GTC164

GUÍA TÉCNICA GTC
COLOMBIANA 164
2007-07-25
CALIDAD DEL AGUA.

SELECCIÓN DE ENSAYOS PARA BIODEGRADABILIDAD
E: WATER QUALITY. SELECTION OF TESTS FOR BIODEGRADABILITY.
CORRESPONDENCIA: esta guía es idéntica por traducción (IDT)

al documento ISO/TR 15462:2006.
DESCRIPTORES: calidad del agua - biodegradabilidad;

calidad del agua - ensayos.
I.C.S.: 13.060.70
Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)

Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435
Prohibida su reproducción Editada 2007-08-03

PRÓLOGO
El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo

nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.
ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.
La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica

está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último
caracterizado por la participación del público en general.
La GTC 164 fue ratificada por el Consejo Directivo del 2007-07-25.
Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.
A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a

través de su participación en el Comité Técnico 12 Calidad del agua.
DOCTOR CALDERÓN ASISTENCIA IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA -

TÉCNICA AGRÍCOLA LTDA. IBLAB LTDA.-
EMPRESA DE ACUEDUCTO Y PRODUCTOS ALIMENTICIOS DORIA S.A.
ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ ESP QUIMIA LTDA.
GESTIÓN EN CALIDAD Y AMBIENTE UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
EMPRESARIAL LTDA.
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las

siguientes empresas:
ACEITES Y GRASAS VEGETALES S.A. ASINAL LTDA.

-ACEGRASAS- ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE INGENIERÍA
ACUEDUCTO Y ALCANTARILLADO DE SANITARIA Y AMBIENTAL -ACODAL-
POPAYÁN S.A. E.S.P. ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE
ACUAGYR S.A. ESP INGENIEROS DE PETROLEOS -ACIPET-
AGUAS DE CARTAGENA S.A. ESP ASOCIACIÓN DE USUARIOS DEL DISTRITO
AGUAS DE MANIZALES S.A. E.S.P DE ADECUACIÓN DE TIERRAS DE LOS
ALPINA PRODUCTOS ALIMENTICIOS S.A. MUNICIPIOS ROLDANILLO - LA UNIÓN
AMBIENCOL INGENIEROS LTDA. ASOCIACIÓN NACIONAL DE INDUSTRIALES
ANALÍTICA DE AGUA E.U. BAVARIA S.A.
-ANDESCO- ASOCIACIÓN NACIONAL DE BIOQUILAB LTDA.
EMPRESAS DE SERVICIOS PUBLICOS BIOTRENDS LABORATORIOS LTDA.
DOMICILIARIOS Y ACTIVIDADES CARULLA VIVERO S.A.
COMPLEMENTARIAS E INHERENTES CEMENTOS BOYACÁ S.A.
ANTEK S.A. CENTRAGAS S.C.A.
AQUALINSO LTDA. CENTROAGUAS S.A. ESP
CENTRO NACIONAL DE PRODUCCIÓN GASEOSAS COLOMBIANAS S.A.
MÁS LIMPIA GRIFFITH COLOMBIA S.A.
CERVECERIA LEONA S.A. HOLSAN LTDA.
CERVECERIA UNIÓN S.A. INCOLBESTOS S.A.
COMPAÑÍA NACIONAL DE LEVADURAS - INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO
LEVAPAN S.A.- -ICA-
CONCESIONARIA TIBITOC S.A.-E.S.P. INSTITUTO DE HIDROLOGÍA, METEOROLOGÍA
CONHYDRA S.A. ESP EMPRESA Y ESTUDIOS AMBIENTALES -IDEAM-
PRESTADORA DE SERVICIOS PÚBLICOS INSTITUTO HUMBOLT
CONSERVAS CALIFORNIA S.A. INTEGRAL S.A.
CORPORACIÓN AUTONOMA REGIONAL JAIRO PÉREZ AVELLA Y CÍA. LTDA.
DEL CAUCA LABORATORIO BIOCONTROL LTDA.
CORPORACIÓN AUTÓNOMA REGIONAL DEL LANZETTA RENGIFO & CÍA
CENTRO DE ANTIOQUIA, -CORANTIOQUIA- LAQMA LTDA.
CORPORACION AUTÓNOMA REGIONAL LARKIN LTDA.
DEL GUAVIO MERCK COLOMBIA S.A.
CORPORACIÓN AUTÓNOMA REGIONAL METROAGUA S.A. E.S.P
DEL VALLE DEL CAUCA MINISTERIO DE AMBIENTE, VIVIENDA Y
CORPORACIÓN AUTÓNOMA REGIONAL DESARROLLO TERRITORIAL
PARA LA DEFENSA DE LA MESETA DE MINISTERIO DE COMERCIO, INDUSTRIA
BUCARAMANGA Y TURISMO
CORPORACION AUTONOMA REGIONAL MINISTERIO DE MINAS Y ENERGÍA
PARA EL DESARROLLO SOSTENIBLE MINISTERIO DE PROTECCIÓN SOCIAL
DEL CHOCÓ -CODECHOCÓ- MINISTERIO DE TRANSPORTE
CORPORACION AUTONOMA REGIONAL NESTLE DE COLOMBIA S.A.
RIONEGRO - NARE, -CORNARE- PANAMCO COLOMBIA
CORPORACIÓN PARA LA PARQUES Y FUNERARIAS S.A. -
CONSERVACIÓN DEL MEDIO AMBIENTE JARDINES DEL RECUERDO
Y LOS RECURSOS NATURALES PELDAR S.A.
DEPARTAMENTO TÉCNICO PETROTESTING COLOMBIA S.A.
ADMINISTRATIVO DEL MEDIO AMBIENTE - PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE FLUIDOS
DAMA- SIEMENS SOCIEDAD ANÓNIMA
DIRECCIÓN GENERAL MARÍTIMA -DIMAR- SIKA COLOMBIA S.A.
EMPRESA COLOMBIANA DE SOCIEDAD COLOMBIANA DE TOXICOLOGÍA
PETROLEOS S.A. -ECOPETROL- SOCIEDAD DE ACUEDUCTO
EMPRESA MUNICIPAL DE ACUEDUCTO ALCANTARILLADO Y ASEO DE B/QUILLA E.S.P.
ALCANTARILLADO Y ASEO DE FUNZA E.S.P. SUPERINTENDENCIA DE INDUSTRIA Y
EMPRESA DE ACUEDUCTO Y COMERCIO
ALCANTARILLADO DE ZIPAQUIRÁ UNIVERSIDAD DE AMÉRICA
EMPRESAS PÚBLICAS DE MEDELLÍN UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
S.A. ESP UNIVERSIDAD JAVERIANA
ESCOBAR & MARTÍNEZ S.A. UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO
ETERNA S.A. UNIVERSIDAD INNCA DE COLOMBIA
EXTRUCOL S.A. UNIVERSIDAD MILITAR NUEVA GRANADA
FRIGORÍFICO GUADALUPE S.A. URIGO LTDA.
FUNDACIÓN NATURA COLOMBIA
FUNDACIÓN SALVEMOS EL MEDIO
AMBIENTE -FUNDAMBIENTE-
ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.
DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 164
CONTENIDO
Página
0. INTRODUCCIÓN ..........................................................................................................1
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN ........................................................................2
2. TÉRMINOS Y DEFINICIONES .....................................................................................2
3. EVALUACIONES Y RECOMENDACIONES................................................................5
3.1 MÉTODOS DE ENSAYO DE BIODEGRADACIÓN .....................................................5
3.2 PARÁMETROS ANALÍTICOS Y EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

