El análisis de redes revela circuitos cerebrales

funcionales anormales en perros ansiosos

Abstracto
La ansiedad es una enfermedad común dentro de los trastornos psiquiátricos humanos y también se ha descrito
como un problema neuropsiquiátrico frecuente en perros. Los estudios de neuroimagen humana mostraron que
las redes cerebrales funcionales anormales podrían estar involucradas en la ansiedad. En este estudio,
esperábamos que cambios similares en la topología de la red también estuvieran presentes en los perros.
Realizamos resonancias magnéticas funcionales en estado de reposo en 25 perros sanos y 13 pacientes. Se
utilizó el cuestionario genérico de investigación y evaluación del comportamiento canino para evaluar los
síntomas de ansiedad. Construimos redes cerebrales funcionales y usamos la teoría de grafos para comparar las
diferencias entre dos grupos. No se encontraron diferencias significativas en la topología de la red global. Sin
embargo, centrándonos en el circuito de la ansiedad, la eficiencia global y la eficiencia local fueron
significativamente superiores, y la longitud del trayecto característico fue significativamente menor en la amígdala
de los pacientes. Detectamos una mayor conectividad entre amígdala-hipocampo, amígdala-mesencéfalo,
amígdala-tálamo, lóbulo frontal-hipocampo, lóbulo frontal-tálamo e hipocampo-tálamo, todos parte del circuito de
ansiedad. Además, las correlaciones entre las métricas de la red y los síntomas de ansiedad fueron
significativas. Las medidas de red alteradas en la amígdala se correlacionaron con el miedo y la excitabilidad
dirigidos por extraños; el grado alterado en el hipocampo se relacionó con el apego/búsqueda de atención, la
capacidad de entrenamiento y la sensibilidad al tacto; la función anormal del lóbulo frontal estaba relacionada
con la persecución y la agresión del perro familiar; la búsqueda de apego/atención se correlacionó con la
conectividad funcional entre la amígdala-hipocampo y la amígdala-tálamo; La agresión del perro familiar se
relacionó con el cambio de topología de la red global. Estos hallazgos pueden arrojar luz sobre la organización
topológica aberrante de las redes cerebrales funcionales que subyacen a la ansiedad en los perros.

Introducción
Los trastornos de ansiedad incluyen trastornos que comparten características de miedo y ansiedad excesivos y
trastornos conductuales relacionados [ 1 ]. Los trastornos de ansiedad se clasifican como trastorno de ansiedad
social (SAD), trastorno de estrés postraumático (TEPT), trastorno de ansiedad generalizada (TAG), trastorno de
pánico y fobias específicas [2 ] . Estas condiciones de discapacidad causan cargas significativas para el individuo
y la sociedad, como causar relaciones sociales, suicidio y aumentar los costos de atención médica. Se ha
informado ampliamente que las alteraciones características en la conectividad estructural y funcional (FC) están
asociadas con la ansiedad [ 3 - 5 ], aunque la integridad funcional y la organización topológica en dichos
pacientes sigue sin estar clara en gran medida.

Los modelos animales son herramientas indispensables para desentrañar los mecanismos neurobiológicos
subyacentes a los trastornos de ansiedad y sus variaciones patológicas. Se han informado cambios en las
actividades neuronales en áreas específicas del cerebro correlacionadas con la ansiedad en primates [ 6 ],
roedores [ 7 ] y perros con ansiedad patológica [ 8 ]. La investigación de la especie canina podría ser de
particular interés. Ha sido bien aceptado que los perros pueden ser modelos traslacionales válidos para una serie
de trastornos del comportamiento humano [ 9] .]. Los perros también pueden desarrollar estas enfermedades
mentales, y también son relativamente accesibles y manejables en comparación con los primates. Además, en
comparación con los roedores, los perros tienen una mayor cantidad de corteza frontal. Por lo tanto, la especie
canina podría ser un modelo apropiado para investigar las redes cerebrales involucradas en la ansiedad y, junto
con otras investigaciones con animales, como los roedores, puede usarse como modelo para la ansiedad
humana (y viceversa). La prevalencia de los trastornos de ansiedad en el perro es alta y el trastorno del
comportamiento más encontrado en la práctica diaria [ 10]. Además, constituyen un grave problema de bienestar
no solo para el bienestar del individuo, sino que también comprometen la relación con el propietario dando lugar
al abandono, realojo o incluso a la eutanasia. En el caso de agresión comórbida, resultan en peligros para la
seguridad y son de interés público. Se ha demostrado que en varios trastornos neuropsiquiátricos caninos, la
base neurobiológica tiene características similares a sus contrapartes humanas [ 11 - 13 ], también en perros [
14]. Sin embargo, hasta ahora no hay ningún informe sobre estudios de rs-fMRI en perros ansiosos, a pesar de
que su valor emocional para los humanos aumenta la demanda de que los veterinarios implementen
herramientas de diagnóstico refinadas y brinden un tratamiento optimizado. Por lo tanto, planteamos la hipótesis
de que la conectividad neuronal regional anormal similar a la de los humanos diagnosticados con
comportamientos ansiosos podría encontrarse en perros ansiosos.

