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Tema 1
Tema 1
MICROBIOLOGÍA
Los microorganismos
aparecían de manera espontánea
o ya estaban presentes en el
aire.
Experimento → Calentó un
matraz hasta la ebullición
(muerte de microorganismos
por calor =
ESTERILIZACIÓN)
Esterilización
MICROBIOLOGÍA
MICROBIOLOGÍA
→ Concepto de microbiología
Definición:
Cultivo puro
Identificación
MICROBIOLOGÍA
Ninguno?
ANIMALES
MACROORGANISMOS 1993 → 2 excepciones
PLANTAS
Epulopiscium fishelsoni
Thiomargarita namibiensis
ARQUEA Eucariontes Virus
HONGOS
PROTOZOOS
Microorganismos → Seres vivos dotados de individualidad con una organización elemental y por lo
general de tamaño microscópico.
MICROBIOLOGÍA
BACTERIA
Aerobios y/o anaerobios
Todos los procariontes causantes de enfermedades conocidas
Hábitat: suelo, aguas, tracto digestivo.
Fuentes de energía: luz, materia orgánica o inorgánica.
ARCHEA
Procariontes
Mayoría anaerobios
Desarrollo en ambientes extremos, como:
– Fuentes termales de elevada temperatura (100º)
– Agua extraordinariamente salina
– Suelos y aguas ácidas o alcalinas
Thermus aquaticus →
EUKARYA
MICROBIOLOGÍA
E.coli → 4600genes
• Microbiología – Veterinaria
Virus de la gripe aviar (Asia-Europa, 2006)
Virus de la lengua azul (Mallorca – MENORCA, 2000)
Virus de la peste quina (Olimpiadas, Barcelona, 1992)
• Microbiología – Agricultura
Fijación del nitrógeno.
Rhizobium melilotii Bacterias importantes en la
Azotobacter vinelandii fijación del Nitrógeno.
• Microbiología – Alimentación
*Probióticos
*Bio (Bifidobacterium)
*Actimel (Lactobacillus casei immunitas)
*Prebióticos
*Conserva Á. láctico, Lactobacillus.
*Sobrasada, Starters o cultivos iniciadores.
*Productos fermentados:
-Col fermentada, vino, cerveza, pan...
• Microbiología – Clínica
• Identificación de nuevas enfermedades
-Virus de la gripe aviar
-Ebola
-Sida (Premio Nobel, 2008, Montaigner)
• Tratamiento y cura → antibióticos
• Prevención → Vacunas
-Vacuna del Papiloma, 2007. Premio Nobel (Cáncer de
cuello de útero)
-2008, Gardasil
• Microbiología – Biotecnologia
MICROBIOLOGÍA
→ Forma
Esférica → Cocos
Micrococos, cocos pequeños y aislados
Diplococos, cocos en parejas
Estreptococos, cadenas de cocos
Estafilococos,grupo irregular de cocos, sin planos de división claros.
Tétradas (4)
Sarcinas (8 o más)
MICROBIOLOGÍA
→ Tamaño
Bacterias gigantes (x25, x50 del tamaño normal) → Epulopiscium fishelsoni, 1993, procariota Gram+
Thiomargarita namibiensis,1999, hasta 700µm de
diámetro.
Mayor crecimiento
→ Reproducción
Por división binaria, en la mayoría de los casos. Formación de un septo de paredes transversales.
MICROBIOLOGÍA
MICROBIOLOGÍA
• Exterior celuar
• Pared bacteriana
Membrana externa
+ GRAM -
Peptidoglucanos
Peptidoglucanos → GRAM +
Ácidos micólicos
+ Ácido-alcohol resistentes
Peptidoglucanos
• Membrana citoplasmática
• Citoplasma
•
• Nucleosoma = Nucleoplasma
• Interior celular
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MICROBIOLOGÍA
→ GLUCOCÁLIZ
CÁPSULA LIMO
Tras la centrifugación
permanecen unidas a la SI NO
bacteria
Dan tinción negativa con tinta
china SI NO
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MICROBIOLOGÍA
Dextrano Sacarasa
(enzima extracelular, en la bacteria)
Éste proceso no requiere ATP: se utiliza la energía de la de la ruptura de los enlaces de los
disacáridos: Transglucosidaciones
En éste caso la Glucosa es la fuente de C y energía. Actúa otro enzima (Levano Sacarasa).