DE ENSAYO.................................................................................................................7
3.3 NIVELES DE APROBACIÓN PARA BIODEGRADACIÓN .........................................7
3.4 TOXICIDAD A LAS BACTERIAS ................................................................................8
3.5 ESTRATEGÍAS DE ENSAYO ......................................................................................9
DOCUMENTO DE REFERENCIA..........................................................................................26
ANEXOS
ANEXO A (Informativo)
COMPARACIÓN DE NORMAS INTERNACIONALES ISO CON LAS DIRECTRICES
DE LA ORGANIZACIÓN PARA LA COOPERACIÓN Y EL DESARROLLO
ECONÓMICOS (OCDE) .........................................................................................................22
ANEXO B (Informativo)
BIBLIOGRAFÍA......................................................................................................................23
TABLAS
Tabla 1. Panorama de los métodos ISO .............................................................................12

CALIDAD DEL AGUA.

SELECCIÓN DE ENSAYOS PARA BIODEGRADABILIDAD
0. INTRODUCCIÓN
0.1 Esta guía es idéntica por traducción al documento ISO/TR 15462. Para propósitos de
esta guía se han incluido las normas técnicas nacionales idénticas a las normas ISO citadas en
el texto.
0.2 La biodegradación de sustancias e ingredientes de aguas residuales depende no

solamente de las estructuras moleculares del material de ensayo, sino también de importantes
factores adicionales, tales como:
- Medios de ensayo acuáticos o terrestres.
- Condiciones de ensayo aerobias o anaerobias.
- Fuente y concentración de los microorganismos del inóculo.
- Aclimatación y adaptación del inóculo.
- Concentración del material de ensayo.
- Presencia de otro sustrato orgánico.
- Posibles efectos tóxicos del material de ensayo bajo condiciones de ensayo.
- Propiedades físicas y químicas y biodisponibilidad del material de ensayo (por ejemplo,

volatilidad, solubilidad en agua, adsorción sobre superficies).
- Propiedades físicas y químicas del sistema de ensayo (por ejemplo, volumen de la mezcla
de ensayo y recipientes de ensayo, eliminación de CO2 y concentración de oxígeno,
temperatura).
- Condiciones de ensayo (por ejemplo, mezclado, agitación, modo de aireación,

recipientes de ensayos estáticos o dinámicos, cerrados o abiertos).
- Duración del ensayo.
1 de 26
- Parámetros analíticos usados (parámetros de suma, tales como DQO, DBO, CO2 o análisis
específico de sustancias).
Ya que muchos factores pueden influir en los resultados de ensayo, no es posible definir un
método "verdadero" o "de referencia". La reproducibilidad de los resultados de ensayo
utilizando diferentes métodos o condiciones, o incluso con métodos de ensayo idénticos puede
ser baja y se pueden obtener resultados de ensayo diferentes. Usualmente, un material de
ensayo que es fácilmente biodegradable o es deficientemente biodegradable producirá
resultados de ensayo similares tanto en réplicas como en repeticiones. Las sustancias que son
biodegradables parcial o moderadamente y necesitan agrupaciones especiales de bacterias o
largos períodos de adaptación, con frecuencia producirán resultados desiguales.
Los ensayos de biodegradación considerados en esta guía están diseñados para determinar la
biodegradabilidad de las sustancias químicas o de aguas residuales bajo condiciones
normalizadas. Se requieren resultados de ensayo para predecir el comportamiento de
biodegradación de los materiales de ensayo en ambientes acuáticos naturales o técnicos, por
ejemplo, en ríos, lagos, estanques, plantas de tratamiento de aguas y digestores. Para mejorar
su valor predictivo, los métodos de ensayo deberían simular hasta cierto punto estos
ambientes. Debido a que las condiciones en estos ambientes son con frecuencia muy
diferentes, algunas veces incluso diametralmente opuestos, los métodos estándar reflejan
estas diferencias. Por tanto, es necesario suministrar un número suficiente de métodos de
ensayo normalizados de manera que se pueda escoger el mejor para un propósito específico.
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN
El presente documento presenta los aspectos generales de los ensayos de biodegradación

para el ambiente acuático, normalizados por la ISO, al igual que recomendaciones acerca de
su uso. En el Anexo A se incluyen las directrices de biodegradación para el medio acuático de
la ORGANIZACIÓN PARA LA COOPERACIÓN Y EL DESARROLLO ECONÓMICO, OCDE,
debido a que estos métodos algunas veces son idénticos a los de las normas ISO, o son
complementos útiles. Además, los ensayos inhibitorios con bacterias e inóculos bacterianos
mixtos se incluyen en el presente documento debido a que la posible toxicidad del inóculo es
información importante para la selección y ejecución de los ensayos de biodegradación.
Igualmente, es muy útil para determinar de antemano la toxicidad bacteriana mediante el
mismo inóculo que el ensayo de biodegradación planificado, antes de empezar el ensayo de
biodegradación.
2. TÉRMINOS Y DEFINICIONES
Para los propósitos de este documento se aplican los siguientes términos y definiciones.
2.1 Lodos activados (Activated Sludge). Biomasa y masa inerte producidas en el tratamiento
aerobio de aguas residuales por el crecimiento de bacterias y otros microorganismos en
presencia de oxígeno disuelto.
2.2 Demanda bioquímica de oxígeno, DBO (Biochemical Oxygen Demand, BOD).