La resonancia magnética funcional en estado de reposo (rs-fMRI) podría revelar fluctuaciones dependientes del
nivel de oxigenación sanguínea (BOLD) espontáneas de baja frecuencia correlacionadas en regiones
anatómicamente distintas llamadas "redes de estado de reposo" (RSN), que se cree que reflejan actividad
neuronal o funciones que ocurren en la materia gris [ 15 ]. Las regiones funcionalmente conectadas pueden
identificarse y las redes cerebrales pueden detectarse en función de las dependencias estadísticas entre las
series temporales BOLD de las regiones cerebrales de interés. Hay varios métodos de análisis disponibles para
investigar la organización del cerebro, incluida la correlación basada en semillas, el análisis de componentes
independientes y la teoría de grafos [ 16] .]. La teoría de grafos se ha aplicado ampliamente para analizar las
alteraciones de las propiedades topológicas en los trastornos neuropsiquiátricos y permitió la comprensión de
cómo los trastornos cerebrales afectan las cogniciones cerebrales en función de las propiedades fundamentales
de la red cerebral, incluida la ansiedad, la depresión, la esquizofrenia, la enfermedad de Alzheimer y la epilepsia
[ 17 ] . En la teoría de grafos, el cerebro se considera una red o gráfico con regiones del cerebro como nodos y la
relación entre los nodos como bordes. La red cerebral se puede describir y cuantificar utilizando métricas de red
teóricas de gráficos [ 18]. Específicamente, el grado nodal mide el grado de nodos que tienden a agruparse, la
eficiencia global mide la eficiencia de la transferencia de información paralela a través de la red, el coeficiente de
agrupamiento mide la eficiencia del intercambio de información dentro de una subred local o entre regiones
adyacentes, la longitud de ruta característica mide la capacidad para la propagación de información dentro de la
red, la red de mundo pequeño indica una red típica que tiene una longitud de ruta similar pero un agrupamiento
más alto que una red aleatoria [ 18 - 20 ].

En este estudio, se utilizó una combinación de rs-fMRI y teoría de grafos para investigar los mecanismos
neuronales subyacentes de acción de la ansiedad en perros. Los datos de rs-fMRI se adquirieron en perros
pacientes con ansiedad y en perros sanos. Además, se evaluaron diferentes síntomas de ansiedad mediante el
Cuestionario de evaluación e investigación del comportamiento canino (C-BARQ), un cuestionario de
comportamiento canino. El objetivo de este estudio fue triple: 1) evaluar las diferencias en la topología de la red
cerebral entre perros sanos y perros con ansiedad; 2) identificar diferencias en FC en regiones implicadas en la
ansiedad y 3) evaluar si diferentes síntomas de ansiedad, medidos con el C-BARQ, están relacionados con
diferencias de redes funcionales específicas.
Materiales y métodos
Animal

Veinticinco perros beagle fueron reclutados como grupo sano (6 machos castrados y 19 hembras castradas; con
edades entre 1 y 8 años; Tabla 1 ). Estos perros eran propiedad del Departamento de Pequeños Animales y del
Departamento de Imágenes Médicas Veterinarias y Ortopedia de Pequeños Animales de la Universidad de
Ghent. Todos los perros fueron revisados cada 3 meses para control de salud, comportamiento espontáneo en la
perrera y respuestas conductuales en diferentes contextos. Todos los perros beagle sanos se alojaron en grupos
de ocho en una superficie interior de 15 m 2 , con acceso a una zona exterior de 15 m 2. El revestimiento del
piso en la parte interior consistía en virutas de madera. A estos perros se les daban juguetes todos los días y se
los dejaba en un patio de recreo cerrado dos veces al día. Además, los estudiantes de veterinaria y los
administradores de las casas de animales paseaban a los perros con regularidad. Además, todos estos perros
mostraron un comportamiento normal, evaluado regularmente por los veterinarios involucrados y los cuidadores
de los perros (Detalles en el Texto S1 ). El comportamiento se mantuvo impecable durante todo el período de
estudio. El grupo de pacientes estaba formado por 13 perros voluntarios. El Comité Ético de la Universidad de
Ghent aprobó este estudio y se respetaron todas las pautas de bienestar animal impuestas por el Comité Ético
(número CE, 2015–140, 2018–09, 2018–088).

Tabla 1. La información demográfica del grupo control (n = 25).

