Guía 20-I PDF

BIOLOGÍA
CELULAR
CONTENIDO
Pág.
Normas para el estudiante del curso de Biología Celular 03
Introducción 05
Instrucciones para el desarrollo de las prácticas 06
Práctica Nº 1: Principios de Bioseguridad en el laboratorio 08
Práctica N° 2: Fundamento de Microscopía 13
Práctica Nº 3: Reconocimiento de Biomoléculas 22
Práctica Nº 4: Permeabilidad de la Membrana Citoplasmática. (Ósmosis) 26
Práctica Nº 5: Permeabilidad de la Membrana Citoplasmática. (Difusión y diálisis) 30
Práctica Nº 6: La célula procariota y eucariótica: reconocimiento de estructuras 33
Práctica Nº 7: Obtención y análisis de fracciones celulares 39
Práctica Nº 8: Metabolismo Celular: Proceso de respiración celular 42
Práctica Nº 9: Extracción del ADN 45
Práctica Nº 10: Fundamentos de la Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). 48
Práctica Nº 11: Fundamentos de Electroforesis 51
Práctica Nº 12: Ciclo celular: Mitosis 52
Práctica Nº 13: Ciclo celular: Meiosis 60
Referencias Bibliográficas 67
Anexos 68
NORMAS PARA EL ESTUDIANTE DEL CURSO DE
BIOLOGÍA CELULAR
El estudiante debe INGRESAR AL LABORATORIO CON MANDIL LARGO, LIMPIO,

ABOTONADO Y BIEN PLANCHADO mientras dure la práctica. Debe usar pantalón sin rasgaduras
largo, zapatos o zapatillas cerradas y las chicas deben tener el cabello amarrado.
LLEGAR PUNTUAL a las prácticas es señal de respeto hacia los profesores y compañeros. Sólo se dará
10 minutos de tolerancia.
Debe entrar ÚNICAMENTE CON LOS MATERIALES NECESARIOS, como cuaderno de trabajo,
lápices, lapiceros, etc. y el material solicitado por el Docente para cada práctica, el resto de materiales
personales guardarlos en el casillero siguiendo las normas.
ESTUDIAR los conceptos teóricos que servirán para el desarrollo de la práctica correspondiente antes
de ingresar al laboratorio. Se tomarán controles de aprendizaje que comprenderán tres preguntas.
Los alimentos, bebidas, maletines y/o mochilas están prohibidos dentro del laboratorio, siendo los
LABORATORIOS AMBIENTES DE TRABAJO Y ESTUDIO.
El uso de celulares durante las clases distrae e incomoda a los demás, antes de ingresar al laboratorio,
asegúrese de apagar su teléfono móvil.
Los grupos de laboratorio son de máximo 3 alumnos, todos los integrantes del grupo son responsables
del contenido de los informes, por lo tanto, la calificación es para todo el grupo a excepción de los
informes individuales indicados por el docente.
Es indispensable para un correcto análisis en los informes, el uso de textos y artículos que provean las
bases teóricas que fundamenten los temas que se han de tratar. En caso de usar fuentes de Internet el
estudiante debe cerciorarse que ésta sea respaldada por instituciones de prestigio que aseguren la
veracidad de la información suministrada. Todos los trabajos entregados deben tener sus referencias
citadas según el sistema Vancouver.
El fraude es el engaño por parte del estudiante en el desarrollo de una actividad académica o
institucional para obtener un provecho indebido, como copiar trabajos realizados por otras
personas (compañeros, estudiantes de ciclos pasados, autores o documentos bajados de internet),
sin indicar de quien provienen; usar ayudas no autorizadas durante los exámenes, poner su
nombre en el trabajo en el que no participó. También comete falta el estudiante que ayude a otra
persona a cometerlo, por ejemplo; prestándole un trabajo ya elaborado para que lo entregue como propio,
soplarle las respuestas o ponerle en un trabajo cuando este no lo ha realizado.
Es responsabilidad de cada grupo o estudiante traer el material para cada práctica (revisar la guía), de lo
contrario no podrán realizar el laboratorio y la calificación se verá afectada.
El alumno ES RESPONSABLE de cualquier accidente que ocurra con el material y/o equipo con el que
trabaje, debiendo reponer dicho material a la brevedad posible. Cualquier accidente con vidrios,
reactivos, cultivos biológicos y/o similares deberá comunicarse al responsable del laboratorio o al
profesor de prácticas a fin de tomar las medidas adecuadas.
El ORDEN Y LA LIMPIEZA son obligatorios en el laboratorio de Biología Celular y Molecular,

asegúrese de aplicarlos durante y después de la práctica, debiendo dejar el lugar usado como usted lo
encontró.
MANTENGA LOS EQUIPOS EN SU SITIO, moverlos podría dañarlos. Salvo indicaciones expresas
del docente de aula, los equipos permanecerán en sus respectivos lugares, en caso de observar cualquier
anomalía informar al docente inmediatamente. Si al finalizar la práctica se encuentran microscopios con
láminas que debieron ser desechadas con anterioridad, el profesor bajará puntos a la nota de trabajo en el
laboratorio del día a toda la mesa.
Por su seguridad y la de sus compañeros se tienen que cumplir en todas las clases las normas de
BIOSEGURIDAD.
Realizada la práctica ANOTAR Y/O DIBUJAR las experiencias observadas, este proceso le ayudará
para realizar los informes respectivos y para el repaso respectivo.
Los laboratorios SON AMBIENTES DE TRABAJO: Para las demostraciones de sentimientos y juegos
habrá otros momentos oportunos.
LA MANIPULACIÓN DE LOS EQUIPOS SE HARÁ EXCLUSIVAMENTE POR EL PROFESOR

que solicitará la ayuda del responsable de laboratorio si fuera necesario. Los alumnos sólo podrán
manipular los equipos dirigidos por el docente o el responsable de laboratorio
INTRODUCCIÓN
Todos los seres vivientes están formados por células; y estas a su vez están formadas por
biomoléculas; pero el número y la variedad de cada una de estas moléculas y células difieren grandemente
entre los distintos organismos. Algunos organismos se componen de solamente una célula. Otros como los
seres humanos, se componen de billones de células. La Biología como ciencia, enmarca los principios básicos
del conocimiento requerido sobre el estudio de los seres vivos. Se trata de una ciencia natural que ha ido
forjando, a través del tiempo la lucha constante, por conocer y transformar la naturaleza. A través de su
desarrollo, ha surgido una diversidad de campos especializados dentro de lo que destaca la Biología Celular
y Molecular que se encarga del estudio de los componentes moleculares de las células y su relación con otras
ramas de la Biología como la Genética, con sus estudios del genoma humano, la clonación de animales, la
terapia génica y la transgénica como también el desarrollo de animales y vegetales transgénicos, avances muy
importantes en las Ciencias de la Salud.
A fin de conocer mejor las complejas y delicadas estructuras de los seres vivos, es necesario el
contacto directo con los muestras que se van a estudiar, por lo que es importante relacionar la teoría con la
práctica; para lo cual brindamos el presente Manual de Biología Celular, detallándose las experiencias de
laboratorio con principios muy sencillos y fáciles de comprender, para que el estudiante tenga un material
didáctico de trabajo que le servirá de guía para realizar sus experiencias de laboratorio.
El Manual tiene dos objetivos fundamentales: en primer lugar; introducir al estudiante en el

desarrollo de procedimientos experimentales que le permitan estudiar la célula como unidad estructural,
funcional y reproductiva de los sistemas vivos, así como los procesos metabólicos que mantienen y renuevan
su organización; y en segundo lugar, desarrollar en el estudiante habilidades para buscar, seleccionar,
organizar e interpretar la información experimental; conduciéndolo a la formulación de interrogantes sobre
una realidad, con base en la teoría ya existente y así alcanzar soluciones a preguntas planteadas en los procesos
biológicos.
Los autores
INSTRUCCIONES PARA EL DESARROLLO DE LAS
EXPERIENCIAS PRÁCTICAS
• Lee la guía de práctica previa al desarrollo de la experiencia en el laboratorio.

• Investiga previamente sobre los conceptos básicos del tema a desarrollar en la práctica.
• Escucha atentamente las indicaciones de los docentes y sigue las instrucciones del manual de
prácticas.
• En caso de que las pruebas experimentales sean individuales realiza todas las pruebas mencionadas
en el manual en forma independiente.
• En el caso de las experiencias grupales, trabaja en coordinación con tu grupo, realizando una
distribución equitativa de las tareas asignadas, cumpliendo con rapidez y eficiencia, ya que de tu
trabajo depende todo el grupo.
• Realiza cuidadosamente tus pruebas experimentales, entendiendo el porqué de los hechos acaecidos.
• Al efectuar cada uno de los pasos del desarrollo experimental, observa minuciosamente tus
experimentos y anota y/o esquematiza con claridad los cambios ocurridos (color, volumen,
aumentos observados, emisión de gases, texturas, etc.), así como los resultados finales.
• Discute y analiza con los miembros de tu grupo el porqué de estos resultados y las conclusiones
preliminares, encontrando patrones, explicando sucesos, hechos y construyendo deducciones.
• Desarrolla en forma grupal o individual según las indicaciones de los docentes el informe de práctica,
utilizando fuentes de información de nivel universitario que expliquen de forma sustentada tus
resultados y conclusiones desarrolladas que será entregado al ingresar al laboratorio de la clase
siguiente.
• Cita tus referencias según el sistema Vancouver.
CRITERIOS QUE SE TOMARÁN EN CUENTA PARA
LA EVALUACIÓN DE LOS INFORMES DE
PRÁCTICA
➢ La rúbrica será para la evaluación de los informes de laboratorio de las prácticas 1, 2, 3 , 4 y 5. En la

presentación deberán incluir en la última hoja la rúbrica de evaluación.
➢ En el caso de los informes 6 se elaborarán y entregarán el mismo día de la sesión de laboratorio. Los
estudiantes llevarán a la sesión todos los insumos y materiales para la entrega del trabajo (hoja de papel
bulky, lápiz, colores, etc.).El trabajo es individual.
➢ En la presentación deberán incluir en la última hoja la rúbrica de evaluación.
RUBRICA PARA EVALUAR PRÁCTICA 12

NIVELES DE DESEMPEÑO
CRITERIOS Nota
Excelente Bueno Regular Deficiente
Llegó puntual y Llegó puntual y Llegó impuntual y

Puntualidad y Llegó puntual y
cumplió en traer pero no cumplió pero no cumplió
responsabilidad pero le faltaro n
to do s lo s co n traer co n traer
De 0 a 3 materiales De 0 a 1
en la materiales
so licitado s para la De 0 a 2 materiales materiales 0
so licitado s para la puntos so licitado s para la punto so licitado s para la
presentación de realizació n de la
realizació n de la realizació n de la realizació n de la
materiales sesió n
sesió n sesió n sesió n
A plica las A plica las

A plica las
medidas de medidas de No aplica las
medidas de
seguridad y seguridad y medidas de
seguridad y
bio seguridad, bio seguridad, seguridad y
bio seguridad, no
desarro lla la desarro lla la bio seguridad, no
desarro lla la
Preparación del técnica indicada de 0 a 5 técnica indicada de 0 a 3 de 0 a 1 desarro lla la
po r el do cente po r el do cente
técnica indicada
técnica indicada
0
material puntos puntos po r el do cente y puntos
paso a paso y paso a paso y po r el do cente y
lo gra preparar una
lo gra preparar una lo gra preparar una no lo gra preparar
lámina de de baja
lámina de buena lámina de baja una lámina para la
calidad para la
calidad para la calidad para la o bservació n.
o bservació n.
o bservació n. o bservació n.
Enfo ca su Enfo ca su Enfo ca su No enfo ca su

muestra muestra muestra muestra
siguiendo lo s siguiendo lo s siguiendo lo s siguiendo lo s
paso s aprendido s paso s aprendido s paso s aprendido s paso s aprendido s
Identificación de en la práctica de en la práctica de en la práctica de en la práctica de
las fases de micro sco pía, De 0 a 3 micro sco pía, De 0 a 2 micro sco pía, de 0 a 1 micro sco pía, 0
identifica celulas identifica celulas identifica celulas identifica celulas
mitosis
en interfase y en interfase y en interfase y en interfase y
divisió n y las divisió n y so lo divisió n y so lo divisió n y so lo
cuatro fases de la tres fases de la do s fases de la do s fases de la
mito sis mito sis mito sis mito sis
Co lo ca su
Co lo ca su No co lo ca su
no mbre Co lo ca su
no mbre no mbre
co mpleto , grupo no mbre
co mpleto , grupo co mpleto , ni
de trabajo , co mpleto ,
de trabajo , indica no mbre de
no mbre y número no mbre de la
no mbre de la la práctica, el
de la práctica. El práctica, trabajo
Datos del informe práctica.. El trabajo lo realiza
trabajo lo realiza De 0 a 3 trabajo lo realiza De 0 a 2 lo realiza en o tro 1 en o tro papel 1
presentado en papel B ulys o papel diferente al
en papel bulky o diferente al bulky
bo nd. Ingresa al bulky o bo nd. No
bo nd. Ingresa al o bo nd. No trae
labo rato rio co n trae to do s lo s
labo rato rio co n to do s lo s
to do s lo s materiales
parte del material materiales
materiales so licitado s.
so licitado . so licitado s.
so licitado s.
Elabo ra sus Elabo ra sus Elabo ra sus Elabo ra sus

dibujo s dibujo s dibujo s dibujo s
científico s científico s, científico s, científico s, no
usando co lo res, usando co lo res, usando co lo res, usando co lo res,
Esquemas de 0 a 4 de 0 a 3
no mina lo s no no mina lo s no no mina lo s De 0 a 2 no mina lo s 1
realizados esquemas, usa de puntos esquemas, usa de puntos esquemas, no usa esquemas, no usa
fo ndo el circulo , fo ndo el circulo , de fo ndo el de fo ndo el
trabaja las trabaja las circulo , no trabaja circulo , no trabaja
escalas. escalas. las escalas. las escalas.
Co lo ca el no mbre
No co lo ca el
Co lo ca el no mbre de la especie
no mbre de la
Datos de la de la especie trabajada y / o no
trabajada y tipo de De 0 a 2 del tipo de De 0 a 1 especie trabajada, 0 0
muestra ni tipo de
co lo ració n. co lo ració n. ( so lo
co lo ració n
un dato )
TOTAL 20 15 8 4
PRÁCTICA Nº 1
PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD EN EL
LABORATORIO
En cualquier laboratorio, se deben de seguir normas y procedimientos para que las personas que
laboran en dicho ambiente no pongan en riesgo su salud y la de la comunidad que lo rodea. Dicho
conjunto de medidas específicas a seguir es lo que se conoce como Bioseguridad.
Por tanto, podemos definir bioseguridad como el conjunto de medidas preventivas orientadas a
mantener, controlar y reducir factores de riesgo laborables procedentes de agentes de riesgo
(biológicos, físicos o químicos) con el objetivo de proteger la salud y la seguridad del personal que
labora en un determinado establecimiento de salud, laboratorio de diagnóstico o de enseñanza
universitaria.
PRINCIPIOS BÁSICOS DE BIOSEGURIDAD

