Consejería de Universidad, Investigación e

Innovación
Secretaría General de Investigación e Innovación

ANEXO III
AYUDAS A LOS AGENTES NO UNIVERSITARIOS DEL SISTEMA ANDALUZ DEL CONOCIMIENTO PARA LA
CONTRATACIÓN DE JÓVENES INVESTIGADORES Y PERSONAL TÉCNICO DE APOYO DE I+D+I, EN EL
MARCO DEL PROGRAMA OPERATIVO DE EMPLEO JUVENIL Y DE LA INICIATIVA DE EMPLEO JUVENIL.
(BOJA núm. 138, de 20 de julio de 2021)
Resolución SGUIT de concesión de 2 de diciembre de 2021.

MEMORIA JUSTIFICATIVA FINAL

ENTIDAD: FIBICO – Fundación para la Investigación Biomédica de Córdoba

PERSONA CONTRATADA: Florina Iulia Bura
N.º EXPEDIENTE: POEJ21_FIBICO
CÓDIGO DE PLAZA: POEJ-21-10
FECHA DE INCORPORACIÓN: 25/03/2022
TITULACIÓN: Formación universitaria de grado

1. TRABAJOS REALIZADOS (Máximo 1000 palabras)

Descripción de la actividad realizada y los resultados alcanzados por la persona contratada, en relación con los planteados en la solicitud.

Tras la publicación de las bases reguladoras, así como de las resoluciones pertinentes, por las vías oportunas,
de la convocatoria de 2021 para la contratación laboral de jóvenes investigadores, de personal técnico de
apoyo y de gestión de la I+D+i, con titulación universitaria o de formación profesional de grado superior, en
el marco del Programa Operativo de Empleo Juvenil y de la Iniciativa de Empleo Juvenil, se ha contratado
a Florina Iulia Bura para el desarrollo de diversas actividades técnicas dentro del Grupo Emergente de In-
vestigación GE09 del Instituto Maimónides de Investigación Biomédica de Córdoba (IMIBIC).

La persona contratada ha llevado a cabo, satisfactoriamente, todas las funciones esperadas e incluidas dentro
de la solicitud realizada por el grupo/centro. Concretamente, las actividades y resultados obtenidos por la
persona contratada se especifican a continuación:

1. Diseño y optimización de un protocolo de extracción de proteínas nativas de muestras de tejido de

Pseudomixoma Peritoneal (PMP), un adenocarcinoma mucinoso raro caracterizado por la
acumulación excesiva de glicoproteínas, que actúan como una barrera, dificultando la extracción de
biomoléculas como las proteínas.

2. Desarrollo de protocolos convencionales, y búsqueda y empleo de kits comerciales, para

cuantificación de las proteínas obtenidas previamente con el objetivo de conocer la concentración
de las mismas, lo cual es imprescindible para posteriores determinaciones experimentales realizadas

Calle Johannes Kepler, 1, Isla de la

Cartuja. 41092-Sevilla
 por Florina. Adicionalmente, ha llevado a cabo determinaciones de la calidad de las fracciones
proteicas extraídas, empleando electroforesis SDS-PAGE.

3. Aplicación de técnicas como Western Blots para la detección y cuantificación de proteínas específi-
cas basada en la afinidad antígeno/anticuerpo (Figura 1).

4. Determinación de la actividad de enzimas antioxidativas, proinflamatorias y marcadores de daño

oxidativo por medio de técnicas de espectrofotometría y fluorometría, con el fin de conocer la ho-
meostasis rédox del PMP (Figura 1).

5. Realización de extracciones de ARN y/o ADN, por medio de kits comerciales, de diversas muestras
biológicas (plasma, aspirado abdominal, cohorte de muestras de pacientes de PMP) con el fin de
emplear dichas fracciones para estudios genómicos, como en el estudio del perfil mutacional de
genes de interés en PMP por medio de una técnica extremadamente sensible como es la ddPCR, con
el fin de establecer una mejor clasificación de los pacientes con vistas a una futura medicina más
personalizada desde el punto de vista de las terapias asignadas (Figura 2).

6. Diseño de cebadores y análisis genómicos para la cuantificación de la expresión de genes de interés

en PMP mediante técnicas de PCR partiendo de la extracción de ARN y su retrotranscripción a
ADNc gracias a kits comerciales.

7. Participación en trabajos de experimentación animal, tales como cuidado de las líneas de ratones con
xenoimplante humano que el grupo ha desarrollado, realización de procedimientos concretos como
trasplantes de mucina, eutanasia en los casos necesarios, genotipado de diversas líneas de ratones, y
protocolos experimentales para el estudio pre-clínico de un potencial fármaco contra el PMP.

