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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE ODONTOLOGÍA

LÍNEA

PROYECTO LÍNEA DE INVESTIGACIÓN

“BIOTECNOLOGÍA Y BIOMATERIALES EN ODONTOLOGÍA”

Autor:

CD. MG. Pablo Alejandro Millones Gómez

TRUJILLO-PERU

2017
TÍTULO DE LA LINEA:

“BIOTECNOLOGÍA Y BIOMATERIALES EN ODONTOLOGÍA”


CONTENIDO

i. Carátula
1. TÍTULO DE LA TESIS ………………………………………………………….. 1

2. CONTENIDO ……………………………………………………………………… 2

3. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………….. 4

4. PLANTEAMIENTO DE LA LINEA DE INVESTIGACION……………………… 6

4.1 Planteamiento del problema …………………………………………………..……. 6


a) Caracterización del problema………………………………..………………. 6

b) Enunciado del problema …………………………………………….. 6

4.2 Objetivos de la investigación ………………………………………………. 7

Objetivo general ……………………………………………………………….............. 7

Objetivos específicos ……………………………………………..…………... 7

4.3 Justificación de la investigación ………………………………………………..…… 7

5. REVISIÓN DE LA LITERATURA. ……………………………………………..…. 9

Antecedentes ………………………………………..………………………………... 9

6. METODOLOGÍA ……………………………………………………………………. 24

6.1 Tipo y nivel de investigación…………………………..…………..………………….. 24

6.2 Diseño de la investigación …………………………….……………………………… 24

6.3 Población y muestra….………………………………….……………………………. 25

6.4 Plan de análisis………………………………………….………………………..…… 28

6.5 Diversificación de la Línea de Investigación……………..…….…………………….. 28

6.6 Criterios éticos………………………………………………………….……..………. 29

7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………………..……… 31

ANEXOS…………………………………………………………………………….…… 35
3. INTRODUCCIÓN

La biotecnología pretende valerse de los procesos fisiológicos ocurridos en

todas las células de nuestro organismo, aprovechando estos mismos para su

beneficio ya sea potenciándolos o manipulándolos; es por esto de vital

importancia primero comprender esas propiedades.

Esto mantuvo fascinada a la humanidad desde que tuvo uso de razón; así, al

realizarse preguntas tan sencillas como el por qué curan las heridas, estaban

sentando las bases para la biotecnología. Inicialmente toda ciencia comienza

con la identificación de fenómenos y el planteamiento de la problemática que

su compresión implica; así la biotecnología en un inicio se dedicaba

simplemente a la observación y planteamiento de interrogantes de los

procesos fisiológicos en las personas y/o animales prestando principal

fascinación a temas como la herencia de caracteres (padre e hijo), el origen

de las enfermedades, la cicatrización y recuperación de lesiones (llamando

principal atención los casos de regeneración visto en animales) o la muerte

misma; para luego cada vez con un rigor más científico abocarse a su

descripción fenomenológica.

De esta manera, conforme se desarrollaban nuevas tecnologías y métodos

aplicados a la biología, la ciencia de la biotecnología comenzó a develar sus

fundamentos celulares; actualmente está entrando en una nueva era en la cual

los enfoques terapéuticos con la terapia génica, terapia celular, ingeniería

tisular, etc, amplían el arsenal de posibilidades dejando prácticamente a un

lado el concepto que hasta hace pocos años se consideraba como cierto que

enunciaba la salud como sólo el estado de bienestar físico y mental 1,2. Antes

de comenzar a presentar las aplicaciones de la biotecnología en la actualidad

buscaremos definirla de la manera más precisa.


La palabra biotecnología significa, en un sentido etimológico el estudio de

la técnica aplicada a los sistemas biológicos. Proveniente del griego tegne,

que se traduce como “técnica”; logos, “estudio” y bios que se traduce como

“vida”.

Como técnica se define la manera en que un conjunto de recursos materiales

o intelectuales son aplicados en una tarea específica. Como tecnología

designamos al conjunto de conocimientos de orden práctico y científico que,

articulados bajo una serie de procedimientos y métodos, son aplicados para

la obtención de bienes de utilidad y se dedica a transformar y mejorar estos

métodos (la técnica). Concluyendo podemos definir a la biotecnología como

a toda aplicación tecnológica que se valga de sistemas biológicos, organismos

vivos o sus derivados para la creación o modificación de productos y/o

procesos enfocados a restablecer la salud 1-3.

Siendo las aplicaciones de la biotecnología tan numerosas y diversas se han

agrupado en cuatro grandes grupos: biotecnología azul designada a describir

su aplicación en ambientes marinos, biotecnología verde que aplica en los

procesos agrícolas, biotecnología blanca que es aquella aplicada a los

procesos industriales y por último la biotecnología roja que se aplicará en

procesos médicos poniendo como ejemplos el diseño de organismos para

producir antibióticos, los diagnósticos moleculares, el desarrollo de vacunas,

los biofármacos, las terapias regenerativas y terapias génicas2-5.

Para una comprensión más estructurada hemos desarrollado una propuesta

sistematizada para su clasificación presentada en la tabla 1 y explicada más

adelante. Aunque se ha desarrollado de forma considerable en el área médica,

son muy pocos aún los estudios enfocados al área estomatológica no

pudiendo aprovecharse todo su potencial citológico. Queda clara la

importancia de crear una línea de investigación en esta área, dando pase a los
alumnos y/o profesionales al desarrollar nuevas biotecnologías o mejorar las

ya existentes.