Se debe tener presente que la sangre humana y los fluidos corporales deberán ser tratados como si
estuvieran potencialmente contaminados con patógenos transmisibles por sangre como el VIH y
VHB. Se asume que cualquier contacto directo con estos fluidos puede resultar en infección y por lo
tanto se requiere que cada trabajador utilice su equipo de protección personal.
Con el fin de evitar accidentes laborales se den tener en cuenta los siguientes principios:
1. Universalidad. Se debe asumir como potencialmente infectante, todo paciente o residuo
biológico.
Principio Universal: “TODA MUESTRA BIOLOGICA DEBE SER ASUMIDO COMO

UN FACTOR DE RIESGO INFECCIOSO”
2. Uso de barreras para la protección personal y disminuir los riesgos, para ello se usan guantes,
lentes protectores, mandil, etc.
3. Lavado de manos.
4. Manejo seguro de los residuos sólidos, con el fin de eliminar los residuos biocontaminados
y lograr una buena segregación de la basura.
AGENTES DE RIESGO
Durante el desarrollo de su trabajo en el laboratorio, dependiendo del tipo de laboratorio y del tipo
de actividad que en este se realiza, el personal puede enfrentarse a diversas situaciones de peligro
que ocasionen efectos adversos a la salud. Estas situaciones de peligro se deben a la exposición a
ciertos agentes causantes de daños físicos o enfermedades que pueden ser transmitidas. Estos agentes
de riesgo pueden ser agrupados en tres categorías, en relación a su naturaleza y características:
Agentes de riesgo biológicos
Consiste en la presencia de un organismo, o la sustancia derivada de un organismo, que provoca una
amenaza a la salud humana. Esto puede incluir transmisión por ingestión, inhalación, inoculación, o
por contacto directo a través de piel o mucosas. Entre estos agentes de riesgo se incluyen bacterias,
hongos, parásitos, virus, priones, como también, tejidos y fluidos de organismos vivientes que porten
o puedan portar ese material, que pueden resultar patógenos.
Agentes de riesgos físicos y mecánicos

Son estados energéticos con un efecto nocivo, de acuerdo a la intensidad y el tiempo de exposición
a los mismos, para la salud humana. Entre los cuales encontramos, temperaturas extremas (altas y
bajas) que pueden ser capaces de ocasionar quemaduras, las radiaciones (ionizantes y no ionizantes),
objetos punzo-cortantes (vidrios resquebrajados de recipientes dañados o tubos rotos, hojas de
bisturí, navajas, etc.), electricidad, el ruido producido por aparatos que ocasiona disminución de la
audición, mala iluminación, carga física, vibración, uso de muebles de trabajo inadecuados.
Agentes de riesgo químicos

Es aquel riesgo susceptible de ser producido por una exposición no controlada a productos químicos,
la cual puede producir efectos locales y sistémicos según la naturaleza del producto, la vía de entrada
en el organismo, el tiempo de exposición, etc. Los agentes de riesgo químicos pueden a su vez ser
clasificados de acuerdo a sus características y su modo de acción:
• Corrosivos que causan destrucción o alteración a los tejidos
• Tóxicos, cuyos efectos se manifiestan según la vía de exposición, por inhalación, ingestión
o contacto directo con piel o mucosas
• Carcinogénicos o mutagénicos
• Inflamables y explosivos
• Etc.
La Organización Mundial de la Salud (OMS) teniendo en cuenta los peligros relativos asociados a
los organismos patógenos que son manipulados en los laboratorios ha realizado una clasificación de
los microorganismos infecciosos por grupos de riesgo en 4 grupos. Los factores utilizados para
agruparlos se basan en: (a) patogenicidad, (b) dosis infectiva, (c) modo de transmisión, (d) rango de
hospedero, (e) disponibilidad de medidas de prevención efectivas y, (f) disponibilidad de tratamiento
efectivo.
Y teniendo en cuenta esta clasificación, los laboratorios son divididos en 4 niveles de bioseguridad
o de contención, que consisten en la combinación de tres elementos: técnica microbiológica, equipo
de seguridad y diseño de la instalación. Cada nivel de bioseguridad tiene barreras establecidas para
ofrecer protección contra los microorganismos, las cuales aumentan con cada nivel. Los laboratorios
de nivel de bioseguridad 1 trabajan con agentes menos peligrosos y requieren de menos precauciones,
mientras los laboratorios de bioseguridad nivel 4 tienen los métodos más estrictos.
En la tabla Nº1 se detalla los diferentes niveles de bioseguridad de un laboratorio y algunos aspectos
relacionados con cada uno de ellos.
Manual de Práctica de Biología Celular
10
Tabla Nº 1: Niveles de bioseguridad
Nivel de
Grupo de riesgo
bioseguridad Agentes de riesgo biológico Tipo de laboratorio Medidas de bioseguridad
(GR)
(BSL)
GR1, riesgo
Bacillus subtilis, Bacillus
individual y Enseñanza básica, Precauciones universales, se trabaja en la mesa de
BSL-1 (Básico) licheniformis, ciertas cepas de E.
poblacional nulo o investigación laboratorio al descubierto
colino patogénicas
bajo
Piletas de lavado de manos, instalaciones de
Campylobacter jejuni, Helicobacter descontaminación de desechos, acceso restringido,
GR2, riesgo pylori, Neisseria gonorrhoeae, señales de advertencia. Personal vacunado,
Servicios de atención
individual capacitado y bajo vigilancia médica. El riesgo
BSL-2 (Básico) Blastomyces dermatitidis, Coccidia, primaria, diagnóstico,
moderado, primario del personal está relacionado con
Toxoplasma gondii, Adenovirus, investigación
poblacional bajo exposiciones accidentales a sangre, fluidos
Papovavirus corporales, etc., que pueden contener un agente
infeccioso.
Acceso restringido al laboratorio, personal
Coxiella burnetii, Mycobacterium
altamente capacitado en el manejo de agentes (con
tuberculosis, VIH, bacterias
potencial de transmisión respiratoria),
GR3, riesgo multirresistentes como
BSL-3 Diagnóstico especial, descontaminación de todos los desechos, cambio de
individual elevado, Staphylococcusa ureus resistente a
(Contención) investigación ropas de protección de laboratorio y su
poblacional bajo meticilina (MRSA) y Streptococcus
descontaminación antes de ser lavadas. Pre-
pyogenes resistente a eritromicina
cámaras, puertas dobles de ingreso, flujo de aire
(SPRE).
negativo.
Personal altamente capacitado, acceso más
BSL-4 GR4, riesgo
Virus del Ebola, virus Marburg, Unidad de patógenos restringido, duchas químicas, uso de trajes
(Contención individual y
virus Lassa, virus Junín. peligrosos especiales, cambio de ropa. Laboratorios en zonas
máxima) poblacional alto
aislados.
Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac y Gisella Guillén

Manual de Práctica de Biología Celular y Molecular
11
MANEJO DE RESIDUOS SOLIDOS DE ESTABLECIMIENTOS DE SALUD
Para hacer un correcto manejo sanitario de los residuos sólidos es necesario, en primer lugar, realizar
una adecuada clasificación/segregación previa de los mismos. Dicha clasificación permite la separación
de residuos contaminados con agentes patógenos o tóxicos del resto de residuos. La clasificación se basa
en la naturaleza y los riesgos asociados, y se divide en tres categorías: Clase A (Residuo
Biocontaminado), clase B (Residuo especial) y Clase C (Residuo Común) (Tabla Nº2).
Tabla Nº2: Clasificación de residuos sólidos sanitarios
Clase Ejemplo Color de Bolsa

Cultivos, vacunas vencidas o
inutilizadas. Muestras de sangre, suero,
tejidos, órganos. Residuos quirúrgicos
Rojo.
Aquellos generados en el y patológicos. Material punzocortante
A proceso de atención e que estuvieron en contacto con
investigación médica pacientes o agentes infecciosos.
Animales contaminados. Residuos
contaminados provenientes de la
atención al paciente.
Aquellos con potencial Residuos químicos peligrosos.
peligro por lo corrosivo, Residuos farmacéuticos (vencidos,
B inflamable, tóxico, desactualizados, no utilizados). Amarilla
explosivo y reactivo para la Residuos radioactivos.
persona expuesta.
Residuos generados por
Todo material que no puede administración, limpieza de jardines,
C clasificarse en las categorías patios, áreas públicas, restos de la Negra
A y B. preparación de alimentos.
Bolsas rojas: áreas Bolsas amarillas: áreas Bolsas negras: residuos

biocontaminadas especiales comunes
unescontaminadas
Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac, Gisella Guillén

12
La segregación de los residuos en las diferentes categorías es considerada una etapa fundamental para
las siguientes etapas del ciclo de manejo de residuos: segregación y almacenamiento primario,
almacenamiento intermedio, transporte interno, almacenamiento final, tratamiento, recolección final y
por último, disposición final (Figura Nº1).
Figura Nº1: Ciclo del manejo de residuos sólidos hospitalarios

FUENTE: MINSA – Norma técnica: Procedimientos para el manejo de residuos sólidos hospitalarios
(R.M. N°217-2004/MINSA)
PRECAUCIONES UNIVERSALES
1. Lavarse siempre las manos con abundante agua y jabón.

2. Usar barreras de protección como guardapolvo largo, guantes, mascarilla, etc. y de ser posible llevar
el cabello recogido.
3. Evitar lesiones por agujas, bisturís y otros instrumentos cortantes durante los procedimientos y
limpieza del material utilizado.
4. Desinfectar, esterilizar y descartar adecuadamente los instrumentos después de usarlos.
COMPETENCIAS
• Desarrolla actitudes responsables en el trabajo en el laboratorio. Define las normas que se deben
adoptar dentro de los laboratorios de la Universidad Científica del Sur para prevenir accidentes.
Analiza cuáles son los riesgos a los que puede estar expuesto durante el aprendizaje en el
laboratorio.

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PRÁCTICA Nº 2
FUNDAMENTOS DE MICROSCOPÍA
El ojo humano con una visión en óptimas condiciones solo puede observar elementos cuyo
tamaño sean mayores a 0,1 mm Para poder visualizar y catalogar las dimensiones por debajo de dicho
tamaño, surgió la necesidad de crear instrumentos y técnicas adecuadas que permitan explorar el
campo de la Biología Celular. Por esta razón, aparecen en primer lugar las lupas y los microscopios
simples, muy útiles para el estudio de estructuras macroscópicas pero insuficientes para poder
realizar un estudio de estructuras celulares. Para cumplir con este fin, aparece el microscopio óptico
común o microscopio compuesto. El microscopio óptico compuesto no es más que un sistema óptico
de lentes convergentes que cumplen la función de aumentar la imagen de un objeto.
Figura N°2. Microscopio óptico de campo claro

Fuente: LABORATORIODE BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR, UNIVERSIDAD CIENTIFICA DEL
SURhttp://www.cientifica.edu.pe

14
Fuente: GENOMA SUR – INTRODUCCIÓN A LA CÉLULA

http://www.genomasur.com/lecturas/Guia01.htm
Figura N°3. Rango de visualización del microscopio.

Fuente: http://www.biologia.arizona.edu/cell/tutor/cells/cells2.html
EL MICROSCOPIO ÓPTICO
Parte mecánico y sus componentes:
• Pie o base: se encuentra en la parte inferior del aparato, proporcionándole estabilidad.

• Columna o brazo: estructura metálica que sostiene a las demás piezas del microscopio.
• Platina: placa horizontal donde se coloca el portaobjetos con la muestra y es sujetada por un
sistema de pinzas que permiten deslizar el portaobjetos en dos sentidos perpendiculares.
Además, posee una perforación central para el paso de los rayos de luz.
• Diafragma: Está asociado a la platina ubicado entre la fuente de luz y el condensador. Es una
membrana metálica que se abre o cierra, cuya función es regular la intensidad de luz que
atraviesa el objeto y eliminar los rayos periféricos que distorsionan las imágenes.
• Tornillos macro y micrométrico: son las que desplazan la platina en un sentido vertical
posibilitando el enfoque. El tornillo macrométrico es el que da un ajuste grueso, con
movimientos amplios de la platina (cm, mm). El micrométrico permite un ajuste fino, casi
imperceptible (μm) para lograr una imagen nítida de la muestra a observar.
• Revolver: sitio donde se montan los objetivos.
• Cabezal: soporta el revólver y los oculares. Pueden ser mono, binocular o trinocular. Los
cabezales trinoculares son poseen un adaptador para una cámara fotográfica.
Parte óptico y sus componentes:
• Condensador: Lente o sistema de lentes de forma cónica que posee un sistema de dos lentes
convergentes que utilizan para hacer eficiente la iluminación, de manera que la mayor parte de
los rayos luminosos de la fuente atraviesen el preparado y entren en el sistema óptico del
microscopio.
• Ocular: es la lente o sistema de lentes más cercana al ojo del observador, montada en un tubo
monocular o en dos tubos binocular. Las lentes llevan impreso el número de aumentos: 6X, 10X
y 15X; El más común es el de 10X. (“X” se lee “por”).
• Objetivo: es la lente más cercana al objeto a observar. En el revólver existen cuatro o cinco
objetivos montados de distintos aumentos. Estos llevan escrito el aumento que puede alcanzarse
con ellos, usualmente son de 4X, 10X, 40X, y 100X. Los cuatro primeros se denominan lentes