Concentración de masa de oxígeno disuelto consumido bajo condiciones especificadas
mediante la oxidación biológica aerobia de un compuesto químico o materia orgánica en agua.
NOTA Para los propósitos de este documento, se expresa como miligramos de captación de oxígeno por
miligramo o gramo de compuesto de ensayo.
2
2.3 Fase de biodegradación (Biodegradación Phase). Tiempo desde el final de la fase de

latencia de un ensayo hasta que se alcance aproximadamente el 90% del nivel máximo de
biodegradación.
NOTA Se expresa en días.
2.4 Biogás (Biogas). Dióxido de carbono y metano producidos por bacterias anaerobias.
2.5 Demanda química de oxígeno (DQO), (Chemical Oxigen Demand, COD). Concentración
de masa de oxígeno equivalente a la cantidad de un oxidante especificado consumido por un
compuesto químico o materia orgánica, cuando se trata una muestra de agua con ese oxidante
bajo condiciones definidas.
NOTA Se expresa como captación de miligramos de oxígeno por miligramo o gramo de compuesto de ensayo.
2.6 Concentración de sólidos suspendidos de un lodo activado (Concentration of Suspended

Solids of an Activated Sludge). Cantidad de sólidos obtenidos por filtración o centrifugación, en
condiciones conocidas de un volumen conocido de lodo activado y secado a 105 °C aproximado
hasta obtener masa constante.
NOTA También se usan con frecuencia sólidos mezclados suspendidos en licor.
2.7 Grado de adsorción sobre lodos activados (Degree of adsorption on activated sludge).
Porcentaje de un compuesto de ensayo eliminado mediante cualquier proceso excepto
biodegradación bajo las condiciones de un ensayo estático acuoso específico con lodos activados,
determinado por comparación de la concentración al inicio y al final del ensayo.
2.8 Lodos digeridos (Digested Sludge). Mezcla de las fases asentadas de aguas residuales y
lodos activados, incubadas en un digestor anaerobio a aproximadamente 35° C para reducir la
biomasa y los problemas de olor, y para mejorar la deshidratación del lodo, compuesta de una
agrupación de bacterias metanogénicas y fermentativas anaerobias que producen dióxido de
carbono y metano.
2.9 Carbono inorgánico disuelto (CID), (Disolved Inorganic Carbon, DIC). Parte del
carbono inorgánico en una muestra de agua, que no se puede eliminar mediante separación de
fase especificada.
NOTA Se puede obtener separación de fases, por ejemplo, mediante centrifugación de la muestra de agua a
2
40 000 m/s durante 15 min o filtración de membrana usando membranas con poros de 0,45 µm de diámetro.
2.10 Carbono orgánico disuelto (COD), (Dissolved Organic Carbon, DOC). Parte del carbono
orgánico en una muestra de agua, que no se puede eliminar mediante separación de fase
especificada.
NOTA Se puede obtener separación de fases, por ejemplo, mediante centrifugación de la muestra de agua a
2
40 000 m/s durante 15 min o filtración de membrana usando membranas con poros de 0,45 µm de diámetro.
2.11 Fase de latencia (Lag Phase). Tiempo desde el comienzo de un ensayo hasta que se
haya logrado la adaptación, la selección de los microorganismos que se degradan, o ambos, y
que el grado de biodegradación de un compuesto químico o materia orgánica se haya
incrementado a aproximadamente el 10 % del nivel máximo de biodegradación.
3
2.12 Nivel máximo de biodegradación (Maximum Level of Biodegradation). Grado máximo

de biodegradación de un compuesto químico o materia orgánica en un ensayo, por encima del
cual no ocurre biodegradación durante el ensayo.
NOTA Se expresa en porcentaje.
2.13 Sólidos suspendidos en el licor mezclado (Mixed Liquor Suspended Solids, MLSS).
Concentración de sólidos expresada en una forma seca especificada, en el licor mezclado.
2.14 Fase de meseta (Plateau Phase). Tiempo desde que finaliza la fase de biodegradación,
hasta que termina el ensayo.
2.15 Preacondicionamiento (Pre-conditioning). Preincubación de un inóculo bajo las

condiciones del ensayo en ausencia del compuesto químico, de materia orgánica, o de ambos,
con el objeto de mejorar el desempeño del ensayo mediante aclimatación de los
microorganismos a las condiciones de ensayo.
2.16 Pre-exposición (Pre-exposure). Pre-incubación de un inóculo en presencia de un

compuesto químico, materia orgánica o de ambos, con el fin de mejorar la capacidad de este
inóculo para biodegradar el material de ensayo mediante adaptación y selección de los
microorganismos.
2.17 Biodegradación anaerobia primaria (Primary Anaerobic Biodegradation). Nivel de

degradación logrado cuando un compuesto de ensayo experimenta cualquier cambio estructural
diferente de la mineralización completa, como resultado de acción microbiana anaerobia.
2.18 Biodegradación primaria. (Primary Biodegradation). Cambio estructural (transformación)

de un compuesto químico por microorganismos, que da como resultado la pérdida de una
propiedad específica.
2.19 Demanda teórica de oxígeno (DTO), (Theorical Oxygen Demand, ThOD). Cantidad
teórica máxima de oxígeno requerida para oxidar completamente un compuesto químico,
calculada de la fórmula molecular.
NOTA En este caso, se expresa como captación de oxígeno en miligramos, por miligramo o gramo de compuesto
de ensayo.
2.20 Carbono orgánico total, COT (Total Organic Carbon). Totalidad de carbono presente
en la materia orgánica que está disuelta y suspendida en el agua.
2.21 Biodegradación aerobia final (Ultimate Aerobic Biodegradation). Disgregación de un

compuesto químico o de materia orgánica por microorganismos en presencia de oxígeno en
dióxido de carbono, agua y sales minerales de cualquier otro elemento presente
(mineralización) y la producción de nueva biomasa.
2.22 Carbono inorgánico total, CIT (Total Inorganic Carbon, TIC). Totalidad de carbono
inorgánico en el agua, que se obtiene del dióxido de carbono y de carbonato.
2.23 Cantidad teórica del dióxido de carbono formado (CTCO2), (Theorical Amount of
Formed Carbon Dioxide, ThCO2). Cantidad máxima de dióxido de carbono formada después
de oxidación completa de un compuesto químico, calculada a partir de la fórmula molecular.
NOTA Se expresa en miligramos de dióxido de carbono por miligramo o gramo de compuesto de ensayo.
4
2.24 Cantidad teórica de carbono inorgánico, CTCO (Theorical Amount of Inorganic

