PRÁCTICA Nº7

DETERMINACIÓN TRANSAMINASA GOT

Ibtissam Allali

OBJETIVOS

● Determinar la actividad de GOT (Glutamato-oxalacetato transaminasa) o AST

(Aspartato aminotransferasa), en UI/L, en muestra de suero o plasma

● Adquirir conocimiento sobre algunas de las pruebas de laboratorio útiles para la

evaluación del funcionamiento hepático y para el diagnóstico diferencial de
hepatopatías.

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA PARA DETERMINAR LA GOT

La GOT cataliza la transferencia reversible de un grupo amino del Aspartato al α-

Cetoglutarico formándose Glutamato y Oxalacetato. El oxalacetato producido es reducido a
Malato en presencia de Malato deshidrogenasa (MDH) y NADH:

El NADH se consume en el proceso, siendo la velocidad de disminución de su

concentración proporcional a la actividad de la GOT en la muestra problema

TÉCNICA

1-Preparación del Reactivos de Trabajo: mezclar en un frasco 4 volúmenes del R1

(tampón+ LDH + L-Alanina) con 1 volumen del R2 (NADH + alta-cetoglutarico)
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Estable 21 días a 2- 8º o 72 h a
temperatura ambiente
2-Comprobar la absorbancia del Reactivo de Trabajo (RT) frente a Blanco agua destilada
(<1,000 de A).
3-Ajustar el blanco con el RT.
4-Preparar las muestras según el siguiente cuadro
(IMPORTANTE :realizar la técnica primero para el suero humano Normal y por luego para
el suero humano Patológico, NO REALIZAR LAS MEZCLAS EN TODOS LOS TUBOS A LA
VEZ, para no solapar los tiempos de lectura):

5-Mezclar el RT + el S. H. Normal, incubar 1 minuto a 25ºC (o 1 minuto a 37ºC si la

temperatura de medición es también a 37ºC).
Leer la absorbancia inicial (inmediatamente después de incubación) a 340 nm y después
volver a medirla cada minuto durante los tres minutos siguientes. Anotar los resultados de
las 4 lecturas.
6-Repetir el paso anterior con la mezcla de RT + S.H. Patológico y anotar resultados.
7-Se repiten los pasos 5 y 6 con la mezcla de RT + Suero Control Patológico y se anotan los
respectivos resultados.

Muestra Control Normal Muestra Control Patologíco

Absorbancia a Tiempo 0 0,022 0,075

(después de 1 minuto de
incubación)

Absorbancia a 30" 0,017 0,069

Absorbancia a 1 minutos 0,014 0,063

Absorbancia a 1'30" minutos 0,009 0,057

RESULTADOS:

Al tratarse de una determinación cinética, se debe calcular la media de las absorbancias

obtenidas y multiplicar cada promedio por el factor que proporciona el método (1750), este
resultado será la actividad de la GOT en las respectivas muestras en UI/L

SPN
Media obtenida → 0,004 · 1750 = 7,6 UI/L
SPP
Media obtenida → 0,018 · 1750 = 31,5 UI/L

Intervalo de valores normales para SPN: 41,5 – 59,7 UI/L

Intervalo de valores normales para SPP: 118 – 170 UI/L
Presuntivamente se piensa que a la hora de realizar las determinaciones se tuvo especial
cuidado, ya que al tratarse de una determinación cinética, se debe prestar especial atención
en los tiempos. Al plasmar los resultados en la tabla con los resultados de los demás grupos
de clase, se observaron valores muy dispares y muy por encima o por debajo de los
intervalos considerados normales tanto para SPN como para SPP.
Uno de los factores que influyeron en estos resultados fue que el Reactivo de Trabajo
llevaba mucho tiempo reconstituido, con lo cual no preservaba los valores correspondientes
como cuando está bien conservado y recién reconstituido. Además, se utilizó el
espectofotómetro del fondo de la clase, que no suele utilizarse muy a menudo, con lo que
puede que haya sido otro de los factores que influyeron en la medición.
Por lo demás, se considera que las cantidades fueron bien pipeteadas, se limpió la punta de
la pipeta correctamente sin que arrastrara parte de la muestra, y se midieron los tiempos en
los minutos correspondientes.