8. Preparación de extractos proteicos para su análisis por nanoHPLC-MS/MS para la obtención del
perfil proteico no sesgado del PMP, junto con los posteriores análisis bioinformáticos y enriqueci-
mientos funcionales para la detección de proteínas alteradas en rutas metabólicas celulares. Adicio-
nalmente, por medio de esta técnica se han detectado, además de proteínas humanas, proteínas pro-
cedentes de microorganismos, como bacterias, levaduras y hongos, las que son objeto de estudio con
la intención de abrir una nueva línea de investigación en esta dirección. De forma similar, ha parti-
cipado en el análisis de los datos obtenidos en otro estudio proteómico enfocado en la obtención del
perfil proteómico redox del PMP.

9. Desarrollo de protocolos propios de cultivos celulares tales como preparación de stocks de medios
de cultivo, así como mantenimiento de cultivos celulares primarios, pase celular de líneas celulares,
desarrollo y optimización de protocolos de dispersión celular a partir de tejido en fresco de pacientes
para el establecimiento de nuevos cultivos (2D) y establecimiento de organoides (cultivos 3D).
Por otro lado, Florina también ha realizado diversas revisiones bibliográficas sobre temas de interés para el
grupo GE09 con el objetivo de establecer nuevos protocolos para el desarrollo de procedimientos experi-
mentales no realizados con anterioridad en esta línea, así como para conocer el avance de la investigación
en este campo con el fin de buscar nuevas vías de investigación acordes a esta patología.

Finalmente, desde el punto de vista más técnico, Florina también se ha encargado de la gestión de residuos
de la mano de la responsable de residuos del grupo, así como de la gestión de stocks y comunicación con
comerciales para la realización de pedidos.

2. INTEGRACIÓN DEL INVESTIGADOR EN EL CENTRO DE I+D SOLICITANTE (Máximo 1000 palabras)

- Departamento, centro, laboratorio, etc.
- Proyecto/s de I+D o grupo o servicio de investigación en los que participa:
- Otros:

Florina, la candidata contratada, se incorporó al Grupo Emergente de Investigación GE09 “Investigación en

cirugía peritoneal y retroperitoneal” del Instituto Maimónides de Investigación Biomédica de Córdoba (IMI-
BIC), compuesto por un Investigador Principal, el Dr. Álvaro Arjona; un Co-Investigador Principal, el Dr.
Antonio Romero; una investigadora posdoctoral, la Dra. María del Carmen Vázquez Borrego, que a su vez
se ha incorporado al grupo mediante una beca competitiva (Sara Borrell), y una investigadora predoctoral.
El GE09 centra su línea principal de investigación en el estudio del adenocarcinoma mucinoso raro denomi-
nado Pseudomixoma Peritoneal, que se caracteriza por la continua y excesiva acumulación de una sustancia
mucinosa, compuesta por glicoproteínas, dentro de la cavidad peritoneal cuyo único tratamiento actual es
una cirugía citorreductora. A pesar de ello, existe un elevado número de recaídas, las cuales no pueden volver
a someterse a cirugía, por lo cual dichos pacientes no tienen más oportunidades terapéuticas. Adicionalmente,
el estudio de la fisiopatología de esta enfermedad se hace complejo debido a la barrera mucosa que supone
la elevada presencia de glicoproteínas. Por este motivo, resulta necesaria la investigación en esta enfermedad,
con el fin de conseguir dianas terapéuticas eficaces y personalizadas que puedan ofrecer a los pacientes una
oportunidad y una mejor calidad de vida.

Con el objetivo de avanzar en esta línea de investigación, el grupo GE09 ha desarrollado un primer protocolo
de extracción de proteínas basado en la depleción de glicoproteínas mediante cromatografía de afinidad y un
análisis posterior por espectrometría de masas, permitiendo obtener el primer perfil proteómico característico
de esta patología. Adicionalmente, se ha desarrollado otro protocolo experimental a partir de la muestra
tumor sin modificar y manteniendo las moléculas en su estructura nativa, abriendo camino al análisis de los
extractos obtenidos por medio de estudios bioquímicos y moleculares con las proteínas totalmente funciona-
les, siendo posible desarrollar ensayos de actividad, así como análisis no sesgados. Florina ha tenido un papel
fundamental en el desarrollo de esta variante más avanzada de extracción de proteínas nativas a partir de
mucina tumoral de pacientes con PMP.
Por todo lo anterior, entendemos que la persona contratada dentro del Grupo Emergente de Investigación
GE09 del IMIBIC, gracias al Programa Operativo de Empleo Juvenil y de la Iniciativa de Empleo Juvenil,
se ha integrado perfectamente en nuestro grupo, así como en el centro solicitante y ha llevado a cabo multitud
de tareas de forma satisfactoria, destacando su implicación y elevado interés en las líneas de investigación
del grupo desde el inicio de su incorporación. Además, es importante destacar su elevada capacidad de apren-
dizaje y trabajo autónomo, tanto en grupo como individualmente. En resumen, a lo largo de todo su contrato
laboral, Florina ha participado en multitud de procedimientos experimentales encuadrados dentro de los si-
guientes proyectos de investigación que el grupo lidera:

- Caracterización molecular del Pseudomixoma Peritoneal y desarrollo de biomarcadores y terapias

diana en un modelo de ratón con xenoimplante humano (PI19/01603; Instituto de Salud Carlos III).

- Bromelina + N-Acetilcisteína intratumoral en Pseudomixoma Peritoneal recidivado e irresecable.

Estudio en fase I/II de brazo único (PI-0064/2020; Consejería de Salud de la Junta de Andalucía).

- Characterization and validation of new therapeutic, diagnostic, and prognostic targets in Pseudo-
myxoma Peritonei (PI22/01213; Instituto de Salud Carlos III).

Adicionalmente, Florina ha realizado diversos cursos formativos iniciales que el IMIBIC facilita a las nuevas
incorporaciones con el fin de conocer las “Medidas en el trabajo frente al COVID-19”, “Seguridad en el
trabajo en laboratorios”, “Almacenamiento y manipulación de productos químicos”, entre otros (Anexo
III.A). De forma similar, también se ha beneficiado de un curso proporcionado por la Unidad de Formación
de FIBICO-IMIBIC dentro de la Oferta Formativa 2023 para el personal de FIBICO (“Curso Superior en
Estadística Aplicada. Análisis de Datos y SPSS”) (Anexo III.B). Por otro lado, ha tenido la oportunidad de
presentar, en modalidad de co-autoría, un póster (“Oxidative environment and redox homeostasis in a rare
malignant disease: Pseudomyxoma peritonei”) dentro de las jornadas “13th IMIBIC Young Investigator
Meeting” organizadas por el propio IMIBIC (Anexo III.C).

De esta forma, la implicación de Florina en los diferentes proyectos de investigación que nos han sido otor-
gados, así como su participación en las diversas actividades formativas y de divulgación científica organiza-
das por el IMIBIC, supone un gran beneficio para la persona contratada debido al impacto que presenta sobre
su futura empleabilidad, ya que durante su relación laboral con nosotros ha aprendido a llevar a cabo multitud
de técnicas ampliamente utilizadas en el campo de la investigación molecular, que sumado a su proactividad
y autonomía, le da un valor añadido a su CV. De igual modo, la incorporación de Florina ha sido beneficiosa
tanto para el grupo en el que se ha integrado como para la institución, ya que la producción científica se ha
visto incrementada gracias a su capacidad para desarrollar los procedimientos experimentales necesarios
además de la posterior interpretación de los resultados obtenidos. Así, por todo lo descrito anteriormente, se
le propone a Florina continuar su carrera investigadora, por medio de la realización de una Tesis Doctoral
dentro del GE09, obteniendo su aceptación y procediendo a su matriculación en el Programa de Doctorado
de Biomedicina de la Universidad de Córdoba (UCO).
3. RENUNCIAS Y SUSTITUCIONES
No aplica.

4. CONTRIBUCIÓN AL PERFECCIONAMIENTO DE LAS CAPACIDADES DE LA PERSONA CONTRATADA

(Máximo 1000 palabras)
Descripción de la forma y medida en la que la actividad realizada mediante la ayuda concedida ha contribuido al perfeccionamiento de las capa-
cidades adquiridas de la persona contratada.

La contratación de personal investigador joven por medio del Sistema de Garantía Juvenil supone un gran
beneficio tanto para los jóvenes investigadores sin experiencia a la hora de su incorporación al mundo labo-
ral, que de otro modo sería compleja, y en ciertas ocasiones frustrante, optando por buscar oportunidades en
otros sectores y/o países; como para las entidades beneficiarias, que incorporan a su plantilla a personal con
ilusión por aprender, seguir formándose y aplicar los conocimientos que poseen y los que van adquiriendo.