4. PLANTEAMIENTO DE LA TESIS

4.1 Planteamiento del problema

a) Caracterización del problema

La odontología clínica en la actualidad se ha centrado prioritariamente en

la utilización de tecnologías para restaurar lesiones patológicas; es recién

en estos últimos años cuando el enfoque curativo ha cambiado por uno

preventivo siendo esto aún insuficiente de sólo valernos de los rasgos

clínicos del paciente (o los detectados por las tecnologías actuales de

imageniología) puesto que la principal predisposición para una enfermedad

se encuentran en la misma estructuración celular (genoma, proteoma, y

metaboloma, etc) y su interacción con el ambiente (microbioma,

xenobióticos, etc). Las tendencias de los organismos internacionales con

la línea de investigación propuesta por la universidad ULADECH

CATÓLICA como institución aplique la biotecnología y Biomateriales en

nuevas tendencias como por ejemplo la empresa Annales Nestlé propone

la utilización del microbioma humano y los probióticos dado en

implicaciones para la pediatría (encargado del Departamento de Patología,

Texas Children’s Hospital, Baylor College of Medicine, Houston, Texas,

EU). Como también la Universidad de Malaga, facultad de Biología


propone crear biofármacos para curar a las personas que padecen

enfermedades, realizando estudios genéticos y experimentos de

manipulación genética.

b) Enunciado del problema

“Es viable la utilización de la biotecnología y Biotecnología para la modificación o

instauración de nuevos conocimientos en la práctica clínica”

4.2 Objetivos de la investigación

a) Objetivo general

Evaluar la viabilidad de la utilización de la biotecnología para la modificación o

instauración de nuevos conocimientos de la práctica clínica.

b) Objetivos específicos

• Evaluación de la manipulación génica aplicada en terapias para las diferentes áreas

estomatológicas.

• Evaluación de la manipulación metabolómica (citocina, etc) en terapias para las

diferentes áreas estomatológicas.

• Evaluación de la descripción fenómica para la estructuración de protocolos en las

diferentes áreas estomatológicas.

• Evaluación de la manipulación de linajes celulares especiales (células madre) en

las diferentes áreas estomatológicas.


• Evaluación de la manipulación del microbioma para la estructuración de

protocolos en las diferentes áreas estomatológicas.

• Evaluación de biomateriales para la estructuración de protocolos en las diferentes

áreas estomatológicas.

• Evaluación de la efectividad de biomateriales dentales y su aplicación in vitro o in

vivo en las diferentes áreas estomatológicas.

4.3 Justificación de la Investigación

Las características de la metodología de tratamiento estandarizadas para la

estomatología (comparado con otras ciencias biológicas) sigue dejando a un lado los

beneficios que el uso de la biotecnología nos brindarían en la promoción, prevención,

diagnóstico, alivio y curación de las patologías / daños que aquejan al sistema

estomatognático1,2.

Considerando que la introducción de estas ciencias al marco clínico habitual de una

población le confiere mayor credibilidad y porcentaje de éxito en lo que terapias

respecto; se consideraría este uno de los primeros pasos para el avance en el campo

médico de nuestro país.

La siguiente línea de investigación respeta los parámetros establecidos en

“REGLAMENTO DE FORMACIÓN EN PRINCIPIOS MORALES Y

RELIGIOSOS” Versión 005 - Aprobado por acuerdo del Consejo Universitario con
Resolución N° 1430-2014-CU-ULADECH Católica, de fecha 04 de diciembre de

2014.

Indicado en el Articulo 5, inciso “a” – Mediante esta Línea de Investigación se

reconoce y comprende el milagro de la Vida, con ello podemos “…Implementar

acciones para acompañar la vida de todos los miembros de la comunidad universitaria,

promoviendo un encuentro personal y comprometido con Jesucristo…” Indicado en

el Articulo 5, inciso “b” – Promovemos con esta línea de investigación

“…Implementa el diálogo entre fe y razón, fe y cultura.” Pues queda claro que al

recaptar y generar conocimientos sobre el funcionamiento fundamental del organismo

nos permite conciliar los aspectos religiosos al suplirle una plataforma científica como

parte integrada de la fe.

En ésta línea de biotecnología, se plantean proyectos en los cuales manipulando

organismos vivos seremos capaces de restablecer la salud del ser humano, con el fin

de poder curar enfermedades, mejorando la calidad de vida, teniendo en cuenta la

ética y la aprobación de la iglesia sin atentar contra la vida del ser humano (dentro del

uso de células madre cabe resaltar el hecho de que el cigoto es en sí una célula madre

y nos está éticamente vedado el manipularlas, pues éstos son ya seres humanos, sólo

que en formación).

5. REVISIÓN DE LA LITERATURA.

a) Antecedentes

Se definió la biotecnología como a toda aplicación tecnológica que se valga

de sistemas biológicos, organismos vivos o sus derivados para la creación o

modificación de productos y/o procesos enfocados a restablecer la salud 1-3.


Descomponiendo el término se puede concluir en que la biotecnología agrupa

todo el conjunto de técnicas y conocimientos que se utilizan organismos

vivientes o sustancias provenientes de estos y busca modificar las técnicas y

conocimientos o desarrollar nuevos.