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MICROBIOLOGÍA
Funciones:
→ Mecanismos de anclaje
HABITAT FUNCIÓN
Bacterias Aguas dulces Adhesión al medio (roca)
Bacterias Intestino Adhesión al medio (intestino)
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MICROBIOLOGÍA
Dominio Arquea → casi todas las Arqueas poseen Capa S y están unidas a la membrana celular
Dominio Bacteria → presentes en Bacterias GRAM+ y en GRAM-, en casi todos los grupos
filogenéticos se encuentran representantes.
GRAM- → las capas S están unidas a la membrana externa
GRAM+ → las capas S están unidas al peptidoglucano.
Función: barrera de permeabilidad entre el exterior y el interior celular y de defensa ante patógenos.
→ GRAM -
hidrofóbica hidrofílica
(en el exterior)
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MICROBIOLOGÍA
LPS
Exterior
• Cadena O
• CORE POLISACARÍDICO
• Lípido A
Interior
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MICROBIOLOGÍA
→ Cadena O
Polisacárico de 6 Carbonos (xn)
Man = Manosa
Carácter antigénico
Rha = Ramnosa
Antígeno O
Abe = Abequosa
Gal = Galactosa
→ CORE POLISACARÍDICO
Polisacáridos de 6C y 7C
NAG =N-acetilglucosamina
Hep = Heptosas
KDO = 2ceto-3deoxioctanoico
→ Lípido A
Esto permite conocer si un conjunto de casos constituyen un foco o varios, seguir la cadena de
infección hasta su origen o determinar el mapa de la región y saber so es un brote autóctono o
importado.
→ Lipoproteínas
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MICROBIOLOGÍA
PORINAS → son trímeros que se autoensamblan. Forman poros, canales = 1nm. Permiten el paso
de pequeñas moléculas hidrofílicas como: azúcares, Aa, di-tripéptidos, iones,
moléculas inorgánicas...
Proteína nm Función
OmpC Poros de 1,1nm Inespecíficos
OmpF Poros de 1,2nm Inespecíficos
PhoE Poros de 1,1nm Entrada de fosfato
PhoE
Si es necesario se puede regular la síntesis de éstas proteinas formadoras de porinas.
transcribe
traduce
→ Canales específicos
Lamb B → Poro específico para la entrada de maltosa maltodextrina. Se induce su síntesis por la
maltosa. Lugar de adsorción del bacteriófago λ (lambda)
Tsx → Poro específico para la entrada de nucleósidos. Lugar de adsorción del bacteriófago T6.
TonA → Poro específico para la entrada de compuestos de hierro. Lugar de adsorción del
bacteriófago T6 y T1.
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MICROBIOLOGÍA
→ Periplasma
→ GRAM – y GRAM +
PEPTIDOGLUCANO = GLUCOPÉPTIDO
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MICROBIOLOGÍA
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MICROBIOLOGÍA
→ Tinción de Gram
GRAM + GRAM -
No pierden el Cristal Violeta Pierden el Cristal Violeta
INCOLORAS
VIOLETA
Colorante de contraste: SAFRANINA (rosa)
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MICROBIOLOGÍA
Experimento de Weidbull:
La tinción de Gram NO está relacioonada con los componentes químicos de las bacterias sinó con la
estructura física del peptidoglucano.
Las levaduras con pared de distinta composición química también se tiñen de Violeta.
→ Bacterias GRAM-
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MICROBIOLOGÍA
→ Bacterias GRAM+
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MICROBIOLOGÍA
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MICROBIOLOGÍA
→ Antibióticos
Son agentes químicos producidos por microorganismos y que son dañinos para otros
microorganismos (mata o inhibe el crecimiento de otros microorganismos)
Tienen distintos modos de acción:
– Unos actúan sobre la síntesis de la pared
– Otros actúan sobre el DNA (inhiben el enzima girasa o la RNAPolimerasa
– Actúan a nivel de sítesis proteica (subunidades 30S o 50S)
– O actúan a nivel de la membrana
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MICROBIOLOGÍA
Su pared es más gruesa (igual que una GRAM+) pero contiene un 60% de lípidos (ácidos
micólicos) y menos peptidoglucano.
Ésta cubierta hidrofóbica hace al organismos impermeable a la mayoría de tinciones y los protegen
de los ácidos y álcalis.
