Está en la página 1de 7

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIAPAS

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS


CAMPUS IV

BIOQUMICA CLNICA II

REPORTE PRCTICA 2:
TRANSAMINASA GLUTMICO PIRVICA (TGP)
TRANSAMINASA GLUTMICO OXALACTICA (TGO)
ALUMNA:
DE LEN GONZLEZ LENELY YUTZIRI.

CATEDRTICO:

MC. TERESA V. LAU HAM.

6 SEMESTRE B

TAPACHULA, CHIAPAS A 04 DE OCTUBRE DEL 2016.

TRANSAMINASA GLUTMICO PIRVICA (TGP)


SIGNIFICANCIA CLINICA:
La ALAT se encuentra en altas concentraciones en el hgado, rin, corazn y tejido
muscular esqueltico. Su nivel se encuentra aumentado en enfermedades que involucran
el hgado (cirrosis, hepatitis viral, entre otras). Niveles bajos se detectan en pacientes
dializados o con deficiencia de vitamina B6.
FUNDAMENTOS DEL MTODO:
La determinacin de ALAT se realiza acoplando su accin transaminasa a la accin de la
enzima LDH en presencia de NADH. Este mtodo se basa en el mtodo de Wroblewski y
La Due, siguiendo las recomendaciones de IFCC y SSCC.
L-Alanina + -Cetoglutarato

Piruvato + NADH

LDH

ALAT

Piruvato + Glutamato

Malato + NAD+

La L-alanina en presencia de ALAT formndose Piruvato y Glutamato. El Piruvato


producido es reducido por la enzima LDH con la consiguiente oxidacin del NADH a NAD.
La actividad de la ALAT se mide determinando la disminucin de absorbancia a 340 nm.
segn el NADH sea oxidado a NAD+.
MUESTRA:
De preferencia utilizar suero libre de hemlisis. Descartar muestras con hemlisis visible
ya que se pueden obtener valores falsamente elevados. Se recomienda hacer la
determinacin tan pronto sea posible. La ALAT es estable a lo menos 3 das entre 2 y
8C. y 30 das a -20C.
TCNICA:
Llevar el reactivo a la temperatura de reaccin (30 o 37C.). Ajustar el espectrofotmetro
a cero con blanco de agua destilada.
Reactivo de trabajo
(mL)
1.0
Volumen de muestra
(mL)
0.1
Mezclar y transferir a la cubeta del espectrofotmetro. Incubar 60 segundos a la
temperatura de reaccin. Leer la absorbancia inicial (A1) a 340 nm. Repetir la lectura a
intervalos de 60 segundos exactos, hasta por tres minutos.
CLCULOS:

Determine el cambio de Absorbancia por minuto (A/min) tanto para el calibrador como
para las muestras.
Factor =

Concentracin Calibrador
A/min Calibrador

Actividad ALAT (UI/L) = Factor x A/min. muestra


O bien se puede utilizar el siguiente factor:
Actividad ALAT desconocido (UI/L) = A/min x 1768

Factor 1768 =

Vt
x
1000
NADH 340 x P x Vm

Vt = Volumen total de reaccin


NADH 340 = Coef. de extincin milimolar del NADH a 340 nm.
P = Espesor del paso de luz en la cubeta
Vm = Volumen de muestra utilizado
ADVERTENCIAS Y MEDIDAS DE PRECAUCION:
Los volmenes indicados pueden ser alterados proporcionalmente sin alterar los
resultados.
Los rangos normales deben informarse de acuerdo a la temperatura a la cual se realiza
el ensayo. Consultar en nuestra pgina WEB la ficha de seguridad de este reactivo y
observar todas las medidas de precaucin necesarias para la manipulacin y eliminacin
de residuos.
Debe utilizarse contenedores de reactivos de autoanalizadores nuevos.
El Hipoclorito de Sodio a una concentracin 10 mg/dL tiene un fuerte efecto
interferente sobre la estabilidad del reactivo, por lo que todo el material utilizado debe
estar LIBRE de residuos de Hipoclorito para garantizar el resultado obtenido.

ESPECIFICACIONES DE DESEMPEO:
-Linealidad: 500 U/L.
Para valores superiores 500 U/L, diluir la muestra con suero fisiolgico y el resultado
obtenido se multiplica por el factor de dilucin.
-Lmite de deteccin: 4 U/L.

-Interferencias: Hemlisis, bilirrubina sobre 20 mg/dL y la lipemia (triglicridos sobre 200


mg/dL) podran interferir en la tcnica. Otros medicamentos y sustancias podran interferir
(4).
-Exactitud: Reactivos MexlabVALTEK no muestran diferencias sistemticas significativas
cuando se comparan con otros reactivos comerciales. Los detalles del estudio
comparativo estn disponibles bajo solicitud.

-Repetibilidad intraserie: n = 20
Nivel
Media (mg/dl)
Normal
47.2
Patolgico
130

C.V.
2.3%
0.7%

-Reproductibilidad interserie: n= 20
Nivel
Media (mg/dl)
Normal
31
Patolgico
118

C.V.
2.3%
1.4%

Estos datos han sido obtenidos utilizando un autoanalizador MINDRAY de la serie


BS. Los resultados pueden variar al cambiar de instrumento o al realizar el
procedimiento manualmente.
-Certificado de Conformidad y Trazabilidad disponible a solicitud.
RANGOS DE REFERENCIA:
Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos de referencia en funcin de la
poblacin de pacientes. Los rangos de referencia que se enumeran a continuacin estn
tomados de la bibliografa existente.
Suero: hasta 24 UI/L a 30C.
Suero: hasta 36 UI/L a 37C.