De acuerdo con el especialista Pierre Douzou la biotecnología se desarrolló

en tres etapas2: Considerada la etapa empírica. Es cuando la biotecnología

nace con el establecimiento de las sociedades humanas y su necesidad de

desarrollar organismos que le permitieran mantener asegurada la

alimentación y lograr su expansión territorial, además de adquirir sus

conocimientos para salvaguardar la vida. 1,2

1. Una segunda etapa considerada como la de transición, se presenta como

intervención de la ciencia y la técnica en el desarrollo de industrias

biotecnológicas que contribuyen

al desarrollo de los grandes imperios1,2

2. Y la tercera etapa considerada de la biotecnología moderna que nació con la

aparición de la biología molecular, disciplina que permitió descifrar en los

años 50 la estructura del ADN (Watson y Crick 1953), así como los

mecanismos para traducir esta información genética en proteínas; se puede

considerar que en el presente milenio, la biotecnología moderna está

ingresando a una nueva fase o nueva etapa en la cual viene marcada por la

decodificación del genoma humano, en esta etapa actual se ha logrado tomar

conciencia de que la ciencia se transforma a un tipo de actividad

multidisciplinaria, dándose la convergencia de varias estrategias,

conocimientos y herramientas; esto se ve reflejado en el simple comprender

del concepto de salud que actualmente no es el mismo de hace 20 años cuando

se consideraba como un concepto


de carácter estático (el bienestar físico y mental de una persona). Mientras

que actualmente la investigación ha evidenciado, cada vez de manera más

contundente, como la salud y la enfermedad se constituyen en complejos

sistemas donde las interacciones entre las características intrínsecas

(genotípicas) de las personas, son modificadas o moduladas por condiciones

extrínsecas, generando un proceso dentro del cual se encuentren en

permanente interacción; en este contexto se habla entonces del proceso salud

/ enfermedad en el ciclo vital humano 1,2.

Puesto que la biotecnología implica la utilización de organismos vivos, partes

de ellos o sus subproductos se pueden concluir, en palabras sencillas, que el

mismo organismo humano y su comportamiento deben servir como base de

conocimiento y manejo tanto de las condiciones de la salud como de la

enfermedad.

Propiciar salud en un individuo (objetivo de la biotecnología) a implicado

construir herramientas que permitan el abordaje del problema en sus

distintos momentos: promoción (educación, motivación, concientización)

prevención (con medidas específicas como conservación del medio ambiente,

vacunas, alimentación), diagnóstico(anticuerpos monoclonales, sondas

moleculares, marcadores, histoquímicos), alivio (fármacos de naturaleza

proteica, metabolitos secundarios) y curación (implantes, trasplantes, terapia

génica, biomiméticas). En los cuales se revisarán la participación de la

biotecnología de forma breve a continuación1:

PROMOCIÓN:

En los últimos años los medios de divulgación tradicionales y los factores

multimedia han sido la mejor herramienta para motivar a las comunidades

hacia la utilización de productos biotecnológicos, asociándolos a las

actividades cotidianas, tal es el caso de los medios de diagnóstico precoz del

embarazo, de detección prematura de placa bacteriana a través de enjuagues


y métodos de renovación microbiana para solucionar la halitosis. La

televisión y la radio frecuentemente difunden programas de bienestar que

tienen su origen en trabajos biotecnológicos.

PREVENCIÓN:

Sentándose en dos áreas principales como son:

El medio ambiente, como se mencionó inicialmente no sólo la genómica es

responsable del proceso de salud – enfermedad, deben considerarse los

factores exógenos asociados los cuales tienen la capacidad de determinar en

un momento dado la modificación total del organismo de una persona, por

ello, sin lugar a dudas el medio ambiente juega un papel fundamental en la

conservación de la salud. En aspectos tan importantes como la calidad del

aire que respiramos, el agua que utilizamos, o el terreno en que nos

movemos, la biotecnología se constituye en un factor determinante en los

procesos de evaluación de estos recursos (toxicología, ecotoxicología)

además, una vez se ha identificado a los materiales contaminantes, participa

en el proceso de descontaminación (como por ejemplo a través de la

utilización de microorganismos capaces de degradar los compuestos

contaminantes, como en los procesos de digestión mediada por

microorganismos anaerobios dentro de las plantas de tratamiento de agua o

la capacidad de digerir contaminantes como el petróleo en casos de derrame)

y nuevamente entra a tallar en la constatación de que el recurso procedente

de un tratamiento biotecnológico posee las cualidades necesarias para su

consumo utilizando como reactivo indicador un bioensayo, a este proceso se

denomina biorremediación. Las vacunas, proporcionan alternativas

altamente eficientes para prevenir ciertas enfermedades mediante la

obtención de vacunas, que utiliza virus atenuados o inmunoglobulinas

humanas durante el proceso de incubación, los cuales son obtenidos mediante

procesos biotecnológicos. Es importante recalcar que el estudio de las bases


moleculares de las enfermedades infecciosas es lo que ha hecho posible al

desarrollo de las vacunas sintéticas basadas en péptidos.

Además la aplicación preventiva en el área odontológica puede evidenciarse

en los enjuagues para la detección prematura de placa bacteriana o las

golosinas que incluyen el xilitol en su composición.

DIAGNÓSTICO:

La obtención de Anticuerpos monoclonales (MABS) representan elementos

importantes para el establecimiento de un certero diagnóstico, un ejemplo

vendría a ser la utilización del anticuerpo monoclonal 15B3 que es capaz de

reconocer selectivamente una forma anormal y patológica del prion PRpc

que se encuentra normalmente en las células y que al encontrado de forma

anormal constituye el agente causal de la enfermedad de CREUTZFELDT –

Jacob; así mismo podrían concretarse estudios para desarrollar anticuerpos

capaces de reconocer los indicios de las principales patologías orales antes

de que estas se instauren.