15
secos y la última, lente húmedo o de inmersión, ya que debe sumergirse en aceite de origen
sintético cuyo índice de refracción sea próximo al del vidrio.
*Fuente de luz o lámpara. Los haces de luz pueden ser natural o artificial, cuando es natural (solar)
un espejo situado en la base del microscopio recoge la luz del medio y la refleja a través del objeto
y del sistema de lentes. La luz artificial la constituye generalmente un foco de luz halógena
ubicado en el microscopio y conectado a un circuito eléctrico de bajo voltaje (6 a 12V).
CONCEPTOS BÁSICOS
Aumento total (AT): es la imagen obtenida de un objeto que se obtiene al multiplicar el aumento
del lente objetivo utilizada por el aumento de la lente ocular.
AT= Aumento objetivo (4x, 10x, 40x y 100x) X el aumento del ocular (10X).
Poder de resolución (PR): es la capacidad de un instrumento óptico, en este caso el microscopio,
para visualizar los detalles de un objeto; es decir, es la capacidad de poder distinguir dos puntos muy
próximos como separados desde una distancia determinada.
ENFOQUE
• Asegúrese primero de que el microscopio esté sobre una base sólida y se encuentre conectado a
una toma de corriente eléctrica.
• Utilice siempre el objetivo de menor aumento (4X), para el primer enfoque de una muestra.
• Encienda la fuente de luz, lleve el condensador a una distancia de 1 a 2 mm de la platina
• Verifique que el diafragma esté abierto y el objetivo perpendicular a la platina.
• Coloque una de las láminas preparadas sobre la platina y asegúrela con las pinzas del sistema de
desplazamiento que tiene la platina.
• Procure que la muestra que va a ser observada se encuentre en el centro del orificio de la platina.
• Gire el tornillo macrométrico hasta obtener una distancia de 1 a 2 cm entre el objetivo y la lámina
preparada. ESTA OPERACIÓN DEBE HACERLA SIN COLOCAR SUS OJOS SOBRE EL
OCULAR.
• Ahora coloque los ojos sobre los oculares y manténgalos abiertos, ajuste el sistema de binoculares
a su distancia ocular, de modo que observe un solo y gran campo de luz.
• Siga moviendo la platina hacia arriba utilizando el tornillo macrométrico hasta que visualice la
muestra en la lámina que preparó. Este enfoque se llama ENFOQUE GRUESO.
• Empiece a girar, con los dedos pulgar e índice de ambas manos, el tornillo micrométrico hasta
que pueda observar nítidamente la muestra, esto es el ENFOQUE FINO, que se ajusta a la visión
de cada observador.
• Rote el revólver para cambiar de objetivo.
• Manipule el tornillo micrométrico y enfoque nuevamente la muestra que esté observando.
• En el caso de que use el objetivo de inmersión, una vez que haya enfocado su muestra con el
objetivo de 40X, previo al cambio con el objetivo de 100X, se agrega una gota de aceite de cedro,
se ubica el objetivo y se enfoca la muestra usando el tornillo micrométrico con mucho cuidado.

16
COMPETENCIAS
1. Identifica las partes del microscopio óptico y reconoce los diferentes componentes.
MATERIALES
MATERIALES DEL LABORATORIO (por mesa de trabajo)
• Microscopios ópticos • 4 hojas de afeitar
• Papel lente • 1 caja de láminas porta objeto y
• 1 Gotero laminillas cubre objeto.
MATERIALES DEL ESTUDIANTE (por mesa de trabajo)

• 1 Corcho natural • Hoja de diario con letras
• 4 Tijeras
PROCEDIMIENTOS
Preparación de muestras:
• Tomar una lámina portaobjeto limpia, estas láminas y los cubreobjetos siempre debe tomarlos
por los bordes usando los dedos pulgar e índice.
• Con una navaja cortar una lámina delgada de corcho, colocarlo en el centro de la lámina
portaobjeto. Enfocar a 40X, 100X y 400X. Esquematizar a 400X.
• Repetir la misma operación en otra lámina y colocar esta vez la letra “e” minúscula recortada
de un diario cualquiera. Asegurarse de colocar la letra como usted la lee (e). Enfocar a 40X,
100X y 400X. Esquematizar a 40 y 100X
.

17
TIPOS DE MICROSCOPÍA (continuación)

COMPETENCIAS
1. Reconoce la importancia delos diferentes tipos de microscopio.
2. Conoce las características del microscopio de campo oscuro, contraste de fases,
fluorescencia y microscopios electrónicos, en el estudio de los sistemas biológicos.
3. Reconoce el impacto que produjo en el estudio de los sistemas biológicos el desarrollo de la
microscopia electrónica.
MARCO TEÓRICO
El uso de determinados componentes colocados en el condensador o en los objetivos se interponen

al haz luminoso emitidos por la lámpara, filtrando u obstaculizando la luz y dan lugar a los distintos
tipos de microscopía óptica como la de campo claro, campo oscuro y contraste de fases. Estos tipos
de dispositivos en un microscopio de contraste de fases manipulan físicamente los haces luminosos
seleccionando parte de las ondas de las que se compone dicho haz, lo que provoca una imagen
contrastada de la muestra sin necesidad de teñirla. En el caso de la microscopia de fluorescencia, se
utiliza una lámpara que emite un haz luminoso fuera del rango de la luz visible y se aprovecha esta
propiedad de filtrar los haces de luz para poder manejar la longitud de onda que incide y emite una
muestra determinada mediante filtros. Actualmente, el microscopio de fluorescencia más utilizado
es el de epifluorescencia, que simplemente indica que la luz filtrada no atraviesa la muestra, sino que
incide sobre ella a través del lente objetivo, y esta misma lente es la encargada de recoger la luz que
emite la muestra excitada.
Otro tipo de microscopía es la Microscopía Electrónica, cuya principal virtud radica en la potencia
amplificadora que no posee un microscopio óptico (Figura N°3), debido a que la microscopia óptica
está limitada por la longitud de onda de la luz visible (alrededor de 4000 ángstroms). En cambio, un
microscopio electrónico utiliza electrones para iluminar un objeto, siendo la longitud de onda de un
electrón de 0,5 ángstroms; razón por la cual en un microscopio electrónico se puede mostrar
estructuras mucho más pequeñas. La imagen que se produce es por la dispersión de los electrones,
mientras que en el microscopio óptico la imagen que se produce es por absorción de los fotones. Es
decir, la imagen que se puede observar se debe a la diferente absorción de la luz por las distintas
estructuras de la muestra, mientras que en el microscopio electrónico la formación de la imagen está
en función de la dispersión y, por consiguiente, perdida de los electrones. Existen dos tipos básicos
de microscopios electrónicos: el microscopio electrónico de transmisión (Transmission Electron
Microscope, TEM) y el microscopio electrónico de barrido (Scanning Electron Microscope, SEM).
En el microscopio electrónico de transmisión (MET), la observación de una muestra biológica se

necesita realizar cortes histológicos ultrafinos. Los haces de electrones se dirigen hacia la muestra
que se desea aumentar y uno de estos electrones que es emitido por la lámpara rebota o es absorbido
por el objeto y otros la atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra en estudio. Los
microscopios electrónicos de transmisión pueden aumentar un objeto hasta un millón de veces.
En un microscopio electrónico de barrido (MEB), las imágenes que se crean es una imagen ampliada
de la superficie de un objeto a observar. En este tipo de microscopio la ventaja que se tiene es que
no necesario realizar un corte del objeto en capas para poder observarlo, sino que se puede colocar

18
un fragmento o la muestra completa dependiendo del tamaño con muy pocos preparativos. La MEB
explora la superficie de la muestra a evaluar y provee una imagen punto por punto, al contrario de
que ofrece la MET, que examina una gran parte de la muestra cada vez. Su funcionamiento se basa
en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones. Los microscopios electrónicos de
barrido pueden ampliar los objetos 200.000 veces.
TIPOS DE MICROSCOPIOS
MICROSCOPIO UTILIDAD
Óptico de campo claro Para observar muestras teñidas.
Para la observación de microorganismos

vivos, invisibles a la microscopia de campo
Óptico de campo oscuro
claro debido a que no se tiñen con facilidad,
porque se distorsiona su visualización.
Para facilitar la visualización de estructuras

Óptico de Contraste de fases
internas de muestras vivas no teñidas
Observar estructuras internas específicas

Óptico de Fluorescencia mediante la utilización de fluorocromos o
anticuerpos marcados.
Examinar virus o la ultraestructura interna de

Electrónico de transmisión cortes delgados de células (aumento de 10000
- 100000X)
Estudiar las características de las superficies

Electrónico de barrido
externas de organismos, células y virus.
Fuente: Comunicación personal.
MATERIALES
• Placas fotografías usando los diferentes tipos de microscopio óptico y electrónico.
PROCEDIMIENTOS
• Teniendo en cuenta la información presente en la explicación del docente, analizar las
siguientes fotografías de muestras observadas mediante microscopía.

19
Tipo de microscopia utilizada

………………………………….
Tipo de microscopio utilizado
………………………….………
1000X
Fuente: Angiogénesis en tumores de células germinales testiculares

http://www.conganat.org/3congreso/cvhap/comunicaciones/059/index.htm

…………..…………………….
…………….……………………
100000X
Fuente: Microscopio virtual

http://www.biologia.edu.ar/microscopia/meb.htm

20

…………….……………………
……………..……………………
1000X


…………….……………………
……………..……………………
100000X


21

…………….……………………
…………….……………………
1000X


…………….……………………
…………….……………………
400X


22
PRÁCTICA Nº 3
RECONOCIMIENTO DE BIOMOLÉCULAS
Figura N°4. Composición química de la célula.

Fuente: Universidad Científica del Sur
La estructura de la célula es consecuencia de moléculas que se hallan organizadas en un

orden muy preciso. La biología de la célula es inseparable de la de las moléculas, porque de la misma
manera que las células son los bloques con que se edifican los tejidos y los organismos, las moléculas
son los bloques con que se construyen las células.
Al principio, el estudio de la composición química de la célula se hizo por análisis
bioquímico de órganos y tejidos enteros, como el hígado, el cerebro, la piel o el meristemo vegetal.
En los últimos años, el desarrollo de métodos de fraccionamiento celular y de diversos micro métodos
permitió aislar diferentes elementos subcelulares y recoger información importante sobre la
estructura molecular de la célula.
Los componentes químicos de la célula se clasifican en inorgánicos (agua y minerales) y
orgánicos (proteínas, hidratos de carbono, ácidos nucleicos, lípidos, etc.). Del total de los
componentes de las células, un 75 a 85% es agua, entre el 2 y el 3% son sales inorgánicas y el resto
son compuestos orgánicos derivados de átomos de carbono (Figura N°4).
COMPETENCIAS
1. Reconocer la presencia de algunos componentes químicos (biomoléculas) en muestras biológicas.
MATERIALES
CARBOHIDRATOS
Compuestos por carbono, hidrógeno y oxígeno, representan la principal fuente de energía

para la célula y también son constituyentes estructurales importantes de la pared celular y de las

23
sustancias intercelulares. Se clasifican, de acuerdo al número de monómeros que contienen, en

monosacáridos, disacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. (Ejm. azúcares, almidones, quitina y
celulosa).
DETERMINACIÓN DE GLUCOSA
MATERIALES DEL LABORATORIO
• 40 mL de reactivo de Benedict • 1 mortero mediano

• 3 mL de glucosa al 1% • 1 pipeta de 3 mL descartable
• 7 tubos de ensayo 16x150mm • 1 bagueta de vidrio
• 1 gradilla
MATERIALES DEL ESTUDIANTE
• Plumón marcador por mesa de trabajo.

• 01 cuchillo pequeño
• Se solicitará los materiales respectivos previa coordinación con el docente en la
sesión de prácticas N° 2.
PROCEDIMIENTO.
TUBO CONTROL: Vertir 5mL de la solución de Benedict en un tubo de ensayo, añadir 3mL de
solución de glucosa, y colocar el tubo a Baño María durante 3 a 5 min.
MUESTRAS PROBLEMA: Numerear o rotular los tubos restantes y repitir la operación
reemplazando el reactivo (solución de glucosa) con cada uno de las muestras solicitadas por el
docente. Anotar los resultados.
Un precipitado rojizo confirma la presencia de azúcar en la solución. El azúcar presente sufre
enolización al agregárse el reactivo de Benedict en contacto con el calor. El reactivo forma
compuestos reductores de cobre que reaccionan con el hidróxido del medio, transformando el ión
cobre en óxido cuproso, evidenciandose una tonalidad rojo ladrillo. La coloración varía desde un
color verdoso (cuando la concentración de azúcar es pequeña) hasta un rojo ladrillo (cuando la
concentración de azúcar es alta).
DETERMINACIÓN DE ALMIDÓN
• 40 mL de reactivo de Lugol • 1 mortero mediano

• 3 mL de almidón al 5% • 1 placa Petri.
• 7 tubos de ensayo 16x150mm • 1 pipeta de 3 mL descartable
• 1 gradilla • 1 bagueta de vidrio

24

PROCEDIMIENTO.
TUBO CONTROL: Añadir 3 mL de solución de almidón en un tubo de ensayo y luego agregar

3mL de solución de yodo (Lugol), observar el cambio de coloración.
MUESTRAS PROBLEMA: Numerar o rotular los tubos restantes y reemplazar el almidón por cada
uno de los alimentos que trajo a la práctica. Anotar los resultados.
En una placa petri colocar un trozo de cada uno de las 5 tipos diferentes de hot
dog/chorizo/queso/jamonada y adicionar una o dos gotas de Lugol. Anotar los resultados.
La solución yodo-yodurada (lugol) puede formar compuestos de absorción con los enlaces
glicosídicos 1-4 presentes en los polisacáridos. La coloración obtenida depende de la estructura
macromolecular del polisacárido y del enlace glicosídico formado, para el caso del almidón es azul.
LÍPIDOS
Los lípidos son un grupo de moléculas caracterizadas por ser insolubles en agua y solubles en
solventes orgánicos. Tales propiedades se deben a que poseen largas cadenas hidrocarbonadas
alifáticas o anillos bencénicos, que son estructuras no polares o hidrofóbicas. Los lípidos más
comunes son los triglicéridos, los fosfolípidos, los glicolípidos y los esteroides.
DETERMINACIÓN DE LÍPIDOS
• 40 mL de reactivo de Sudan III • 1 mortero mediano

• 1 gradilla • 1 pipeta de 3 mL descartable
• 3 mL de aceite vegetal.

