Vacunas contra el VIH producidas en plantas y posibles candidatos

Resumen

Millones de personas en todo el mundo sufren cargas sociales y de salud importantes

relacionadas con el VIH/SIDA y sus infecciones oportunísticas asociadas. Para reducir
estas cargas, se requieren vacunas preventivas y terapéuticas. Las vacunas efectivas
contra el VIH han estado bajo investigación durante varias décadas utilizando
diferentes modelos animales. En los últimos años, también se ha prestado atención a
posibles candidatos a vacunas contra el VIH producidos en plantas. Además de esto,
se han identificado anticuerpos ampliamente neutralizantes producidos en plantas que
pueden dirigirse a epítopos virales conservados y neutralizar cepas mutantes del VIH.
Numerosos epítopos de las glicoproteínas de envoltura y las proteínas de cápside del
VIH-1 forman parte de la terapia contra el VIH. Aquí discutimos algunos hallazgos
recientes con el objetivo de producir proteínas recombinantes anti-VIH-1 en plantas
modificadas genéticamente para la profilaxis y el tratamiento terapéutico del SIDA.

Introducción

El Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) es uno de los mayores desafíos

para la salud pública global en la actualidad. En 1981, se identificó al SIDA como una
nueva enfermedad caracterizada por el colapso dramático de las células T CD4+ y las
respuestas inmunológicas. Esta drástica disminución del sistema inmunológico puede
dar lugar a diversas patologías oportunísticas en sujetos infectados. Dos años después
del descubrimiento del SIDA, se identificó un nuevo retrovirus como agente causal del
SIDA [1] y fue formalmente renombrado como el Virus de Inmunodeficiencia Humana
(VIH) en 1986. El VIH pertenece a los lentivirus (un subgrupo de la familia de los
retrovirus) y tiene un genoma formado por dos moléculas de ARN de cadena simple
similares y varias proteínas virales empaquetadas dentro de una cápside. Se han
identificado dos tipos de VIH (VIH-1 y VIH-2), según sus particularidades genéticas y
diversos antígenos virales. Sin embargo, el VIH-1, y sus subtipos, es el principal
responsable de la creciente pandemia global de SIDA. El genoma del VIH-1 codifica
nueve marcos de lectura abierta. Tres de estos codifican el Antígeno Específico del
Grupo (Gag), una polimerasa particular (Pol) llamada transcriptasa inversa (RT), y
glicoproteínas de envoltura (Env), que posteriormente se proteolizan en proteínas
individuales comunes a todos los retrovirus. Su envoltura viral comprende trímeros de
heterodímeros enlazados no covalentemente, subunidades gp120 y gp41. Hasta ahora,
se han identificado más de una docena de subtipos de VIH-1 y cientos de formas
recombinantes circulantes del VIH-1 (CRFs). La rápida evolución de la proteína de
envoltura del VIH (Env) (gp120) tiene graves consecuencias para la inmunidad al VIH-1
[3].

Demanda de vacunas contra el VIH

A finales de 2018, la Organización Mundial de la Salud (OMS) estimó que 37.9 millones
de personas vivían con VIH en todo el mundo, y de ellas, 23.3 millones recibían terapia
antirretroviral (TAR). Además, alrededor de 700,000 personas contraen VIH cada año y
miles mueren a causa del posterior síndrome crónico de inmunodeficiencia adquirida
(SIDA). África sigue siendo la región más afectada, representando aproximadamente
dos tercios de las personas que viven con el virus. Para complementar los esfuerzos de
la TAR, una vacuna es esencial para erradicar la pandemia del VIH/SIDA y frenar sus
daños multifacéticos. Esto es crucial, especialmente en regiones endémicas de VIH
donde el acceso a la TAR es limitado debido a condiciones socioeconómicas precarias
y donde la ingeniería genética de plantas puede prosperar [4,5].

En la actualidad, no hay disponible comercialmente ninguna vacuna contra el VIH.

Establecer una vacuna profiláctica contra el VIH es una necesidad absoluta. La
pandemia global del VIH sigue creciendo, como lo demuestran las estadísticas de la
OMS, debido a la mortalidad, el número de personas viviendo con el virus VIH-1 y los
nuevos casos cada año. Por otro lado, los medicamentos actuales de TAR son
costosos y requieren una observancia de por vida con muchos efectos secundarios.
Tan temprano como en 1987, Estados Unidos llevó a cabo la primera fase de un
ensayo de una vacuna candidata. En la actualidad, se han probado más de 30
candidatos a vacunas contra el VIH en ensayos clínicos de fase I/II, realizados
principalmente en Estados Unidos y Europa, e involucrando a miles de voluntarios
sanos.

