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Manual de Práctica
BIOLOGÍA CELULAR
CONTENIDO
Pág.
Introducción 04
Instrucciones para el desarrollo de los informes de las experiencias de las sesiones prácticas 06
Referencias Bibliográficas 69
LLEGAR PUNTUAL a las prácticas es señal de respeto hacia los profesores y compañeros. Sólo se dará
10 minutos de tolerancia.
Debe entrar ÚNICAMENTE CON LOS MATERIALES NECESARIOS, como cuaderno de trabajo,
lápices, lapiceros, etc. y el material solicitado por el docente para cada práctica, el resto de los materiales
personales guardarlos en el casillero siguiendo las normas.
ESTUDIAR los conceptos teóricos que servirán para el desarrollo de la práctica correspondiente antes
de ingresar al laboratorio. Se tomarán controles de aprendizaje que comprenderán tres preguntas.
Los alimentos, bebidas, maletines y/o mochilas están prohibidos dentro del laboratorio, siendo los
LABORATORIOS AMBIENTES DE TRABAJO Y ESTUDIO.
El uso de celulares durante las clases distrae e incómoda a los demás, antes de ingresar al laboratorio,
asegúrese de apagar su teléfono móvil.
Todos los integrantes del grupo son responsables del contenido de los informes, por lo tanto, la
calificación es para todo el grupo a excepción de los informes individuales indicados por el docente.
Es indispensable para un correcto análisis en los informes, el uso de textos y artículos que provean las
bases teóricas que fundamenten los temas que se han de tratar. En caso de usar fuentes de Internet el
estudiante debe cerciorarse que ésta sea respaldada por instituciones de prestigio que aseguren la
veracidad de la información suministrada. Todos los trabajos entregados deben tener sus referencias
citadas según el sistema APA.
El fraude es el engaño por parte del estudiante en el desarrollo de una actividad académica o
institucional para obtener un provecho indebido, como copiar trabajos realizados por otras
personas (compañeros, estudiantes de ciclos pasados, autores o documentos bajados de internet),
sin indicar de quien provienen; usar ayudas no autorizadas durante los exámenes, poner su
nombre en el trabajo en el que no participó. También comete falta el estudiante que ayude a otra
persona a cometerlo, por ejemplo; prestándole un trabajo ya elaborado para que lo entregue como propio,
soplarle las respuestas o ponerle en un trabajo cuando este no lo ha realizado.
Es responsabilidad de cada grupo o estudiante traer el material para cada práctica (revisar la guía), de lo
contrario no podrán realizar el laboratorio y la calificación se verá afectada.
El alumno ES RESPONSABLE de cualquier accidente que ocurra con el material y/o equipo con el que
trabaje, debiendo reponer dicho material a la brevedad posible. Cualquier accidente con vidrios,
Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac y Gisella Guillén
Manual de Práctica de Biología Celular
3
reactivos, cultivos biológicos y/o similares deberá comunicarse al responsable del laboratorio o al
profesor de prácticas a fin de tomar las medidas adecuadas.
MANTENGA LOS EQUIPOS EN SU SITIO, moverlos podría dañarlos. Salvo indicaciones expresas
del docente de aula, los equipos permanecerán en sus respectivos lugares, en caso de observar cualquier
anomalía informar al docente inmediatamente. Si al finalizar la práctica se encuentran microscopios con
láminas que debieron ser desechadas con anterioridad, el profesor bajará puntos a la nota de trabajo en el
laboratorio del día a toda la mesa.
Por su seguridad y la de sus compañeros se tienen que cumplir en todas las clases las normas de
BIOSEGURIDAD.
Realizada la práctica ANOTAR Y/O DIBUJAR las experiencias observadas, este proceso le ayudará
para realizar los informes respectivos y para el repaso respectivo.
Los laboratorios SON AMBIENTES DE TRABAJO: Para las demostraciones de sentimientos y juegos
habrá otros momentos oportunos.
INTRODUCCIÓN
Todos los seres vivientes están formados por células; y estas a su vez están formadas por
biomoléculas; pero el número y la variedad de cada una de estas moléculas y células difieren grandemente
entre los distintos organismos. Algunos organismos se componen de solamente una célula. Otros como los
seres humanos, se componen de billones de células. La Biología como ciencia, enmarca los principios básicos
del conocimiento requerido sobre el estudio de los seres vivos. Se trata de una ciencia natural que ha ido
forjando, a través del tiempo la lucha constante, por conocer y transformar la naturaleza. A través de su
desarrollo, ha surgido una diversidad de campos especializados dentro de lo que destaca la Biología Celular
y Molecular que se encarga del estudio de los componentes moleculares de las células y su relación con otras
ramas de la Biología como la Genética, con sus estudios del genoma humano, la clonación de animales, la
terapia génica y la transgénica como también el desarrollo de animales y vegetales transgénicos, avances muy
importantes en las Ciencias de la Salud.
A fin de conocer mejor las complejas y delicadas estructuras de los seres vivos, es necesario el
contacto directo con los muestras que se van a estudiar, por lo que es importante relacionar la teoría con la
práctica; para lo cual brindamos el presente Manual de Biología Celular, detallándose las experiencias de
laboratorio con principios muy sencillos y fáciles de comprender, para que el estudiante tenga un material
didáctico de trabajo que le servirá de guía para realizar sus experiencias de laboratorio.
Los autores
Uso del mandil y/o vestimenta para el ingreso a los laboratorios de la Universidad
• Para cada sesión de prácticas en laboratorios, los usuarios deben de portar un mandil (guardapolvo)
de la Universidad, siendo su uso de carácter obligatorio y de manera correcta (el mandil debe ser de
manga larga y estar debidamente abotonado). No se aceptará el uso de chaquetas cortas, scrubs
médicos y/o mandiles con logos de otra institución y por ende NO SE PERMITIRÁ el ingreso al
laboratorio.
• Todos los usuarios de estos ambientes vestirán sus mandiles antes de ingresar al laboratorio y dejarán
de usarlos luego de retirarse al culminar la sesión práctica.
• El calzado a utilizar debe ser cerrado, pantalones largos no rasgados y medias largas que cubran la
totalidad de los tobillos y empeines (no se aceptará cubrir los agujeros de la vestimenta con cinta o
papeles). Asimismo, el cabello debe de estar debidamente recogido durante toda la sesión de clase.
De no cumplirse estos criterios, NO SE LE PERMITIRÁ el ingreso al laboratorio.
• El uso de elementos de protección personal (EPP) (cofias, guantes y mascarillas) dependerá de la
naturaleza de la práctica y de las indicaciones dadas por el docente a cargo. La adquisición de las
mismas es responsabilidad absoluta del estudiante.
5) El marco teórico debe resaltar los puntos más importantes para entender el tema que se desarrolló
en el laboratorio, debe estar debidamente referenciado. No debe ser copia de un libro, debe explicarse
en sus propios términos.
6) Objetivos y Materiales, si es que no se ha propuesto algún objetivo o usado algún material nuevo,
sólo es una presentación de lo usado en la guía, podrían incluir detalles de los equipos o colorantes
usados en el experimento.