Carbon, ThIC). Cantidad máxima de carbono inorgánico formada después de la oxidación
completa de un compuesto químico, calculada estequiométricamente a partir de la fórmula
molecular.
NOTA Se expresa en miligramos de carbono por miligramo o gramo de compuesto de ensayo.
2.25 Biodegradación anaerobia final. (Ultimate Anaerobic Degradation). Nivel de

degradación logrado cuando un compuesto de ensayo es utilizado por microorganismos
anaerobios, que da como resultado la producción de dióxido de carbono, metano, sales
minerales y nuevos componentes celulares microbianos (biomasa).
3. EVALUACIONES Y RECOMENDACIONES
3.1 MÉTODOS DE ENSAYO DE BIODEGRADACIÓN
Los métodos de ensayo para biodegradabilidad aerobia no tienen potencial equivalente,

principalmente debido a las diferentes densidades microbianas, las concentraciones de las
sustancias de ensayo y las duraciones de ensayo usadas. La norma ISO 7827 (ensayo para la
eliminación de DQO), la NTC 4449 (ISO 9439, ensayo de emisiones de CO2), la norma ISO 9408
(ensayo de consumo de oxígeno), la norma ISO 10708 (DBO en un ensayo con botella cerrada, en
dos fases) y la norma ISO 14593 (ensayo de espacio de cabeza de CO2) tienen un potencial
aproximadamente igual. Estos métodos son procedimientos ampliamente usados para estudios de
biodegradación en ambiente acuático y corresponden en principio a los ensayos de la OCDE
para biodegradabilidad inmediata. La duración del ensayo es de 28 d. Se usan con frecuencia
lodos activados como inóculo, con una concentración máxima de 30 mg/L de sustancia seca.
Los matraces de ensayo de la norma ISO 10707 (ensayo en botella cerrada) tienen una baja
inoculación, no se revuelven ni airean y por tanto tienen un potencial de degradación más bajo,
pero son especialmente útiles y aplicables a compuestos de ensayo volátiles e inhibidores.
Este ensayo corresponde en principio a los ensayos de DBO conocidos (véanse las normas
ISO 5815-1, ISO 5815-2 y la NTC 3629), que sin embargo no se recomiendan para sustancias
debido a que las condiciones son muy estrictas y el tiempo del ensayo (5 d) es muy corto.
Muchas sustancias se clasificarían como no biodegradables y por tanto se discriminarían. El
DBO5 es el ensayo de biodegradación acuática más antiguo y ha demostrado durante muchos
años su conveniencia para aguas residuales.
La NTC 4182 (ISO 9887, ensayo SCAS) y la NTC 4255 (ISO 9888, ensayo de Zahn-Wellens)
son ensayos con una alta concentración de inóculo. La NTC 4182 (ISO 9887) utiliza un sustrato
adicional (aguas residuales) y su duración se puede extender más de los 28 d usuales. En
consecuencia, estos ensayos tienen un alto potencial de degradación y se pueden usar para
determinar la biodegradabilidad intrínseca de las sustancias químicas, lo cual, en la filosofía de
la OCDE se denomina "biodegradabilidad inherente". Ya que estos ensayos son sistemas
abiertos basados en determinación del DQO, no se pueden aplicar directamente a sustancias
volátiles o insolubles en agua. La NTC 4256 (ISO 11733, ensayo de simulación de lodos
activados) es un ensayo dinámico continuo que simula las plantas de tratamiento de aguas
residuales que incluyen técnicas de nitrificación y desnitrificación. La norma ISO 14592 (ensayo
de simulación de río/ensayo con matraz de agitación) es un ensayo especial para
biodegradación de sustancias a concentraciones reales ambientalmente bajas y es adecuado
para determinar la cinética de la biodegradación en el ambiente acuático. La norma ISO 14592-1 es
un ensayo estático que simula cuerpos de agua quietos como lagos o estanques; la
norma ISO 14592-2 es un ensayo de sistema dinámico y simula aguas que fluyen, como
las de los ríos. La NTC 4233 (ISO 11734, medición de la producción de biogás) es el
único ensayo normalizado para biodegradabilidad anaerobia y se aplica independientemente
5
en ensayos de biodegradabilidad aerobia. Se debería dar prioridad para la aplicación a aquellas

sustancias químicas que no se han degradado aerobiamente lo suficiente, que preferiblemente se
adsorben sobre lodos activados, y que entran de esta manera a digestores anaerobios en plantas de
tratamiento de aguas residuales. La norma ISO 16221 es una norma para ensayos de
biodegradación marina e incluye cinco ensayos diferentes con parámetros analíticos establecidos,
que se basan en ensayos con agua dulce, adaptados para condiciones marinas.
La cinética y el grado de degradación pueden ser variables en diferentes compartimientos

ambientales; por tanto, los resultados de diferentes métodos de ensayo pueden variar para el
mismo material de ensayo. Es claro que se esperan diferencias entre los ensayos de
biodegradación aerobios y anaerobios, al igual que entre sistemas de ensayo con agua dulce y
con agua salada. También es obvio que el potencial de degradación se incrementa si las
condiciones de ensayo son favorables. Los ensayos con altas concentraciones de inóculo y
que permiten incluso preexposición del inóculo y extender la duración del ensayo hasta
alcanzar la fase meseta mostrarán degradación con mayor frecuencia, que los ensayos con
condiciones menos favorables. Un parámetro importante es una concentración de ensayo
óptima que no sea demasiado alta, de manera que se evite el riesgo de inhibición, ni
demasiado baja, de manera que sea difícil o imposible determinar con exactitud y precisión la
eliminación de DQO, la captación de oxígeno o la producción de dióxido de carbono. En el
extremo, a concentraciones muy bajas (por ejemplo, mucho menores de 1 mg/L), es posible
que no ocurra biodegradación debido a que el valor umbral para una degradación exitosa es
demasiado bajo.
Sin embargo, las sustancias químicas que no se degradan en los ensayos más estrictos sobre
biodegradabilidad inmediata pueden degradarse en ensayos inherentes potentes. No obstante,
pueden no degradarse en el ensayo de simulación de lodos activados realizado en forma
continua. Los ensayos sobre biodegradabilidad inmediata pueden arrojar resultados
contradictorios que no se pueden explicar solamente por una potencia de degradación
diferente, como en el caso del ensayo de botella cerrada, que es más débil (véase la norma
ISO 10707). La experiencia también demuestra que los ensayos, que se supone que tienen el
mismo potencial de degradación (como las normas ISO 7827, ISO 9408 y la NTC 4449 (ISO
9439)) y que se preparan, agitan y airean en forma idéntica y usan la misma concentración de
inóculo, pueden dar resultados diferentes. La razón de esto son las diferentes técnicas
analíticas usadas. El consumo, y en consecuencia, la medición de oxígeno, son diferentes de la
producción y medición del carbono, que es el último paso en los procesos de biodegradación
aerobia. Además, una parte del dióxido de carbono quedará sin disolver en el agua del ensayo
y su determinación demora más allá de su producción biológica. La cantidad total de dióxido de
carbono se mide sólo después de la acidificación al final del ensayo. Esta falla en el ensayo de
producción de CO2 se elimina casi completamente cuando se usa el método de espacio de
cabeza de CO2 (norma ISO 14593). Otra mejora es un nuevo desarrollo analítico que determina
el CO2 producido utilizando la medición de conductividad continua en lugar del CID. Los grados
equivalentes de biodegradación demorarán más que la eliminación del DQO o la captación de
oxígeno y pueden influir en el cumplimiento de la ventana de 10 d (véase el numeral 3.5).
Incluso dentro de un método de ensayo se pueden obtener resultados diferentes en recipientes