ALIVIO:

Sin lugar a duda los fármaco constituyen un elemento fundamental en el

alivio de las enfermedades, de manera genérica se podría hablar de

farmoquímicos y biofármacos dependiendo de su procedencia; siendo que la

biotecnología entra a tallar en la obtención de los dos tipos de fármacos

mencionados (aunque principalmente en los biofármacos).

Respecto a los biofármacos, el conocimiento cada día más profundo de los

planteamientos moleculares involucrados en las diferentes patologías ha

conducido a la obtención de fármacos que tienen la particularidad de ser una


réplica exacta de respuesta endógena responsable de la alteración bioquímica

que se presenta; y que utilizamos de forma conveniente podrían resolver la

patología, así en la actualidad se están buscando comprender a precisión los

mecanismos moleculares involucrados en la periodontitis, buscando

sintetizar un biofármaco capaz de tratarlos.

CURACIÓN:
Busca restablecer los tejidos orgánicos dañados por alguna patología o lesión

valiéndose de trasplantes, implantes, biosustitución o mediante técnicas de

ingeniería tisular las cuales nos presentan la opción más prometedora.

EXTENSIÓN DE LA BIOTECNOLOGÍA

La biotecnología al valerse de seres vivos puede sintetizarse en el conocimiento y el

manejo de sus principales dimensiones:

EL GENOMA, es el contenido de ADN que tiene un organismo, en 1953,

Watson y Crick describieron la estructura molecular de doble hélice del ADN;

posteriormente fue aislado por primera vez por Miescher en 1969. Este ADN

porta la información necesaria para la síntesis de las proteínas que los

organismos necesitan para la vida5-7.

El genoma humano está compuesto por tres millones de pares de bases. El

orden y la disposición de estas, es extremadamente importantes, ya que

marcan la diversidad de los organismos (puesto que todos los seres vivos

contienen las mismas bases)5.

La lectura del genoma humano comenzó en el año de 1990 finalizando 13

años después logrando identificar entre 25 000 a 30 000 genes contenidos en

el ADN humano. Entre sus más actuales aplicaciones estomatológicas se


pueden citar las siguientes: la identificación del gen Msx1 y Msx2 que juegan

un papel importante en el desarrollo craneofacial (incluyendo las piezas

dentales) podrían terminar en el desarrollo de mecanismos de diagnósticos

temprano de maloclusiones, además combinando la naturaleza de estos

genes, junto a la ingeniería tisular basada en células madre proponen el

desarrollo de una biotecnología capaz de inducir la formación de una pieza

dental completa en el alvéolo post extracción o incluso plantea la posibilidad

de generar una tercera dentición en la especie humana5-7.

En otra investigación el Dr Hillman ha utilizado la biotecnología recombinante de

ADN logró modificar genéticamente el Streptococcus mutans para producir una

cepa bacteriana que pueda ser utilizado para prevenir la caries dental; esta cepa

posee dos cualidades únicas: la incapacidad de producir ácidos promotores de

caries y la capacidad de producir un compuesto antibacteriano tóxico para las

bacterias cariogénicas presentes4.

La terapia génica puede ser utilizada también para el tratamiento del dolor

crónico severo. Numerosos estudios han demostrado que los genes pueden

ser transferidos a células de sistemas nerviosos central de modelos animales

(por ejemplo la transferencia del gen B-endorfina produce analgesia efectiva

en ratas). Ese procedimiento podría ser de gran utilidad para el tratamiento

de la neuralgia del trigémino7,8.

También se ha propuesto que la sensibilización de las células tumorales con

ganciclovir utilizando como vector el virus asociado al adenovirus, podría ser

utilizado con éxito en la terapia génica para el carcinoma oral escamoso

celular7,8.

Aunque el conocimiento del genoma humano se ha considerado un gran

avance científico que podrá abrir nuevos caminos para el diagnóstico y


tratamiento de enfermedades, la verdad es que toda esta información se quedó

corta cuando se observó que el organismo sintetizaba muchas más proteínas

que el número de genes presentan y que la acción de cada proteína incluidas

su secuencia y plegamiento eran fundamentales para entender los

mecanismos de funcionamiento celular y funcionamiento de organismos

(unicelulares o multicelulares).9

EL PROTEOMA, es el conjunto de proteínas que el organismo sintetiza a

partir de los genes que contienen. Este conjunto de proteínas determina como

son los organismos, como funciona su cuerpo, como se comporta ante

infecciones, ante los cambios de entorno o el estado fisiológico o patológico.

Ellos forman parte de procesos que son complejos, actuando de manera

dependiente controlando todas las reacciones biológicas de los organismos 9-


11
.

Cabe resaltar que su estudio permitirá utilizar toda esta información cuando

se disponga de los conocimientos y métodos necesarios y así poder

comprender los mecanismos proteicos.

El uso sinérgico basadas en técnicas que trabajaran sobre este campo, da lugar

a una clasificación convirtiéndose en una aplicación biotecnológica siendo:

I) Herramientas para el análisis global y la separación de los componentes del

proteoma. En esta categoría se permite aislar prácticamente todas las proteínas

de un proteoma en una matriz bidimensional y así poder ser analizadas

directamente siendo la herramienta fundamental para la segunda categoría

(Técnica de electroforesis)10.

II) Herramientas para el análisis individual de los componentes del proteoma. Las

proteínas ya son analizadas (técnica espectrometría de masas), siendo útil para


obtener el espectro de las masas del conjunto de péptidos denominadas “huellas

peptídicas” siendo

características de cada una de las proteínas y permiten identificarlas una a una

en la base de datos constituyendo herramientas para la tercera categoría 10.