7) Procedimientos deben describir lo realizado en la clase, resumir lo que dice la guía e incluir las
ligeras variaciones de acuerdo con cómo procedió cada grupo.
8) Resultados, deben “describir” lo observado en cada experimento. Pueden hacer uso de figuras
esquemas dibujos, debidamente titulados, y referenciados (es decir si en la sección de
RESULTADOS se menciona: En la Figura 1A se observó/ observamos que los cloroplastos
…..etc……., dicha Figura 1 debería hacer referencia a lo que se observó, la cual debe tener título y
rótulos adecuados. Así mismo incluir los resultados de otros grupos es adecuado.
9) Discusión, esta es una de las partes más importantes, en la cual deben esforzarse por analizar con
un pensamiento crítico lo observado en el desarrollo de la práctica. Deben incluir los experimentos
realizados en todo el laboratorio, es decir algunas veces se dividen para trabajar todos los
experimentos, pero DEBEN DISCUTIR SOBRE TODOS, además comparar lo esperado vs lo
observado. También deben usar libros y o artículos para comparar estos resultados con lo teórico.
10) Las fuentes de referencia deben ser apropiadas, por ejemplo: libros, artículos, documentos
académicos, etc. Así mismo deben de seguir las normas de Vancouver (existe un documento al
respecto). Así mismo se les recomendó descargar y usar algún gestor de referencias como Mendeley
(gratuito) o EndNote (de paga).
COMPETENCIAS: desarrolla el nivel de comprensión de lo realizado en las sesiones de práctica en laboratorio y discutir los
resultados obtenidos.
En el caso del informe 6, se elaborará y entregará el mismo día de la sesión de laboratorio. Los estudiantes
llevarán a la sesión todos los insumos y materiales para la entrega del trabajo (hoja de papel bulky, lápiz,
colores, etc.). El trabajo es individual.
En la presentación deberán incluir en la última hoja la rúbrica de evaluación.
COMPETENCIAS: desarrolla técnicas básicas de preparación de láminas e identifica las diferentes fases de la mitosis.
PRÁCTICA Nº 1
PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD EN EL
LABORATORIO
En todo laboratorio, se ha de cumplir normas y procedimientos para asegurar que las personas que
hacen uso de dicho ambiente no pongan en riesgo su salud y la de la comunidad que lo rodea. Este
conjunto de medidas específicas a seguir es lo que se conoce como Bioseguridad.
Por tanto, podemos definir bioseguridad como el conjunto de medidas preventivas orientadas a
mantener, controlar y reducir factores de riesgo laborables procedentes de agentes de riesgo
(biológicos, físicos o químicos) con el objetivo de proteger la salud y la seguridad del personal que
labora en un determinado establecimiento de salud, laboratorio de diagnóstico o de enseñanza
universitaria.
Se debe tener presente que la sangre humana y los fluidos corporales deberán ser tratados como si
estuvieran potencialmente contaminados con patógenos transmisibles por sangre como el VIH y
VHB. Se asume que cualquier contacto directo con estos fluidos puede resultar en infección y por lo
tanto se requiere que cada trabajador utilice su equipo de protección personal.
Con el fin de evitar accidentes laborales se den tener en cuenta los siguientes principios:
2. Uso de barreras para la protección personal y disminuir los riesgos, para ello se usan guantes,
lentes protectores, mandil, etc.
3. Lavado de manos.
4. Manejo seguro de los residuos sólidos, con el fin de eliminar los residuos biocontaminados
y lograr una buena segregación de la basura.
AGENTES DE RIESGO
Durante el desarrollo de su trabajo en el laboratorio, dependiendo del tipo de laboratorio y del tipo
de actividad que en este se realiza, el personal puede enfrentarse a diversas situaciones de peligro
que ocasionen efectos adversos a la salud. Estas situaciones de peligro se deben a la exposición a
ciertos agentes causantes de daños físicos o enfermedades que pueden ser transmitidas. Estos agentes
de riesgo pueden ser agrupados en tres categorías, en relación a su naturaleza y características:
La Organización Mundial de la Salud (OMS) teniendo en cuenta los peligros relativos asociados a
los organismos patógenos que son manipulados en los laboratorios ha realizado una clasificación de
los microorganismos infecciosos por grupos de riesgo en 4 grupos. Los factores utilizados para
agruparlos se basan en: (a) patogenicidad, (b) dosis infectiva, (c) modo de transmisión, (d) rango de
hospedero, (e) disponibilidad de medidas de prevención efectivas y, (f) disponibilidad de tratamiento
efectivo.
Y teniendo en cuenta esta clasificación, los laboratorios son divididos en 4 niveles de bioseguridad
o de contención, que consisten en la combinación de tres elementos: técnica microbiológica, equipo
de seguridad y diseño de la instalación. Cada nivel de bioseguridad tiene barreras establecidas para
ofrecer protección contra los microorganismos, las cuales aumentan con cada nivel. Los laboratorios
de nivel de bioseguridad 1 trabajan con agentes menos peligrosos y requieren de menos precauciones,
mientras los laboratorios de bioseguridad nivel 4 tienen los métodos más estrictos.
En la tabla Nº1 se detalla los diferentes niveles de bioseguridad de un laboratorio y algunos aspectos
relacionados con cada uno de ellos.
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Nivel de
Grupo de riesgo
bioseguridad Agentes de riesgo biológico Tipo de laboratorio Medidas de bioseguridad
(GR)
(BSL)
GR1, riesgo
Bacillus subtilis, Bacillus
individual y Enseñanza básica, Precauciones universales, se trabaja en la mesa de
BSL-1 (Básico) licheniformis, ciertas cepas de E.
poblacional nulo o investigación laboratorio al descubierto
colino patogénicas
bajo
Piletas de lavado de manos, instalaciones de
Campylobacter jejuni, Helicobacter descontaminación de desechos, acceso restringido,
GR2, riesgo pylori, Neisseria gonorrhoeae, señales de advertencia. Personal vacunado,
Servicios de atención
individual capacitado y bajo vigilancia médica. El riesgo
BSL-2 (Básico) Blastomyces dermatitidis, Coccidia, primaria, diagnóstico,
moderado, primario del personal está relacionado con
Toxoplasma gondii, Adenovirus, investigación
poblacional bajo exposiciones accidentales a sangre, fluidos
Papovavirus corporales, etc., que pueden contener un agente
infeccioso.
Acceso restringido al laboratorio, personal
Coxiella burnetii, Mycobacterium
altamente capacitado en el manejo de agentes (con
tuberculosis, VIH, bacterias
potencial de transmisión respiratoria),
GR3, riesgo multirresistentes como
BSL-3 Diagnóstico especial, descontaminación de todos los desechos, cambio de
individual elevado, Staphylococcusa ureus resistente a
(Contención) investigación ropas de protección de laboratorio y su
poblacional bajo meticilina (MRSA) y Streptococcus
descontaminación antes de ser lavadas. Pre-
pyogenes resistente a eritromicina
cámaras, puertas dobles de ingreso, flujo de aire
(SPRE).
negativo.