Reclutamiento de pacientes

Con base en el historial del perro, el examen físico y los cuestionarios, todos los perros pacientes fueron
diagnosticados con comportamiento ansioso, con o sin agresión, específicamente hacia personas y animales
familiares y desconocidos. La duración media del problema de estos perros osciló entre 8 meses y 2 años; 6
fueron adoptados del albergue, 7 fueron criados en casa; 5 eran agresivos con las personas y los perros; 9
tenían miedo de las personas y los perros; 6 mostraron fobias al ruido; 4 fueron a terapia conductual pero
fracasaron; 3 fueron a la terapia con medicamentos, pero fracasó. Se tomaron muestras de sangre para pruebas
de función tiroidea y se enviaron a un laboratorio comercial (Zoolyx, Aalst, Bélgica) para descartar problemas de
comportamiento provocados por disfunción tiroidea [ 21 ].

Evaluación del comportamiento

El comportamiento del perro ( Fig. 1 ) se evaluó utilizando el cuestionario de comportamiento canino validado
rellenado por el propietario. El Cuestionario de Evaluación e Investigación del Comportamiento Canino (C-BARQ)
es una herramienta estandarizada de evaluación del comportamiento para dueños/tutores, cuidadores y
profesionales de perros. Fue desarrollado y validado por Y Hsu y J Serpell [ 22 , 23]. Proporciona información
sobre el comportamiento y el temperamento del perro en 13 escalas. Este cuestionario contiene 101 preguntas
agrupadas en siete secciones: entrenamiento y obediencia, agresión, miedo y ansiedad, comportamiento
relacionado con la separación, excitabilidad, apego y búsqueda de atención y varios. Las respuestas a las
preguntas se puntuaron con una escala de frecuencia de 5 puntos o una escala de diferencial semántico de 5
puntos. El cuestionario fue traducido al holandés.

Fig 1. Síntomas de ansiedad de los perros.

Se utilizó un segundo cuestionario, aún no validado, pero desarrollado específicamente para preguntas de
investigación actuales en nuestro departamento (comunicación personal K Overall [ 24 ]). Este cuestionario no
incluía puntaje y se usó predominantemente para obtener una descripción general de las diferentes reacciones
impulsadas por la ansiedad y la agresión en diferentes situaciones, incluida la información del propietario, la
información del perro, la ansiedad por separación y la pantalla de reactividad/fobia al ruido, la pantalla de
reactividad y agresión, estereotipos (repetitivos). ) y el comportamiento ritual. Al igual que el C-BARQ, las
preguntas fueron traducidas al holandés.

Resonancia magnética

Todos los datos de neuroimagen se recopilaron en un escáner 3T Siemens Trio Tim con la bobina de columna
de matriz en fase y una bobina de matriz corporal de matriz en fase. Los perros fueron premedicados en una
habitación tranquila con dexmedetomidina (Dexdomitor; Orion) a 375 μg/m2 por inyección intramuscular. La
anestesia general se indujo con 2-3 mg/kg de propofol (Propovet Multidose, Abbott Laboratories) por vía
intravenosa a través de un catéter en la vena cefálica. La anestesia se mantuvo con isoflurano (Isoflo, Abbott
Laboratories) en oxígeno administrado al efecto.

Para cada perro, primero se adquirió una imagen 3D ponderada en T1 de alta resolución utilizando una
secuencia MP-RAGE con los siguientes parámetros: tiempo de repetición (TR) = 2250 ms, tiempo de eco (TE) =
4,18 ms, tamaño de matriz = 256 × 256, campo de visión (FOV) = 256 × 256 mm2, ángulo de giro = 9° y tamaño
de vóxel = 1 × 1 × 1 mm3, 176 cortes. Luego, se adquirió una exploración rs-fMRI utilizando una secuencia de
imágenes planares de eco de gradiente (EPI) de disparo único (TR/TE = 2000/27 ms, ángulo de giro = 90°,
tamaño de matriz = 64 × 64, FOV = 192 × 192 mm2, tamaño de vóxel = 3 × 3 × 3 mm3; espesor de corte = 3 mm
sin espacio entre cortes; número de cortes = 24). Los perros se colocaron de cabeza y esternalmente en el
orificio del escáner. Después de completar la adquisición de MRI, se permitió que los perros se recuperaran.

Análisis de los datos

Preprocesamiento.

Los datos de rs-MRI se preprocesaron utilizando SPM12 ( https://www.fil.ion.ucl.ac.uk/spm/software/spm12/ ) y

MRtrix3 [ 25]. En primer lugar, las imágenes se realinearon a su imagen media utilizando un enfoque de mínimos
cuadrados y una transformación espacial de 6 parámetros (cuerpo rígido) para eliminar los artefactos de
movimiento. A continuación, las imágenes se registraron en una plantilla EPI y se suavizaron espacialmente
utilizando un núcleo gaussiano con un ancho completo a la mitad del máximo de 6 mm. Posteriormente, se aplicó
un filtro de paso de banda (0,01 Hz-0,1 Hz) para eliminar el ruido fisiológico y de baja frecuencia. Durante el
registro en la plantilla EPI, se minimizaron las diferencias en el tamaño del cerebro entre las razas de perros.
Durante el procesamiento, no se realizó la corrección de artefactos relacionados con la falta de homogeneidad
del campo, la materia blanca global (WM) y el líquido cefalorraquídeo (LCR) no se sometieron a regresión [ 26 ].