III) Técnicas para el proceso e interpretación de datos.

Mediante las dos primeras categorías y las técnicas utilizadas vamos a poder

procesar los resultados a la base de datos siendo herramienta fundamental para

la identificación sistemática de proteínas10.

Aplicaciones de la Proteómica

Los proyectos de caracterización del proteoma pretenden investigar la

función de las proteínas comprendiendo las interacciones que sufren en el

interior de la célula. Estos proyectos responden a la noción cada vez más

extendida de que las proteínas no actúan de forma aisladas, sino a través de

complejos macromoleculares, los cuales sufren alteraciones en sus niveles de

expresión a consecuencia de alteraciones fisiopatológicas o inducidas por

agentes externos; se busca entonces la identificación de las proteínas que

sufren alteraciones en sus niveles de expresión a consecuencia de estos

cambios permitiendo así la caracterización del mecanismo molecular y la

identificación de dianas farmacológicas así como de posibles marcadores

diagnósticos9-11.

La utilidad práctica de los resultados obtenidos con la Proteómica en relación

con la salud está cobrando gran importancia. El descubrimiento de

marcadores proteicos de enfermedades como las cardiovasculares, las

neurológicas, las oncológicas, las metabólicas, entre otras, tiene una

aplicación clínica en un futuro próximo en el diagnóstico, el seguimiento y el

tratamiento de estas enfermedades11.


METABOLOMA, nos referimos al metabolismo siendo el conjunto de

reacciones bioquímicas, procesos fisio-químicos, moléculas y elementos

químicos presentes en un organismo vivo que ocurren, siendo la base de la

vida permitiendo crecer, reproducirse, mantener estructuras, responder a

estímulos, etc; viéndose influidos tanto por factores internos como el estado

hormonal del individuo o la hora del día, como por factores externos. Se han

identificado más de 2.500 metabolitos, 1200 principios activos y 3500

componentes de alimentos permitiendo conocer el estado del organismo

haciendo posible el estudio de respuestas celulares, mecanismos de defensa

y mecanismos de homeostasis. Estos conocimientos se encuentran

actualmente en un profundo análisis científico y aunque aún son

relativamente escasos los que se dedican al área

estomatológica presenta a continuación los más relevantes8, 11-12:

En el 2007, Nelson13 en un estudio realizado en 13 pacientes que

manifestaban lesiones de tejidos Trasudados (liquen plano), investigó sobre

los posibles marcadores biológicos (citoquinas), para detectar el nivel de

factor nuclear kappa β dependientes de citoquinas, TNF-alfa, IL-1-alfa, IL-6

y IL-8 en tejido Trasudado directamente de las lesiones de liquen plano, la

cual indicó que el factor nuclear kappa β es dependiente de citoquinas

inflamatorias; puede ser detectado aumento de estos niveles en los tejidos

orales Trasudado en pacientes con liquen plano oral.

En el 2013 Herane17 en 23 pacientes con periodontitis crónica, buscó analizar

la expresión de citoquinas Th17 y su correlación con el área periodontal

inflamada en estos pacientes, resultó que hubo un aumento, no significativo,

de los niveles de IL-17A, IL6 e IL-23. El estudio determinó que hubo una

disminución de la IL-10 y los niveles de IL-17A se correlacionaron

positivamente con el área periodontal inflamada. Con ello se confirma que

en niveles bajos de IL-10 la presencia de periodontitis crónica es inevitable,


mientras que altos niveles de IL-10 mantienen estables las lesiones gingivales

sin progreso a periodontitis crónica; esta hipótesis se encuentra reforzada por

estudios como los de Macín S. en el 2010 18.

En el 2007 Brekalo I, et al.14 Realizó un estudio sobre la expresión del Factor

de necrosis tumoral-alfa y la interleucina 6 en lesiones periapicales en

humanos, se demostró que en lesiones sintomáticas los niveles de IL-6 fueron

elevados a comparación de las lesiones asintomáticas, en el TNF –alfa no

hubo diferencia entre los niveles sintomáticos y asintomáticos. Mientras que

en el estudio de Fredriksson L. (2006)15 al analizar las concentraciones del

Factor de necrosis tumoral-α en la articulación temporo-mandibular y líquido

sinovial con relación al tratamiento del dolor intraarticular, demostró que un

alto nivel de pretratamiento de TNF-α en el líquido sinovial se asoció con el

aumento de dolor, mientras que una disminución de TNF-α se asociaba a la

eliminación del dolor, por lo tanto la presencia de TNF-α en el líquido

sinovial predice el efecto del

tratamiento intra-articular.

En el 2006 en un estudio de Simcic D, et al.16 se demostró que hay altos niveles

de IL2 e IL-6 en la saliva de los pacientes con síndrome de boca ardiente.

EL FENOMA, es el conjunto de todos los fenotipos expresados por una

especie que van desde las características de una célula como de un tejido, un

órgano, un organismo o toda la especie misma. El fenoma comprende lo

rasgos fenotípicos (características apreciables) derivadas de la interacción de

los factores génicos, proteómicos y metabolómicos con su medio ambiente.


Se considera que todo organismo vivo es un hologenoma (teoría del

hologenoma), resultado de la interacción de sus componentes, los que fueron

mencionados anteriormente.

Una de las más resaltantes biotecnologías desarrolladas producto de

manipulación génica, proteómica y metabólica es el desarrollo de las cápsides

virales o VLPs (Virus- Like Particles), que recientemente han recibido gran

atención debido al alto potencial que presentan dentro del campo de la

medicina (biotecnología- nanomedicina).