También són resistentes a los leucocitos, crecen lentamente debido a que los nutrientes entran
lentamente y además se requiere mucha energía para sintetizar estos ácidos micólicos.
Crece 100-1000 veces más lentamente que E. coli.
Tiempo de duplicación de Mycobacterium tuberculosis → 24h
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MICROBIOLOGÍA
→ Unitaria → Interna
Mitocondrias
Eucariotas → obtención de energía → Orgánulos intracelulares
Cloroplastos
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MICROBIOLOGÍA
→ Reacciones Bioenergéticas
MICROORGANISMOS
- Cadena transportadora de electrones (TEORIA
METABOLISMO RESPIRATORIO QUIMIOSMÓTICA)
- Fuerza protón-motriz
- Centros fotosintéticos
- Pigmentos fotosintéticos:
FOTOSINTÉTICOS Bacterioclorofilas
Carotenoides
Citocromos
Ubiquinonas
→ Pigmentos celulares
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MICROBIOLOGÍA
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MICROBIOLOGÍA
→ Características generales
• 90% agua
• No existe compartimentación
• En el laboratorio, al microscopio electrónico se ve:
→ Citoplasma de apariencia granular (presencia de ribosomas)
→ Zona central de aspecto fibrilar, con DNA, una zona mucho más clara
(nucleoplasma)
• Cloranfenicol → Antibiótico
Actúa sobre los ribosomas 70S, inhibiendo la síntesis proteica.
Procariotas → Muerte bacteriana
La utilización en humanos (ribosomas 80S) frente infecciones microbianas
aparentemente debería tener un efecto inocuo, pero su suministro en un
humano causó la muerte; por qué? → El cloranfenicol actuaba sobre células
que se multiplicaban activamente, es decir = células de la médula ósea =
donde la síntesis de mitocodrias (ribosomas 70S) es elevada.
Los ribosomas de las mitocondrias son de origen procariótico.
• Estreptomicina
• Tetramicina, Eritromicina → inhiben la actividad de ribosomas 70S, pero no son captados
por las células eucariotas, ergo → no afectan a las mitocondrias.
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MICROBIOLOGÍA
Vesículas gaseosas
Clorosomas
Inclusiones citoplasmáticas Carboxisomas
Enterosomas
Magnetosomas
Almidón
Citoplasma Glucógeno
Polibetahidroxibutirato (“PBH”)
Material de reserva Gránulos de cianoficina
Gránulos de polifosfatos
Inclusiones de azufre
Ceras
Cristales paraesporales
→ Inclusiones
Cilindros huecos
__ 200 – 1000nm __
|
75nm
|
Composición proteica = 2nm de grosor.
Número de vesículas: de pocas a cientos.
Función → Permiten al microorganismo colocarse en la zona adecuada de:
– Intensidad de luz
– Presión de oxígeno
– Concentración de nutrientes
Están presentes en microorganismos metabólicamente muy distintos pero que comparten
un hábitat acuático: es indiferente si el microorganismo es una bacteria o una arquea, lo
importante es el hábitat. Ejemplos: Bacterias fotótrofas y Clostridios (G+) → Bacteria
Halobacterias → Arquea
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MICROBIOLOGÍA
• Carboxisomas
Son inclusiones celulares en las cuales se da la fijación del CO2 a partir del Ciclo de
Calvin. Presencia del enzima RUBISCO → Ribulosa Bifosfato Carboxilasa.
Tienen un tamaño de 100nm de diámetro.
Forma de incrementar la rubisco → mayor fijación de CO2 sin afectar a la presión
osmótica del citoplasma. El carboxisoma es insoluble.
→ http://schaechter.asmblog.org/schaechter/2010/10/those-mysterious-
microcompartments.html
• Magnetosomas
→ R. Guerrero. Bacterias magnetotácticas hoy y hace 3800 millones de años (.pdf)
Ciertas bacterias en presencia de un débil campo magnético se orientan hacia uno de sus
polos. Tienen 40-100nm y contienen:
- Ferromagnetita O4Fe3
- Greigita S4Fe3
- Pirita S2Fe3
La Tierra es un campo magnético.
Los magnetosomas orientan a las cabterias en un campo magnético, determinan hacia
donde deben nadar (hacia el fondo). Ejemplo: Columna de sedimento.
No es un proceso de atracción aleatorio, las bacterias muertas no migran, el magnetosoma
orienta la bacteria i los flagelos son los que la mueven.