Personal altamente capacitado, acceso más
BSL-4 GR4, riesgo
Virus del Ebola, virus Marburg, Unidad de patógenos restringido, duchas químicas, uso de trajes
(Contención individual y
virus Lassa, virus Junín. peligrosos especiales, cambio de ropa. Laboratorios en zonas
máxima) poblacional alto
aislados.
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Para hacer un correcto manejo sanitario de los residuos sólidos es necesario, en primer lugar, realizar
una adecuada clasificación/segregación previa de los mismos. Dicha clasificación permite la separación
de residuos contaminados con agentes patógenos o tóxicos del resto de residuos. La clasificación se basa
en la naturaleza y los riesgos asociados, y se divide en tres categorías: Clase A (Residuo
Biocontaminado), clase B (Residuo especial) y Clase C (Residuo Común) (Tabla Nº2).
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La segregación de los residuos en las diferentes categorías es considerada una etapa fundamental para
las siguientes etapas del ciclo de manejo de residuos: segregación y almacenamiento primario,
almacenamiento intermedio, transporte interno, almacenamiento final, tratamiento, recolección final y
por último, disposición final (Figura Nº1).
PRECAUCIONES UNIVERSALES
1. Lavarse siempre las manos con abundante agua y jabón.
2. Usar barreras de protección como guardapolvo largo, guantes, mascarilla, etc. y de ser posible llevar
el cabello recogido.
3. Evitar lesiones por agujas, bisturís y otros instrumentos cortantes durante los procedimientos y
limpieza del material utilizado.
4. Desinfectar, esterilizar y descartar adecuadamente los instrumentos después de usarlos.
COMPETENCIAS
1. Desarrollar actitudes responsables en el trabajo en el laboratorio.
2. Definir las normas que se deben adoptar dentro de los laboratorios de la Universidad Científica
del Sur para prevenir accidentes.
3. Analizar cuáles son los riesgos a los que puede estar expuesto durante el aprendizaje en el
laboratorio.
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PRÁCTICA Nº 2
FUNDAMENTOS DE MICROSCOPÍA
El ojo humano con una visión en óptimas condiciones solo puede observar elementos cuyo
tamaño sean mayores a 0.1 mm Para poder visualizar y catalogar las dimensiones por debajo de dicho
tamaño, surgió la necesidad de crear instrumentos y técnicas adecuadas que permitan explorar el
campo de la Biología Celular. Por esta razón, aparecen en primer lugar las lupas y los microscopios
simples, muy útiles para el estudio de estructuras macroscópicas pero insuficientes para poder
realizar un estudio de estructuras celulares. Para cumplir con este fin, aparece el microscopio óptico
común o microscopio compuesto. El microscopio óptico compuesto no es más que un sistema óptico
de lentes convergentes que cumplen la función de aumentar la imagen de un objeto.
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EL MICROSCOPIO ÓPTICO
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secos y la última, lente húmedo o de inmersión, ya que debe sumergirse en aceite de origen
sintético cuyo índice de refracción sea próximo al del vidrio.
*Fuente de luz o lámpara. Los haces de luz pueden ser natural o artificial, cuando es natural
(solar) un espejo situado en la base del microscopio recoge la luz del medio y la refleja a través
del objeto y del sistema de lentes. La luz artificial la constituye generalmente un foco de luz
halógena ubicado en el microscopio y conectado a un circuito eléctrico de bajo voltaje (6 a 12V).
CONCEPTOS BÁSICOS
Aumento total (AT): es la imagen obtenida de un objeto que se obtiene al multiplicar el aumento
del lente objetivo utilizado por el aumento de la lente ocular.
AT= Aumento objetivo (4x, 10x, 40x y 100x) X el aumento del ocular (10X).
Poder de resolución (PR): es la capacidad de un instrumento óptico, en este caso el microscopio,
para visualizar los detalles de un objeto; es decir, es la capacidad de poder distinguir dos puntos muy
próximos como separados desde una distancia determinada.
ENFOQUE
• Asegúrese primero de que el microscopio se encuentre sobre una base sólida y conectado a una
toma de corriente eléctrica.
• Utilice siempre el objetivo de menor aumento (4X) para el primer enfoque de una muestra.
• Encienda la fuente de luz, lleve el condensador a una distancia de 1 a 2 mm de la platina
• Verifique que el diafragma esté abierto y el objetivo perpendicular a la platina.
• Coloque una de las láminas preparadas sobre la platina y asegúrela con las pinzas del sistema de
desplazamiento que tiene la platina.
• Procure que la muestra que va a ser observada se encuentre en el centro del orificio de la platina.
• Gire el tornillo macrométrico hasta obtener una distancia de 1 a 2 cm entre el objetivo y la lámina
preparada. ESTA OPERACIÓN DEBE HACERLA SIN COLOCAR SUS OJOS SOBRE EL
OCULAR.
• Ahora coloque los ojos sobre los oculares y manténgalos abiertos, ajuste el sistema de binoculares
a su distancia ocular, de modo que observe un solo y gran campo de luz.
• Siga moviendo la platina hacia arriba utilizando el tornillo macrométrico hasta que visualice la
muestra en la lámina que preparó. Este enfoque se llama ENFOQUE GRUESO.
• Gire con los dedos pulgar e índice de ambas manos el tornillo micrométrico hasta que pueda
observar nítidamente la muestra, esto es el ENFOQUE FINO, que se ajusta a la visión de cada
observador.
• Rote el revólver para cambiar de objetivo.
• Manipule el tornillo micrométrico y enfoque nuevamente la muestra que esté observando.
• En el caso de que use el objetivo de inmersión, una vez que haya enfocado su muestra con el
objetivo de 40X, previo al cambio con el objetivo de 100X, se agrega una gota de aceite de cedro,
se ubica el objetivo y se enfoca la muestra usando el tornillo micrométrico con mucho cuidado.
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COMPETENCIAS
1. Identificar las partes del microscopio óptico y reconoce los diferentes componentes y sus
funciones.
MATERIALES
PROCEDIMIENTO
Preparación de muestras:
• Tomar una lámina portaobjeto limpia, la lámina portaobjeto y cubreobjeto siempre debe
tomarlos por los bordes usando los dedos pulgar e índice.
• Con una navaja cortar una lámina delgada de corcho, colocarlo en el centro de la lámina
portaobjeto y colocar una lámina cubreobjeto sobre el corcho. Enfocar a 40X, 100X y 400X.
Esquematizar a 400X.
• Repetir la misma operación en otra lámina y colocar esta vez la letra “e” minúscula recortada
de un diario cualquiera. Asegurarse de colocar la letra como usted la lee (e). Enfocar a 40X,
100X y 400X. Esquematizar a 40 y 100X
.