Construcción de redes funcionales.

Se construyó un atlas parcelado (adaptado en base a investigaciones anteriores) [ 27 , 28 ] que contenía 30

regiones corticales y subcorticales de interés (ROI) en base a las imágenes anatómicas ponderadas en T1 de
todos los animales usando MRtrix3. Sobre la base de nuestra investigación anterior y la investigación de otros,
elegimos estas regiones como ROI [ 8 , 13 , 29 - 34 ]. Uno de los principales objetivos de nuestros estudios
caninos, en relación con las similitudes (o no) en los circuitos cerebrales, es, por ejemplo, utilizar el modelo de
cerebro canino para mejorar los métodos de estimulación cerebral no invasiva, también en humanos [35 - 37 ] .
Estos ROI se enumeran en la Tabla 2 y se visualizan enFigura 2A . Usando una caja de herramientas de análisis
teórico gráfico (GRETNA) [ 38 ], se extrajo la serie temporal media de cada ROI y se calculó el coeficiente de
correlación de Pearson entre cada par de ROI. Para cada escaneo rs-fMRI, se obtuvo una matriz de correlación
de 30 x 30. Solo se incluyeron pesos positivos en los conectomas cerebrales, y las medidas de red para todos
los nodos se calcularon en las redes ponderadas. Para eliminar las conexiones más débiles, se aplicaron a las
matrices de correlación umbrales basados en la densidad de la red (es decir, el número de conexiones restantes
dividido por el número máximo de conexiones posibles). Se eligieron umbrales para obtener densidades de red
que van del 20 % al 50 %, con un intervalo del 5 % [ 18 , 39]. Después de establecer el umbral, los coeficientes
de correlación se transformaron de la r a la z de Fisher para obtener una distribución normal. Luego, se
construyeron redes funcionales o grafos a partir de las matrices de correlación. En estos gráficos, los nodos se
corresponden con los ROI y los bordes con los coeficientes de correlación [ 20 , 38 ].
Figura 2.
A. Regiones de interés (ROI) superpuestas en una plantilla T1. Solo se visualizan los ROI correctos. Los ROI de
la izquierda son idénticos. B. Canalización del análisis de datos: 1) la serie temporal media de las ROI
predefinidas se extrae de las imágenes rs-fMRI preprocesadas, 2) el coeficiente de correlación de Pearson se
calcula entre las series temporales de cada par de ROI, 3) para cada rs -fMRI, se obtiene una matriz de
correlación de 30 x 30, 4) se eliminan las conexiones más débiles, 5) se construye una red o grafo funcional, en
el que los nodos se corresponden con las ROI y las aristas con los coeficientes de correlación, en base a la
matriz de correlación, y 6) se calculan métricas de red global y nodal para cuantificar la red.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0282087.g002

TABLA 2 (ver en paper original)

Análisis teórico de grafos.

Para todos los gráficos, se calcularon varias métricas de red usando GRETNA, tanto a nivel global (toda la red)
como nodal (por ROI). Grado o fuerza de conexión es el número de bordes (ponderados) conectados a un nodo.
Es una medida de centralidad e indica qué tan importante es un nodo en la red. La longitud de ruta característica
(Lp) es el número promedio de aristas que conectan dos nodos en la red y la eficiencia global (Eglob) es la
longitud de ruta inversa promedio entre dos nodos. Estas son medidas de integración funcional o eficiencia
general de comunicación en la red. El coeficiente de agrupamiento (Cp) es la proporción de vecinos de un nodo
que también están conectados entre sí y la eficiencia local (Eloc) es la longitud de camino inversa promedio
dentro de la vecindad de un nodo, es decir, los nodos conectados a ese nodo.18 , 40 ]. Small-worldness (σ)
indica una red típica que tiene una longitud de ruta similar pero una agrupación más alta que una red aleatoria [
19 ]. Las métricas de la red se calcularon en diferentes densidades de matriz de correlación, del 20 % al 50 % de
densidad con un intervalo del 5 %, y se promediaron sobre estas densidades [ 20 , 38 ]. La canalización del
análisis de datos se muestra en la figura 2B . Basado en nuestra investigación anterior [ 8 , 13 , 29 , 30 , 41 , 42 ],
investigación relevante de medicina del comportamiento veterinario [ 43 ] y medicina humana [ 31 –34 ], elegimos
estas cinco regiones de interés como circuito de ansiedad en este estudio: amígdala, lóbulo frontal, hipocampo,
mesencéfalo y tálamo. El vermis fue elegido como la región de control. Por lo tanto, se evaluaron las diferencias
entre grupos en el nivel nodal en las regiones del circuito de ansiedad y vermis. La prueba no paramétrica U de
Mann-Whitney se realizó en el análisis de nivel nodal para comparar las diferencias entre grupos. Para corregir
los parámetros de la red para comparaciones múltiples, se aplicó la corrección de la tasa de descubrimiento falso
(FDR) utilizando p < 0,05 como umbral significativo. El cálculo de las medidas de red de integración, segregación
y centralidad se resume en la Fig. 3 [ 18 ]. (VER EN PAPER ORIGINAL).

