ANALISIS DE LOS ALIMENTOS 2018

ANALISIS DE LECHE

ANÁLISIS DE LECHE Y DERIVADOS LÁCTEOS

Objetivo de análisis:

• Determinar su composición a los fines de verificar si es un producto apto para consumo o

industrialización;
• Conocer su estado higiénico investigando ciertas sustancias cuya presencia es índice de
contaminación o mala conservación.
• Investigar el posible agregado de agua, neutralizantes, o la extracción parcial de materia
grasa a los fines de establecer su genuinidad.

Consideraciones generales

• La leche sin calificativo alguno, es el producto obtenido por el ordeñe total e

ininterrumpido, en condiciones de higiene, de la vaca lechera en buen estado de salud y
alimentación (C.A.A. art. 554).
• La leche proveniente de otros animales, se denomina con el nombre de la especie
productora. Las leches segregadas por las distintas especies de mamíferos ofrecen una
composición similar, aunque difieren en las proporciones relativas de sus componentes
mayoritarios y en su contenido en cenizas.
• El constituyente característico que la distingue de cualquier otro alimento es la lactosa
(Dglucopiranosil-4-B-galactopiranósido). Otro de los constituyentes únicos es la caseína
que es un complejo de fosfoproteínas.
• El contenido en grasa de la leche varía con la raza. La grasa es una mezcla de glicéridos de
16 ácidos grasos, de los cuales el 43% del total de ácidos grasos están provistos de dobles
enlaces y aproximadamente la mitad de ellos son líquidos a temperatura ambiente. El 5%
del nitrógeno total de la leche está representado por sustancias nitrogenadas no
proteicas y el 95% restante por proteínas.
• El análisis completo de la leche incluye diversos ensayos físicos, químicos y
microbiológicos.
• La leche destinada al procesamiento llega a la planta a granel o en recipientes, y como
análisis de rutina se inspeccionan parámetros como su olor, temperatura de recepción,
densidad, contenido graso, acidez y ensayo de la resarzurina. Las muestras con niveles
bajos de extracto seco magro se someten a determinaciones que permitan distinguir el
aguado.
• Una vez pasteurizada la leche se la somete al ensayo de las fosfatasas para verificar su
correcto procesamiento y al ensayo del azul de metileno como indicador de su capacidad
de conservación. En leches esterilizadas se realiza el ensayo de turbidez. Además todos
estos productos son sometidos a control de grasa y extracto seco magro.
• También se puede realizar el control de restos de pesticidas, antibióticos y contaminación
con elementos radioactivos como el 90Sr.

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Las siguientes determinaciones fueron realizadas en muestra de leche ultrapasterizada, un solo

análisis fue realizado por este grupo sobre muestra de leche cruda, los demás ensayos fueron
aportados por otro grupo, y se detallarán más adelante.

Información nutricional
Porción 200 ml = 1 vaso
Cantidad por Cantidad por
%VD
100 mL porción
Valor energético 57 kcal/239 kJ 114 kcal/477 kJ 6
Carbohidratos 4,5 g 9,0 g 3
Proteínas 3,0 g 6,0 g 8
Grasas totales 3,0 g 6,0 g 11
Grasas saturadas 1,11 g 3,5 g 16
Grasas trans 0g 0,0 g
Fibra alimentaria 0 g 0,0 g 0
Sodio 49 mg 98 mg 4
Calcio 105 mg 210 mg 21
Vitamina A 64 µg 128 µg 21
Vitamina D 1,0 µg 2,0 µg 40

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Conservar a 5ºC e inmediatamente antes del análisis llevar la muestra a una temperatura de 20-
25ºC, mezclar por inversiones repetidas cuidando de no formar espuma. Si quedara grasa
separada calentar la leche a 38ºC en baño maría, homogeneizar y luego enfriar a 20ºC.

DETERMINACION DE EXTRACTO SECO

El contenido en extracto seco de la leche de los distintos mamíferos es muy variable, porque
dependen esencialmente del contenido de materia grasa.

Por extracto seco se entiende el conjunto de sustancias que componen la leche con excepción del
agua. Esto es correcto al determinar el contenido de agua por algún método específico. Pero al
realizarlo por desecación, se obtiene la suma de sustancias fijas no volátiles en condiciones
determinadas.