paralelos, por ejemplo, si las fases de latencia varían y el ensayo finaliza antes de alcanzar la
fase de meseta. La experiencia ha demostrado que las sustancias químicas fácilmente
degradables usualmente dan resultados comparables, al igual que las que tienen una
degradación deficiente, lo que muestra su persistencia relativa en casi todos los sistemas de
ensayo. Las sustancias químicas con capacidad intermedia para degradarse dan resultados
más coherentes en ensayos con mayor potencial de degradación o cuando se usan inóculos
preexpuestos. Sin embargo, las sustancias con una biodegradación deficiente se pueden
eliminar bien en plantas de tratamiento de aguas residuales si tienen, por ejemplo, un alto
potencial de adsorción sobre lodos activados. Estos procesos de adsorción no siempre ocurren
6
en paralelo con los procesos de biodegradación. Para la determinación de esta eliminación

especial, es adecuada la norma ISO 18749 (ensayo estático).
3.2 PARÁMETROS ANALÍTICOS Y EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS DE ENSAYO
En la mayoría de ensayos normalizados se solicita información sobre biodegradabilidad

final, es decir, la degradación de una sustancia orgánica en catabolitos inorgánicos CO2 y
agua. Para determinar la degradación aerobia completa (mineralización) se usan los
parámetros de suma DQO, DBO o de emisión de CO2. La DBO y el CO2 siempre indican
claramente biodegradabilidad, mientras que la eliminación del DQO se puede deber a
biodegradación al igual que a eliminación abiótica, por ejemplo la adsorción sobre lodos
activados o evaporación. En el caso de sustancias con una baja solubilidad en agua, el
DQO no se puede determinar debido a que la sustancia de ensayo se eliminaría de la
solución por filtración o centrifugación, y por tanto no se puede usar. En los ensayos
anaerobios, la producción de biogás (metano y dióxido de carbono), medida por cambios en
la presión, es el parámetro analítico usual.
Por razones analíticas, los parámetros de suma requieren concentraciones bastante altas de la
sustancia de ensayo. Si la concentración de ensayo debiera estar lo más cerca posible de las
concentraciones naturales, por ejemplo, por razones cinéticas, deberían ser muy bajas en el
ensayo. En este caso se usan técnicas analíticas específicas para sustancias, para investigar
las transformaciones biológicas de las sustancias químicas, la denominada biodegradabilidad
primaria. Si se requieren incluso concentraciones más bajas, son necesarias sustancias
radioetiquetadas. También puede haber otras técnicas analíticas adecuadas para usar después
de la biodegradación, pero sólo los métodos mencionados aquí se usan en ensayos
normalizados.
En la medición del DQO, la concentración inicial se compara con la concentración final. Cuando
se usan DBO y CO2, las mediciones durante el ensayo se acumulan y comparan al final con los
respectivos valores teóricos DTO o CTCO2, que se calculan de la fórmula molecular de la
sustancia de ensayo. De los valores medidos se calculan los porcentajes de biodegradación y
se trazan contra el período de incubación, para mostrar una curva de biodegradación. Con
frecuencia las curvas de biodegradación tienen:
- una fase de latencia marcada, en la que los microorganismos del inóculo se adaptan a
la sustancia de ensayo, seguida de,
- la fase de degradación real, en la cual ocurre la conversión de la sustancia de ensayo,

el DQO es eliminado, se utiliza oxígeno y se produce CO2, y
- una fase estacionaria (de meseta), en la que finaliza la biodegradación y no se mide una
degradación significativa adicional.
El resultado del ensayo es usualmente el grado de degradación en porcentaje, determinado

como un valor medio en la fase estacionaria (de meseta). Si esto no es posible debido a que
solamente hay unos pocos puntos de datos disponibles o no se obtiene una fase estacionaria
(de meseta) clara, en su lugar se usa el mayor valor de la fase estacionaria (de meseta) o el
valor medido el último día del ensayo.
3.3 NIVELES DE APROBACIÓN PARA BIODEGRADACIÓN
El porcentaje de biodegradación, como se expresa por la eliminación del DQO para la

biodegradabilidad final o la sustancia de ensayo eliminada para biodegradabilidad primaria,
puede llegar al 100 %. Se debería verificar en un ensayo que los procesos de eliminación
7
abiótica, tales como la adsorción física, son significantemente pequeños, o se deberían

considerar en el cálculo. Bajo las condiciones estáticas limitantes en ensayos de
biodegradación inmediata (véase el numeral 3.5) se supone que no se puede esperar el 100 %
en una ventana de 10 d, o incluso en un tiempo total de ensayo de 28 d, y por tanto los valores
> 70 % de DQO y la eliminación de la sustancia de ensayo > 80 %, determinados con un
método analítico específico para la sustancia, han sido adoptados como niveles de aprobación
final o biodegradación primaria. La experiencia ha demostrado que las sustancias que cumplen
estos criterios usualmente alcanzan niveles más altos en ensayos de simulación de lodos
activados y en el ambiente real. De hecho, en muchos casos más del 70 % y el 80 %
respectivamente se encuentran en los ensayos estáticos inmediatos.
La producción de CO2 y captación de oxígeno en ensayos estáticos expresados como un