Análisis estadístico.

Las diferencias en la red cerebral funcional se evaluaron en tres niveles. A nivel 1) global y 2) nodal, las
diferencias de grupo en grado, longitud de trayectoria característica, eficiencia global, coeficiente de
agrupamiento y eficiencia local se evaluaron mediante una prueba U de Mann-Whitney con un nivel de
significación de 0,05 después de la corrección FDR para corregir comparaciones múltiples entre nodos. En un
nivel de conexión 3, las diferencias de grupo en los valores z entre las regiones del circuito de ansiedad se
evaluaron mediante una prueba U de Mann-Whitney con un nivel de significancia de 0,05 después de la
corrección FDR para corregir comparaciones múltiples entre conexiones.

El coeficiente de correlación de rangos de Spearman no paramétrico entre las métricas de la red global, el grado
nodal, la eficiencia global como medida de integración y el coeficiente de agrupamiento como medida de
segregación, y la fuerza de conexión por un lado, y la gravedad de los síntomas de ansiedad, derivados del C- El
cuestionario BARQ, por otro lado, se calculó para evaluar si estaban relacionados. Las correlaciones entre la
fuerza de la conexión y los síntomas de ansiedad se corrigieron para comparaciones múltiples utilizando el FDR
en q = 0,05.

Resultados
resultados de la prueba de tiroides

Los resultados de las pruebas de tiroides de todos los pacientes fueron normales. La tiroxina total (T4), la
hormona estimulante de la tiroides (TSH), la triyodotironina libre (fT3) y la tiroxina libre (fT4) estaban en rangos
normales. La prueba de tiroglobulina fue negativa en todos los pacientes ( Tabla 3 ).

Topología de red global

Se calcularon cinco métricas de red a nivel global: 1) grado medio, 2) longitud de ruta característica, 3) eficiencia
global, 4) coeficiente de agrupamiento, 5) eficiencia local y 6) mundo pequeño (Fig. 4A ) . No se pudieron
encontrar diferencias significativas entre los grupos en estas métricas utilizando la prueba U de Mann-Whitney.
Además, encontramos σ > 1 para los dos grupos, lo que indica que tanto el grupo de pacientes como el de
control exhibieron atributos de mundo pequeño.
Figura 4.
A. Métricas de red global visualizadas como un gráfico de caja con mediana y rango intercuartílico. B. Métricas
de la red nodal.

Grado nodal en el circuito de la ansiedad

Se evaluaron las diferencias en el grado nodal, la longitud del camino característico, la eficiencia global, el
coeficiente de agrupamiento y la eficiencia local en las regiones del circuito de ansiedad: amígdala, lóbulo frontal,
hipocampo, mesencéfalo y tálamo (Fig. 4B ) . Las métricas de red se promediaron entre los componentes
izquierdo y derecho de cada región. En la amígdala, encontramos que el grupo de pacientes exhibió una
eficiencia global y local significativamente mayor (p = 0,007, corrección FDR; p = 0,003, corrección FDR,
respectivamente) y una longitud de trayectoria característica significativamente menor (p = 0,006, corrección
FDR) , en comparación con el grupo de control (la consistencia de la medida de la red se verificó en el rango de
umbrales, los resultados se proporcionan en la figura S1 ).

Conexiones individuales en el circuito de la ansiedad

Para evaluar la fuerza de conexión alterada en el circuito de ansiedad, se investigaron los valores z de los
coeficientes de correlación entre las regiones del circuito de ansiedad. Los valores z son el promedio de las
conexiones intrahemisféricas e interhemisféricas entre los componentes izquierdo y derecho de las regiones
cerebrales. Si un valor z es cero, significa que la correlación está por debajo del umbral de un promedio de 20%
a 50% de densidad de red [ 38]. Los valores z o fuerza de conexión son significativamente mayores en el grupo
de pacientes en comparación con el grupo control para las conexiones amígdala-hipocampo, amígdala-
mesencéfalo, amígdala-tálamo, lóbulo frontal-hipocampo, lóbulo frontal-tálamo e hipocampo-tálamo (U = 77, p =
0,022; U = 87, p = 0,040; U = 81, p = 0,026; U = 64, p = 0,009; U = 78, p = 0,028 y U = 52,5, p = 0,005,
respectivamente). La fuerza de conexión entre el hipocampo y el mesencéfalo es significativamente menor en el
grupo de pacientes en comparación con el grupo control (U = 66, p = 0,014). En la figura 5 se muestran las
conexiones en el circuito de ansiedad que diferían significativamente entre el grupo de pacientes y el grupo de
control .