Fundamento del método: evaporación de la humedad a una temperatura determinada hasta

peso constante.

Técnica

Colocar aproximadamente 25 g de arena en un cristalizador e introducir una varilla de vidrio de

una longitud ligeramente mayor al diámetro del cristalizador. Secar el cristalizador con la arena y

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la varilla a 102ºC ± 2ºC durante 4 horas, enfriar en un desecador durante 45 minutos y pesar.
Añadir 10 mL de muestra y pesar al miligramo por diferencia.

Mezclar con la varilla de vidrio.

Colocar la cápsula sobre un baño de agua hirviente durante 20-30 minutos removiendo de tanto
en tanto para evitar que se forme una costra, hasta que la arena esté aparentemente seca.
Colocar la cápsula en la estufa durante 4 horas a 102 2ºC, enfriar en desecador durante 45
minutos y pesar.

Cálculo.

𝑔 100
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 𝑠𝑒𝑐𝑜 = (𝑏 − 𝑎) ∗
100 𝑔 𝑝

• a = peso del cristalizador con varilla seca en gramos: 32,748 g.

• b = peso del cristalizador con varilla y leche secos en gramos: 33,924 g.
• p= peso de la muestra en gramos: 10 mL=10,323 g.

𝑔 𝑔
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 𝑠𝑒𝑐𝑜 = 11,39
100 𝑔 100 𝑔

CONTROL DE ESTERILIZACION. ENSAYO DE TURBIDEZ

Fundamento del método.

En la leche esterilizada las albúminas son desnaturalizadas y precipitan conjuntamente con la

caseína por agregado de sales o ácidos inorgánicos, un calentamiento posterior no producirá
floculación.

Si el tratamiento térmico de la leche ha sido insuficiente la caseína y la albúmina no

desnaturalizada presentes se separan al calentarla previo tratamiento con sulfato de amonio.

Interpretación de resultados:

Si hay floculación después del calentamiento, se trata de leche pasteurizada. No debe observarse
turbidez en la leche que ha sido esterilizada después de envasada.

La leche esterilizada UTA puede dar leve turbidez, pero en nuestro caso no se observó.

MATERIA GRASA.

Método de Gerber

Fundamento del método: la leche es tratada con ácido sulfúrico para desagregar las proteínas. Se
extrae con alcohol amílico y por centrifugación se reúne la materia grasa en una capa clara que se
evalúa cuantitativamente mediante una escala convencional.

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Técnica

1. Colocar en un butirómetro 10 mL de ácido sulfúrico de

Gerber.
2. Agregar con precaución para evitar la mezcla, 11 mL de la
muestra de la leche (previamente calentada a 40ºC, homogeneizada y
enfriada a 20ºC).
3. Introducir 1 mL de alcohol amílico. En todos los casos cuidar
de no mojar la pared interior del cuello del butirómetro.
4. Tapar firmemente el butirómetro y agitar con precaución
sosteniéndolo horizontalmente, hasta desaparición de flóculos por
disolución total. (¡Ojo!, en este paso se eleva la temperatura,
cuidado,.. no quemarse).
5. Llevar dos veces a la posición vertical para que el ácido
sulfúrico que se encuentra en la parte graduada se mezcle bien con el resto del
contenido.
6. Colocar el butirómetro caliente en la centrífuga con el ápice hacia el centro y centrifugar
durante 8-10 minutos a 800-1000 r.p.m. (Si se procesan varias muestras colocarlas
simultáneamente en el baño a 65ºC durante 5 minutos antes de centrifugar). Para leches
homogeneizadas efectuar el calentamiento y la centrifugación durante 5’ cada vez y
repetir 2 veces seguidas estas operaciones.
7. Terminada la centrifugación volver a colocar él o los butirómetros en baño maría a 65ºC
durante 5 minutos manteniendo sumergida por lo menos 2 / 3 de la longitud de la escala.
8. Retirar y ajustar el tapón con movimientos de vaivén hasta que la capa de grasa se
encuentre dentro de la parte graduada del butirómetro.
9. La línea de separación entre la capa grasa y la solución acuosa oscura debe coincidir con
el cero o al menos con una graduación de la escala.