25
PROCEDIMIENTO.
TUBO CONTROL: Añadir unos cuantas gotas de Sudan III a un tubo de ensayo conteniendo 3 mL
de aceite con agua. Agitar suavemente y observe los resultados.
MUESTRAS PROBLEMA: Numerar o rotular los tubos restantes, reemplazar el aceite por los
productos biológicos que trajo a al práctica. Dejar reposar cada tubo de ensayo 5 min antes de tomar
las lecturas de coloración.
El colorante Sudan III se prepara en alcohol, es hidrófobo y muy soluble en lípidos, por eso al añadir
aceite a la mezcla alcohólica del colorante, éste se separa juntándose con el lípido obteniéndose
finalmente una fase superior de color rojo cereza (Sudan III + aceite) y una fase inferior transparente
(alcohol).
PROTEÍNAS
Las unidades que componen las proteínas son los aminoácidos. Un aminoácido es un ácido orgánico
en el cual el carbono unido al grupo carboxilo está unido también a un grupo amino, además, el
carbono se halla ligado a una cadena lateral que es diferente en cada tipo de aminoácido. Todas las
funciones básicas de las células dependen de proteínas específicas. Se puede decir que no existe vida
sin proteínas. Están presentes en cada componente de la célula y pueden ser estructurales o
enzimáticas.
DETERMINACIÓN DE PROTEINAS

• 40 mL de reactivo de Biuret • 1 mortero mediano
• 1 gradilla • 1 pipeta de 3 mL descartable
• 1 huevo sin cocer.

PROCEDIMIENTO.
TUBO CONTROL: Colocar 5mL de Reactivo de Biuret en un tubo de ensayo y añadir la clara de
huevo. Observar y anotar los resultados.
MUESTRAS PROBLEMA: Numere o rotule los otros tubos y reemplace la clara de huevo por los
materiales que ha traido para la práctica.
El reactivo de Biuret contiene hidróxido de Sodio al 40%; las uniones peptídicas CO-NH que se
establece entre los aminoácidos de las proteínas puede formar junto con el cobre un complejo Biuret
– cuprosódico en medio alcalino. La reacción positiva se manifiesta de un color violeta.

26
PRÁCTICA Nº 4
PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA
CITOPLASMÁTICA. (ÓSMOSIS)
Figura N°5. Estructura de la membrana celular

Fuente: http://php.med.unsw.edu.au/cellbiology/index.php?title=Cell_Membranes_and_Compartments
La membrana celular es una estructura supramolecular que está presente en todos los tipos
celulares. Está constituida básicamente por una bicapa fosfolípidica, en donde se insertan proteínas
(periféricas o integrales)(Figura N°5). Algunas células pueden presentar carbohidratos asociados a
lípidos y/o proteínas, encontrándoselas en la monocapa externa y en menor porcentaje.
La membrana celular rodea a las células dándole una individualidad, debido a que separa dos
medios acuosos: la región intracelular llamada citoplasma y la externa o región extracelular. Esta
membrana es un filtro, altamente selectivo, que controla la entrada de nutrientes y la salida de los
productos residuales, debido a esta propiedad es considerada como semipermeable.
En la actualidad se considera al modelo de “Mosaico Fluido” (Singer y Nicholson, 1972)
como la estructura básica de las membranas. Este modelo propone que los lípidos se disponen
formando una verdadera bicapa que permite desplazamientos, donde las proteínas integrales se
insertan tomando contacto con la superficie extra e intracelular. Uno de los conceptos básicos de este
modelo es que la bicapa permite desplazamientos considerables de sus componentes. Por lo tanto, la
doble capa no es estática, sino que es capaz de permitir y propiciar un movimiento a lo largo del
plano estructural de la membrana. Una de las características más relevantes de la organización
molecular de las membranas es la asimetría de todos sus componentes, lo cual significa que en ambas
mitades de la bicapa los componentes se distribuyen de diferente manera.
Las funciones de la membrana son de transporte (el intercambio de materia entre el interior de
la célula y su medio externo), reconocimiento y comunicación (gracias a moléculas situadas en la
parte externa de la membrana, que actúan como receptoras de sustancias.

27
ÓSMOSIS Y PRESIÓN OSMÓTICA
El componente principal de la célula es el agua, que actúa como solvente de solutos orgánicos
e inorgánicos.
El movimiento de moléculas de agua de una zona de mayor concentración a una zona de
menor concentración de agua a través de una membrana semipermeable (es decir, el agua se mueve
de un lugar donde hay mucha agua a un lugar donde hay poca agua). El proceso de ósmosis involucra
necesariamente la presencia de una membrana semipermeable que separa dos zonas con
concentraciones diferentes (Figura N°6).
El movimiento del agua a través de las membranas biológicas es siempre pasivo (sin gasto
de energía), la fuerza que dirige este movimiento se conoce como presión osmótica.
Figura N°6: Proceso de ósmosis

Fuentes: http://keepinapbiologyreal.wikispaces.com/Osmosis
Cuando la célula se encuentra en una solución cuya concentración de solutos es menor que
la del medio interno de la célula, se dice que la célula está en una solución hipotónica y como
consecuencia, el agua entra a la célula causando que se expanda. Si la concentración de solutos es
mayor fuera de la célula, se dice que la célula está en una solución hipertónica; provocando que la
célula pierda agua y pierda tamaño. Si las concentraciones de soluto son iguales en ambos lados de
la membrana, se dice que la célula está en una solución isotónica, donde el movimiento neto es cero.
Las células animales y vegetales funcionan óptimamente en ambientes isotónicos. Las
células vegetales cuando se les coloca en una solución hipotónica, la vacuola se llena de agua y
ocurre un fenómeno llamado turgencia, mientras que en las células animales el agua tiende a entrar,
provocando que las células se hinchen y lleguen incluso a estallar, fenómeno llamado lisis. Por otra
parte, si la célula vegetal se le coloca en una solución hipertónica, pierde agua y la célula sufre el
fenómeno denominado plasmólisis al separarse la membrana celular de la pared celular, lo cual suele
ser letal; mientras, la célula animal pasaría por un fenómeno de crenación (Figura N°7).

28
En Célula Vegetal
Fuente: http://bio1100.nicerweb.com/Locked/media/ch04/tonicp.html
En Célula Animal
Fuente: http://catalog.flatworldknowledge.com/bookhub/4309?e=averill_1.0-ch13_s05
Figura N°7: Efecto de diferentes concentraciones de solución salina en células animales y células
vegetales
COMPETENCIAS
1. Identifica la característica de permeabilidad de la membrana celular.

2. Reconoce e identificar soluciones hipotónicas, isotónicas e hipertónicas.
3. Diferencia las respuestas celulares a diferentes concentraciones salinas.
4. Deduce como la pared celular afecta el comportamiento osmótico de la célula.
5. Desarrolla habilidades en el trabajo de laboratorio

29
MATERIALES
MATERIALES DEL LABORATORIO POR MESA
• 4 Gotero • 100 mL de Solución NaCl 0.9%

• 4 lancetas de punción. • 100 mL de Solución NaCl 5% (0.3M)
• Alcohol yodado. • 3 beakers de 100 mL
• Paquete de algodón. • 4 Sacabocados
• Guantes estériles (docente) • 1 Balanza
• Caja de punzo cortantes. • 1 caja de láminas portaobjetos
• 100 mL de Solución NaCl 0.2% • 1 caja de laminillas cubreobjetos
(0.015M)
• 100 mL de Solución NaCl 0.8%
(0.15M)
MATERIALES DEL ESTUDIANTE POR MESA

• 1 papa mediana • Plumón marcador por mesa de
• 1 rama de hojas de Elodea sp trabajo.
• Hojas de afeitar
PROCEDIMIENTOS
1. Efecto de soluciones hipotónicas, hipertónicas e isotónicas en células vegetales (Elodea sp):

Colocar una hoja de Elodea sp sobre una lámina portaobjeto, colocar una gota de solución salina
al 0.2%, rotular la lámina con el marcador y cubrir la muestra con una laminilla. Observar al
microscopio a 40X, 100X y 400X. Esquematizar sus observaciones a 400X. Repetir el
procedimiento con las soluciones al 0.8 % y 5%. Esquematizar sus observaciones.
2. Efecto de soluciones hipotónicas, hipertónicas e isotónicas en células animales (glóbulos

rojos). Limpiar y desinfectar con alcohol la pulpa del dedo anular. Punzar con la lanceta estéril
y colocar en cada lámina portaobjeto una gota de sangre. A cada lámina agregar 1 gota de
solución de NaCl: a la primera NaCl 0.9%; a la segunda, NaCl 0.2% y a la tercera, NaCl 5%.
Marcar cada uno de los preparados. Observar al microscopio y esquematizar a 400X.
3. Osmolaridad en las células vegetales: Se observará como los diferentes tipos de soluciones
afectan el equilibrio y el funcionamiento de las células vegetales. La osmolaridad se expresa
como moles de soluto por litro de solución; mientras más alta es la osmolaridad, mayor es la
concentración de soluto.
Preparar 3 beakers de 40 ml rotulados para cada solución. Usar un cortador cilíndrico para sacar
1 cilindro de la papa de 5cm de largo. Cortar de cada cilindro 9 rueditas uniformes de
aproximadamente 5mm de grosor, separarlas en tres grupos y pesar cada grupo por separado y
tocar la textura inicial. Anotar los datos. Transferir a los beakers rotulados con las soluciones de
NaCl 0.015, 0.15 y 0.30M y anotar el tiempo en que se inicia Incubar por 30 minutos a
temperatura ambiente. Retirar cada grupo de rueditas de las soluciones en que están sumergidas
a una hoja de papel secante. Anotar si hubo cambios en textura y pesarlas nuevamente. Analizar
y discutir los resultados.

30
PRÁCTICA Nº 5
PERMEABILIDAD DEL TEJIDO MEMBRANA

CITOPLASMÁTICA
(DIFUSIÓN Y DIÁLISIS)
DIFUSIÓN
Es el movimiento de moléculas de una región de alta concentración a otra de menor concentración
producido por la energía cinética de las moléculas (Figura N°8). Todas las moléculas de gases y
líquidos tienden a moverse o difundirse en todas direcciones hasta que se encuentran distribuidas
regularmente por todo el espacio disponible.
La difusión no requiere gasto de energía por parte de la célula y por lo tanto es un movimiento pasivo.
La velocidad de difusión depende del tamaño de las moléculas y de la temperatura, la causa de la
difusión es el movimiento térmico de las moléculas. Con el crecimiento de la temperatura de la
solución, la velocidad de difusión, por lo común, aumenta.
Figura N°8. Difusión de moléculas.

Fuente: http://www.tutorvista.com/content/biology/biology-iii/biomembranes/physical-processes.php
Fuente: http://en.wikipedia.org/wiki/Diffusion
En la difusión, las moléculas tienden a esparcirse y separarse lentamente con el tiempo. Las
moléculas se mueven a favor del gradiente de concentración.

31
DIÁLISIS
Es la difusión de moléculas de bajo peso molecular a través de una membrana semipermeable, éstas
se desplazan desde la solución más concentrada a la más diluida. (Figura N°9). Es el fundamento de
la hemodiálisis que intenta sustituir la filtración renal deteriorada.
Figura N°9. Diálisis

Fuentes: The purification of proteins is an essential first step in understanding their function
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=stryer&part=A438
En el proceso de diálisis, las moléculas de bajo peso molecular son capaces de atravesar la membrana
semipermeable, moviéndose a favor del gradiente de concentración.
COMPETENCIAS
1. Identifica la característica de permeabilidad de la membrana celular.
2. Describe los mecanismos de difusión y diálisis a nivel molecular.
3. Enumera factores que afectan la velocidad de difusión.
4. Desarrolla habilidades en el trabajo de laboratorio
MATERIALES
• 40 mL de agua helada • 40 mL de solución de almidón al 1%

• 40 mL de agua caliente • Agua destilada
• 100 mL de Reactivo de Biuret • 3 Beakers 100 mL
• 50 mL de Colorante Azul de Metileno • 4 Beakers 500 mL
• 100 mL de Nitrato de plata • 8 tubos de ensayo 16x150mm
• 1 L de Solución de Lugol • 1 embudo
• 40 mL de solución de Cloruro de
Sodio al 30%

• 20 cm de pabilo • 4 hojas de afeitar
• 2 Palitos de anticucho • 2 buches limpios de pollo
• 1 huevo por todo el laboratorio (para
preparar solución de albumina)

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PROCEDIMIENTO.
1. Difusión (factor temperatura): En este experimento, se estudiará el movimiento browniano de

las moléculas y el efecto de la temperatura. Colocar en un beaker, 40 mL de agua a temperatura
ambiente; en otro, 40 mL de agua helada y un tercero, 40 mL de agua caliente. Añadir
simultáneamente a cada uno de ellos una gota de colorante azul de metileno (sin mover
demasiado el agua) y observar el comportamiento de la gota en el agua. Anotar sus
observaciones.
2. Diálisis #1 (de afuera hacia adentro): Atar con pabilo un extremo del buche y por el otro
extremo añadir, usando un embudo, 40 mL de solución de almidón al 1%. Cerrar el orificio del
buche que quedó abierto con pabilo y con ayuda de un palito de anticucho, colocar en un beaker
que contenga 150 mL de agua con varias gotas de solución de Lugol hasta tener un color dorado.
Dejar actuar durante 30 minutos. Retirar del beaker y anotar los cambios de color dentro del
buche.
3. Diálisis #2 (de adentro hacia afuera): Atar con pabilo un extremo del buche, por el otro extremo
añadir, usando un embudo, 40 mL de solución de Cloruro de Sodio al 30% y 40 ml de solución
de albúmina al 0.5%. Cerrar con pabilo el extremo que quedó abierto, mezclar y con ayuda del
palito de madera, colocar en un beaker que contenga 150 mL de agua destilada. Dejar actuar por
30 minutos. Retirar del beaker y proceder a verter 6 mL de la mezcla de dentro del buche a un
tubo de ensayo y adicionar 4 gotas de reactivo de Biuret. Repetir el procedimiento con la solución
del beaker. Anotar los cambios de color en cada uno de los tubos. Además, a la solución del
beaker añadir cinco gotas de solución de nitrato de plata (AgNO3) y anotar los cambios de color.