Las bacterias que crecen en bajas concentraciones de hierro no son magnetotácticas.
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MICROBIOLOGÍA
→ Material de reserva
Ciertas bacterias almacenan sustancias de reserva formando inclusiones de tipo granular (sustancias
de reserva → polisacáridos, grasas, polifosfatos, azufre...)
Se encuentra bajo una forma osmóticamente inactiva (compuesto insolubles en agua). En
condiciones de necesidad se usan como fuente de Carbono y energía con la finalidad de prolongar la
vida.
Por lo general, una especie dada, sólo formará un tipo de material de reserva; no se acumula todo!
Sólo un tipo determinado!
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MICROBIOLOGÍA
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MICROBIOLOGÍA
→ Introducción
Uno: MONOTRICO
Nº de Flagelos Trichos = Pelo (griego)
Varios: POLITRICO
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MICROBIOLOGÍA
Los flagelos son filamentos helicoidales impulsados por un motor de rotación localizado en la
membrana citoplasmática.
El flagelo actúa como un impulsor (hélice de un barco) y empuja a la bacteria a través del medio.
• Filamentos helicoidales
Largos, hasta x10 longitud de la bacteria y finos (12-18nm). Constituidos por la proteína
FLAGELINA (PM = 51000) → subunidad del filamento helicoidal.
La flagelina se ordena helicoidalmente alrededor de un hueco (eje). 11 subunidades de
flagelina entorno al hueco. La distribución helicoidal puede ser una característica
taxonómica.
• Cuerpo basal
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MICROBIOLOGÍA
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MICROBIOLOGÍA
→ Otros apéndices
• FIMBRIAS
Estructura corta. Los filamentos son semejantes a los flagelos aunque no intervienen en la
motilidad sino que sirven para adherirse a las superficies.
Se encuentran en elevado número, de 100 a 1000. Tienen un diámetro de 3-10nm
• PILI SEXUAL
Son largos, puede haber uno o viario. Tinen un diámetro de 9-10nm. Con estructura similar
a las fimbrias. Se da en bacterias que poseen plásmidos conjugativos (responsables de la
síntesis del pili sexual).
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MICROBIOLOGÍA
Plásmido/ DNA
C → Cerrado
C → Circular autoreplicón extracromosómico
C → Covalentemente
→ TACTISMOS // TAXIS
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MICROBIOLOGÍA
→ Quimiotactismos y Motilidad
• Movimiento con dirección definida, los flagelos se enrollan y giran en el sentido opuesto de
las agujas del reloj. CounterClockWise. Este movimiento dura de 1 a 2 segundos.
Receptores Quimiotácticos
• Presencia del atrayente (molécula: glucosa)
• Movimiento de la bacteria hacia el atrayente, los flagelos giran CCW.
• A nivel molecular:
▪ Implica la unión de la molécula a....
Proteínas transportadoras del periplasma → Binding Proteins
(INDIRECTO)
1.
Unión directa a un receptor de membrana citoplasmática
(DIRECTA)
2. Transmisión de la información a los motores flagelares
• Atrayentes → moléculas sencillas: azúcares, aminoácidos...
• Se conocen 40 receptores diferentes para estas sustancias: oxígeno, glucosa, maltosa, serina,
aspartato, ribosa, galactosa, glicina, indol.
• Un receptor puede unir otras moléculas en un gradiente de afinidad decreciente
L-Aspartato > L-Glutamato > L-Metionina
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MICROBIOLOGÍA
MCP puede estar más o menos metilada, esto implicará un cambio conformacional en la
proteína!!
Nivel de atrayente alto → el atrayente metila la MCP, lo que provoca un nivel de fosforilación bajo
y movimiento flagelar sin cambio de rotación.
Los atrayentes disminuyen la velocidad de autofosforilación, los repelentes la aumentan.
Si cheY no se fosforila (nivel de fosforilación bajo) no se une al motor flagelar y este sigue girando
CCW.
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MICROBIOLOGÍA
• Poseen un filamento axial: ultraestructura igual a la de los flagelos, pero rodeados de una
vaina proteica, cada filamento puede tener de 2 a 100 flagelos (en el interior!!!)
• Estos filamentos se insertan en cada uno de los polos del microorganismo y se suponen en el
centro. (Genera un movimiento mucho más eficaz, y dan forma!)