TRANSAMINASA GLUTMICO OXALACTICA (TGO)

SIGNIFICANCIA CLINICA:
La ASAT se encuentra presente en todos los tejidos, pero en altas concentraciones en el
hgado, msculo, rin y corazn. Su aumento se asocia a enfermedades que afectan
dichos tejidos tales como hepatitis, infarto del miocardio, entre otras.
FUNDAMENTOS DEL METODO:
La determinacin de ASAT se realiza acoplando su accin transaminasa a la accin de la
enzima MDH en presencia de NADH. Este mtodo se basa en el mtodo de Henry et al.,
siguiendo las recomendaciones de IFCC
L-Aspartato+a-Cetoglutarato

Oxaloacetato + NADH

MDH

ASAT

Oxaloacetato + Glutamato

Malato + NAD+

El L-Aspartato reacciona con el a-Cetoglutarato en presencia de ASAT formndose


Oxaloacetato y Glutamato. El Oxaloacetato producido es reducido por la enzima MDH con
la consiguiente oxidacin del NADH a NAD.
La actividad de la ASAT se mide determinando la disminucin de absorbancia a 340 nm.
segn el NADH sea oxidado a NAD.
MUESTRA:
De preferencia utilizar suero libre de hemlisis. Descartar muestras con hemlisis visible
ya que se pueden obtener valores falsamente elevados. La ASAT es estable a lo menos 7
das entre 2 y 8C. y 15 das a -20C.
TCNICA:
Llevar el reactivo a la temperatura de reaccin (30C o 37C.). Ajustar el
espectrofotmetro a cero con blanco de agua destilada.
Reactivo de trabajo
(mL)
1.0
Muestra o calibrador
(mL)
0.1
Mezclar y transferir a la cubeta del espectrofotmetro. Incubar 60 segundos a la
temperatura de reaccin. Leer la absorbancia inicial (A1) a 340 nm. Repetir la lectura a
intervalos de 60 segundos exactos, hasta por tres minutos.
Adaptaciones para la aplicacin de este reactivo en autoanalizadores estn disponibles a
solicitud. Es responsabilidad del laboratorio validar esta aplicacin.

CLCULOS:
Determine el cambio de Absorbancia por minuto (A/min) tanto para el calibrador como
para las muestras.

Factor=

Concentracin Calibrador
A/ min Calibrador

Actividad ASAT desconocido /UI/L) = Factor x A/min. muestra


O bien se puede utilizar el siguiente factor:
Actividad ASAT desconocido (UI/L) = A/min x 1768
Factor 1768=

Vt
x
1000
NADH 340 x P x Vm

Vt = Volumen total de reaccin.


NADH 340 = Coef. de extincin milimolar del NADH a 340 nm.
P = Espesor del paso de luz en la cubeta.
Vm = Volumen de muestra utilizado.
ADVERTENCIAS Y MEDIDAS DE PRECAUCIN:
Los volmenes indicados pueden ser alterados proporcionalmente sin alterar los
resultados.
Los rangos normales deben informarse de acuerdo a la temperatura a la cual se realiza
el ensayo.
Consultar en nuestra pgina WEB la ficha de seguridad de este reactivo y observar
todas las medidas de precaucin necesarias para la manipulacin y eliminacin de
residuos.
Debe utilizarse contenedores de reactivos de autoanalizadores nuevos.
El Hipoclorito de Sodio a una concentracin 10 mg/dL tiene un fuerte efecto
interferente sobre la estabilidad del reactivo, por lo que todo el material utilizado debe
estar LIBRE de residuos de Hipoclorito para garantizar el resultado obtenido.
ESPECIFICACIONES DE DESEMPEO:
-Linealidad: 500 U/L. Para valores superiores 500 U/L, diluir la muestra con suero
fisiolgico y el resultado obtenido se multiplica por el factor de dilucin.
-Lmite de deteccin: 4,0 U/L.
-Interferencias: Hemlisis, bilirrubina sobre 20 mg/dL, y la lipemia (triglicridos sobre 200
mg/dL) pueden interferir en la tcnica. Otros medicamentos y sustancias podran interferir
(4).
-Exactitud: Reactivos MexlabVALTEK no muestran diferencias sistemticas significativas
cuando se comparan con otros reactivos comerciales. Los detalles del estudio
comparativo estn disponibles bajo solicitud.

-Repetibilidad intraserie: n = 20
Nivel
Media (mg/dl)
Normal
43
Patolgico
186

C.V.
2.7%
1.4%

-Reproductibilidad interserie: n= 20
Nivel
Media (mg/dl)
Normal
44
Patolgico
183

C.V.
4.9%
2.5%

Estos datos han sido obtenidos utilizando un autoanalizador MINDRAY de la serie


BS. Los resultados pueden variar al cambiar de instrumento o al realizar el
procedimiento manualmente.
-Certificado de Conformidad y Trazabilidad disponible a solicitud.
RANGOS DE REFERENCIA:
Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos de referencia en funcin de la
poblacin de pacientes. Los rangos de referencia que se enumeran a continuacin estn
tomados de la bibliografa existente.
Suero: hasta 22 U/L a 30C.
Suero: hasta 34 U/L a 37C.
RESULTADOS:
TGP:
A/min muestra: 0.006
Factor 1768
Actividad ALAT desconocido (UI/L) = A/min x 1768
Actividad ALAT desconocido (UI/L) = (0.006) (1768)
Actividad ALAT desconocido (UI/L) = 10.608 UI/L
TGO:
A/min muestra: 0.007
Factor 1768
Actividad ALAT desconocido (UI/L) = A/min x 1768
Actividad ALAT desconocido (UI/L) = (0.007) (1768)
Actividad ALAT desconocido (UI/L) = 12.376 UI/L