Obstáculos de las vacunas profilácticas contra el VIH

A pesar de los considerables recursos humanos y financieros destinados a la

investigación del VIH durante décadas, el desarrollo de una vacuna efectiva contra el
VIH sigue siendo esquivo. La creación de una vacuna preventiva eficaz y de bajo costo
es un desafío para los profesionales de la salud en el siglo XXI. El principal obstáculo
detrás de este fracaso es la extraordinaria diversidad genética del VIH-1 y, más
específicamente, el alto nivel de variabilidad dentro de la glicoproteína de envoltura
(Env) viral, que es el objetivo de los anticuerpos neutralizantes [6–8]. Debido a las altas
tasas de mutación (aproximadamente 1–10 mutaciones por ciclo de replicación del
genoma), una considerable flexibilidad conformacional y una extensa cobertura
glicosilada, el virus VIH-1 ha desarrollado un arsenal único de mecanismos para evadir
los anticuerpos neutralizantes [9]. Después de la infección, cada huésped contiene
variantes del VIH capaces de eludir los anticuerpos neutralizantes (nAbs) producidos.
Aunque las modificaciones estructurales de la envoltura presentan una barrera a una
respuesta inmunológica amplia, este problema podría superarse mediante vacunas
polivalentes contra el VIH que reconozcan dominios conservados en la envoltura viral
[10]. Evidencia acumulativa y múltiples estudios sugieren que una vacuna efectiva
contra el VIH podría ser alcanzable en los próximos años.

Biofábricas basadas en plantas

La ingeniería molecular de plantas (IMP) se basa en la capacidad de las plantas para

expresar diversos genes con fines preventivos y terapéuticos, y promete ser una opción
viable [11]. En los últimos años, la producción y comercialización de proteínas
recombinantes y compuestos farmacéuticos a partir de plantas se ha optimizado y ha
tenido relativo éxito [11–15]. El concepto de IMP como una biofábrica se demostró
anteriormente [16] y presenta numerosas ventajas sobre sistemas convencionales que
utilizan bacterias, levaduras, cultivos de células de insectos y animales para productos
farmacéuticos [13]. Las plantas modificadas genéticamente pueden ensamblar, plegar,
glicosilar y producir proteínas recombinantes a gran escala y bajo costo sin riesgo de
contaminación por patógenos humanos [17]. Las semillas que albergan proteínas
farmacéuticas también pueden almacenarse a temperatura ambiente durante meses o
años en algunos casos sin pérdida de actividad [18], eliminando así requisitos
significativos de almacenamiento y transporte en cadena de frío. Se han informado
ejemplos de posibles vacunas derivadas de plantas para proteger contra diversas
enfermedades infecciosas [19] y patologías como el cáncer [20], el virus de la influenza
A subtipo H1N1, la hepatitis B y otros patógenos responsables de patologías humanas
globales [21,22]. También se han identificado varios metabolitos secundarios de plantas
con propiedades antimicrobianas como inhibidores del ciclo de infección de diferentes
patógenos, que a menudo forman parte de la estrategia de defensa de la planta contra
tensiones bióticas y/o abióticas.

Candidatos de vacunas y anticuerpos contra el VIH expresados en plantas

Desde 1995, se han producido varios antígenos del VIH y anticuerpos neutralizantes
anti-VIH en diversas especies de plantas mediante transformación estable mediada por
Agrobacterium o a través de sistemas de expresión transitoria utilizando vectores
virales de plantas. Una estrategia actual para desarrollar vacunas contra el VIH es la
capacidad para inducir anticuerpos neutralizantes amplios (bnAbs) en diferentes etapas
[23]. Recientemente, se expresó en Nicotiana benthamiana una nueva proteína de
fusión biespecífica anti-VIH-1, que combina bnAb con lectina [24]. El anticuerpo
monoclonal humano neutralizante 2G12 también se expresó en tabaco y ahora está
aprobado para ensayos clínicos de fase I en humanos [25]. La 2G12 es uno de los
anticuerpos neutralizantes amplios que reconocen específicamente epítopos de
carbohidratos en la superficie del VIH-1.
La identificación de Dominios Antigénicos Focalizados en Epítopos (EADs) ofrece
posibles objetivos para el diseño racional de vacunas contra el VIH-1 [26]. Numerosos
epítopos de las glicoproteínas de envoltura (Env) y proteínas de cápside del VIH-1 se
encuentran en la 'Base de Datos de Inmunología Molecular del VIH'. Estas mezclas
heterólogas de Env del VIH-1 exponen la respuesta inmunológica a una diversidad de
conformaciones de Env [27]. La síntesis de proteínas artificiales construidas con
epítopos conservadores de células T y B y sus miméticos también es prometedora para
el desarrollo de vacunas contra diversos virus, incluido el VIH [7,28]. La síntesis de
vacunas contra el VIH-1 utilizando nanopartículas similares a virus es otra área de
investigación [29–32].