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MICROBIOLOGÍA
Análisis del 16RNAr presenta a las espiroquetas como un filum diferenciado, y que ecologicamente
ocupa hábitats muy diversos: lodos, cavidad bucal, asociaciones simbiónticas.
Ejemplo → Las espiroquetas ectosimbiontes del protista gigante Myxotrica paradoxa (que se
encuentra únicamente en el intestino de termes australiano Mastotermens darwiniensis) contribuyen
a su desplazamiento.
→ A diferencia de otras bacterias en las que la flagelación depende de los cambios ambientales, el
flagelo periplásmico de las espiroquetas se expresa a lo largo de todo su ciclo de vida.
Ejemplos:
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MICROBIOLOGÍA
→ Movimiento de colonias
Escherichia coli →
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MICROBIOLOGÍA
A → no
An → sin Kripto = esconder (griego)
→ ausencia
Introducción...
Las bacterias se dividen = 2 células vegetativas (ciclos vitales “normales”)
Algunas bacterias, además → 1 célula no vegetativa en estado de reposo (criptobiosis) muy
resistentes a factores ambientales durante largos lapsos de tiempo!
• Ventajas: supervivencia si faltan nutrientes
• Formación: al final de cada fasa esponencial de crecimiento (fase óptica de crecimiento)
GRUPO NOMBRE
Actinomicetes Exospora
Mixobacterias Mixoespora
Azotobacter Cistos
Bdellovibrio Bdellocistos
Anabaena Esporas
Bacillus
Clostridium y otros ENDOESPORAS
→ Endosporas
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MICROBIOLOGÍA
→ Características generales
• Termoresistentes
→ FORMACIÓN: ESPORULACIÓN
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MICROBIOLOGÍA
→ Esporulación: al finalizar la fase activa de crecimiento cada célula tiene dos cuerpos
cromatínicos
FASE I
Formación del filamento axial (DNA)
FASE II
Formación de un septo transversal
FASE III
La membrana de la célula mayor recubre a la menor. Se forma la preespora. Al m.o. → zona
clara no refingente. Representa un estado IRREVERSIBLE.
FASE IV
Síntesis y deposición de estructuras. CORTEX → entre las dos membranas citoplasmáticas.
FASE V
Cutícula Externa → por encima de la membrana más externa aparecen unas envueltas
concéntricas de multiláminas de proteínas denominadas: cutícula externa (“spore coat”).
Empieza a ser refringente, pero todavía no es resistente al calor.
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MICROBIOLOGÍA
FASE VI
EXOSPORIO → capa menos compacta por encima de la cutícula externa. Cambios
químicos: paralelos al aumento de la resistencia térmica. Síntesis de Ácido DIPICOLINICO
(10-15% pesp seco). Captación masiva de Ca.
Homoserina Á.Dihidropicolínico
FASE VII
Autolísis de la célula madre. Liberación de la espora madura.
ESPORULACIÓN
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MICROBIOLOGÍA
→ Introducción a la esporulación
Operón: conjunto de genes que se regulan y transcriben conjuntamente. Dan lugar a un RNAm
policistrónico.
Inducción de la esporulación:
→ 8-10horas
→ 50 operones se desreprimen y activan 200 genes = proceso genéticamente muy complejo
→ Es un proceso gradual y secuencial
• CORTEX
Se ubica entre las dos membranas.
Es peptidoglucano con modificaciones.
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MICROBIOLOGÍA
Péptidos lineales: inhiben la síntesis del DNA. Ej: Bacitracina → posee el Aa ornitina. No presente
en proteínas.
Péptidos cíclicos: inhiben la síntesis de la pared celular. Ej: Micobacilina.
Los péptidos lineales y cíclicos pueden modificar estructuras de las membranas. Ej: Polimixina,
Tirocidina.
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MICROBIOLOGÍA
SAPSs
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MICROBIOLOGÍA
→ GERMINACIÓN
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MICROBIOLOGÍA
→ Clostridometría
→ Medio de cultivo
• Triptona, rico en aminoácidos
• Sulfito sódico
• Citrato férrico
• Agar-Agar (solidificante)
• Legislación
• Comunidades autónomas, B.O.E.
• Aguas potables
• Aguas de baño
• Enterococos
Suficiente Excelente
185 100 UFC/100ml
• E.coli
Suficiente Excelente
500 250 UFC/100ml
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