Cálculos.

Materia grasa g / 100 mL = divisiones leídas en la escala

Materia grasa g/100 mL= 5,1 g/100 mL

DENSIDAD.

La densidad de la leche depende del total de sus componentes, y no es un valor constante por
estar determinada por dos valores opuestos y variables:

• Concentración de los elementos disueltos y en suspensión (sólidos no grasos): la densidad

varía proporcionalmente a esta concentración.

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• Proporción de materia grasa. Teniendo ésta una densidad inferior a 1, la densidad de la

leche varía en forma inversa al contenido graso.

La adición de agua a la leche disminuye su densidad, pero si a la vez ésta ha sido descremada
puede tener valores de densidad normales.

Fundamento del método: se determina por areometría, a tales fines se utiliza un hidrómetro
especialmente calibrado (lactómetro o lactodensímetro) de modo que cubra el rango de
densidades desde 1,025 a 1,035 el cual por simplicidad está graduado entre 25º35ºC.

Técnica

Llevar la leche a 40ºC en baño de agua, homogeneizar y dejar enfriar aproximadamente a 20ºC.
Verter la leche en la probeta de 250 mL evitando formar espuma y controlar la temperatura
Llenar hasta el borde. Sumergir el lactodensímetro, lo que provocará el desborde de la leche
excedente.

Efectuar la lectura en el borde superior del menisco.

La densidad observada fue 1,031 g/mL a 20 °C, pero con la corrección por temperatura el
verdadero valor de la densidad de la leche fue de: 1,0323 g/mL.

ACIDEZ

Fundamento del método: la acidez de la leche es valorada mediante el agregado de hidróxido de

sodio hasta viraje de la fenolftaleína.

Técnica

Colocar en un erlenmeyer de 100 mL, 25 mL de leche, que no haya sido previamente calentada ni
diluida, agregar 1 mL de fenolftaleína y titular con la solución de NaOH, agitando breve pero
enérgicamente justo hasta coloración rosada, que se mantenga más de 30 segundos. Como
blanco de color utilizar 25 mL de leche, colocada en un erlenmeyer similar.

Cálculo.

𝑔 𝑉 ∗ 𝑁 ∗ 𝑚𝑒𝑞 á𝑐. 𝑙á𝑐𝑡 ∗ 100 𝑚𝐿

𝐴𝑐𝑖𝑑𝑒𝑧 𝑒𝑛 á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑙á𝑐𝑡𝑖𝑐𝑜 = = 𝑉 ∗ 0,036
100 𝑚𝐿 𝐹𝐸

V: mL gastados de NaOH 0,1 N

𝑔 𝑔
𝐴𝑐𝑖𝑑𝑒𝑧 𝑒𝑛 á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑙á𝑐𝑡𝑖𝑐𝑜 = 4,15 𝑚𝐿 ∗ 0,036 = 0,1494
100 𝑚𝐿 100 𝑚𝐿

DETERMINACION DE pH.

Generalmente la leche tiene una reacción iónica cercana a la neutralidad. La leche de vaca tiene
una reacción débilmente ácida, con un pH entre 6,6 y 6,8, como consecuencia de la presencia de
caseína, aniones fosfato y citrato principalmente. Del valor de pH depende la estabilidad de la
caseína.

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El pH no es un valor constante y puede variar durante el ciclo de lactancia y por la alimentación.

Se consideran anormales los valores de pH < 6,5 o superiores a 6,9.

Lo que habitualmente se conoce como acidez de la leche es el resultado de una valoración de la

leche utilizando como indicador fenolftaleína que vira a pH 8,3. La acidez de la leche es el
resultado de la sumatoria de cuatro reacciones:

a) Acidez debida a la caseína, por sus

grupos ésteres fosfóricos, que es alrededor
de 2/5 de la acidez total en leches recién
ordeñadas.
b) Acidez debida a sustancias minerales
y a indicios de ácidos orgánicos, que
representan 2/5 de la acidez total.
c) Reacciones secundarias debidas a
fosfatos, 1/5 de la acidez total.
d) Acidez desarrollada debido al ácido
láctico y a otros ácidos procedentes de la
degradación microbiana de la lactosa en las
leches en vías de alteración. La acidez
desarrollada por la fermentación láctica hace
bajar el pH entre 4 y 5.