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COMPETENCIAS
MARCO TEÓRICO
Otro tipo de microscopía es la Microscopía Electrónica, cuya principal virtud radica en la potencia
amplificadora que no posee un microscopio óptico (Figura N°3), debido a que la microscopia óptica
está limitada por la longitud de onda de la luz visible (alrededor de 4000 ángstroms). En cambio, un
microscopio electrónico utiliza electrones para iluminar un objeto, siendo la longitud de onda de un
electrón de 0.5 ángstroms; razón por la cual en un microscopio electrónico se puede mostrar
estructuras mucho más pequeñas. La imagen que se produce es por la dispersión de los electrones,
mientras que en el microscopio óptico la imagen que se produce es por absorción de los fotones. Es
decir, la imagen que se puede observar se debe a la diferente absorción de la luz por las distintas
estructuras de la muestra, mientras que en el microscopio electrónico la formación de la imagen está
en función de la dispersión y, por consiguiente, perdida de los electrones. Existen dos tipos básicos
de microscopios electrónicos: el microscopio electrónico de transmisión (Transmission Electron
Microscope, TEM) y el microscopio electrónico de barrido (Scanning Electron Microscope, SEM).
En un microscopio electrónico de barrido (MEB), las imágenes que se crean es una imagen ampliada
de la superficie de un objeto a observar. En este tipo de microscopio la ventaja que se tiene es que
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no necesario realizar un corte del objeto en capas para poder observarlo, sino que se puede colocar
un fragmento o la muestra completa dependiendo del tamaño con muy pocos preparativos. La MEB
explora la superficie de la muestra a evaluar y provee una imagen punto por punto, al contrario de
que ofrece la MET, que examina una gran parte de la muestra cada vez. Su funcionamiento se basa
en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones. Los microscopios electrónicos de
barrido pueden ampliar los objetos 200.000 veces.
TIPOS DE MICROSCOPIOS
MICROSCOPIO UTILIDAD
PROCEDIMIENTO
21
1000X
100000X
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1000X
100000X
23
1000X
400X
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PRÁCTICA Nº 3
RECONOCIMIENTO DE BIOMOLÉCULAS
COMPETENCIAS
MATERIALES
CARBOHIDRATOS
Formado por carbono, hidrógeno y oxígeno, representan la principal fuente de energía para
la célula y también son constituyentes estructurales importantes de la pared celular y de las sustancias
intercelulares. Se clasifican, de acuerdo con el número de monómeros que contienen, en
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DETERMINACIÓN DE GLUCOSA
PROCEDIMIENTO.
TUBO CONTROL: Vertir 5mL de la solución de Benedict en un tubo de ensayo, añadir 3mL de
solución de glucosa, y colocar el tubo a Baño María durante 3 a 5 min.
MUESTRAS PROBLEMA: Numerar o rotular los tubos restantes y repitir la operación
reemplazando el reactivo (solución de glucosa) con cada uno de las muestras solicitadas por el
docente. Anotar los resultados.
Un precipitado rojizo confirma la presencia de azúcar en la solución. El azúcar presente sufre
enolización al agregárse el reactivo de Benedict en contacto con el calor. El reactivo forma
compuestos reductores de cobre que reaccionan con el hidróxido del medio, transformando el ión
cobre en óxido cuproso, evidenciandose una tonalidad rojo ladrillo. La coloración varía desde un
color verdoso (cuando la concentración de azúcar es baja) hasta un rojo ladrillo (cuando la
concentración de azúcar es alta).
DETERMINACIÓN DE ALMIDÓN
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PROCEDIMIENTO.
LÍPIDOS
Los lípidos son un grupo de biomoléculas caracterizada por ser insolubles en agua y solubles en
solventes orgánicos, esto se debe a que poseen largas cadenas hidrocarbonadas alifáticas o anillos
bencénicos, que son estructuras no polares o hidrofóbicas. Los lípidos más comunes son los
triglicéridos, los fosfolípidos, los glicolípidos y los esteroides.
DETERMINACIÓN DE LÍPIDOS
• 5 mL de aceite vegetal.
• Plumón marcador por mesa de trabajo.
• Se solicitará los materiales respectivos previa coordinación con el docente en la
sesión de prácticas N° 2.
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PROCEDIMIENTO.
TUBO CONTROL: Añadir 3 mL de Sudan III a un tubo de ensayo conteniendo 3 mL de aceite con
3 mL de agua. Agitar suavemente y observe los resultados.
MUESTRAS PROBLEMA: Numerar o rotular los tubos restantes, reemplazar el aceite por los
productos biológicos que trajo a al práctica. Dejar reposar cada tubo de ensayo 5 min antes de tomar
las lecturas de coloración.
El colorante Sudan III se prepara en alcohol, es hidrófobo y muy soluble en lípidos, por eso al añadir
aceite a la mezcla alcohólica del colorante, éste se separa juntándose con el lípido obteniéndose
finalmente una fase superior de color rojo cereza (Sudan III + aceite) y una fase inferior transparente
(alcohol).
PROTEÍNAS
La unidad base que forma las proteínas es el aminoácido, el cual aminoácido es un ácido orgánico
que tiene un carbono unido al grupo carboxilo y un grupo amino, además, el carbono se halla ligado
a una cadena lateral que es diferente en cada uno de los 20 aminoácidos. En cada una de las funciones
básicas de las células está involucrado las proteínas, funciones tales como estructural, enzimática,
transporte, etc.; por lo que se puede concluir que sin las proteínas no existiría la vida.
DETERMINACIÓN DE PROTEINAS
PROCEDIMIENTO.
TUBO CONTROL: Colocar 5mL de Reactivo de Biuret en un tubo de ensayo y añadir la clara de
huevo. Observar y anotar los resultados.
MUESTRAS PROBLEMA: Numere o rotule los otros tubos y reemplace la clara de huevo por los
materiales que ha traido para la práctica.
El reactivo de Biuret contiene hidróxido de Sodio al 40%; las uniones peptídicas CO-NH que se
establece entre los aminoácidos de las proteínas puede formar junto con el cobre un complejo Biuret
– cuprosódico en medio alcalino. La reacción positiva se manifiesta de un color violeta.
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PRÁCTICA Nº 4
PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA
CITOPLASMÁTICA. (ÓSMOSIS)
La membrana celular es una estructura supramolecular presente en todas las células y está
constituida básicamente por una bicapa fosfolípidica, en donde se insertan proteínas (periféricas o
integrales) (Figura N°5). En algunas células se puede observar carbohidratos asociados a lípidos y/o
proteínas, encontrándoselas en la cara externa y en bajo porcentaje.
La membrana celular rodea a las células dándole una individualidad, debido a que separa dos
medios acuosos: la región intracelular llamada citoplasma y la externa o región extracelular. Esta
membrana es un filtro, altamente selectivo, que controla la entrada de nutrientes y la salida de los
productos residuales, debido a esta propiedad es considerada como semipermeable.
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Las funciones de la membrana son de transporte (el intercambio de materia entre el interior de
la célula y su medio externo), reconocimiento y comunicación (gracias a moléculas situadas en la
parte externa de la membrana, que actúan como receptoras de sustancias).
El componente principal de la célula es el agua, que actúa como solvente de solutos orgánicos
e inorgánicos.
El movimiento del agua a través de las membranas biológicas es siempre pasivo (sin gasto
de energía), la fuerza que dirige este movimiento se conoce como presión osmótica.