Las cápsides virales o VLPs se componen únicamente de las proteínas de la

cápside viral, y a diferencia de los virus, no contienen el material genético

natural de éstos, por lo que no son partículas infecciosas. Estas partículas

pueden ser utilizadas como andamiajes básicos para el diseño y fabricación

de materiales nanoestructurados.

Dentro de este contexto, algunas de las características que hacen atractivas a las

cápisdes virales son las siguientes:

i) Presentan arquitecturas altamente ordenadas de dimensiones nanométricas

que tienen la capacidad de autoensamblarse.

ii) Se estima que alrededor de 1031 virus habitan la Tierra (BAMFORD et al.,

2005), dentro de este vasto número existe una gran diversidad tanto de

tamaños (17 - 1500 nm en cápsides icosaédricas); como de formas distintas,

predominando las cápsides icosaédricas, filamentosas y helicoidales. iii)

Cuentan con estructuras monodispersas en tamaño y composición, bajo

condiciones particulares de pH y fuerza iónica.

iv) Poseen áreas superficiales grandes, con una variedad grupos funcionales expuestos en un

alto número de copias, que permiten el acoplamiento de múltiples ligandos, ya sea de la


misma molécula o diferentes moléculas. Esta característica los hace moléculas

polivalentes, con la capacidad de participar en interacciones colectivamente más fuertes

que sus contrapartes con sitios únicos de interacción, aumentando la afinidad de unión con

los sitios blanco.

v) Presentan cavidades que pueden ser utilizadas para encapsular moléculas con diversos

fines.

vi) Debido a su carácter proteico son biocompatibles y biodegradables.

La encapsulación de enzimas dentro de cápisdes virales se ha realizado

principalmente para la producción de bionanorreactores enfocados al estudio

de fenómenos de catálisis, aunque también se ha propuesto su utilización

como posibles agentes terapéuticos. El primer artículo reportado sobre la

encapsulación de enzimas en cápisdes virales fue en el 2007.

La encapsulación de proteínas dentro de estos vehículos de origen viral,

ofrece una serie de ventajas para sobrepasar las limitaciones que presentan

las proteínas como agentes terapéuticos. En primer lugar, las cápsides son

vehículos con una alta capacidad de carga, aptos para el transporte de

cantidades considerables de proteína en su interior. Además, la

nanoestructura viral es capaz de conferir a la proteína encapsulada protección

frente a la degradación por proteasas, así como una barrera contra el

reconocimiento por el sistema inmune. La inmunogenicidad del virus puede

ser abatida por distintos métodos entre los que se encuentran los llamados

“self-peptides”, la modificación de los epítopes y el recubrimiento de la

partícula con polietilenglicol (PEG). De esta manera se modifica

químicamente la cápside y no el biofármaco en cuestión, evitando

repercusiones negativas en la actividad biológica de la proteína

terapéutica19,20.
En el caso de los organismos multicelulares (humanos, animales) nos

encontramos con la particularidad que además de ser organismos como tales

también se consideran un bioma albergando una diversa variedad de

microorganismos (microbioma) lo cuales a su vez también son un hologenoma

compuestos por su genoma, proteoma, metaboloma y fenoma.

Además debemos tener en consideración el caso de células “especiales” las

cuales presentan características bastante distinguibles del resto de las células

corporales por lo cual deben ser tratadas de una forma más independiente;

hablamos de las células madre las cuales son la base de la actual ingeniería

tisular.

Imagen A. Teoría del hologenoma


Células Células microbianas
somáticas/
sexuales (MICROBIOMA)
Células madre

Genoma

Proteoma

Metaboloma

Fenoma

Tabla 1

EL MICROBIOMA, es definido como la totalidad de microbios, su material

genético como proteico y las interacciones que establecen en el espacio donde

viven; por esto el ser humano es considerado un bioma siendo que está

compuesto por más de 100 trillones de células microbianas, habiendo 10

veces más células foráneas que las propias del organismo, el detalle está en

identificar correctamente la comunidad microbiana que habita en el hombre,

ya que son parte del ecosistema protector con el medio externo del hábitat

del ser humano.


Imagen B. El ser humano como microbioma humano.

El hombre piensa que ser un microbioma es sinónimo de estar infectado por

lo cual sólo se dedica a eliminar el 99.9% de las bacterias, exponiendo el

bioma, destruyéndolo y quedando indefensos ante las infecciones o

enfermedades oportunistas.

En el caso del microbioma oral, es tanto el impacto que tiene sobre el organismo

que se relacionan las enfermedades de boca con las enfermedades sistémicas.

Para entender lo dicho, usamos diferentes enjuagues, pastas, que son

bactericidas, tratando de barrer con todo agente patógeno olvidando el bioma

que tenemos en boca.

Tanto es el daño que nos causamos que los patógenos están comenzando a ser

reconocidos como microbios residentes que están fuera de equilibrio (Human

microbiome Project HMP 2002).

La biotecnología nos brinda las herramientas para manipular y adquirir

conocimientos a nuestro favor a nivel genómico, proteómico o metabolómico

de estos microorganismos saprofitos.


Aquí es donde entra a tallar la biotecnología que teniendo en cuenta la

composición e interacciones en el microbioma oral será capaz de sintetizar

biofármacos selectivos, no ocurriendo la destrucción total de nuestro

microbioma20. También podemos recordar la manipulación del genoma del

Streptococcus mutans que se mencionó anteriormente4.