En este caso, la incorporación de Florina al grupo GE09 del IMIBIC, presenta un gran impacto sobre su
empleabilidad ya que durante su relación laboral con nosotros ha aprendido a llevar a cabo multitud de
técnicas ampliamente utilizadas en el campo de la investigación molecular, tales como protocolos de extrac-
ción y cuantificación de proteínas y ácidos nucleicos, técnicas de separación de moléculas (electroforesis y
sus modalidades), técnicas de detección y cuantificación de expresión génica (PCR y sus modalidades), in-
munoensayos (Western), determinación de actividad enzimática, trabajo con cultivos celulares, manejo y
desarrollo de protocolos con animales de experimentación, etc. El conocimiento y experiencia en todas estas
técnicas y líneas, junto con la proactividad, autonomía e ilusión por seguir aprendiendo de Florina, le da un
valor añadido a su CV, mejorando de esta forma sus perspectivas laborales de futuro.

Por otro lado, cabe destacar también que la publicación de un artículo como co-primera autora publicado
recientemente en la revista Frontiers in Oncology (Anexo III.D), y otro en el que la trabajadora ha colaborado
publicado en la revista European Journal of Surgical Oncology, la ayuda enormemente a la hora de la soli-
citud de becas predoctorales con el fin de continuar su carrera investigadora. Adicionalmente, la participa-
ción en congresos (“13th IMIBIC Young Investigators Meeting” organizado por el IMIBIC y “VII Meeting
for Young Proteomics Researchers” organizado por la Sociedad Española de Proteómica) mediante la pre-
sentación de posters, dando difusión a los resultados obtenidos en las investigaciones llevadas a cabo por el
GE09, en las que Florina ha contribuido activamente como parte del equipo de investigación, desarrollando
los procedimientos experimentales, de igual forma contribuirá a mejorar su CV.

De esta forma, Florina ha podido desarrollar capacidades destacables en un profesional como poseer una alta
adaptabilidad y versatilidad, capacidad de análisis crítico y resolución de problemas, comunicación efectiva,
capacidad de comprender, adquirir y aplicar conocimientos de forma rápida y eficaz y trabajar tanto en grupo
como individualmente de forma organizada, autónoma y proactiva sin perder el interés y la ilusión por seguir
aprendiendo.

Es por todo esto, que tal como se ha comentado con anterioridad, se le ha propuesto a Florina continuar su
carrera investigadora con nosotros por medio de la solicitud de admisión al Programa de Doctorado en Bio-
medicina de la UCO, así como una beca predoctoral (Contratos Predoctorales de Formación en Investigación
en Salud 2023 – AES 2023 – ISCII).

5. DOCUMENTACIÓN ACREDITATIVA DE LOS TRABAJOS EFECTUADOS POR LA PERSONA CONTRATADA

Deberá relacionarse y adjuntarse documentación acreditativa de los trabajos efectuados por la persona contratada (resultados del trabajo efec-
tuado, pruebas gráficas, registros de asistencia, etc.).

Los trabajos realizados por la persona contratada y los resultados obtenidos se justifican con las siguientes
Figuras y Anexos:

Figura 1. Marcadores de estrés oxidativo en muestras de PMP. (A) Niveles de expresión relativa de HIF-1α
en mucina líquida (n=5) y mucina sólida (n=5) comparados con tejidos sanos (n=5; apéndice no tumoral y
colon sano) evaluados por Western Blot. La Unidad Densitométrica Arbitraria (ADU) para la proteína fue
normalizada por el valor de Normalización de Proteína Total (NPT). (B) Actividad de la catalasa (U/mg)
en mucina líquida (n=5) y mucina sólida (n=5) en comparación con tejidos sanos (n=5; apéndice no tumoral
y colon sano) evaluada mediante ensayo enzimático. El análisis ANOVA de una vía se realizó con múltiples
comparaciones (mucina líquida y mucina sólida vs. tejido sano). * p<0.05, ** p<0.01 y *** p<0.001.

Figura 2. Estudio mutacional de muestras de biopsia líquida de pacientes de PMP para mutaciones en genes
como KRAS (A), GNAS R201C (B) y GNAS R201H (C) empleando técnicas de ddPCR y su representación
por medio del software QuantaSoft. En las gráficas A, B y C, la nube de puntos de color gris corresponde a
eventos negativos tanto para la mutación, así como para el alelo silvestre; mientras que la nube de puntos
azul representa los eventos positivos para la mutación en estudio, y finalmente, la nube de puntos verde hace
referencia a los eventos positivos para el alelo silvestre.
ANEXO III.A – Certificados cursos iniciales IMIBIC
ANEXO III.B – Certificado curso Oferta Formativa 2023 FIBICO-IMIBIC
ANEXO III.C – Presentación de resultados a congresos
ANEXO III.D
La persona tutora Vº. Bº. Representante Legal
D. Antonio Romero Ruiz D. Álvaro Granados del Río

ROMERO Digitally signed

by ROMERO
RUIZ RUIZ ANTONIO -
ANTONIO - 79221402H
Date:
79221402 2023.11.06
H 11:35:12 +01'00'