Cuando la célula se encuentra en una solución cuya concentración de solutos es menor que
la del medio interno de la célula, se dice que la célula está expuesta a una solución hipotónica y
como consecuencia, el agua entra a la célula causando que se expanda. Pero sí la concentración de
solutos es mayor fuera de la célula, se dice que la célula está expuesta a una solución hipertónica;
provocando que la célula pierda agua y pierda tamaño. Si las concentraciones de soluto son iguales
en ambos lados de la membrana, se dice que la célula está expuesta una solución isotónica, donde
el movimiento neto es cero.
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un fenómeno llamado turgencia, mientras que en las células animales el agua tiende a entrar,
provocando que las células se hinchen y lleguen incluso a estallar, fenómeno llamado lisis. Por otra
parte, si la célula vegetal se le coloca en una solución hipertónica, pierde agua y la célula sufre el
fenómeno denominado plasmólisis al separarse la membrana celular de la pared celular, lo cual suele
ser letal; mientras, la célula animal pasaría por un fenómeno de crenación (Figura N°7).
En Célula Vegetal
Fuente: http://bio1100.nicerweb.com/Locked/media/ch04/tonicp.html
En Célula Animal
Fuente: http://catalog.flatworldknowledge.com/bookhub/4309?e=averill_1.0-ch13_s05
Figura N°7: Efecto de diferentes concentraciones de solución salina en células animales y células
vegetales
COMPETENCIAS
1. Identificar la característica de permeabilidad de la membrana celular.
2. Reconocer e identificar soluciones hipotónicas, isotónicas e hipertónicas.
3. Diferenciar las respuestas celulares a diferentes concentraciones salinas.
4. Deducir como la pared celular afecta el comportamiento osmótico de la célula.
5. Desarrollar habilidades en el trabajo de laboratorio
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MATERIALES
MATERIALES DEL LABORATORIO
PROCEDIMIENTOS
1. Efecto de soluciones hipotónicas, hipertónicas e isotónicas en células vegetales (Elodea sp):
Colocar una hoja de Elodea sp sobre una lámina portaobjeto, colocar una gota de solución salina
al 0.2%, rotular la lámina con el marcador y cubrir la muestra con una laminilla. Observar al
microscopio a 40X, 100X y 400X. Esquematizar sus observaciones a 400X. Repetir el
procedimiento con las soluciones al 0.8 % y 5%. Esquematizar sus observaciones.
3. Osmolaridad en las células vegetales: Se observará como los diferentes tipos de soluciones
afectan el equilibrio y el funcionamiento de las células vegetales. La osmolaridad se expresa
como moles de soluto por litro de solución; mientras más alta es la osmolaridad, mayor es la
concentración de soluto.
Preparar 3 beakers rotulados uno para cada solución. Usar un cortador cilíndrico para sacar 1
cilindro de la papa de 5cm de largo. Cortar de cada cilindro 9 rueditas uniformes de
aproximadamente 5mm de grosor, separarlas en tres grupos y pesar cada grupo por separado y
tocar la textura inicial. Anotar los datos. Transferir a los beakers rotulados con las soluciones de
NaCl 0.015, 0.15 y 0.30M y anotar el tiempo en que se inicia Incubar por 30 minutos a
temperatura ambiente. Retirar cada grupo de rueditas de las soluciones en que están sumergidas
a una hoja de papel secante. Anotar si hubo cambios en textura y pesarlas nuevamente. Analizar
y discutir los resultados.
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PRÁCTICA Nº 5
DIFUSIÓN
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DIÁLISIS
Es la difusión de moléculas de bajo peso molecular a través de una membrana semipermeable, éstas
se desplazan desde la solución más concentrada a la más diluida. (Figura N°9). Es el fundamento de
la hemodiálisis que intenta sustituir la filtración renal deteriorada.
COMPETENCIAS
MATERIALES
MATERIALES DEL LABORATORIO
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PROCEDIMIENTO.
2. Diálisis #1 (de afuera hacia adentro): Atar con pabilo un extremo del buche y por el otro
extremo añadir, usando un embudo, 50 mL de solución de almidón al 10%. Cerrar el orificio del
buche que quedó abierto con pabilo y con ayuda de un palito de anticucho, colocar en un beaker
que contenga agua con 400 mL de solución de Lugol. Dejar actuar durante 40 minutos. Retirar
del beaker y anotar los cambios de color dentro del buche.
3. Diálisis #2 (de adentro hacia afuera): Atar con pabilo un extremo del buche, por el otro extremo
añadir, usando un embudo, 40 mL de solución de Cloruro de Sodio al 30% y 40 ml de solución
de albúmina al 0.5%. Cerrar con pabilo el extremo que quedó abierto, mezclar y con ayuda del
palito de madera, colocar en un beaker que contenga 150 mL de agua destilada. Dejar actuar por
40 minutos. Retirar del beaker y proceder a verter 6 mL de la mezcla de dentro del buche a un
tubo de ensayo y adicionar 4 gotas de reactivo de Biuret. Repetir el procedimiento con la solución
del beaker. Anotar los cambios de color en cada uno de los tubos. Además, a la solución del
beaker añadir cinco gotas de solución de nitrato de plata (AgNO3) y anotar los cambios de color.
35
PRÁCTICA Nº 6
La célula eucariota presenta mayor tamaño y organización que la célula procariota posee estructuras
celulares que van a cumplir diversas funciones como las organelas celulares, inclusiones
citoplasmáticas, sustancias ergásticas y/u otras estructuras.
Las células procariotas son, por lo general, muy pequeñas, con una estructura interna relativamente
muy simple, cosmopolitas y con un citoplasma en apariencia relativamente homogéneo. En general,
el ADN está enrollado, adherido a la membrana plasmática y concentrada en una región de la célula,
llamada nucleoide. Estas células carecen de las características "organelas" envueltas en membrana
subcelular de los eucariotas, pero pueden contener sistemas de membrana dentro de la pared celular.
Las células procarióticas pueden tener pigmentos fotosintéticos tales como los encontrados en las
cianobacterias ("bacterias azules"). Algunas células procariotas tienen flagelos externos en forma de
látigo para la locomoción o pili como pelos para adherirse. Las células procariotas tienen múltiples
formas: cocos (redonda), bacilos (bastones), y espiralada o espiroquetas (células helicoidales) (Figura
N°10).
Casi todas las células procariotas están rodeadas por una pared relativamente dura de peptidoglucano.
La pared celular, es una red polimérica compleja constituida por aminoácidos, aminoazúcares,
azúcares y lípidos, ubicada debajo de elementos extracelulares como la cápsula y cerca de una
36
membrana que colinda con el citoplasma. De acuerdo con la constitución de la pared celular, las
bacterias pueden clasificarse de acuerdo con su reacción a la tinción Gram en Gram positivas y Gram
negativas (Figura N°11).
En la célula eucariota se pueden distinguir dos tipos de células, la célula eucariota animal y
la célula eucariota vegetal. Estas células tienen estructuras en común como: la membrana celular,
citosol, citoesqueleto, retículo endoplasmático, aparato de Golgi, mitocondrias y núcleo; pero
también tienen estructuras propias que las caracterizan, por ejemplo: la célula eucariota animal
presenta centriolos y estructuras locomotoras como los cilios y flagelos, mientras que las células
vegetales se caracterizan por la presencia de una pared celular compuesta principalmente
carbohidratos y plastidios que pueden tener o no pigmentos.