La valoración acidimétrica de la leche fresca recién ordeñada es una medida indirecta de su

riqueza en caseína y fosfatos.

Fundamento del método

Se basa en la determinación mediante un potenciómetro para medida de pH provisto de un

electrodo indicador y uno de referencia, habitualmente formando un solo elemento.

El valor obtenido en la determinación fue pH=7.

CONTROL DE PASTEURIZACION: DETERMINACION DE PEROXIDASAS (WILKINSON Y PETERS)

Las lactoperoxidasas fueron las primeras enzimas descubiertas en la leche. Son enzimas de
oxidación indirecta porque liberan oxígeno de los peróxidos como el agua oxigenada, pero se
trata de oxígeno atómico, que es aceptado por una sustancia presente en el medio. Por efecto del
calor van perdiendo la actividad, de forma tal que este ensayo permite establecer si se trata de
leche cruda, pasteurizada o hervida.

Fundamento del método: las peroxidasas en presencia de agua oxigenada producen la oxidación
de ciertos reactivos orgánicos (bencidina, parafenilendiamina o tintura de guayacol) que son
fácilmente oxidables y su reacción se manifiesta por un cambio de color.

Técnica
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Colocar 10 mL de leche en un tubo de ensayo. Agregar 2 mL de la solución de bencidina y de 2 a 3

gotas de ácido acético (cantidad suficiente para coagular las proteínas).

Agitar y añadir por las paredes del tubo 2 mL de la solución de agua oxigenada.

Interpretación de los resultados:

• Desarrollo de color azul intenso: se trata de leche cruda o

calentada a inferior a 78 ºC.
• No hay desarrollo de color: la leche ha sido calentada a 80 ºC o a
mayor temperatura.

El tubo de la izquierda, que no presenta ninguna coloración es el de

nuestro grupo, nosotros trabajamos, como se dijo anteriormente, con
leche ultrapasterizada. Este resultado indica que el tratamiento térmico se
realizó de manera efectiva.

El tubo de la derecha, es el tubo con leche cruda. El ensayo fue realizado

por otro grupo, e indica que el producto aun no fue sometido a un
tratamiento térmico.

EXTRACTO SECO NO GRASO.

Es un valor más constante que el extracto seco total, por haberse eliminado el componente más
variable.

𝑔
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 𝑠𝑒𝑐𝑜 𝑛𝑜 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑜 =𝐴−𝐵
100 𝑔

• A: extracto seco graso g/100 g: 11,39 g/100 g.

• B: materia grasa en g/100 g: 4,94 g (sale de considerar la materia grasa para 100 gramos
de muestra y no para 100 mL, usamos la densidad)

𝑔 𝑔
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 𝑠𝑒𝑐𝑜 𝑛𝑜 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑜 = 6,45
100 𝑔 100 𝑔

PRUEBA DE AZUL DE METILENO.

Esta determinación se realizó sobre una muestra de leche cruda.

Fundamento del método: esta determinación se utiliza con frecuencia para determinar la calidad
bacteriológica de la leche.

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Se conoce como ensayo de la reductasa pero en realidad no se trata de la acción de una enzima
determinada.

El poder reductor normal de la leche se ve incrementado con la actividad bacteriana, dado que el
oxígeno disuelto va disminuyendo por la acción de las bacterias, y las bacterias le adicionan
además su propio sistema reductor.

La actividad reductora depende del número de bacterias y especies presentes. Algunas como las
coliformes son muy activas, mientras que otras como las bacterias termorresistentes y
esporuladas influyen poco.

El método consiste en agregar a cierta cantidad de leche una solución standard de azul de
metileno. Se mantiene luego a temperatura constante y se controla el tiempo en que se produce
la decoloración del mismo.

El período de tiempo para lograr la decoloración es inversamente proporcional al del número y

actividad de las bacterias que contiene. O sea que verifica en forma indirecta el grado de
desarrollo microbiano de la leche.

Técnica

Se colocan 10 mL de la muestra en un tubo. Agregar 1 mL de la solución de azul de metileno.

Tapar el tubo, invertirlo hasta homogenizar y colocar en baño de agua o estufa (37ºC).