Esclarecer los conocimientos respecto al proteoma y metaboloma del

microbioma oral nos podría llevar a métodos de diagnóstico precoz más

precisos.

CELULAS MADRE, aunque se las puede encontrar como células somáticas

indiferenciadas en el organismo adulto21-28, sus propiedades únicas (fenoma)

nos obligan a tratarla como un ente distinto a las demás células corporales o al

microbioma. Se define conceptualmente como las células indiferenciadas con

capacidad clonogénica (proliferación) y de diferenciación en diversos tipos

celulares25-28.

El principal pilar en el que se sostiene la medicina regenerativa es la ingeniería

tisular, la cual en la actualidad valiéndose de la biotecnología manipulan células

madre con el

objetivo de lograr la tal ansiada regeneración22,23,25-28. Esta regeneración valida

por células madre requiere la aplicación en conjunto de tres compartimentos

biológicos que vendrían a ser las células madre, scalffolds (estructura del

medio ambiente celular) y señales inductoras(metaboloma); siendo que su

obtención y manipulación implica un elevado tiempo y costo se realizan

diversos estudios científicos teniendo como objetivo final reducir tiempo y

costo que demanda la ingeniería tisular al procurar regenerar tejidos u órganos

específicos(como los dientes, la mandíbula, glándulas salivales, etc).24-28


Como acápite final cabe mencionar que las células madre pueden aplicarse en

otros procedimientos además de la regeneración, en mecanismos de

inmunomodulación (aprovechando su metaboloma y proteoma que les

confieren propiedades de inmunoprivilegio) o en terapia génica (sirviendo

como vector)7,8,25-28.

6. METODOLOGÍA

6.1 Tipo y nivel de investigación.

Dentro de esta línea es posible hacer investigaciones cualitativas, cuantitativas, básicas o

aplicadas de niveles exploratorio, descriptivo comparativo y/o explicativo.

6.2 Diseño de la investigación.

Los diseños que surgirán del presente proyecto podrán ser de tipo descriptivos,

retrospectivos o prospectivos. De una sola casilla o investigaciones

multicéntricas. Podrán a su vez ser investigaciones de corte longitudinal,

transversal, probabilísticas y no probabilísticas.

Para las exploraciones cualitativas se utilizarán métodos grupales comunitarios

o la aplicación de modelos tipo descripción de caso.

Así mismo es evidente que se dé pie para el inicio de estudios explicativos que

permitan determinar el impacto de nuevas terapias basadas en la biotecnología

sobre múltiples variables asociadas a la evolución de diversas enfermedades

siempre bajo la perspectiva y abordaje de esta variable.

Para investigaciones de nivel explicativo, se podría aplicar diseños de tipo pre

experimental o experimental, es decir con medición de indicadores base antes y

después del tratamiento. Así mismo y dependiendo de la naturaleza de la

variable dependiente podrían desarrollarse diseños cuasi experimentales para


medir el efecto de la intervención de la biotecnología terapéutica (variable

independiente) sobre otras variables con medición de indicadores base antes y

después de la intervención en el grupo de investigación y en el grupo control.

6.3 Población y muestra.

El universo de sujetos u objetos de las investigaciones derivadas del proyecto de línea

estará conformado por biomateriales, líneas celulares, microorganismos que podrán ser

estudiados en humanos, animales o in vitro.

Cuando el estudio comprenda pacientes, ellos comprenderán solo a los sujetos que de

manera voluntaria acepten participar en la investigación, esta expresión de libertad quedará

reflejada en la firma del documento de consentimiento informado. El número final de

pacientes de la muestra dependerá del número de pacientes que acepten participar de las

experiencias durante los periodos prefijados de reclutamiento de acuerdo a la incidencia

de la enfermedad y la frecuencia de visita de los pacientes al servicio respectivo.

Variables:

Se presentan a continuación algunas variables que serán objeto de investigación durante el

desarrollo de las investigaciones derivadas de la línea de investigación:

• Biomateriales: es un material que el organismo está en condiciones de tolerar, en

odontología se pueden considerar todos aquellos materiales dentales usados en la práctica

clínica o de laboratorio.

• Células madre: células con capacidad clonogénica, regenerativa y de diferenciación

aplicables para la estructuración de tejidos.

• Microbioma: Microorganismos que colonizan estructuras orales de forma saprófita

brindando diversos beneficios por estudiar.


• Genoma: Cadenas de nucleótidos estructurados que codifican los genes que se expresarán

para determinar en gran parte nuestro fenoma.

Covariables:

• Scalffolds: Estructura tridimensional que se utiliza para guiar físicamente la

manipulación de células madre

• Medio ambiente biológico: Condiciones atmosféricas (concentración de

CO2/OXIGENO, presencia de nutrientes) en las cuales pueda desarrollarse de forma ideal

un estirpe bacteriano.

Procedimiento de recolección de datos:

El procedimiento de recolección de datos se realizará mediante fichas

previamente preparadas de acuerdo al tipo de estudio a realizar. Estas pueden

ser cuestionarios o instrumentos de recolección para estudios tipo ensayo clínico

 Técnicas e instrumentos:

El instrumento base para el desarrollo del trabajo será la ficha en dónde se

recolecten los datos generales del estudio y las mediciones de las variables a

estudiar.

Procedimiento que utilizara el tesista de acuerdo a la variable que seleccione:

• Se seleccionará la especie biológica a manipular.

• Se seleccionará el área anatomotopográfica a biopsiar.

• Se realiza la biopsia según conveniencia.