Las mitocondrias son organelas proveedoras de energía y los plastidios con pigmento
cumplen la función de dar color a las estructuras vegetales además de la fotosíntesis (cloroplastos),
mientras que los plastidios sin pigmento llamados también leucoplastos guardan los productos
obtenidos durante la fotosíntesis.
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El movimiento ciliar está adaptado al medio líquido y es cumplido por pequeños apéndices
especialmente diferenciados. Se trata de filamentos contráctiles variables en número y tamaño, que
reciben el nombre de flagelos, si son escasos y largos y cilios, si son cortos y numerosos. En los
protozoarios, hay centenares o miles de pequeños cilios cuyo movimiento permite al organismo
desplazarse con rapidez en el medio líquido. En algunos protozoarios especiales, los cilios se
fusionan y forman apéndices cónicos más gruesos denominados cirros.
En protozoarios, toda la clase flagelados se caracteriza por la presencia de flagelos. Entre los
metazoarios, solo los espermatozoides tienen la propiedad de desplazarse como células aisladas por
medio de esos apéndices.
COMPETENCIAS
MATERIALES
PROCEDIMIENTO
38
* En la tinción Gram, aquellas células procariotas que se observar de color azul-violeta son
denominadas Gram positivo y las que se observan de color rosa, Gram negativo.
Coco
Gram+
Bacilo Gram-
1000 X
Nucléol
o
Pared celular
Núcleo
400 X
39
• Observación de plastidios y ciclosis: Colocar una hoja de Elodea sp. en una lámina, añadir una
gota de agua y observar al microscopio. Esquematizar a 400X.
400XX
400
Mitocondria
Núcleo
Citoplasma
1000 X
40
• Cilios y flagelos:
Observación de cilios en Protozoarios: Colocar una gota del cultivo de Protozoarios sobre una
lámina portaobjeto y cúbrala con una laminilla. Observar el movimiento de los cilios.
Cilios
1000 X
Flagelo
1000 X
ESPERMATOZOIDE HUMANO
41
PRÁCTICA Nº 7
Las diferentes metodologías utilizadas para el estudio de la composición celular han permitido
analizar en gran medida la anatomía y localización de las estructuras y organelas celulares. Sin
embargo, si se desea profundizar en la funcionabilidad de cada componente celular se deben realizar
ensayos que permita obtener fracciones enriquecidas de las distintas estructuras u organelas.
Una de las técnicas más utilizadas para obtener dichas fracciones es el Fraccionamiento
Celular (Figura N°12), el cual es un conjunto de procedimientos que tienen como principal objetivo
obtener fracciones puras o enriquecidas de un determinado componente celular, ya sea éste una
organela como el núcleo, mitocondrias, lisosomas, peroxisomas, etc. Y dependiendo del estudio que
42
se desee elaborar la fracción celular también puede estar compuesta por restos de membrana celular
o por complejos multiproteicos como el citoesqueleto de actina, microtúbulos y poros nucleares.
1) HOMOGENIZADO
Ruptura de las células o tejidos para obtener un lisado celular (o tisular), de tal modo que se
liberen sus componentes, en particular sus organelas, sin que estos sufran mayores daños y que se
encuentren en condiciones adecuadas para su purificación. Para el caso de la ruptura celular, también
existen diversas alternativas como es el método mecánico, donde se hace uso de instrumentos como
el mortero, pinzas, homogeneizadores y ultrasonido que permiten la disgregación y lisis celular. Pero
si se desea partir de un cultivo celular, no es necesario separar las células y se pasa directamente a la
lisis celular. En el caso del método químico, el uso de detergentes, enzimas y el shock osmótico que
cumplen con la función de romper y lisar la membrana celular.
2) FILTRADO
3) CENTRIFUGADO
Una vez que se tienen todos los componentes celulares libres, es necesario separarlos en
fracciones, es decir, realizar su fraccionamiento y el método más utilizado para este fin es la
centrifugación de gradiente de densidad o también el de centrifugación diferencial; cuando los
diferentes componentes celulares se encuentran suspendidos en un líquido, tienden a sedimentar
hacia el fondo por el efecto de la gravedad. Para acelerar este proceso, se puede colocar a un tubo
conteniendo esta suspensión en un rotor giratorio, de forma de someter a las partículas a una fuerza
centrífuga.
COMPETENCIAS
MATERIALES:
43
PROCEDIMIENTO
44
PRACTICA N° 8
Posteriormente a los mecanismos de nutrición y digestión celular, las células usan las
moléculas producto de estos procesos como fuente para la elaboración de energía que es necesaria
para la actividad celular, para lo cual pasan procesos como la desaminación de los aminoácidos, la
beta-oxidación de los ácidos grasos y la glucólisis que tienen como objetivo la formación de ácido
pirúvico y otras moléculas necesarias para los procesos de respiración celular. El ácido pirúvico
obtenido de estos procesos, principalmente de la glucólisis, puede dependiendo del individuo y del
medio en el cual se encuentra ir a dos rutas metabólicas:
La acción del inhibidor sobre la respiración celular: La enzima enolasa cataliza la reacción que
convierte el 2 fosfoglicerato (2PG) en fosfoenolpiruvato (PEP), la enolasa para reaccionar requiere
de la presencia de iones de magnesio. En el siguiente experimento se usará el flúor para precipitar
los iones magnesio y así inhibir la reacción. Esta inhibición se puede detectar como una disminución
en la velocidad del proceso respiratorio, (disminución en la producción del CO2) en las células de
levadura. Debido a que los fluoruros son extremadamente venenosos para los humanos, maneje las
soluciones con sumo cuidado en este ejercicio y asegúrese de lavarse las manos tan pronto como
termine.
45
COMPETENCIAS
1. Comprender los procesos de respiración celular.
MATERIALES:
46
PROCEDIMIENTO
Rotular los tubos de ensayo numerándolos del 1 al 5 por el lado curvo, manténgalos boca abajo
mientras escribe el número. Llenar los tubos como se indica en la siguiente tabla:
REACTIVO 1 2 3 4 5
Levadura 3 mL 3mL 3 mL 3 mL 3mL
Agua destilada 5 mL
Glucosa 5 mL
Fructosa 5 mL
Almidón 5 mL
Sacarosa 5 mL
Rotular los tubos de ensayo numerándolos del 1 al 5 por el lado curvo, manténgalos boca abajo
mientras escribe el número. Llenar los tubos como se indica en la siguiente tabla:
REACTIVO 1 2 3 4 5
Levadura 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL
Agua destilada 5 mL
Glucosa 5 mL 2 mL 2 mL 2 mL
NaF (0,01 M) 3mL
NaF (0,05 M) 3 mL
NaF (0,10 M) 3 mL
47
por 30 min. Volver a medir la cámara de gas de cada tubo y anotar los resultados bajo la columna
“lectura final” en la misma tabla.