Observar cada media hora, previa homogeneización. Anotar el tiempo transcurrido hasta la
decoloración. Un anillo azul en la superficie y en el fondo carece de significado.

Interpretación de los resultados

• tiempo < 20’ -------- leche mala

• 20’ < tiempo < 40’ -------- leche regular
• 40’ < tiempo < 2 horas -------- leche buena
• tiempo > 2 horas -------- leche en buen estado

La interpretación desde el punto de vista químico del presente ensayo

responde al hecho de que en los organismos vivos ocurre, aún en ausencia
de oxígeno, una oxidación mediante el transporte de hidrógeno, desde la
sustancia que se oxida hasta la sustancia aceptora que se reduce.

Estas reacciones de oxidación están catalizadas por enzimas, las

deshidrogenasas que favorecen la deshidrogenación del sustrato. En este
ensayo como aceptor de hidrógeno se utiliza el indicador azul de metileno
que posee color y al hidrogenarse pasa como leucobase incolora del
estado reducido.

Al cabo de dos horas, el tubo no había cambiado de color prácticamente. Aproximadamente se

decoloraron 2 mm del tubo, lo que indica que la leche estaba en buen estado.

DETERMINACION DE PROTEINAS- METODO DE SORENSEN.

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Fundamento

Está técnica determina el contenido en proteínas de la leche mediante una valoración ácido-base,
ya que tras la adición de formol a la muestra, el formaldehido se une a los grupos amino de los
aminoácidos de las proteínas dejando los grupos carboxilos libres. Este hecho produce cambios en
la acidez titulable de la leche siendo valorada con hidróxido sódico. La cantidad de hidróxido
sódico utilizado en la neutralización es utilizado para calcular la cantidad de proteínas presente en
la muestra.

Técnica

Se utilizan 50 cm3 de leche. Se vierten 20 gotas de solución alcohólica de fenolftaleína,

agitando, se titula con solución 0,25 N de NaOH hasta coloración rosada débil pero
persistente. Inmediatamente se agregan 10 cm3 de formol al 40% previamente
neutralizado a la fenolftaleína y la acidez que se genera se titula con la misma solución de
NaOH 0,25 N. El tiempo de contacto de la leche con el formol no se tiene en cuenta ya
que el bloqueo de los grupos –NH2 es instantáneo.

Cálculo.

Duplicando el número de ml de solución de NaOH (para referir a 100 ml de leche) se tiene

el índice de aldehído o nº de formol, el que multiplicado por el factor 0,495 da
directamente la cantidad de proteínas en forma porcentual.

𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎𝑠 𝑔% = 𝐼 ∗ 0,495

𝐼 =𝑉∗2

El gasto de hidróxido fue de 5,5 mL y la normalidad del mismo era de 0,242 N.

𝑉1 ∗ 𝑁1 = 𝑉2 ∗ 𝑁2

5,5 𝑚𝐿 ∗ 0,242 𝑁
𝑉2 = = 5,324 𝑚𝐿
0,25 𝑁

𝐼 = 5,324 𝑚𝐿 ∗ 2 = 10,648 𝑚𝐿

𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎𝑠 𝑔% = 10,648 𝑚𝐿 ∗ 0,495 = 5,27𝑔%

Legislación.

Artículo 555 - (Resolución Conjunta SPReI N°252/2014 y SAGyP N° 218/2014) “La leche destinada
a ser consumida como tal o la destinada a la elaboración de leches y productos lácteos, deberá
presentar las siguientes características físicas y químicas:

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(*) En condiciones excepcionales podrá ser comercializada leche con un contenido graso inferior
al 3% si la autoridad sanitaria provincial, previo estudio de evaluación, lo considera aceptable para
su jurisdicción. En dicho caso el contenido de materia grasa deberá ser declarado en el rotulado
con letras de buen tamaño, realce y visibilidad.

(**) Podrá ser expresado en su equivalente en g/100 cm3 tomando para la conversión el valor de
densidad (a 15 °C) correspondiente.