• Se aísla el organismo biológico o subproducto biológico a trabajar con el método más

adecuado que asegure la mayor integridad biológica y conservación de propiedades

citológicas e histológicas.

 Se realiza cultivo o se aplican la técnica de conservación (crio-conservación, etc.)

dependiendo del objetivo del estudio.

 Dependiendo del objetivo del estudio se procederá a : analizar morfología, analizar

citología, analizar histología, analizar genoma, analizar proteoma, analizar

metabolismo, analizar mediadores generados y/o involucrados, analizar propiedades

celulares, analizar bioma, analizar interacciones específicas, etc.

 Dependiendo del objetivo de investigación se procederá a: evaluar el biomaterial,

manipular morfología, manipular citología, manipular histología, manipular genoma,

manipular proteoma , manipular metabolismo, manipular mediadores generados y/o

involucrados, manipular propiedades celulares, manipular bioma, manipular

interacciones específicas, etc.

 Dependiendo del objetivo de investigación se procederá a: generar estructuras

complejas (tejidos, órganos, individuos, etc.), generar residuos aprovechables

(subproductos celulares como medios de cultivo, como conservantes, etc.), generar

metabolitos inductores (drogas, factores de crecimiento, factores de diferenciación,

etc.)

 Se procede a anotar los resultados de forma ordenada y sistemática

 Se realizaran análisis longitudinales (de ser necesario) y se aplican análisis estadísticos

para verificar o nulificar la hipótesis.


6.4 Plan de análisis.

Para evaluar la eficacia de las terapias biotecnológicas desarrolladas en odontología, se utilizará

herramientas y pruebas estadísticas porcentuales, de promedios y desviación estándar, así como test

de correlación en donde serán analizados, y así mismo se realizará su representación gráfica,

utilizando el paquete estadístico Excel 2013 así como SPSS 2

6.5 Diversificación de la Línea de Investigación.

De la presente línea se desprenden diversos proyectos de tesis individuales:

• Evaluación de la efectividad clínica o in vitro de distintos materiales dentales empleados

en odontología.

• Evaluación de la manipulación génica aplicada en terapias para las diferentes áreas

estomatológicas. Por ejemplo al modificar la carga genética de las células madre o de las

células microbianas para cumplir funciones específicas como la regeneración insitu y el

equilibramiento del ecosistema oral (al generar cepas más resistentes, probióticos).

• Evaluación de la manipulación metabolómica (citocina, etc) en terapias para las diferentes

áreas estomatológicas. Por ejemplo, al inducir el aumento de interleuquinas 10 y la

disminución de interleuquinas 6, puesto que el aumento de las interleuquinas 10 mejora las

lesiones periodontales, mientras que la disminución de éstas conlleva a una periodontitis

crónica en la boca del individuo. Por otro lado el aumento de las interleuquinas 6 también

nos lleva hacia una periodontitis crónica.

• Evaluación de la descripción fenómica para la estructuración de protocolos en las diferentes

áreas estomatológicas. Como por ejemplo al realizar la secuenciación de los marcadores

histoquímicos determinantes de los 6 nichos celulares conocidos en cavidad oral, o también

al determinar las propiedades inherentes a la supervivencia de nuestros microorganismos

saprófitos para evitar su alteración.


• Evaluación de la manipulación de linajes celulares especiales (células madre) en las

diferentes áreas estomatológicas. Como en la obtención de células madre de la cavidad oral,

haciendo posible diversas terapias, siendo una de éstas la regeneración de tejidos dentales.

6.6 Criterios éticos.

El estudio se llevará a cabo siguiendo las normas éticas del Instituto Nacional de Salud del Perú

(INS) tanto para la experimentación tanto con el uso de animales como para ensayos clínicos. La

elección de la especie animal para experimentación se realizara según la conveniencia del

investigados y los objetivos que persigue; la elección del paciente se realizará con el consentimiento

de los responsables del Servicio donde se realice el estudio. Se reportará las incidencias de las

visitas de manera inmediata si se identifican factores de riesgo agravados que originen la inmediata

atención del facultativo. Se reportarán informes periódicos y el informe final al coordinador de la

sede.

Los datos personales de los pacientes constarán en la ficha terapéutica más no en la tabla de análisis

de datos sólo un número de identificación. Para la intervención es necesario conocer su nombre y

apellidos y su dirección de correo electrónico de ser posible. Estos datos serán conocidos por el

investigador y por un auxiliar encargado de la aleatorización. Los datos permanecerán en la base

de datos informática hasta la finalización del estudio y será destruida posteriormente al término de

la investigación.

A todos los pacientes se les informará del estudio solicitándoles el consentimiento escrito para su

inclusión en el mismo.

La investigación solo se llevará a cabo si el proyecto es aprobado por el Comité de Etica

Institucional de la Universidad católica Los Ángeles de Chimbote.


7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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ANEXOS:

ANEXO N°1

Ejemplo de esquema para recolección de datos (pruebas/análisis) de cualquier proyecto en

el área de biotecnología.

Análisis de cualquier estructura (células humanas, células microbianas, virus, moléculas proteicas,
etc) a cualquier nivel (genoma, proteoma, transcriptoma, metaboloma, fenoma, etc)

MARCADOR REACCIÓN POSITIVA REACCIÓN NEGATIVA


INMUNOHISTOQUÍMICO

MARCADOR-1

MARCADOR-2

MARCADOR-3

MARCADOR-4

MARCADOR-5

MARCADOR-6

MARCADOR-7

Caracterización de DPSCs humanas mediante pruebas de Inmunocitoquímica (ICC) con

anticuerpos monoclonales específicos.