RESULTADOS
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
48
PRÁCTICA Nº 9
EXTRACCIÓN DE ADN
La biología molecular es una de las herramientas más útiles de las que se vale hoy en día la
ciencia y la medicina moderna siendo la extracción de ADN (Figura N°13) un tipo de metodología
que mediante la manipulación del material genético ha permitido, entre otras cosas, el desarrollo de
la clonación de secuencias de ADN para el estudio de mutaciones que estén involucradas en las
diferentes patologías humanas, mapeo y secuenciación de genes con fines terapéuticos. Con este
conocimiento se logra el desarrollo de la terapia genética, el análisis de diversidad molecular de
especies, análisis forenses y de paternidad.
COMPETENCIAS
49
PROCEDIMIENTO
50
PROCEDIMIENTO
51
PRÁCTICA Nº 10
La reacción en cadena de la polimerasa, cuyas siglas en ingles son PCR (Polymerase Chain
Reaction) es una técnica muy usada en el campo de la biología molecular, la cual fue desarrollada
por Kary Mullis en 1986. El objetivo de esta técnica es obtener un gran número de copias de un
fragmento de ADN particular mediante una amplificación in vitro. Es una técnica de amplificación
selectiva, la cual se basa en la capacidad de la enzima ADN polimerasa en fabricar una cadena de
ADN complementaria a una ya existente.
Cada ciclo de PCR consiste en tres etapas: la primera, donde el ADN molde es incubado a
altas temperaturas para desnaturalizarlo y de esta manera permitir el fácil acceso de los cebadores al
ADN molde; la segunda o etapa de alineamiento, donde los cebadores hibridan con sus secuencias
complementarias del ADN molde y, por último, la etapa de elongación en la cual el ADN polimerasa
sintetiza de los fragmentos de ADN a partir de los cebadores que ya se han alienado (Figura N°14).
La detección del producto de una PCR se realiza normalmente mediante una corrida electroforética.
Es por eso que el PCR es una herramienta que se ha desarrollado para ofrecer una alternativa
para el estudio del ADN. Debido al impacto dentro de la comunidad científica porque ofrece las
siguientes cualidades.
• Sensibilidad: hace referencia a la mínima cantidad de ADN que es necesario para que se
produzca la amplificación.
• Especificidad: solo se obtiene un solo producto amplificado.
• Eficiencia: amplificación máxima que se puede obtener en un número determinado de ciclos.
• Fidelidad: se refiere a los errores que comete la ADN polimerasa durante la amplificación.
52
COMPETENCIAS
MATERIALES
• 1.5 mL de agua estéril
• Micropipetas de 10 – 100 µL • 4 muestras de ADN
• 50 puntas de 10 -100 µL y de • 1 kit - Mix de PCR (taq polimerasa,
100 -1 000 µl dNTPs, primer, Mg, agua) / muestras
• 1 microcentrífuga16000 rpm alicotadas para cada mesa de trabajo
• 1 termociclador • 1 kit (Primers).
53
PROCEDIMIENTO
4. Finalizada el proceso de amplificación, retirar los eppendorf del termociclador y guardar las muestras
a 4°C si el amplificado se llegara a utilizar en un lapso de poco tiempo. Si no fuese el caso mantener a
–20°C.
Protocolo de PCR
54
PRÁCTICA Nº 11
FUNDAMENTOS DE ELECTROFORESIS
Los ácidos nucleicos (ADN, ARN) están cargados negativamente debido a los grupos
fosfatos, por lo cual cuando se aplica una corriente eléctrica a una matriz de gel que contiene las
muestras de ácidos nucleicos que se encuentra en una solución a pH neutro o básico, entonces los
fragmentos de ácidos nucleicos migrarán hacia el polo positivo o ánodo.
El tamaño del poro formado por el gel depende de la concentración de la acrilamida: a mayor
concentración, menor tamaño del poro y se dificulta el movimiento de los fragmentos a lo largo del
gel permitiendo de esta manera obtener una mayor resolución en los fragmentos pequeño. Una
desventaja que posee la acrilamida sobre la agarosa es que es un compuesto tóxico pero su poder de
resolución es mayor. Todas las moléculas de ADN al tener carga negativa van a migrar hacia el polo
positivo, pero al entrar en los polos del gel, las moléculas más grandes van a tener un movimiento
más lento debido a su dificultad para pasar entre los poros, mientras las moléculas más pequeñas lo
hacen más rápidamente y llegan antes al polo positivo.
55
A
A. Preparación del gel; B. Cargar la muestra en el gel; C. Revelado del gel de agarosa
COMPETENCIAS
56
PROCEDIMIENTO
• Asegurarse de usar guantes durante la manipulación de las muestras, los reactivos y el equipo.
• Preparar 50 mL de agarosa al 2% y adicionar 20 μL de colorante Sybr green, dejar polimerizar
por 10 min aproximadamente. Sumergir el sistema conteniendo los geles polimerizados en su
tanque (cámara electroforética) con el buffer TBE 1X para ADN. Al momento de sumergir los
geles en el tanque, asegurarse que los pocillos del gel estén totalmente saturados de buffer.
• Sobre un pedazo de lámina extensible de parafilm, preparar una mezcla de 5 μL ADN con 1μL
de buffer carga repartida en alícuotas de acuerdo con el número de muestras que se colocarán
en los pocillos (considerar el uso de un marcador de peso molecular estándar de ADN).
• Con el uso de puntas de 20 μL proceder a cargar cuidadosamente la muestra en los pocillos del
gel de agarosa evitando la contaminación del pocillo contiguo.
• Finalizada la colocación de las muestras ADN en los pocillos, cubrir el tanque con la tapa y
conectar los cables de los electrodos en la fuente de poder. Encender la fuente de poder y
proceder a seleccionar el voltaje adecuado (puede estar comprendido entre 75 a 120 voltios).
• Luego de seleccionar las condiciones de voltaje, iniciar el proceso de la electroforesis.
• Transcurrido el tiempo de corrida de la electroforesis, proceder al desmontaje del equipo
empezando con la desconexión de los electrodos de la fuente de poder, removiendo el sistema
contiene el gel de agarosa.
• Remover el gel del soporte, para realizar este proceso se requiere tener mucho cuidado, pues el
gel es muy frágil y puede romperse con facilidad.
• Desplazar el gel hacia el transiluminador para el revelado, encender el equipo y verificar que
este a una longitud de onda de 420 nm.
• Dejar hasta que empiecen a aparecer las bandas y registrar el resultado final.
• Observar los resultados obtenidos y discutir.
57
RESULTADO ESPERADO
M
2000
1900
1800
1700
1500
1600
1500
1400
1300
1200
1100
1000
900
800
700
600
500
400
300
200
100
58
PRÁCTICA Nº 12
Las células se generan a partir de otras células y la única forma de producir más células es por división
de las ya existentes. Este ciclo de reproducción celular en el cual la célula duplica su contenido
(duplicación) y luego se divide en dos (división) es conocido como ciclo celular (Figura N°16). Este
proceso se divide en dos fases: INTERFASE Y DIVISIÓN CELULAR
59
LA DIVISIÓN CELULAR
• Cariocinesis
MITOSIS
La mitosis es la fase del ciclo celular en el cual las moléculas replicadas de ADN durante la
Interfase, se reparten el material nuclear (cariocinesis), dando lugar a la formación de dos núcleos
hijos con la misma dotación genética entre sí y que la célula que les dio origen. Al final de la mitosis
suele acompañarse por un proceso de citocinesis, que es la división del citoplasma en dos,
permitiendo que se formen dos células hijas. Esta cariocinesis ocurre en células somáticas.