porcentaje de los valores teóricos respectivos CTCO2 y DTO es siempre menor que el
porcentaje determinado por la eliminación del DQO (véanse las referencias [2] y [3]). Esto se
puede ver especialmente en casos en que se hacen mediciones simultáneas, por ejemplo, usando
el método de combinación de CO2/DQO descrito en el Anexo D de la NTC 4449 (ISO 9439). La
razón para esto es que en el metabolismo bacteriano parte del carbono orgánico de la sustancia de
ensayo se oxida bioquímicamente y se convierte en CO2, mientras que otras fracciones son
sintetizadas en un nuevo material celular o en productos metabólicos orgánicos. Estas fracciones
no se oxidan y no contribuyen a la producción de CO2, sin embargo, son parte de la biodegradación
final. La proporción de carbono orgánico convertido a material celular depende de factores tales
como la naturaleza de la sustancia de ensayo y la recolección de especies bacterianas presentes.
Sin embargo, no hay un solo valor que se pueda adoptar como un nivel de "aprobación general" en
estos casos. Los datos de ensayos interlaboratorio realizados durante la normalización y
establecimiento de estos métodos de ensayo y la experiencia de muchos laboratorios condujo al
nivel de aprobación aceptado y usado actualmente, de >60 % de DTO o de CTCO2 en ensayos de
biodegradación inmediata. En la referencia [3] se presentan ejemplos y una discusión sobre los
niveles de aprobación basados en la OCDE.
3.4 TOXICIDAD A LAS BACTERIAS
Se ha observado que las sustancias químicas que son inhibidoras de las bacterias y no se
degradan a las concentraciones de ensayo usuales, se pueden degradar a concentraciones
menores del compuesto de ensayo o mediante el uso de un inóculo de otra fuente o después
de pre-adaptación. De manera que se requiere información adicional para evitar la clasificación
de una sustancia química como de biodegradación deficiente. Sin embargo, en realidad no se
degrada debido a que es tóxica bajo las condiciones de ensayo. Una forma de evitar esto es
agregar un control de inhibición durante el ensayo. La mayoría de los ensayos estándar
incluyen recipientes adicionales que contienen juntos la sustancia de ensayo y la de referencia.
El grado de biodegradación de esta mezcla es una buena evaluación de cualquier inhibición.
Sin embargo, puede ser mejor tener esta información antes de iniciar un ensayo de
biodegradación costoso y dispendioso, y conocer la concentración eficaz EC20 de la sustancia
de ensayo antes de escoger la concentración de ensayo correcta. Por tanto, se recomienda
llevar a cabo ensayos de toxicidad bacteriana usando el mismo inóculo mezclado que en los
ensayos de degradación, que con frecuencia son lodos municipales activados. Los métodos
adecuados para condiciones aerobias son el ensayo para inhibición de consumo de oxígeno
por lodos activados (véase la norma ISO 8912) y el ensayo sobre el crecimiento de
microorganismos de lodos (véase la norma ISO 15522). Para ensayos de biodegradación
anaerobia este control de inhibición no es posible, debido a la alta concentración de material
orgánico en el ensayo. Sin embargo, dos ensayos de toxicidad con diferentes condiciones, la
norma ISO 13641-1 y la norma ISO 13641-2 están disponibles para diferentes concentraciones
del lodo digerido y la duración de los ensayos. Los resultados de estas investigaciones de
toxicidad no sólo pueden usarse para escoger los mejores ensayos de degradación y las
concentraciones de ensayo correctas, sino también para predecir el comportamiento tóxico de
8
una sustancia de ensayo en plantas de tratamiento de aguas residuales o digestores. En este

contexto, también se debería mencionar el ensayo de inhibición de nitrificación (ISO 9509);
esto permite la predicción de los efectos tóxicos sobre el proceso de nitrificación microbiana,
que es muy sensible.
Además, existen ensayos normalizados de toxicidad para las bacterias, que utilizan cultivos
puros de bacterias. Por ejemplo, la norma ISO 10712 usa Pseudomonas putida y las normas
ISO 11348 (todas las partes) usan la bacteria luminiscente Vibrio Fischeri. No se recomienda
usar estos métodos debido a que las concentraciones efectivas obtenidas pueden estar más
allá de lo que ocurre en los ensayos de biodegradación o en el ambiente real. La razón puede
ser que la sustancia de ensayo puede ser tóxica para los especímenes de ensayo usados, pero
no para la comunidad microbiana de bacterias de lodos activados, más tolerante. Existe el
riesgo de que para muchas sustancias se prevea una inhibición alta que en realidad no
ocurrirá, y que por tanto se usen concentraciones de ensayo bajas que no son favorables para
los métodos analíticos usuales.
3.5 ESTRATEGIAS DE ENSAYO
Puesto que existen diferencias entre la complejidad, duración, calidad de los resultados y costos
de los diferentes ensayos, éstas se deberían considerar cuando se escoge qué ensayo o
estrategia de ensayo usar al comienzo de un estudio. La selección de un ensayo depende
normalmente del propósito de éste o de los requisitos legales que se deben cumplir, pero
también puede depender de las propiedades físicas o químicas de la sustancia química de
ensayo. Por ensayo, los componentes de ensayo volátiles se pueden ensayar únicamente en
sistemas cerrados tales como los de las normas ISO 10707, ISO 10708 ó ISO 11593. Las
sustancias químicas insolubles o de una solubilidad deficiente no se pueden evaluar por ninguno
de los métodos basados en la determinación del DQO. En la norma ISO 10634 se brinda
orientación para la preparación de sustancias químicas de difícil ensayo.
Usualmente, los ensayos de biodegradación comenzarán con un método que usa una densidad
de células baja para responder la pregunta: ¿el compuesto de ensayo es biodegradable en
cualquiera de los compartimientos ambientales? Un valor bajo o de cero para la biodegradación
obtenida en un ensayo estático simple puede ser suficiente en algunos casos. De lo contrario, se
puede aplicar un ensayo con una densidad celular más alta, un período de ensayo más
prolongado o con un inóculo preexpuesto a la sustancia química. Cuando se espera que una
sustancia de ensayo tenga una biodegradación deficiente, tendría sentido comenzar con un
método que use estas condiciones mejoradas y averiguar si hay potencial de biodegradación o
eliminación. Los inóculos preadaptados se pueden obtener en uno de los ensayos de alta
densidad según la NTC 4182 (ISO 9887) o la NTC 4255 (ISO 9888). Debido a su complejidad,
ensayos como el de simulación de lodos activados (NTC 4256 (ISO 11733)) o el modelo del río
(ISO 14592-2) no se aplicará usualmente sino hasta después de que se hayan llevado a cabo
otros ensayos más sencillos. Los ensayos de biodegradación bajo condiciones anaerobias o
marinas se hacen por solicitud especial si esta información es necesaria.
Para el ensayo rutinario de sustancias químicas, la estrategia de ensayo del Programa de