33
PRÁCTICA Nº 6
LA CÉLULA EUCARIÓTICA Y PROCARIOTA:

RECONOCIMIENTO DE ESTRUCTURAS
La Teoría Celular establece que todos los seres vivos están constituidos por células, que todos los
seres vivos son la expresión de cada una de las células que lo constituyen, que una célula sólo
proviene de una ya existente y que la célula es la unidad básica de todo ser vivo. Se han identificado
hasta el momento dos tipos celulares: la célula procariota (que se caracteriza principalmente por que
el material genético constituido por ADN desnudo y que se encuentra libre en el citoplasma celular),
y la célula eucariota (que se caracteriza porque el material genético formado de ADN asociado a
proteínas se encuentra separado del citoplasma por una membrana denominada membrana nuclear),
pero ambos tipos celulares comparten estructuras en común: la membrana celular, el citosol o
hialoplasma, el citoesqueleto, los ribosomas y el material genético.
La célula eucariota presenta mayor tamaño y organización que la célula procariota y en su citoplasma
se encuentran estructuras celulares que van a cumplir diversas funciones que se conocen con el
nombre de organelas celulares, inclusiones citoplasmáticas, sustancias ergásticas y/u otras
estructuras.
Las células procariotas son por lo general muy pequeñas, con una estructura interna relativamente
muy simple. Son cosmopolitas. El citoplasma de la mayor parte de procariotas es en apariencia
relativamente homogéneo. En general, el ADN está enrollado, adherido a la membrana plasmática y
concentrada en una región de la célula, llamada nucleoide. Los procariotas incluyen los reinos
Monera (simple bacterias) y Archaea. Carecen de las características "organelas" envueltas en
membrana subcelular de los eucariotas, pero pueden contener sistemas de membrana dentro de la
pared celular. Las células procarióticas pueden tener pigmentos fotosintéticos tales como los
encontrados en las cianobacterias ("bacterias azules"). Algunas células procariotas tienen flagelos
externos en forma de látigo para la locomoción o pili como pelos para adherirse. Las células
procariotas tienen múltiples formas: cocos (redonda), bacilos (bastones), y espiralada o espiroquetas
(células helicoidales) (Figura N°10).
Figura N°10. Formas de las células procariotas

Fuente: https://www.monografias.com/trabajos61/bacterias/bacterias2.shtml
Casi todas las células procariotas están rodeadas por una pared relativamente dura llamada
peptidoglucano. La pared celular, es una red polimérica compleja constituida por aminoácidos,
aminoazúcares, azúcares y lípidos, ubicada debajo de elementos extracelulares como la cápsula y

34
cerca de una membrana que colinda con el citoplasma. De acuerdo a la constitución de la pared
celular las bacterias pueden clasificarse de acuerdo a su reacción al Gram (Gram positivas + y Gram
negativas) (Figura N°11).
Figura N°11. Pared Gram-negativa y Gram-positiva

Fuente: http://www.escuelapedia.com/identificacion-de-bacterias-gram-positivas-y-gran-negativas/
En la célula eucariota se pueden distinguir dos tipos de células, la célula eucariota animal y
la célula eucariota vegetal. Estas células tienen estructuras en común como: la membrana celular,
citosol, citoesqueleto, retículo endoplasmático, aparato de Golgi, mitocondrias y núcleo; pero
también tienen estructuras propias que las caracterizan, por ejemplo: la célula eucariota animal
presenta centriolos y estructuras locomotoras como los cilios y flagelos, mientras que las células
vegetales se caracterizan por la presencia de una pared celular compuesta principalmente
carbohidratos y plastidios que pueden tener o no pigmentos.
Todas las organelas celulares trabajan coordinadamente para el funcionamiento general y

preciso de la célula, muchas veces resulta difícil entender este proceso de forma dinámica y con todas
las estructuras celulares trabajando a la vez y en estrecha colaboración logrando que la célula se
convierta en una máquina biológica perfecta que cumple sus funciones vitales de forma precisa y
constante, convirtiéndose en la pieza base de los organismos multicelulares.
La membrana celular delimita el territorio celular y como se ha observado en prácticas

anteriores es la puerta de entrada y salida celular, la pared celular presente en las células vegetales es
una estructura de sostén y protección. El citoplasma celular está formado por el hialoplasma,
citoesqueleto y organelas celulares. El hialoplasma es un medio acuoso, con un 85% de agua en el
cual esta disuelta gran cantidad de moléculas formando una solución coloidal; prótidos (aminoácidos,
enzimas, proteínas estructurales), lípidos, glúcidos (polisacáridos, metabolitos), ácidos nucleicos
(nucleótidos, nucleósidos, ADN, ARN, ARNt, ARNr) sales e iones.
El movimiento ciliar está adaptado al medio líquido y es cumplido por pequeños apéndices
especialmente diferenciados. Se trata de filamentos contráctiles variables en número y tamaño, que
reciben el nombre de flagelos, si son escasos y largos y cilios, si son cortos y numerosos. En los
protozoarios, hay centenares o miles de pequeños cilios cuyo movimiento permite al organismo

35
desplazarse con rapidez en el medio líquido. En algunos protozoarios especiales los cilios se fusionan
y forman apéndices cónicos más gruesos denominados cirros.
En Protozoarios, toda la clase flagelados se caracteriza por la presencia de flagelos. Entre los
metazoarios, solo los espermatozoides tienen la propiedad de desplazarse como células aisladas por
medio de esos apéndices.
Las mitocondrias son organelas proveedoras de energía y los plastidios con pigmento cumplen la
función de dar color a las estructuras vegetales además de la fotosíntesis (cloroplastos), mientras que
los plastidios sin pigmento llamados también leucoplastos guardan los productos obtenidos durante
la fotosíntesis.
COMPETENCIAS
1. Diferencia una célula procariótica de una célula eucariótica.
2. Identifica y diferenciar las células eucariotas animales y vegetales.
MATERIALES
• Microscopio de campo claro • 100 mL de solución de rojo neutro

• 1 Goteros • 5 mL de aceite de inmersión
• 1 caja de láminas portaobjetos • Papel lente
• 1 caja de laminillas cubreobjetos • 100 mL de Lugol y/o Rojo Neutro
• 1 hojas de afeitar • 2 láminas fijas de célula procariota
• 1 Lámina fijada de espermatozoides (Gram + y Gram -)
• 100 mL de colorante verde de Janus • 4 pinzas de punta fina
• 50 mL de agua del pantano (agua con sedimento)

• 1 cebolla
• 1 rama de Elodea sp.
• 1 Plumón marcador por mesa de trabajo
PROCEDIMIENTO
1. OBSERVACIÓN CÉLULAS PROCARIOTAS (Tinción GRAM).
a) Enfocar a 1000X las láminas fijadas de células procariotas que están coloreadas mediante
la Tinción Gram.
b) Observar la forma y tamaño de las células. Esquematizar.

36
* En la tinción Gram, aquellas células procariotas que se observar de color azul-violeta son
denominadas Gram positivo y las que se observan de color rosa, Gram negativo.
Coco
Gram+
Bacilo Gram-
1000 X
Fuente: Laboratorio de Biología. Universidad Científica del Sur
2. OBSERVACIÓN DE ESTRUCTURAS DE CÉLULAS VEGETALES
• Núcleo, Nucléolo y pared celular: En una lámina portaobjeto colocar una gota de lugol sobre
ella un fragmento de catáfilo de cebolla extraído con una pinza. El fragmento tomado debe ser
transparente y debe colocarse completamente extendido sobre la lámina. Poner una lámina
cubreobjetos y sin aplicar presión eliminar cuidadosamente el exceso de líquido con ayuda de un
papel secante. Observar al microscopio y esquematizar sus observaciones a 100X y 400X.
Nucléolo
Pared celular
Núcleo
400 X
Célula de catafilo de cebolla Allium cepa

400 X

37
• Observación de plastidios y ciclosis: Colocar una hoja de Elodea sp. en una lámina, añadir una
gota de agua y observar al microscopio. Esquematizar a 400X.
400 XX
400
Cloroplastos (clorofila) en Elodea sp.
3. OBSERVACIÓN DE ESTRUCTURAS DE CÉLULAS ANIMALES:
• Núcleo, citoplasma y mitocondrias: Con un hisopo estéril hacer un raspado de epitelio bucal y
estirar la muestra en una lámina portaobjeto y dejar secar a medio ambiente durante tres minutos.
Cubra la muestra con Verde de Janus y deja reposar cinco minutos, eliminar el exceso de
colorante. Observar el citoplasma claro, limitado por la membrana, el núcleo más teñido y las
mitocondrias pueden ser observadas de color azul-verdoso. Esta coloración se debe al sistema
citocromo-oxidasa, en cambio en el citoplasma el colorante es reducido a su leucobase.
Esquematizar a 400X.
Mitocondria
Núcleo
Citoplasma
1000 X
CÉLULAS DE EPITELIO BUCAL

38
• Cilios y flagelos:
Observación de cilios en Protozoarios: Colocar una gota del cultivo de Protozoarios sobre una
lámina portaobjeto y cúbrala con una laminilla. Observar el movimiento de los cilios.
Cilios
1000 X
CILIADO Loxophyllum sp.
• Observación de flagelos: Colocar una lámina fijada de espermatozoides en el microscopio y

enfocar a 1000x. Esquematizar.
Flagelo
1000 X
ESPERMATOZOIDE HUMANO

39
PRÁCTICA Nº 7
OBTENCIÓN Y ANÁLISIS DE FRACCIONES

CELULARES
Figura N°12. Fracciónamiento celular

Fuente: https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?bookid=2214&sectionid=171769199
Las diferentes metodologías utilizadas para el estudio de la composición celular, entre ellas las
técnicas bioquímicas, fisiológicas y citológicas. Permiten analizar en gran medida la anatomía y
localización de las estructuras y organelas celulares. Sin embargo, si se desea profundizar en la
funcionabilidad de cada componente celular se deben realizar ensayos bioquímicos y fisiológicos.
Generalmente el primer paso es obtener fracciones enriquecidas con las distintas estructuras u
organelas.
Una de las técnicas más utilizadas para obtener dichas fracciones es el Fraccionamiento
Celular (Figura N°12), el cual es un conjunto de procedimientos que tienen como principal objetivo
obtener fracciones puras o enriquecidas de un determinado componente celular, ya sea éste una

40
organela como el núcleo, mitocondrias, lisosomas, peroxisomas, etc. Y dependiendo del estudio que
se desee elaborar la fracción celular también puede estar compuesta por restos de membrana celular
o por complejos multiproteicos como el citoesqueleto de actina, microtúbulos y poros nucleares.
Todo proceso de Fraccionamiento Celular tiene tres etapas:
HOMOGENIZADO
Ruptura de las células o tejidos para obtener un lisado celular (o tisular), de tal modo que se
liberen sus componentes, en particular sus organelas, sin que estos sufran mayores daños y que se
encuentren en condiciones adecuadas para su purificación. Para el caso de la ruptura celular, también
existen diversas alternativas como es; el método mecánico, donde se hace uso de instrumentos como
el mortero, pinzas, homogeneizadores y ultrasonido que permiten la disgregación y lisis celular. Pero
si se desea partir de un cultivo celular, no es necesario separar las células y se pasa directamente a la
lisis celular. En el caso del método químico, el uso de detergentes, enzimas y el shock osmótico.
También cumplen con la función de romper y lisar la membrana celular.
FILTRADO
Proceso que consiste en la separación de componentes no deseados presentes en la

suspensión celular mediante un medio poroso, que retiene sólidos y permite el pasaje del líquido.
Dependiendo de la naturaleza del contaminante, esto puede ser tan simple como verter el
homogeneizado a través de una gasa y recoger el filtrado en el otro lado.
CENTRIFUGADO
Una vez que se tienen todos los componentes celulares libres, es necesario separarlos en
fracciones, es decir, realizar su fraccionamiento y el método más utilizado para este fin es la
centrifugación de gradiente de densidad o también el de centrifugación diferencial; cuando los
diferentes componentes celulares se encuentran suspendidos en un líquido, tienden a sedimentar
hacia el fondo por el efecto de la gravedad. Para acelerar este proceso, se puede colocar a un tubo
conteniendo esta suspensión en un rotor giratorio, de forma de someter a las partículas a una fuerza
centrífuga.
COMPETENCIAS
1. Identifica las fracciones celulares a partir de hígado de pollo.
2. Conoce la técnica de fraccionamiento celular para el estudio de las organelas celulares.
MATERIALES:
• 1 Mortero • 2 beakers de 100 mL

• 1 Gasa • 100 mL de Verde de Janus
• 16 microtubos de 1.5mL • 1 Cubeta con hielo

41
• 1 beaker de 50 mL • 4 lunas de reloj
• 100 mL de Buffer Tris 10 mM pH 7,5 • Balanza de precisión.
• 1,5 mL de Colorante DAPI • Microscopio de campo
• 1,5 mL de Mytotracker claro y de fluorescencia.
• 1 caja de láminas portaobjetos
• 1 caja de laminillas cubreobjetos
• Entre 5 a 10 gr. de hígado de pollo
PROCEDIMIENTO
1. Pesar el hígado de pollo en la luna de reloj.