Gracias a este proceso de división celular, las células son capaces de multiplicarse, participar
en procesos de desarrollo, de crecimiento y de regeneración celular.
La mitosis se puede dividir en cuatro etapas: profase, metafase, anafase, telofase, cada una
de ellas caracterizada por una serie particular de sucesos (Figura N°17 y N°19).
Profase. En esta fase, los cromosomas duplicados se preparan para la separación y la maquinaria
mitótica se ensambla. El material genético se condensa permitiendo observar los cromosomas como
filamentos dobles (cromátidas hermanas) unidos por un estrangulamiento (centrómero). Al final de
la profase han desaparecido la membrana nuclear y el nucléolo.
1000 X
Metafase. Los cromosomas están alineados en la placa ecuatorial de la célula (placa metafásica), en
la parte media entre los dos polos. Las cromátidas de cada cromosoma están conectadas por su
cinetocoro con las fibras del huso, los cuales son jalados hacia los extremos.
1000 X
Anafase. El anafase comienza cuando las cromátidas hermanas de cada cromosoma se separan e
inician su movimiento hacia los polos opuestos de la célula. El acortamiento de las fibras del huso y
60
la división del cinetocoro contribuye a la separación de los cromosomas. El anafase constituye una
fase importante de la división celular porque en ella se debe realizar la correcta distribución de las
dos copias de la información genética original.
1000 X
Telofase. Durante la telofase las células hijas regresan a la condición de Interfase. Las cromátidas
llegan a los polos y comienzan a descondensarse, en esta fase donde se reconstruye la membrana
nuclear alrededor de cada conjunto cromosómico lo cual definirá los nuevos núcleos hijos.
1000 X
COMPETENCIAS
1. Observar y reconocer las fases de la Mitosis
MATERIALES:
61
PROCEDIMIENTO
1. De 10 a 15 días antes de realizarse la práctica colocar bulbos de cebolla en vasos pequeños
que contengan agua de caño, sujetar los bubos de cebolla con palitos mondadientes (Figura
N°18). Cambiar la primera agua a las 24 horas y después del cambio mantener con la misma
agua hasta el desarrollo de su práctica. El bulbo de cebolla se debe colocar en oscuridad.
Figura N°18. Forma de colocar bulbos de cebolla Allium cepa para trabajar la práctica de
mitosis
2. Cortar con una hoja de afeitar las raíces, aproximadamente de un tamaño de 1 a 2 cm. Colocar
estas raíces sobre una luna de reloj que contenga el colorante orceína aceto-clorhídrica.
Asegurarse que las raíces estén cubiertas con el colorante.
3. Con ayuda de una pinza de madera sujetar la luna de reloj y llevarla a las llamas de un mechero
hasta que emita vapores blancos, tener cuidado de que las raíces estén embebidas del
colorante. No debe hervir.
4. Dejar enfriar y repetir la operación tres veces.
5. Después del último calentamiento se debe dejar enfriar por un lapso de 5 min.
6. Colocar una raíz sobre una lámina porta objetos, reconocer la punta de la raíz y cortar
aproximadamente 5 mm y añadir una gota del colorante con ayuda de un gotero. Desechar el
resto de la raíz.
7. Cubrir la muestra con una lámina cubreobjeto.
8. Con ayuda de un lápiz ejercer presión formando círculos concéntricos sobre la lámina
cubreobjeto para expandir la muestra.
9. Eliminar el exceso de colorante utilizando papel toalla y realizar el procedimiento
denominado “squash” (aplastamiento).
10. Llevar la lámina al microscopio, localizar las células que presentan estructuras filamentosas
intensamente teñidas e identifique las fases de la mitosis. Esquematizar sus observaciones a
400X.
62
63
PRÁCTICA Nº 13
La MEIOSIS es un tipo de división celular por el cual la dotación cromosómica queda dividida
exactamente por la mitad. En este proceso, dos divisiones celulares sucesivas (DIVISIÓN I Y
DIVISIÓN II) ocurren después de un ciclo de replicación de ADN dando lugar a cuatro células
haploides a partir de una diploide (Figura N°20).
Esta división ocurre en células germinales, que se localizan en los órganos reproductores, las
gónadas, y cuya función es la formación de células sexuales o gametos, los que se forman al
dividirse por meiosis.
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• Diploteno. Los cromosomas homólogos empiezan a separarse, pero quedan unos puntos de
unión entre ellos, denominados QUIASMAS. Los quiasmas son la manifestación citológica
de donde se produjeron entrecruzamiento.
• Diacinesis. Los quiasmas se desplazan hacia los extremos del bivalente, fenómeno llamado
TERMINALIZACIÓN. Los cromosomas se unen a las fibras del huso.
Anafase I. Los cromosomas homólogos (tétradas) se separan totalmente y se mueven hacia polos
opuestos guiados por las fibras del huso. Desaparecen los quiasmas.
Telofase I. Los cromosomas se ubican en cada polo de la célula. Los cromosomas empiezan a
descondensarse, se forma la envoltura nuclear, dando lugar a núcleos que poseen un número
haploide de cromosomas, cada uno formado por dos cromátidas.
65
Citocinesis. División del citoplasma en dos células hijas. No hay interfase, la segunda división
empieza inmediatamente.
Metafase II. Las fibras del huso se unen a los cinetocóros de los cromosomas y los dirigen hacia
el plano ecuatorial de la célula.
66
Anafase II. El centrómero se divide y las cromátidas hermanas son desplazada hacia polos
opuestos arrastradas por las fibras del huso.
Telofase II. Cada uno de los polos recibe un juego haploide de cromosomas, se forman los
nuevos núcleos.
Citocinesis Que origina cuatro células, cada una con número haploide de cromosomas (n) y
constituidas de una sola cromátide. Estas células formarán los gametos.
COMPETENCIAS
1. Identificar las fases de la Meiosis
2. Reconocer la importancia de la Meiosis en la variabilidad genética
3. Investigar las consecuencias genéticas de la Meiosis
MATERIALES
▪ 1 juego de 13 láminas fijadas de células germinales Zea mays
67
PROCEDIMIENTO
1. Llevar la lámina al microscopio e identificar las fases (Figura N°24 y N°25). Esquematizar
sus observaciones.
LEPTOTENO ZIGOTENO PAQUITENO DIPLOTENO DIACINESIS
68
1000 X 1000 X
METAFASE I ANAFASE I
1000 X 1000 X
TELOFASE I PROFASE II
1000 X 1000 X
METAFASE II ANAFASE II
69
1000 X 1000 X
TELOFASE II CITOCINESIS
70
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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