FOTOS DE PRÁCTICA

Actividades propuestas de la práctica

1- ¿Para qué es útil la determinación de las enzimas GOT y GPT?

La enzima GPT es una enzima se utiliza principalmente para diagnóstico de enfermedades

hepáticas, cuando se emplea en conjunción con la GOT ayuda en el diagnóstico de infartos
de miocardio, ya que el valor de GPT se mantiene dentro de los límites normales y
aumentan los niveles de GOT.
La enzima GOT se utiliza principalmente para su diagnóstico y seguimiento junto con otras
enzimas como ALT y ALP. También se emplea en el control post-infarto, pacientes con
desórdenes del músculo esquelético y en otras afecciones.

2- ¿Cuál de estas dos enzimas es más específica para evaluar el daño hepático?
¿Por qué?
Las dos enzimas son bastante específicas para evaluar el daño hepático, pero la GPT es
más precisa porque su principal aplicación es para diagnosticar enfermedades hepáticas.
Sin embargo suelen utilizarse conjuntamente.
3- ¿Cuál es la sensibilidad de ambos métodos?

GOT : 1U/L = 0,00053 A/min

GPT : 1U/L = 0,00052 A/min

4- ¿Cuál es el límite de linealidad del método GPT?

400 U/L

5- ¿Cuál es el límite de linealidad del método GOT?

467 U/L

6- ¿Cuál es el intervalo de medición del método para la GPT?

Desde el límite de detección 0 U/L hasta el límite de linealidad 400 U/L

7- ¿Cuál es el intervalo de medición del método para la GOT?

Desde el límite de detección 0 U/L hasta el límite de linealidad 467 U/L

8- ¿Qué sustancia es la que se mide espectrofotométricamente en estos métodos?

Se miden 2 enzimas intracelulares en un suero humano normal y un suero humano
patológico

9- El resultado se expresa en UI/min, ¿qué significado tiene esta unidad de medida?

La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 µmol de sustrato por
minuto, en condiciones estándar. La concentración se expresa en unidades por litro (UI/L)

10- ¿Cuáles son los valores de referencia en hombres y mujeres de GPT?

25°C 30°C 37°C

MUJERES Hasta 18 U/L 22 U/L 32 U/L

HOMBRES Hasta 22 U/L 29 U/L 40 U/L

Dependiendo de la temperatura a la que se realice la determinación los valores son distintos

11- ¿Cuáles son los valores de referencia en hombres y mujeres de GOT?

25°C 30°C 37°C

HOMBRES 19U/L 26U/L 38U/L

MUJERES 16U/L 22U/L 31U/L

Dependiendo de la temperatura a la que se realice la determinación los valores son distintos

12- ¿Como se actuará si los valores obtenidos en la muestra son superiores al límite
de linealidad?
Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, se debe diluir 1/10 con
ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 10.

13- ¿Qué puede causar interferencias en la medición de GPT y GOT?

GPT : La hemólisis, drogas y otras sustancias. GOT : La hemólisis, drogas y otras

sustancias.

14- ¿Cuál es la estabilidad de los reactivos?

21 días a 2-8ºC o 72h a temperatura ambiente (15-25ºC)

15- Los valores obtenidos para cada control (Normal y patológico) ¿están dentro de
los límites permitidos?

Al medir únicamente la enzima transaminasa GOT, solo se tienen resultados de esta. En

este caso ninguno de los dos valores obtenidos están dentro de los valores considerados
normales.

16- ¿A qué atribuyes la falta de exactitud de tus resultados? (en caso de que no
hayan sido fiables)
Como anteriormente se comenta en la discusión de los resultados, pienso que han habido
varios errores, tanto en el espectrofotómetro como en la estabilidad de los reactivos, con lo
cuál ha afectado en los resultados que se han obtenido.