2. Colocar el hígado en el mortero, asegúrese de moler bien y de extraer los ligamentos
conjuntamente con la grasa. Realice una pasta uniforme del hígado y seguidamente adicione
20 ml de la solución Tris 10 mM pH 7,5. Con una gasa filtre en un beaker limpio.
3. Transvasar 250 µl del extracto a 2 tubos eppendorf y agregue 500 µl de la solución de buffer
Tris 10 mM pH 7,5. Rotulándose con la palabra núcleo. Centrifugue a 3000 rpm durante 3
minutos. (El pellet que ha quedado se denomina fracción nuclear y resuspender en 200 µl de
Tris 10 mM pH 7,5).
4. Coloque el sobrenadante del proceso anterior a 2 ependorf nuevos y márquelos con la palabra
mitocondrias. Centrifugar a 10000 rpm durante 8 minutos. (El pellet que ha quedado se
denomina fracción mitocondrial, eliminar el sobrenadante y resuspender el pellet en 200 µl
de buffer Tris 10 mM pH 7,5).
5. Ahora observaremos la fracción nuclear. Para ello colocamos 10 µl del resuspendido del
tubo marcado como núcleo, en una lámina porta objeto y le adicionamos una gota de Azul
de metileno y cubrir con una lámina cubreobjeto. Hacer las observaciones en el microscopio
de campo claro y realice sus esquemas. En otra lámina adicionar 10 µl del colorante DAPI y
cubrir con una lámina cubreobjeto., dejar reposar por 2 min. Observe en el microscopio de
fluorescencia y realice sus esquemas.
6. Observación de mitocondrias. Tomar el tubo marcado como mitocondrias y en un ependorf
de 0,5 ml adicione 5 µl del resuspendido y 5 µl del colorante mytotracker dejándolo incubar
por 10 min a 37°C. En otro eppendor de 0,5 µl realice la misma operación y adicione 5 µl
del colorante verde de Janus. Realice un frotis y observe al microscopio de fluorescencia y
de campo claro. Esquematizar a 400X

42
PRACTICA N° 8
METABOLISMO CELULAR: PROCESO DE

RESPIRACIÓN CELULAR
Posteriormente a los mecanismos de nutrición y digestión celular, las células usan las
moléculas producto de estos procesos como fuente para la elaboración de energía que es necesaria
para la actividad celular, para lo cual pasan procesos como la desaminación de los aminoácidos, la
beta-oxidación de los ácidos grasos y el glucólisis que tienen como objetivo la formación de ácido
pirúvico y otras moléculas necesarias para los procesos de respiración celular. El ácido pirúvico
obtenido de estos procesos, principalmente de la glucólisis, puede dependiendo del individuo y del
medio en el cual se encuentra ir a dos rutas metabólicas:
La ruta aeróbica denominada también catabolismo aerobio degradándose completamente

hasta CO2 y agua, este mecanismo se realiza en las mitocondrias que actúan como centrales
energéticas de la célula y sintetizan ATP producto de esta degradación.
La otra ruta mencionada es el proceso anaeróbico llamada también catabolismo anaeróbico,

que en ausencia de oxígeno transforma el ácido pirúvico en otras moléculas degradándose
parcialmente, esta ruta tiene dos procesos más estudiados: el catabolismo láctico que por acción de
la lactato deshidrogenasa se transforma en ácido láctico y la vía alcohólica donde el ácido pirúvico
se descarboxila formando un acetaldehído y este es reducido por acción del NADH a alcohol etílico.
Este último tipo de fermentación la realizan algunas especies de levaduras como la

Saccharomyces cerevisae que son utilizadas en la industria de la panificación y en la industria
cervecera, estas levaduras tienen la capacidad de poder realizar los dos tipos de respiración
dependiendo de la abundancia de nutrientes en el medio, cuando se encuentran en un medio rico en
carbohidratos escogen la ruta anaeróbica.
En la presente práctica, utilizando un respirómetro artesanal, se observará la acción de

diferentes carbohidratos como facilitadores en el proceso de respiración celular anaeróbica y la
acción de un antimetabolito que interferirá en el proceso de respiración celular inhibiendo una de las
etapas de la glucólisis.
La acción del inhibidor sobre la respiración celular: La enzima enolasa cataliza la reacción que
convierte el 2 fosfoglicerato (2PG) en fosfoenolpiruvato (PEP), la enolasa para reaccionar requiere
de la presencia de iones de magnesio que mantiene su estructura y de iones manganeso como
cofactor. En el siguiente experimento se usará el flúor para precipitar los iones magnesio y así inhibir
la reacción. Esta inhibición se puede detectar como una disminución en la velocidad del proceso
respiratorio, (disminución en la producción del CO2) en las células de levadura. Debido a que los
fluoruros son extremadamente venenosos para los humanos, maneje las soluciones con sumo cuidado
en este ejercicio y asegúrese de lavarse las manos tan pronto como termine.

43
COMPETENCIAS
1. Comprende los procesos de respiración celular.
MATERIALES:

• 9 tubos de ensayo 13x100mm • 3 mL de NaF 0.05 molar
• 9 tubos de ensayo 16x150mm • 3 mL de NaF 0.10 molar
• 1 L Agua destilada • 8 Pipetas de plástico
• 3 mL de Solución de glucosa al 5% • 4 Gradillas
• 3 mL de Solución de fructosa al 5% • 1 placa petri grande.
• 3 mL de Solución de sacarosa al 5% • 4 Varillas de vidrio (baguetas)
• 3 mL de Solución de almidón al 5% • 1 Hervidor
• 3 mL de NaF 0.01 molar

• Paquete de 100 gr de levaduras seca (paquete sellado al vacío) (debe entregarse un día
antes de la sesión de práctica).
• 1 regla milimetrada
PROCEDIMIENTO
Fabricación de un Respirómetro artesanal

Para construir un respirómetro simple, siga las siguientes instrucciones: llene con agua uno de los
pequeños tubos de ensayo (en el experimento se usa la suspensión de levaduras y las otras sustancias
en lugar de agua). Invierta el tubo de ensayo sobre el tubo de base plana. Hágalo rápidamente, de tal
manera que se derrame la menor cantidad posible de líquido del tubo de ensayo. Si hay burbuja de
aire, se mide con la regla graduada en milímetros; si éste contiene células de levadura respirando, el
dióxido de carbono tenderá a acumularse desplazando así más líquido. Después de un rato, el
volumen de la cámara de aire constituye una medida de la cantidad de respiración que haya tenido
lugar.
Preparación de las muestras experimentales
1. Preparación de muestras utilizando diferentes carbohidratos
Rotular los tubos de ensayo numerándolos del 1 al 5 por el lado curvo, manténgalos boca abajo
mientras escribe el número. Llenar los tubos como se indica en la siguiente tabla:
REACTIVO 1 2 3 4 5
Levadura 3 mL 3mL 3 mL 3 mL 3mL
Agua destilada 5 mL
Glucosa 5 mL
Fructosa 5 mL
Almidón 5 mL
Sacarosa 5 mL

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2. Preparación de muestras utilizando antimetabolitos
Rotular los tubos de ensayo numerándolos del 1 al 5 por el lado curvo, manténgalos boca abajo
mientras escribe el número. Llenar los tubos como se indica en la siguiente tabla:
REACTIVO 1 2 3 4 5
Levadura 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL
Agua destilada 5 mL
Glucosa 5 mL 2 mL 2 mL 2 mL
NaF (0,01 M) 3mL
NaF (0,05 M) 3 mL
NaF (0,10 M) 3 mL
*Llenar el tubo hasta el borde

Invertir cada tubo de ensayo dentro de un tubo de base plana para armar el respirómetro. Medir
la cámara de aire formada y anotar sus resultados en la tabla de esta página como “lectura
inicial”. Colocar la base de los tubos dentro de la placa Petri y verter agua caliente y dejarlos
por 30 min. Volver a medir la cámara de gas de cada tubo y anotar los resultados bajo la columna
“lectura final” en la misma tabla.
RESULTADOS
TABLA DE RESULTADOS MUESTRA 1
Longitud Inicial Longitud Final (L. Final – L. Inicial)

TUBO (mm) (mm) (Producción de CO2)
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
TABLA DE RESULTADOS MUESTRA 2
Longitud Longitud Final (L. Final – L. Inicial

TUBO Inicial (mm) (mm) (Producción de CO2)
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5

45
PRÁCTICA Nº 9
EXTRACCIÓN DE ADN
Figura N°13. Extracción de ADN

Fuente: http://bioneer.com.au/Products/DNA-RNA-Preparation-Kits/Single-Spin-Column-type-Nucleic-Acid-Extraction-Ki/Genomic-
DNA-Extraction-Kits-(1)/Genomic-DNA-Extraction-Kits.aspx
La biología molecular es una de las herramientas más útiles de las que se vale hoy en día la
ciencia y la medicina moderna, la extracción de ADN (Figura N°13) es un tipo de metodología que
mediante la manipulación del material genético ha permitido, entre otras cosas, el desarrollo de la
clonación de secuencias de ADN para el estudio de mutaciones que estén involucradas en las
diferentes patologías humanas, mapeo y secuenciación de genes con fines terapéuticos. Con este
conocimiento se logra el desarrollo de la terapia genética, el análisis de diversidad molecular de
especies, análisis forenses y de paternidad.
COMPETENCIAS
1. Extrae, conoce y analiza la técnica de aislamiento de ADN a partir de muestras biológicas.

46
MATERIALES POR MESA O POR GRUPO

Extracción del ADN • Micropipetas de 10 – 100, 100 - 1000
µL.
• Lanceta de punción. • 1 caja de puntas de 10 -100 µl y de
• Alcohol yodado. 100 - 1000 µL (esterilizadas)
• Paquete de algodón. • 16 microtubos de 1.5 mL
• Guantes estériles (docente) (esterilizados)
• Caja de punzo cortantes. • Microcentrífuga 16000 rpm
• 1 Kit de extracción de ADN • Vortex
• Frasco de 100 mL de Alcohol 96 – • Termómetro
100%
PROCEDIMIENTO
Extracción de ADN usando kit de extracción Purelink-genomic (Invitrogen)
Extracción de ADN de sangre Total.

1. A un tubo ependorff, adicionar una muestra de 20 µL de sangre fresca o congelada.
2. Transferir 20 µL de células o sangre a un tubo que contiene 20 µL proteinasa K.
3. Añadir 20 µL de RNasa a la muestra. Someter a vórtex por 15 segundos e incubar a temperatura
ambiente durante 2 min.
4. Añadir 100 µL de Buffer lisis y homogenizar utilizando vórtex por 15 segundos.
5. Incubar a 55 ° C durante 10 min.
6. Añadir 100 µL de etanol 96-100%. Mezclar en el vórtex por 15 segundos.
7. Incubar la lisis por 5 min a temperatura ambiente.
Proceso de purificación:
1. Colocar la lisis (260 µL) en la columna de extracción.
2. Centrifugar la columna a 8500 rpm por 1 min, descartar el filtrado por la columna y colocar la
columna en un nuevo tubo de lavado.
3. Lavar la columna con 200uL de buffer de lavado, centrifugar a 8500 rpm por 1 min y eliminar el
filtrado.
4. Colocar la columna en un nuevo tubo de lavado, adicionar 200 uL de buffer de lavado y
centrifugar la columna a velocidad máxima por 3 min para poder filtrar cualquier residuo del
buffer de lavado.
5. Colocar la columna en un nuevo tubo de recolección (1.5mL).
6. Añadir 100 µL de Buffer de elución a la columna.
7. Incubar a temperatura ambiente durante 1 min. Centrifugar la columna a velocidad máxima
durante 1 min a temperatura ambiente.
8. Incubar a temperatura ambiente por 1 min. Centrifugar a velocidad máxima por 1 min (opcional)
9. El tubo contiene ADN genómico purificado.
10. Almacenar el ADN purificado a -80ºC para otras aplicaciones.

47
EXTRACCIÓN DE ADN (continuación)
Cuantificación de ácidos nucleicos
Para la cuantificación de ácidos nucleicos existen diferentes metodologías, como es el caso

de la espectrofotometría que nos permite medir el ADN en microgramos, y la espectrofotometría nos
da una mayor sensibilidad que nos permite medir pequeñas cantidades de ADN expresando los
resultados en nanogramos.
MATERIALES POR GRUPO

Extracción del ADN
• Espectrofotómetro Lambda • Caja de puntas de 0.5 -10 µL

(cuantificación de ADN) (estériles)
• Micropipetas de 0.5 – 10 µL • 20 tubos de PCR (250 µL)
• 1 Vortex
PROCEDIMIENTO
1. Seleccionar el tipo de muestra a medir en el espectrofotómetro Lambda.

2. Colocar 2 µL de la muestra de ADN extraída en el sensor del espectrofotómetro.
3. Anotar los resultados y comparar los resultados.

48
PRÁCTICA Nº 10
FUNDAMENTOS DE LA REACCIÓN EN CADENA

DE LA POLIMERASA (PCR)
La reacción en cadena de la polimerasa, cuyas siglas en ingles son PCR (Polymerase Chain
Reaction) es una técnica muy usada en el campo de la biología molecular, la cual fue desarrollada
por Kary Mullis en 1986. El objetivo de esta técnica es obtener un gran número de copias de un
fragmento de ADN particular mediante una amplificación in vitro. Es una técnica de amplificación
selectiva, la cual se basa en la capacidad de la enzima ADN polimerasa en fabricar una cadena de
ADN complementaria a una ya existente.
Para realizar la técnica de PCR se necesita de:

• Desoxinucleotidostrifosfato (dNTPs), mezcla de los cuatro desoxinucleotidos (dATP, dCTP,
dTTP y dGTP) que son el sustrato para la síntesis del nuevo ADN.
• Cebadores (primers), oligonucleótidos complementarios a una de las hebras del ADN,
delimitando la zona de ADN que se quiere amplificar.
• ADN polimerasa, enzima termoestable (Taq polimerasa) que se encarga de la síntesis de la
cadena de ADN.
• ADN molde, molécula que contiene la región de ADN que se va a amplificar.
• Solución tampón o buffer, solución que permite el adecuado funcionamiento de la ADN
polimerasa.
• Iones divalente (Mg++)
Cada ciclo de PCR consiste en tres etapas: la primera, donde el ADN molde es incubado a
altas temperaturas para desnaturalizarlo y de esta manera permitir el fácil acceso de los cebadores al
ADN molde; la segunda o etapa de alineamiento, donde los cebadores hibridan con sus secuencias
complementarias del ADN molde y, por último, la etapa de elongación en la cual el ADN polimerasa
sintetiza de los fragmentos de ADN a partir de los cebadores que ya se han alienado (Figura N°14).
La detección del producto de una PCR se realiza normalmente mediante una corrida electroforética.
Es por eso que el PCR es una herramienta que se ha desarrollado para ofrecer una alternativa
para el estudio del ADN. Debido al impacto dentro de la comunidad científica porque ofrece las
siguientes cualidades.
• Sensibilidad: hace referencia a la mínima cantidad de ADN que es necesario para que se
produzca la amplificación.
• Especificidad: solo se obtiene un solo producto amplificado.
• Eficiencia: amplificación máxima que se puede obtener en un número determinado de ciclos.
• Fidelidad: se refiere a los errores que comete la ADN polimerasa durante la amplificación.