Ensayo de Sustancias Químicas de la OCDE es muy importante. En el Anexo A se comparan las
directrices de la OCDE aplicadas a ensayos de biodegradación acuática se enumeran y
comparan con las Normas Internacionales ISO. Los procedimientos de estas directrices
generalmente son los mismos que los de las normas ISO, pero estas últimas son más precisas y
claras que las directrices OCDE.
La estrategia de la OCDE consiste en aplicar al comienzo del ensayo un método de densidad

celular baja simple, es decir, un ensayo denominado de "biodegradabilidad inmediata", que exige
que:
9
a) Se utilice un método de ensayo normalizado y aceptado, como el de las directrices de la

OCDE 301A-F o un ensayo ISO comparable de la misma calidad.
b) El inóculo no está preexpuesto a la sustancia de ensayo;
c) El ensayo finaliza después de 28 d aproximadamente, y
d) Se usa uno de los parámetros de suma, COD, DBO o CO2.
Un nivel de aprobación dado se alcanza a los 10 d después de comenzar la fase de degradación,

que se define como el tiempo en que el alcance de la mineralización excede el 10 % y es idéntico al
final de la fase de latencia. Los niveles de aprobación que se deberían alcanzar dentro de esta
ventana de 10 d son > 70 % de eliminación del COD en comparación con la concentración inicial
medida, ≥ 60 % del DBO del DTO calculado ó ≥ 60 % de emisión de CO2 en comparación con el
CTCO2 calculado.
Si bajo estas condiciones se cumple la "ventana de 10 d", se supone que la mineralización

completa se logrará dentro del período de ensayo usual de 28 d, o dentro de un tiempo
razonable en el ambiente real. Esto se puede verificar cuando en el período de ensayo restante
se alcanza una fase de meseta alta, es decir, la etapa en la cual la degradación es completa, o
por comparación de los datos de ensayos más estrictos sobre biodegradabilidad inherente o de
los datos medidos en el ambiente real. Una sustancia recibe la etiqueta "fácilmente
biodegradable" si se cumplen estos criterios y no es necesario medir una degradación completa
bajo las condiciones de ensayo más severas, y dentro del período de ensayo corto de 28 d de
los ensayos sobre biodegradabilidad inmediata. Sin embargo, esta hipótesis sólo es razonable
para sustancias químicas puras pero no necesariamente para mezclas químicas o sustancias
químicas que contienen proporciones significativas de impurezas. Por esta razón, las
sustancias químicas se deberían someter a ensayo en su forma más pura posible. De otra
parte, el ensayo del comportamiento ambiental de las sustancias químicas, de acuerdo con
leyes o directivas requiere con frecuencia el uso de cargas de producción reales con todas las
impurezas.
El siguiente paso para las sustancias que no son fácilmente biodegradables es intentar
demostrar una biodegradabilidad inherente. Se considera que una sustancia tiene
biodegradabilidad inherente, si en un ensayo apropiado se logra degradación final
(mineralización). Algunas sustancias no son persistentes y se puede suponer que se degradan
en un medio acuático a mediano o largo plazo, por ejemplo, en plantas de tratamiento de aguas
residuales o en otros compartimientos ambientales. Los dos ensayos principales para
biodegradabilidad inherente, las Directrices de la OCDE 302, A y B, corresponden a la NTC 4182
(ISO 9887) y a la NTC 4255 (ISO 9888). Permiten que se ensayen únicamente sustancias químicas
solubles en agua, ya que el COD se usa como un parámetro analítico. Sin embargo, se pueden
usar para preexponer un inóculo para uso en otros ensayos, por ejemplo, el de la norma ISO 9408, la
NTC 4449 (ISO 9439) o el de la norma ISO 14593.
La última categoría de ensayo en la filosofía de la OCDE consiste en los ensayos de

simulación, que reproducen en laboratorio, en la medida de lo posible, las condiciones
ambientales definidas y de esta manera brindan más y mejor información sobre el
comportamiento de degradación de sustancias bajo condiciones ambientales simuladas, que
los simples ensayos estáticos. El más conocido es el ensayo de simulación de lodos activados
(NTC 4256 (ISO 11733)), que corresponde a la OCDE 303 A.
Otros ensayos de esta categoría son el ensayo de "biopelícula" (OECD 303 B) y los ensayos a
bajas concentraciones (ISO 14592-1 e ISO 14592-2), que simulan las condiciones de agua
superficial.
10
La etiqueta "fácilmente biodegradable" es un criterio muy importante para muchos propósitos

en el campo de ensayo de productos. Una sustancia fácilmente biodegradable se considera
degradada en forma completa y rápida en cualquier compartimiento ambiental aerobio,
especialmente en plantas de tratamiento de aguas residuales. Por tanto, son innecesarios
ensayos adicionales sobre biodegradación y se puede reducir la necesidad de otros
parámetros ecológicos tales como bioacumulación o ecotoxicidad. Sin embargo, la experiencia
obtenida con muchas sustancias durante las últimas décadas demostró que los criterios
existentes para la facilidad de la biodegradación no son incuestionables. Los estudios con
detergentes, realizados para un reglamento europeo para ensayo de detergentes y con
sustancias químicas en general, demostraron que los productos que no cumplieron los criterios
de "biodegradabilidad inmediata", no obstante, fueron eliminados adecuadamente en ensayos
de simulación y en el ambiente real. Los criterios de la OCDE para "biodegradabilidad
inmediata" parecen ser demasiado estrictos; por tanto, el Reglamento Europeo más reciente
para ensayo de detergentes ya no estipula la ventana de 10 d. Un detergente se puede
considerar como biodegradable si en el ensayo estándar basado en DBO o en CO2 los valores
límites de ≥ 60 % se alcanzan en 28 d. Adicionalmente, se debería tener en cuenta que los
detergentes no son sustancias químicas puras sino mezclas de diferentes compuestos
químicos. Por tanto, la biodegradabilidad de los detergentes se debería considerar en una
forma diferente de la biodegradabilidad de los compuestos químicos puros.
Un grupo de expertos comparó los resultados de los ensayos de biodegradabilidad inmediata