Fig 5. Conexiones del circuito de ansiedad que difieren significativamente entre el grupo de pacientes y el grupo
control.
Las conexiones que son significativamente más altas en el grupo de pacientes se indican en amarillo, las
conexiones que son significativamente más bajas se indican en azul. Abreviaturas: AMG, amígdala; FL, lóbulo
frontal; HC, hipocampo; MES, mesencéfalo y THL, tálamo.

Correlaciones entre métricas de red y síntomas de ansiedad

La información demográfica y las puntuaciones C-BARQ de los pacientes se proporcionan en la Tabla 4 . Las
correlaciones de las métricas de la red global, el grado nodal, la eficiencia global y el coeficiente de
agrupamiento, y la fuerza de la conexión con los síntomas de ansiedad se evaluaron mediante el coeficiente de
correlación de rango de Spearman ( Fig. 6). El grado (ρ = 0,594, p = 0,049) y la eficiencia global (ρ = 0,583, p =
0,047) en la amígdala se correlacionaron positivamente con el miedo dirigido a extraños. El grado (ρ = -0,593, p
= 0,042) en la amígdala y la fuerza de conexión (ρ = -0,781, p = 0,042) entre la amígdala izquierda y derecha se
correlacionaron negativamente con la excitabilidad. El grado (ρ = 0,616, p = 0,033) en el hipocampo y la fuerza
de conexión entre la amígdala y el hipocampo (ρ = 0,758, p = 0,028) y la amígdala y el tálamo (ρ = 0,905,
p<0,001) se correlacionaron positivamente con el apego/búsqueda de atención comportamiento. El grado en el
hipocampo se correlacionó positivamente con la capacidad de entrenamiento (ρ = 0,579, p = 0,049) y la
sensibilidad al tacto (ρ = 0,837, p = 0,001). El coeficiente de agrupamiento en el lóbulo frontal se correlacionó
positivamente con la persecución (ρ = 0,784, p = 0,003). Finalmente, la longitud del camino característico (ρ = -
0.879, p = 0,009) se correlacionó negativamente con la agresión del perro familiar y la eficiencia local (ρ = 0,805,
p = 0,029), eficiencia global (ρ = 0,879, p = 0,009), grado (ρ = 0,954, p = 0,001) en el lóbulo frontal y la eficiencia
global (ρ = 0,954, p = 0,001) en el lóbulo frontal se correlacionaron positivamente con la agresión del perro
familiar. Para Entrenabilidad, la puntuación más alta significa mejor entrenabilidad. Por lo demás, la puntuación
más alta significa peores problemas de conducta.
Fig. 6. Correlaciones de métricas de red global, grado nodal, eficiencia global y coeficiente de agrupamiento, y
fuerza de conexión con síntomas de ansiedad.
Los datos se visualizan como un gráfico de dispersión con una línea de regresión y un intervalo de confianza del
95 %

Tabla 4. Las puntuaciones del C-BARQ de los pacientes.

Discusión
Topología de red global

A nivel de topología de red global, no se observaron diferencias significativas entre grupos. En humanos, muchos
estudios informaron diferencias significativas entre los controles sanos y los pacientes con ansiedad: se encontró
un aumento del AUC (área bajo la curva) del trayecto óptico más corto y una disminución del AUC del coeficiente
de agrupamiento en los pacientes con SAD a nivel global [44 ] ; Se observó una segregación de red
significativamente mayor en GAD [ 45 ], y una organización e integración subóptima en todo el cerebro estaba
presente en pacientes con GAD [ 46 ].

Curiosamente, una serie de estudios tampoco han podido encontrar ninguna diferencia de red global en los
trastornos de ansiedad: la estructura de la red y las métricas de centralidad del nodo no difirieron entre los
grupos SAD y sanos [ 47 ] ; la fuerza de la red global de síntomas de ansiedad no cambió significativamente en
la psicopatología del trastorno alimentario antes y después del tratamiento [ 48 ]. De manera similar, en nuestros
resultados, la topología de la red global no es significativamente diferente en perros con ansiedad en
comparación con perros sanos. No obstante, en el nivel de topología regional, se encontró una mayor integración
funcional, lo que puede indicar una mayor resistencia al daño neuronal focal en el cerebro. Se ha asumido que la
resiliencia topológica de la red cerebral protege la integridad de la red de un ataque patológico [ 49]. Podría
explicar por qué no hubo una diferencia significativa en el nivel global de nuestro estudio. Solo unas pocas
regiones específicas se ven afectadas y es posible que esto no influya en la red global. Pero también puede
estar directamente relacionado con los rasgos de comportamiento ansioso. Por ejemplo, existe una cantidad
considerable de evidencia de que la salida de la amígdala está directamente relacionada con los fenotipos de
miedo y ansiedad [ 50 , 51 ].