49
Figura N°14. Proceso de PCR

Fuente: http://apuntesbiotecnologiageneral.blogspot.com/
Dentro de las aplicaciones de esta técnica se pueden mencionar el diagnóstico de

enfermedades infecciosas, en el diagnóstico prenatal de enfermedades genéticas, diagnóstico de
cáncer, en técnicas de clonaje y secuenciación de ADN genómico, los análisis forenses,
identificación de sospechosos con pequeñas muestras de sangre, semen o pelo, identificación de
padres en litigios de paternidad, microbiología ambiental,
COMPETENCIAS
Conoce los fundamentos en lo que se basa la técnica de PCR. Conoce los fundamentos y la
importancia del uso de la técnica de PCR para el diagnóstico de enfermedades en los seres
humanos. Explica cómo se genera un fragmento especifico de ADN genómico humano
utilizando la técnica de PCR.
MATERIALES
• 4 Muestras de ADN
• Micropipetas de 10 – 100 µL • 1 kit - Mix de PCR (taq polimerasa,
• 50 puntas de 10 -100 µL y de dNTPs, primer, Mg, agua) / muestras
100 -1 000 µl alicotadas para cada mesa de trabajo
• 1 Microcentrífuga16000 rpm • 1 kit (Primers).
• 1 Termociclador
• 1.5 mL de Agua estéril

50
PROCEDIMIENTO
1. En un tubo de PCR colocar 25 µL de solución de reacción final (mix de PCR):
Componente Concentración a la que se Concentración final en la Volumen a

conserva reacción añadir (μl)
Agua ------ ------- 12
Tampón 10X 1X 7,5
MgCl2 25 mM 1 mM 1
Primers R 10 μM 0,4 μM 1
Primers F 10 μM 0,4 μM 1
dNTPS 10 mM 0,4 mM 1
Taq 5 unidades/μl 1 unidad/25 μl 0,5
ADN ------ ------ 1
Concentración final de la reacción 25
2. Centrifugar brevemente para mezclar bien los componentes.

3. Colocar los eppendor con la solución de mix de PCR en el termociclador, el cual ya debe tener
programado las condiciones de amplificación.
Desnaturalización Hibridación Elongación N° de ciclos Mantener a

94°C por 1 min 52°C por 1 min 72°C 30 seg 30 4°C
4. Finalizada el proceso de amplificación, retirar los ependorf del termociclador y guardar las muestras a
4°C si el amplificado se llegara a utilizar en un lapso de poco tiempo. Si no fuese el caso mantener a –
20°C.
Protocolo de PCR

51
PRÁCTICA Nº 11
FUNDAMENTOS DE ELECTROFORESIS
La electroforesis es una técnica va a permitir la separación de moléculas como proteínas y

ácidos nucleicos a través una matriz (gel), la cual va a funcionar como un filtro o matriz molecular
permitiendo separar moléculas en un campo eléctrico, de acuerdo al tamaño o peso molecular, la
carga neta y la estructura tridimensional que poseen. Por lo cual, moléculas de ADN de tamaño
diferente van a emigrar de forma distinta en un gel de electroforesis; siendo la distancia recorrida por
cada fragmento de ADN inversamente proporcional al logaritmo de su peso molecular. Los
materiales usados como matriz o soporte son los polímeros como la agarosa, la poliacrilamida, papel
(celulosa), almidón y acetato de celulosa.
Los ácidos nucleicos (ADN, ARN) están cargados negativamente debido a los grupos
fosfatos, por lo cual cuando se aplica una corriente eléctrica a una matriz de gel que contiene las
muestras de ácidos nucleicos que se encuentra en una solución a pH neutro o básico, entonces los
fragmentos de ácidos nucleicos migrarán hacia el polo positivo o ánodo.
La separación de los fragmentos de ADN por electroforesis se regula a través de la
concentración de agarosa (o poliacrilamida) en el gel y el voltaje aplicado durante la corrida
electroforética; por lo tanto, los fragmentos de menor tamaño migran más rápido hacia el ánodo que
aquellos de mayor tamaño y el incremento del voltaje aumenta proporcionalmente la velocidad de
migración de los fragmentos en el gel.
La poliacrilamida es un soporte muy usado cuando se realiza una electroforesis de muestras
de ácidos nucleicos debido a que es transparente, elástico, tienen una porosidad controlable y
permiten una buena visualización de las bandas durante un tiempo prolongado. Los geles de
poliacrilamida se forman por polimerización de la acrilamida con la bisacrilamida. Estos geles suelen
emplearse cuando los fragmentos de ADN que van a ser visualizados son de bajo peso molecular
(menos de 1000 pares de base), mientras que para fragmentos de mayor peso molecular se emplea
los geles de agarosa.
El tamaño del poro formado por el gel depende de la concentración de la acrilamida: a mayor
concentración, menor tamaño del poro y se dificulta el movimiento de los fragmentos a lo largo del
gel permitiendo de esta manera obtener una mayor resolución en los fragmentos pequeño. Una
desventaja que posee la acrilamida sobre la agarosa es que es un compuesto tóxico pero su poder de
resolución es mayor. Todas las moléculas de ADN al tener carga negativa van a migrar hacia el polo
positivo, pero al entrar en los polos del gel, las moléculas más grandes van a tener un movimiento
más lento debido a su dificultad para pasar entre los poros, mientras las moléculas más pequeñas lo
hacen más rápidamente y llegan antes al polo positivo.
Una electroforesis típica consiste en preparar un gel de agarosa a una determinada
concentración, mezclar las muestras que se van a analizar con un colorante adecuado que va permitir
el frente de corrida de la electroforesis, colocar las muestras en el gel, realizar la corrida
electroforética y por último, visualizar los ácidos nucleicos para lo cual se emplea un determinado
colorante, puede ser Sybr Green, Red gel y Bromuro de etidio (Figura N°15).

52
A
A. Preparación del gel; B. Cargar la muestra en el gel; C. Revelado del gel de agarosa
Figura N°15. Corrida Electroforética

Fuente: http://stp.insht.es:86/stp/basequim/012-electroforesis-en-gel-de-agarosa-exposici%C3%B3n
La electroforesis en ácidos nucleicos en geles de agarosa permite determinar el peso

molecular de los ácidos nucleicos, para lo cual es necesario utilizar marcadores de tamaño molecular
conocido y de esta manera de acuerdo a la posición del fragmento del ADN en el gel de agarosa
poder calcular los pesos moleculares de las muestras de ADN analizadas. También permite analizar
los fragmentos de ADN cortados con enzimas de restricción, aislar y recuperar fragmentos de ADN
purificados.
COMPETENCIAS
Aprecia la técnica de electroforesis en gel. Comprende los conceptos que están involucrados en la
separación de ácidos nucleicos en una corrida electroforética. Observa la muestra de ADN aislada
de la práctica anterior.
MATERIALES POR GRUPO

• Muestra de ADN obtenida de la • 1 Fuente de poder.
práctica anterior. • Micropipetas para volúmenes de 0,5 -
• 5 µL Marcador de peso molecular 10 μL
(100-1000 pb). • 4 juegos de guantes.
• 1 Cámara de electroforesis y • 4 gradillas para tubos de 1.5 mL
accesorios (peines, soporte, tabla • 50 puntas para volúmenes de 0,5 - 10
niveladora, etc). μL

53
• 40 mL de agarosa al 2 %. • 40 µL Colorante Sybr green
• 1 L de Buffer Tris – acetato – EDTA • 1 Transiluminador de luz UV.
1X (TAE) pH 8-8.3.
• 1.5 mL de Buffer carga para ADN.
PROCEDIMIENTO
• Asegurarse de usar guantes durante la manipulación de las muestras, los reactivos y el
equipo.
• Preparar 50 mL de agarosa al 2% y adicionar 20 μL de colorante Sybr green, dejar

polimerizar por 10 min aproximadamente. Sumergir el sistema conteniendo los geles
polimerizados en su tanque (cámara electroforética) con el buffer TBE 1X para ADN. Al
momento de sumergir los geles en el tanque, asegurarse que los pocillos del gel estén
totalmente saturados de buffer.
• Sobre un pedazo de lámina extensible de parafilm, preparar una mezcla de 5 μL ADN con
1μL de buffer carga repartida en alícuotas de acuerdo al número de muestras que se colocarán
en los pocillos (considerar el uso de un marcador de peso molecular estándar de ADN).
• Con el uso de puntas de 20 μL proceder a cargar cuidadosamente la muestra en los pocillos

del gel de agarosa evitando la contaminación del pocillo contiguo.
• Finalizada la colocación de las muestras ADN en los pocillos, cubrir el tanque con la tapa y
conectar los cables de los electrodos en la fuente de poder. Encender la fuente de poder y
proceder a seleccionar el voltaje adecuado (puede estar comprendido entre 75 a 120 voltios).
• Luego de seleccionar las condiciones de voltaje, iniciar el proceso de la electroforesis.
• Transcurrido el tiempo de corrida de la electroforesis, proceder al desmontaje del equipo

empezando con la desconexión de los electrodos de la fuente de poder, removiendo el sistema
que contiene el gel de agarosa.
• Remover el gel del soporte, para realizar este proceso se requiere tener mucho cuidado, pues
el gel es muy frágil y puede romperse con facilidad.
• Desplazar el gel hacia el transiluminador para el revelado, encender el equipo y verificar que
este a una longitud de onda de 420 nm.
• Dejar hasta que empiecen a aparecer las bandas y registrar el resultado final.
• Observar los resultados obtenidos y discutir.

54
RESULTADO ESPERADO
M
2000
1900
1800
1700
1500
1600
1500
1400
1300
1200
1100
1000
900
800
700
600
500
400
300
200
100
M: marcador de peso molecular.

Carril Nº 1,2,3,4,5,6,7: muestras problemas de ADN.

55
PRÁCTICA Nº 12
CICLO CELULAR: MITOSIS
Figura N°16. Ciclo celular

Fuente: http://esperanzacuartoeso.blogspot.com/
Las células se generan a partir de otras células y la única forma de producir más células es por división
de las ya existentes. Este ciclo de reproducción celular en el cual la célula duplica su contenido
(duplicación) y luego se divide en dos (división) es conocido como ciclo celular (Figura N°16). Este
proceso se divide en dos fases: INTERFASE Y DIVISIÓN CELULAR
LA INTERFASE, se divide en:
• G1, llamada la fase de crecimiento, se inicia con una célula hija que proviene de la división
celular anterior. Se produce mucha actividad en la célula, la cual aumenta de tamaño,
sintetiza nuevo material citoplasmático sobre todo proteínas y ARN, los cuales se necesitaran
para continuar con el ciclo celular.
• S, o fase de síntesis de ADN, es la fase en que tiene lugar la duplicación del ADN. Cuando
acaba este periodo el núcleo contiene el doble de proteínas nucleares y de ADN que con el
que había iniciado, cada cromosoma ahora tiene dos cromátidas hermanas.
• G2, o segunda fase de crecimiento, en ella se sigue sintetizando ARN y proteínas que se
necesitaran para la fase de mitosis. El final de este periodo queda marcado por la aparición
de cambios en la estructura celular, cambios visibles en el microscopio óptico y que nos
indican el principio de la Mitosis o división celular.

56
LA DIVISIÓN CELULAR
• Cariocinesis
MITOSIS
La mitosis es la fase del ciclo celular en el cual las moléculas replicadas de ADN durante la
Interfase, se reparten el material nuclear (cariocinesis), dando lugar a la formación de dos núcleos
hijos con la misma dotación genética entre sí y que la célula que las dio origen. Al final de la mitosis
suele acompañarse por un proceso de citocinesis, que es la división del citoplasma en dos,
permitiendo que se formen dos células hijas. Esta cariocinesis ocurre en células somáticas.
Gracias a este proceso de división celular, las células son capaces de multiplicarse, participar
en procesos de desarrollo, de crecimiento y de regeneración celular.
La mitosis se puede dividir en cuatro etapas: profase, metafase, anafase, telofase, cada una
de ellas caracterizada por una serie particular de sucesos (Figura N°17 y N°19).
Profase. En esta fase, los cromosomas duplicados se preparan para la separación y la maquinaria
mitótica se ensambla. El material genético se condensa permitiendo observar los cromosomas como
filamentos dobles (cromátidas hermanas) unidos por un estrangulamiento (centrómero). Al final de
la profase han desaparecido la membrana nuclear y el nucléolo.
1000 X
Metafase. Los cromosomas están alineados en la placa ecuatorial de la célula (placa metafásica), en
la parte media entre los dos polos. Las cromátidas de cada cromosoma están conectadas por su
cinetocoro con las fibras del huso, los cuales son jalados hacia los extremos.
1000 X
Anafase. La anafase comienza cuando las cromátidas hermanas de cada cromosoma se separan e
inician su movimiento hacia los polos opuestos de la célula. El acortamiento de las fibras del huso y

57
la división del cinetocoro contribuye a la separación de los cromosomas. La anafase constituye una
fase importante de la división celular porque en ella se debe realizar la correcta distribución de las
dos copias de la información genética original.
1000 X
Telofase. Durante la telofase las células hijas regresan a la condición de Interfase. Las cromátidas
llegan a los polos y comienzan a descondensarse, en esta fase donde se reconstruye la membrana
nuclear alrededor de cada conjunto cromosómico lo cual definirá los nuevos núcleos hijos.
1000 X
Figura N°17. Fases de Mitosis.

Fuente: http://www.etitudela.com/profesores/rma/celula/04f7af9d590edee08/04f7af9d5f0dc0808/04f7af9d5f0dc3a0a/index.html
A continuación tiene lugar la división del citoplasma o Citocinesis.
COMPETENCIAS
1. Observa y reconocer las fases de la Mitosis
MATERIALES:

• 4 lunas de reloj • 4 pinzas de relojero
• 4 pinzas de madera • 1 paquete de láminas porta objeto y
• 4 navajas o hojas de afeitar cubre objetos
• Papel toalla • Caja de fósforos
• Colorante Orceina aceto clorhídrica
• 4 mecheros de alcohol

58

• Bulbos de cebolla (de manera personal).
PROCEDIMIENTO
1. De 10 a 15 días antes de realizarse la práctica colocar bulbos de cebolla en vasos pequeños que
contengan agua de caño, sujetar los bubos de cebolla con palitos mondadientes (Figura N°18).
Cambiar la primera agua a las 24 horas y después del cambio mantener con la misma agua hasta
el desarrollo de su práctica. El bulbo de cebolla se debe colocar en oscuridad.
Figura N°18. Forma de colocar bulbos de cebolla Allium cepa para trabajar la práctica de
mitosis
2. Cortar con una hoja de afeitar las raíces, aproximadamente de un tamaño de 1 a 2 cm. Colocar
estas raíces sobre una luna de reloj que contenga el colorante orceina aceto clorhídrica.
Asegurarse que las raíces estén cubiertas con el colorante.
3. Con ayuda de una pinza de madera sujetar la luna de reloj y llevarla a las llamas de un mechero
hasta que emita vapores blancos, tener cuidado de que las raíces estén embebidas del colorante.
No debe hervir.
4. Dejar enfriar y repetir la operación tres veces.
5. Después del último calentamiento se debe dejar enfriar por un lapso de tiempo de 5 minutos.
6. Colocar una raíz sobre una lámina porta objetos, reconocer la punta de la raíz y cortar
aproximadamente 5 mm y añadir una gota del colorante con ayuda de un gotero. Desechar el
resto de la raíz.
7. Cubrir la muestra con una laminilla.
8. Con ayuda de un lápiz ejercer presión formando círculos concéntricos sobre la laminilla para
expandir la muestra.
9. Eliminar el exceso de colorante utilizando papel toalla y realizar el procedimiento denominado
“squash” (aplastamiento).
10. Llevar la lámina al microscopio, localizar las células que presentan estructuras filamentosas
intensamente teñidas e identifique las fases de la mitosis. Realizar sus observaciones a 400X y
esquematizar.