Artículo 559tris - (Res MSyAS N° 328, 21.05.97)

"Se entiende por Leche Ultrapasteurizada a la leche, homogeneizada o no, que ha sido sometida
durante por lo menos 2 segundos a una temperatura mínima de 138°C mediante un proceso
térmico de flujo continuo, inmediatamente enfriada a menos de 5°C y envasada en forma no
aséptica en envases estériles y herméticamente cerrados". La Leche Ultrapasteurizada debe ser
sometida a los siguientes tratamientos:

1. Selección, a fin de descartar las leches no aptas según la disposición del Artículo 556 del
presente Código.
2. Higienización previa por filtración o por medios mecánicos aprobados por la autoridad
sanitaria competente.
3. Estandarización optativa del contenido de materia grasa propia de la leche.
4. Homogeneización optativa.
5. Tratamiento térmico a una temperatura mínima de 138°C durante por lo menos 2
segundos.
6. Ser enfriada a menos de 5°C después de dicho tratamiento.
7. Podrá mantenerse hasta su envasado en tanques adecuados y a temperatura no superior
a 5°C.
8. Ser envasada en envases bromatológicamente aptos, con materiales adecuados para las
condiciones previstas de almacenamiento y que garanticen la hermeticidad del envase y
una protección adecuada contra la contaminación.
9. Ser mantenida a continuación de ser envasada a una temperatura no superior a los 8°C,
ya sea en el establecimiento elaborador y/o en los medios de transporte refrigerados y/o
en depósitos terminales de la empresa, bajo responsabilidad del establecimiento
elaborador.

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10. Ser mantenida en la boca de expendio a temperatura no superior a los 8°C, desde el
momento de su recepción hasta su expendio al consumidor. La leche Ultrapasteurizada
deberá responder a las siguientes exigencias:

El rotulado de Leche Ultrapasteurizada, deberá efectuarse en conformidad con las siguientes

exigencias:

Se aplicará lo establecido en el presente Código. Este producto se rotulará en el cuerpo del envase
como "Leche Ultrapasteurizada" o "Leche Ultrapasteurizada", formando una sola frase con
caracteres de igual tamaño, realce y visibilidad.

Si hubiere sido homogeneizada, deberá consignarse en el rotulado la denominación

"Homogeneizada", con caracteres no mayores a los empleados en la designación del producto.
Deberá consignarse el tratamiento térmico que ha sido sometido el producto, indicando
expresamente temperatura y tiempo, y la leyenda "Mantener refrigerada a una temperatura no
superior a 8°C o similar.

La Leche Ultrapasteurizada deberá ser sometida a los controles oficiales necesarios para verificar
el cumplimiento de las exigencias del presente, la eficiencia del proceso de ultrapasteurización,
las condiciones de transporte y de mantenimiento refrigerado. Se efectuarán sobre muestras
obtenidas en el establecimiento elaborador y/o durante el transporte y/o a nivel del expendio
para el consumo.

En todos los casos de toma de muestra se debe controlar la temperatura del producto en dicho
momento y dejar constancia en el acta respectiva".

Conclusiones.

Teniendo en cuenta los valores obtenidos en las distintas determinaciones, y comparando con lo
reglamentado en el Código Alimentario Argentino, podemos concluir que:

• El extracto seco no está legislado pero si el extracto seco no graso, este como mínimo
debe ser de 9,0 g/100 g. Nosotros obtuvimos un valor de 6,45 g/100 g, está por debajo de
lo permitido.
• El CAA admite como mínimo 3,0 g/100 g de materia grasa, estaríamos dentro de lo
reglamentado pero creemos que es un valor elevado que influye en el extracto seco no
graso, valor que esta fuera de legislación.
• La densidad a 15 °C obtenida en el análisis está dentro del rango permitido. Creemos que
es un valor confiable ya que tuvimos mucho cuidado con las temperaturas.
• Los valores de acidez y pH obtenidos también están dentro de lo permitido.

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• Realizamos control de pasteurización y determinamos que había sido realizado de manera

eficiente.
• Las determinaciones que se efectuaron en leche cruda por nuestro grupo y por otros
arrojaron datos de una leche de buena calidad, con un contenido de proteínas dentro de
lo que permite el CAA.
• Creemos que podemos haber cometido algunos errores, sobre todo en la determinación
de grasas, por eso deberíamos haber realizado análisis por duplicado.

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