Desorganización topológica regional de redes funcionales en perros

ansiosos

En el grupo de ansiedad, se encontró que la longitud del camino característico era más baja y la eficiencia global
más alta en la amígdala. Esto podría indicar que existe una mejor eficiencia de comunicación entre estas
regiones y el resto de la red cuando se enfrentan a la ansiedad. Una conexión más fuerte y una mejor eficiencia
de comunicación pueden considerarse como una integración funcional mejorada para la transferencia de
información entre estas regiones del cerebro y el resto de la red. En este estudio, también detectamos que la
eficiencia local es mayor en la amígdala en perros ansiosos en comparación con el grupo sano. Esto indica que
hay más aglomeraciones alrededor de la amígdala, por lo que hay una mejor interconectividad local en los perros
ansiosos. El aumento de la eficiencia local también indica una mayor segregación funcional en la amígdala. Para
la fuerza de conexión entre conexiones del circuito de ansiedad, se observó una comunicación más (eficiente) en
el grupo de pacientes entre amígdala-mesencéfalo y amígdala-tálamo. Aquí, el aumento de FC de estas tres
regiones está en línea con una hipótesis bien aceptada de que la ansiedad y los trastornos de ansiedad están
asociados con un funcionamiento aumentado o hiperactivo en la red de prominencia.3].

Además, en humanos, se informa que la red de modo predeterminado (DMN) puede interactuar con otras redes
cerebrales durante la regulación emocional. Por ejemplo, las personas con un alto rasgo de ansiedad
demuestran una disminución de la FC entre las regiones de la DMN y la red frontoparietal [ 52 ]. En este estudio,
se encontró una mayor fuerza de conexión entre el lóbulo frontal y el hipocampo. Curiosamente, Hang X et al.
informó que la FC aberrante de algunas regiones cerebrales cruciales de la DMN y la red de prominencia podría
contribuir a la fisiopatología de los trastornos de ansiedad en humanos [ 53]. En consecuencia, en nuestro
estudio actual, se incrementó la FC entre amígdala-hipocampo, mesencéfalo-hipocampo y tálamo-hipocampo.
Otra hipótesis es que las señales conflictivas generadas en la red de prominencia se transmiten a la red
frontoparietal que implementa un mayor control cognitivo en ensayos futuros [ 3 ]. Esto se corresponde con la
mayor conectividad entre el lóbulo frontal y el tálamo en nuestros hallazgos.

Un punto culminante particular de nuestros resultados es la conexión entre el hipocampo y el mesencéfalo. Aquí,
se encontró una comunicación menos (eficiente) entre el hipocampo y el mesencéfalo en el grupo de ansiedad.
Es de destacar que los hallazgos actuales indican que el hipocampo y el mesencéfalo se consideran socios en la
"codificación integradora", lo que sugiere que el neurotransmisor dopamina puede estar involucrado. Esto apunta
hacia una síntesis emocionante entre la investigación de la memoria a nivel cognitivo, molecular y de sistemas
con implicaciones para las condiciones clínicas en las que la neuromodulación dopaminérgica es disfuncional [
54 ]. Se ha informado que la disfunción del hipocampo y el mesencéfalo está relacionada con un alto riesgo de
psicosis en humanos [ 55] .], y en ratas, la destrucción de las neuronas dopaminérgicas en el mesencéfalo
disminuye la proliferación de células del hipocampo y puede revertirse con fluoxetina, lo que sugiere que la
fluoxetina podría ser un fármaco terapéutico potencial para los síntomas no motores (p. ej., ansiedad, depresión
y déficits cognitivos) en la enfermedad de Parkinson [ 56 ]. También en los perros, los sistemas dopaminérgicos
juegan un papel importante en la determinación de reacciones afectivas como la exhibición de problemas de
comportamiento relacionados con la ansiedad [ 29 , 57 ]. Lisman et al. desarrolló el concepto de que las
neuronas dopaminérgicas del hipocampo y el mesencéfalo forman un circuito funcional y demostró que la
conectividad mejorada entre el hipocampo y el mesencéfalo está asociada con el aprendizaje y el procesamiento
de la información [58] .]. Por lo tanto, en nuestro estudio, la menor conectividad entre el hipocampo y el
mesencéfalo en el grupo de pacientes puede ser la razón de la disminución de los síntomas de entrenabilidad.