59
Figura N°19. Fases de Mitosis

Fuente: http://www.bio.miami.edu/dana/250/25009_4print.html

60
PRÁCTICA Nº 13
CICLO CELULAR: MEIOSIS
Figura N°20. Meiosis

Fuente: http://ptbestaribiology.blogspot.com/2011/05/what-is-meiosis.html
La MEIOSIS es un tipo de división celular por el cual la dotación cromosómica queda dividida
exactamente por la mitad. En este proceso, dos divisiones celulares sucesivas (DIVISIÓN I Y
DIVISIÓN II) ocurren después de un ciclo de replicación de ADN dando lugar a cuatro células
haploides a partir de una diploide (Figura N°20).
Esta división ocurre en células germinales, que se localizan en los órganos reproductores, las
gónadas, y cuya función es la formación de células sexuales o gametos, los que se forman al
dividirse por meiosis.
DIVISIÓN MEIÓTICA I (reduccional) (Figura N°21). Se divide en:
Profase I. Fase más compleja y larga de la Meiosis, la cual se subdivide 5 fases:

• Leptoteno. Se inicia con la CONDENSACIÓN de los cromátidas, observándoselas como
filamentos aparentemente simples. Duplicación de centrómero, formación del huso,
disgregación de la envoltura nuclear y nucléolo.
• Cigoteno. APAREAMIENTO (SINAPSIS) de los cromátidas, la cual empieza por los
telómeros, formación de los BIVALENTES (cada par de homólogos duplicado)
• Paquiteno. Los cromosomas comienzan a condensarse, se realiza el intercambio cromosómico
(CROSSING OVER) (Figura N°22) entre los cromosomas homólogos. A medida que los
cromosomas homólogos continúan acortándose y engrosándose, se puede observar que estas
formaciones están formadas por 4 cromátidas y se les denomina TÉTRADAS.
• Diploteno. Los cromosomas homólogos empiezan a separarse pero quedan unos puntos de unión
entre ellos, denominados QUIASMAS. Los quiasmas son la manifestación citológica de donde
se produjeron entrecruzamiento.

61
• Diacinesis. Los quiasmas se desplazan hacia los extremos del bivalente, fenómeno llamado
TERMINALIZACIÓN. Los cromosomas se unen a las fibras del huso.
Metafase I. La membrana nuclear desaparece, las tétradas se ordenan en el plano ecuatorial, se

forma el huso acromático, los centríolos, si existen, están en los polos.
Anafase I. Los cromosomas homólogos (tétradas) se separan totalmente y se mueven hacia polos
opuestos guiados por las fibras del huso. Desaparecen los quiasmas.
Telofase I. Los cromosomas se ubican en cada polo de la célula. Los cromosomas empiezan a
descondensarse, se forma la envoltura nuclear, dando lugar a núcleos que poseen un número
haploide de cromosomas, cada uno formado por dos cromátidas.
Figura N°21. División Meiótica 1

Fuente: http://www.tokresource.org/tok_classes/biobiobio/biomenu/meiosis/index.htm

62
Citocinesis. División del citoplasma en dos células hijas. No hay interfase, la segunda división
empieza inmediatamente.
Figura N°22. Esquema de recombinación genética

Fuente: http://www.mhhe.com/biosci/ap/ap_prep/bioD6b.html
DIVISIÓN MEIÓTICA II (ecuacional). Esta división se básicamente una división mitótica, pero
sin ninguna replicación de ADN. Este proceso de división ocurre de manera simultánea en ambas
células hijas, resultado de la primera división (Figura N°23). Se divide en cuatro fases:
Profase II. Comienza a desaparecer la envoltura nuclear y el nucléolo, la cromatina comienza a

condensarse, los centriolos se desplazan hacia los polos, se forma el huso.
Metafase II. Las fibras del huso se unen a los cinetocóros de los cromosomas y los dirigen hacia el
plano ecuatorial de la célula.

63
Anafase II. El centrómero se divide y las cromátidas hermanas son desplazada hacia polos opuestos
arrastradas por las fibras del huso.
Telofase II. Cada uno de los polos recibe un juego haploide de cromosomas, se forman los nuevos
núcleos.
Citocinesis Que origina cuatro células, cada una con número haploide de cromosomas (n) y
constituidas de una sola cromátide. Estas células formarán los gametos.
Figura N° 23. División meiótica 2.

Fuente: http://www.tokresource.org/tok_classes/biobiobio/biomenu/meiosis/index.htm
COMPETENCIAS
1. Identifica las fases de la Meiosis

2. Reconoce la importancia de la Meiosis en la variabilidad genética
3. Investiga las consecuencias genéticas de la Meiosis
MATERIALES
▪ 1 juego de 13 láminas fijadas de células germinales Zea mays

64
PROCEDIMIENTO
1. Llevar la lámina al microscopio e identificar las fases (Figura N°24 y N°25). Esquematizar sus
observaciones.
LEPTOTENO ZIGOTENO PAQUITENO DIPLOTENO DIACINESIS
1000 X 1000 X 1000 X 1000 X 1000 X
Figura N°24. Fases de Meiosis

Fuente: http://www.squidoo.com/cell-lapbook

65
1000 X 1000 X
METAFASE I ANAFASE I
1000 X 1000 X
TELOFASE I PROFASE II
1000 X 1000 X
METAFASE II ANAFASE II

66
1000 X 1000 X
TELOFASE II CITOCINESIS
Figura N°25. Fases de meiosis

67
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
• Alberts B, Jonson A, Bray D, Lewis J, Raff M, Roberts K. y Walter P. Biología molecular

de la célula. 5ta ed. Barcelona-España: Ediciones Omega; 2010.
• Alexander P, Bahret M, Chaves J, Courts G y SkolkyD'Alessio N. Biología. Englewood
Cliffs. New Yersey: Editorial Prentice Hall; 1992.
• Atlas de Biología: los mecanismos de la vida. Barcelona: Cultural; 1998.
• Audesirk T, Audesirk G y Byers B. Biología: la vida en la tierra. 6ta ed. México: Pearson
Educación; 2003.
• Bernstein R y Bernstein S. Biología. 10ma ed. Colombia: Mc Graw Hill Interamericana;
1998.
• Curtis H, Barnes N, Schnek A y Massarini A. Biología. 7ma ed. en español. Buenos Aires.
Editorial Médica Panamericana. 2008.
• De Robertis E, Hib J y Ponzio R. Biología celular y molecular. 12ava ed. Buenos Aires:
Editorial El Ateneo; 1997.
• Karp G. Biología celular y Molecular. 4ta ed. México D.F: Mc Graw Hill Interamericana;
2005.
• Paniagua Gómez-Alvarez R, Nistal Martín de Serrano M y Sesma Egozcue M. Citología e
histología vegetal y animal : biología de las células y tejidos animales y vegetales. 3ra ed.
Madrid : Mc Graw Hill Interamericana; 2002.
• Smith C y Wood E.Biología celular. Wilmintong, Delaware- EUA: Editorial Addison-Wesley
Iberoamericana SA. 1998.
• Smith, C. y Wood, E. Biología molecular y biotecnología. Wilmintong, Delaware- EUA:
Editorial Addison-Wesley Iberoamericana SA. 1998.
• Solomon E, Berg L, Martin D y Villee C. Biología de Villee. 4ta ed. México D.F: Editorial
Mc Graw Hill Interamericana; 1998.
• Villee C. Biología. 8va ed. México D. F: Mc Graw Hill Interamericana; 1996.

68
ANEXOS
PAUTAS PARA REDACTAR UN INFORME DE LABORATORIO
1) Leer la rúbrica que se utiliza en la calificación de los informes.

2) Mantener el formato en todo el informe:
a. Tipo y tamaño de letra
b. Alineado (justificado).
c. Adicionalmente le dará más orden que incluyan un encabezado y pie de página, con título, y
compaginado.
d. Los nombres científicos deben ir en letra cursiva.
3) El informe debe ser descrito en primera persona (en plural, pues realizan en grupo el informe) o ser
impersonal
4) La introducción debe referirse a lo que se relatará en el informe.
5) El marco teórico debe resaltar los puntos más importantes para entender el tema que se desarrolló en
el laboratorio, debe estar debidamente referenciado. No debe ser copia de un libro, debe explicarse en sus
propios términos.
6) Objetivos y Materiales, si es que no se ha propuesto algún objetivo o usado algún material nuevo, sólo
es una presentación de lo usado en la guía, podrían incluir detalles de los equipos o colorantes usados en
el experimento.
7) Procedimientos deben describir lo realizado en la clase, resumir lo que dice la guía e incluir las ligeras
variaciones de acuerdo a cómo procedió cada grupo.
8) Resultados, deben “describir” lo observado en cada experimento. Pueden hacer uso de figuras
esquemas dibujos, debidamente titulados, y referenciados (es decir si en la sección de RESULTADOS se
menciona: En la Figura 1A se observó/ observamos que los cloroplastos …..etc……., dicha Figura 1
debería hacer referencia a lo que se observó, la cual debe tener título y rótulos adecuados. Así mismo
incluir los resultados de otros grupos es adecuado.
9) Discusión, esta es una de las partes más importantes, en la cual deben esforzarse por analizar con un
pensamiento crítico lo observado en el desarrollo de la práctica. Deben incluir los experimentos realizados
en todo el laboratorio, es decir algunas veces se dividen para trabajar todos los experimentos, pero
DEBEN DISCUTIR SOBRE TODOS, además comparar lo esperado vs lo observado. También deben
usar libros y o artículos para comparar estos resultados con lo teórico.
10) Las fuentes de referencia deben ser apropiadas, por ejemplo: libros, artículos, documentos
académicos, etc. Así mismo deben de seguir las normas de Vancouver (existe un documento al respecto).
Así mismo se les recomendó descargar y usar algún gestor de referencias como Mendeley (gratuito) o
EndNote (de paga).
Documento elaborado por: Gerardo Sánchez García.

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BIOLOGÍA

Normas para el estudiante del curso de Biología Celular 03

Instrucciones para el desarrollo de las prácticas 06

Práctica Nº 1: Principios de Bioseguridad en el laboratorio 08

Práctica N° 2: Fundamento de Microscopía 13

Práctica Nº 3: Reconocimiento de Biomoléculas 22

Práctica Nº 4: Permeabilidad de la Membrana Citoplasmática. (Ósmosis) 26

Práctica Nº 5: Permeabilidad de la Membrana Citoplasmática. (Difusión y diálisis) 30

Práctica Nº 6: La célula procariota y eucariótica: reconocimiento de estructuras 33

Práctica Nº 7: Obtención y análisis de fracciones celulares 39

Práctica Nº 8: Metabolismo Celular: Proceso de respiración celular 42

Práctica Nº 9: Extracción del ADN 45

Práctica Nº 10: Fundamentos de la Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). 48

Práctica Nº 11: Fundamentos de Electroforesis 51

Práctica Nº 12: Ciclo celular: Mitosis 52

Práctica Nº 13: Ciclo celular: Meiosis 60

El estudiante debe INGRESAR AL LABORATORIO CON MANDIL LARGO, LIMPIO,

El ORDEN Y LA LIMPIEZA son obligatorios en el laboratorio de Biología Celular y Molecular,

LA MANIPULACIÓN DE LOS EQUIPOS SE HARÁ EXCLUSIVAMENTE POR EL PROFESOR

El Manual tiene dos objetivos fundamentales: en primer lugar; introducir al estudiante en el

• Lee la guía de práctica previa al desarrollo de la experiencia en el laboratorio.

➢ La rúbrica será para la evaluación de los informes de laboratorio de las prácticas 1, 2, 3 , 4 y 5. En la

RUBRICA PARA EVALUAR PRÁCTICA 12

Llegó puntual y Llegó puntual y Llegó impuntual y

A plica las A plica las

Enfo ca su Enfo ca su Enfo ca su No enfo ca su

Elabo ra sus Elabo ra sus Elabo ra sus Elabo ra sus

PRINCIPIOS BÁSICOS DE BIOSEGURIDAD

Principio Universal: “TODA MUESTRA BIOLOGICA DEBE SER ASUMIDO COMO

Agentes de riesgos físicos y mecánicos

Agentes de riesgo químicos

Tabla Nº 1: Niveles de bioseguridad

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac y Gisella Guillén

MANEJO DE RESIDUOS SOLIDOS DE ESTABLECIMIENTOS DE SALUD

Tabla Nº2: Clasificación de residuos sólidos sanitarios

Clase Ejemplo Color de Bolsa

Bolsas rojas: áreas Bolsas amarillas: áreas Bolsas negras: residuos

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac, Gisella Guillén

Figura Nº1: Ciclo del manejo de residuos sólidos hospitalarios

1. Lavarse siempre las manos con abundante agua y jabón.

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac, Gisella Guillén

Figura N°2. Microscopio óptico de campo claro

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac y Gisella Guillén

Fuente: GENOMA SUR – INTRODUCCIÓN A LA CÉLULA

Figura N°3. Rango de visualización del microscopio.

Parte mecánico y sus componentes:

• Pie o base: se encuentra en la parte inferior del aparato, proporcionándole estabilidad.

Parte óptico y sus componentes:

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac y Gisella Guillén

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac y Gisella Guillén

MATERIALES DEL ESTUDIANTE (por mesa de trabajo)

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac y Gisella Guillén

TIPOS DE MICROSCOPÍA (continuación)

El uso de determinados componentes colocados en el condensador o en los objetivos se interponen

En el microscopio electrónico de transmisión (MET), la observación de una muestra biológica se

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac y Gisella Guillén

Óptico de campo claro Para observar muestras teñidas.

Para la observación de microorganismos

Para facilitar la visualización de estructuras

Observar estructuras internas específicas

Examinar virus o la ultraestructura interna de

Estudiar las características de las superficies

Fuente: Comunicación personal.