Se ha desarrollado una vacuna polivalente, la proteína quimérica C4(V3)6, que se

expresó en bacterias, luego en tabaco y lechuga, mostrando propiedades antigénicas
potentes sin toxicidad observada [33]. La caracterización de esta proteína de lechuga
demostró que indujo una respuesta inmunológica al ser ingerida por ratones [34].
Además, la proteína C4(V3)6 derivada de la lechuga mostró un potencial inmunogénico
mejorado en comparación con los epítopos producidos en Escherichia coli. Se
realizaron investigaciones adicionales sobre otras proteínas multi-epitópicas fusionando
el epítopo multi-VIH con la glutatión-S-transferasa y expresándola en células
recombinantes de E. coli. El epítopo multi-VIH se expresó en plantas de tabaco y
generó respuestas humorales en ratones [35]. También se sintetizó una proteína
quimérica multipotente contra el VIH en la planta de musgo Physcomitrella patens,
demostrando el potencial de las plantas de musgo como vehículo de expresión para la
síntesis de antígenos y vacunas contra el VIH.

Recientemente, se describió un nuevo ligando de afinidad basado en la proteína

fluorescente roja DsRed, como portador del epítopo ELDKWA que puede capturar el
anticuerpo neutralizante anti-VIH 2F5 [37]. Cuando se expresó en tabaco transgénico,
se obtuvo un rendimiento de 24 mg/kg con hasta un 90% de pureza mediante
tratamiento térmico y cromatografía de afinidad con iones metálicos inmovilizados para
la purificación de proteínas. Aunque aún no está optimizado, mejorar su expresión y
capacidad haría que su uso en la producción y purificación de mAbs específicos del
idioma fuera rentable [37].

En un intento de evaluar la inmunogenicidad de una vacuna multivalente contra el VIH,

que incluía un vector de ADN solo o en combinación con la glicoproteína Env (gp120),
se encontró que la coadministración de componentes de la proteína Env gp120 con la
vacuna de ADN conduce a la inducción temprana y potente de las respuestas de
anticuerpos de unión de IgG a Env V1/V2 [38]. También se informó recientemente que
un vector de vacuna de ADN corto (de 172 pb de longitud) derivado del promotor de la
proteína de cápside del circovirus porcino PCV-1 y expresando varios subtipos del…

Conclusión y perspectiva

Existe una necesidad urgente de erradicar la epidemia de VIH/SIDA en todo el mundo

de cualquier manera posible, enfocándose en sus estructuras conservadas y/o
variables. La facilidad y la eficacia económica de los sistemas de expresión en plantas
pueden acelerar el desarrollo de vacunas preventivas y terapéuticas contra el VIH. Una
vez que se desarrolle una vacuna efectiva contra el VIH, tarde o temprano y mediante
cualquier enfoque biológico, la ingeniería molecular de plantas podría convertirse en la
solución preferida para producir dicha vacuna, gracias a sus numerosas ventajas sobre
otras plataformas de producción de biofármacos. Los biomedicamentos, incluyendo
vacunas, anticuerpos monoclonales de amplio espectro y microbicidas antirretrovirales
producidos en plantas de manera económica y altamente eficaz podrían tener un
impacto significativo en la epidemiología, incidencia y prevalencia del VIH. En última
instancia, las plantas que albergan moléculas terapéuticas pueden crecer casi en
cualquier lugar sin necesidad de infraestructuras sofisticadas o costosas para producir
posibles candidatos a vacunas contra el VIH, facilitando el acceso a estas vacunas
para personas de bajos recursos. Kessans et al. [56] demostraron el potencial de
combinar una vacuna de plantas en un régimen de vacunación heterólogo, donde las
vacunas producidas en plantas proporcionarían refuerzos adecuados debido a la gran
cantidad de material de vacuna requerido para refuerzos repetidos [56]. Otros estudios
en animales también han demostrado el valor que la ingeniería molecular de plantas
podría tener en estrategias efectivas de vacunación prime/refuerzo [57,58].

Los próximos pasos serán continuar impulsando el desarrollo de instalaciones que

permitan la producción de vacunas y proteínas antirretrovirales en plantas en entornos
con recursos limitados [59]. Las vacunas contra el VIH y las proteínas antirretrovirales
que podrían satisfacer las demandas mundiales nunca podrían producirse bajo las
actuales restricciones prohibitivamente caras de los sistemas de producción y
purificación de células de mamíferos. Por otro lado, las plataformas basadas en plantas
tienen una oportunidad razonable de alcanzar este objetivo [60,61].