Correlaciones entre métricas de red y síntomas de ansiedad

Se han desarrollado varias herramientas para medir el comportamiento canino. Algunos se basan en la
observación directa de la respuesta del perro a varias situaciones de prueba [ 59 ]. Aunque tales pruebas son
más objetivas que la información derivada del propietario, la desventaja es que es difícil evocar el
comportamiento problemático en un entorno clínico [ 60 ]. Otros métodos se centran en la evaluación del
comportamiento del día a día mediante un cuestionario especialmente diseñado para el dueño del perro. El C-
BARQ es un cuestionario validado y ampliamente utilizado para el comportamiento canino.

En este estudio, se encontró que el miedo dirigido a extraños, la excitabilidad, el apego, la búsqueda de
atención, la capacidad de entrenamiento, la persecución, la sensibilidad al tacto y la agresión del perro familiar
estaban asociados con varias medidas de red: el aumento de FC de la amígdala se correspondía con más miedo
dirigido a extraños y menor excitabilidad; mayor conectividad de la amígdala, el hipocampo y el tálamo asociado
con más apego y comportamiento de búsqueda de atención; mayor conectividad del hipocampo correlacionada
con una mejor capacidad de entrenamiento y una mayor sensibilidad al tacto; mayor conectividad del lóbulo
frontal se corresponde con más persecución; mayor eficiencia global y local, correlacionada con peor agresividad
del perro familiar; el aumento de la conectividad funcional del lóbulo frontal también se correspondía con una
peor agresión del perro familiar.

En el comportamiento del perro, la amígdala y el hipocampo están asociados con recordar cosas y excitarse,
excitarse y asustarse [ 61 ]. Las disfunciones de estas regiones pueden provocar síntomas de ansiedad como
más miedo, menos excitabilidad, menos capacidad de entrenamiento, etc., que están en línea con
investigaciones anteriores en humanos [ 62 , 63 ]. Vermeire et al. ya informó que se observó una función
aberrante del tálamo en perros compulsivos [ 29 ]. En este estudio, también observamos un comportamiento
anormal de apego/búsqueda de atención asociado con el tálamo, lo cual es consistente con hallazgos previos de
síntomas de ansiedad en humanos [ 64 , 65]. Los hallazgos de más persecución y peor agresión del perro
familiar relacionada con el lóbulo frontal también están en línea con los estudios en humanos que encontraron
que la disfunción frontal predice los síntomas de depresión y ansiedad [ 66 , 67 ].
Limitaciones
Varias limitaciones en el presente estudio deben ser consideradas. Primero, el tamaño de la muestra es
relativamente moderado. 13 perros con diferentes antecedentes y gravedad de los síntomas podrían ser
insuficientes para encontrar diferencias en la red global. La experiencia desagradable debe considerarse en los
estudios que examinan la relación entre las diferencias de red y la psicopatología [ 68 , 69 ]. En este estudio, la
mayoría de los perros pacientes son adoptados del refugio de animales, el maltrato o el abandono pueden influir
en las redes cerebrales de ansiedad; y algunos fueron criados por los propietarios. Se deben reclutar más
pacientes para obtener un resultado más claro. En segundo lugar, debe mencionarse la diferencia entre los
perros de laboratorio y los domésticos [ 70]. Con los datos actuales será imposible desentrañar el efecto de la
"vivienda" en los síntomas de ansiedad utilizados en esta cohorte. Solo podemos agregar a las direcciones
futuras que se recomendaría investigar los síntomas de ansiedad canina también en animales de laboratorio y/o
utilizar un grupo de control canino saludable más naturalista. Esto se puede refinar en el futuro cuando tengamos
suficientes pacientes, entonces podemos establecer una clara diferencia o consistencia dentro del grupo;
entonces los pacientes beagle pueden hacer una comparación más directa con el grupo de control. En tercer
lugar, nuestro protocolo de resonancia magnética se realizó bajo anestesia. Esto podría causar desviaciones con
la condición despierta. Cuarto, que hayamos incluido todo el prefrontal como ROI debe considerarse como una
limitación,

Conclusión
Mediante el uso de rs-fMRI y el análisis de red de la teoría de grafos en perros, caracterizamos las anomalías en
la topología de la red cerebral funcional en estado de reposo asociadas con la ansiedad. Como encontramos
correlaciones entre los síntomas de ansiedad y las medidas de la red, esto puede indicar que rs-fMRI podría
proporcionar información de diagnóstico útil para la ansiedad en perros, aunque aún se requiere más
investigación. En el futuro, también nos gustaría investigar el potencial de rs-fMRI como herramienta de
diagnóstico para la respuesta al tratamiento, como tratamientos farmacológicos o tratamientos de modulación
neural como rTMS. Dichos esfuerzos proporcionarán información importante sobre los mecanismos
fisiopatológicos de la ansiedad en los perros, lo que puede conducir a terapias más personalizadas y efectivas y,
junto con otras investigaciones en animales, construir un puente hacia la comprensión del comportamiento
humano (y viceversa).