con los resultados de los ensayos inherentes y de simulación, y con los datos del ambiente real
(véase la referencia [1]). Las sustancias que alcanzaron los niveles de aprobación dados del 70 %
COD y ≥ 60 % DBO o CO2 en un ensayo de "biodegradabilidad inmediata" se verificaron contra el
logro de un nivel de mineralización muy alto en ensayos (> 90 % de eliminación del COD o > 75 %
DBO o CO2 después de 28 d) o en el ambiente. La investigación estadística de más de 800
resultados de ensayo con sustancias químicas demostró que el cumplimiento de la ventana de 10 d
no permitía, en aproximadamente una tercera parte de todos los casos, ninguna predicción
confiable de mineralización completa, debido a que fueron posibles interpretaciones de falsos
positivos o falsos negativos. Con la eliminación del COD como parámetro, el criterio de
biodegradación inmediata > 70 % en 10 d usualmente se alcanza mucho más fácilmente que la
captación de oxígeno o la producción de CO2, debido a que estos parámetros analíticos se basan
en un producto final y no sólo en la eliminación de la sustancia. Para lograr un nivel comparable de
severidad al de los ensayos de COD, se necesitaría una ventana de tiempo de 15 d con los
ensayos basados en DBO o CO2 y un nivel de aprobación ≥ 60 %.
Las nuevas técnicas analíticas permiten la medición continua de DBO y CO2 y dan como
resultado un número suficiente de puntos de datos bien distribuidos en todo el período de
ensayo. Con programas de ajuste de curvas adecuados para las curvas de biodegradación se
pueden extraer descriptores característicos. Uno es el valor A, que describe el alcance de la
biodegradación en la fase de meseta y se expresa como el grado de biodegradación en
porcentaje. El otro es el valor k, que describe la tasa de biodegradación después del inicio de la
fase de biodegradación y se expresa como una cifra por unidad de tiempo. Una combinación
de los valores A y k dan información confiable tanto para la extensión como para la tasa de
biodegradación de una sustancia. Los valores A y k adecuados que corresponden a los
criterios existentes serían para ensayos basados en eliminación de COD > 80 % y > 0,3 por
hora, y para ensayos basados en DBO o CO2 > 75 % y > 0,1 por hora. Las investigaciones
estadísticas mencionadas pudieron demostrar que las sustancias que cumplen estos criterios
son eliminadas en un ensayo de simulación de lodos activados o en plantas de tratamiento de
aguas residuales reales en > 95 %. Esto daría la posibilidad de una alternativa confiable para el
criterio existente de la ventana de 10 d, y es necesario discutirlo en detalle con científicos,
reglamentadores y la industria.
11
Tabla 1. Panorama de los métodos ISO
Número de
Título Principio Objeto Recomendación
norma ISO
ISO 5815-1 Calidad del agua. Dilución de una muestra de agua con cantidades diferentes de una La norma ISO 5815-1 es aplicable a todas las Sólo para aguas y aguas
Determinación de la dilución especificada de agua rica en oxígeno disuelto y que aguas con valores de DBO > 3 mg/L y que no residuales, no para sustancias.
demanda bioquímica de contenga un inóculo de microorganismos aerobios y aliltiourea para excedan 6 000 mg/L. Los resultados obtenidos
oxígeno (DBO) después de n evitar la nitrificación. Incubación a 20 °C usualmente durante 5 d en brindan una indicación a partir de la cual se
días (DBOn). Parte 1: la oscuridad, Determinación de la concentración de oxígeno disuelto puede estimar la calidad de las aguas y si se
método de siembra con antes y después de la incubación. Cálculo de la masa de oxígeno compara con el DQO, se puede estimar
adición de aliltiourea consumida por litro de muestra. biodegradabilidad de sus componentes.
ISO 5815-2 Calidad del agua. La misma técnica que en la norma ISO 5815-1, pero con La norma ISO 5815-2 es aplicable a todas las Sólo para aguas y aguas
Determinación de la condiciones de ensayo optimizadas para la determinación de aguas con valores de DBO > 0,5 mg/L y que residuales, no para sustancias.
demanda bioquímica de valores de DBO bajos. no excedan 6 mg/L.
oxígeno (DBO) después de n
días (DBOn). Parte 2: método
de muestras no diluidas
ISO 7827 Calidad del agua. Sistema de ensayo acuático estático usando compuestos de ensayo La norma ISO 7827 es aplicable a Sólo para compuestos de
Evaluación de la orgánicos como la única fuente de carbono y de energía para un compuestos orgánicos que son: ensayo solubles en agua. La
biodegradabilidad aerobia inóculo de microorganismos aerobios mixtos, usualmente lodos - solubles en agua a la concentración de ensayo eliminación del COD no siempre
«final» de los compuestos activados a 30 mg/L de sustancia seca. Medición regular de la (10 mg/L a 40 mg/L (COD); es un indicador claro de
orgánicos en medio acuoso. eliminación del COD para determinar la biodegradabilidad final en 28 - no volátiles, o que tengan una presión de biodegradación.
Método basado en la d. Evaluación de los resultados de ensayo mediante comparación del vapor despreciable;
determinación del carbono COD al inicio y al final del ensayo. Adicionalmente, se puede llevar a - que no sufran adsorción significativa sobre
orgánico disuelto (COD). cabo un análisis específico para determinar la biodegradabilidad el vidrio y los Iodos activados;
primaria. - que no presenten efecto inhibidor sobre los
microorganismos de ensayo a la
concentración de ensayo.
ISO 8192 Calidad del agua. La norma ISO 8192 especifica un método para evaluar el efecto El método es aplicable a cualquier material de Ensayos sencillos y de corta
Determinación de la inhibitorio o estimulante de un material de ensayo sobre el ensayo. Se recomienda tener cuidado duración para sustancias y
inhibición del consumo de consumo de oxígeno de microorganismos de lodos activados. especial con materiales de baja solubilidad en aguas residuales. Indicación
oxígeno por lodos Los lodos activados en presencia de un sustrato fácilmente agua o materiales volátiles, y los que del efecto de toxicidad en la
activados (oxidación de biodegradable consumirán oxígeno rápidamente a una tasa que consumen o producen oxígeno dificultad de biodegradación.
carbono y amonio) depende de la concentración de microorganismos. La adición abióticamente. Se dan dos ejemplos de la
de las concentraciones tóxicas de un material de ensayo puede aplicación, el mejor representa las
dar como resultado la reducción de la tasa de consumo de condiciones en aguas superficiales y el otro
oxígeno. Las tasas se miden después de una exposición corta representa las condiciones en las plantas de
(30 min ó 180 min) al material de ensayo usando un electrodo tratamiento biológico de aguas residuales.
de oxígeno y el porcentaje de inhibición se calcula por
comparación con el de la mezcla de control que contiene solamente
el sustrato. El efecto inhibitorio puede incluir respiración heterotrófica
o carbonácea, y nitrificación.
Continúa...
12
Tabla 1. (Continuación)
Número de
norma ISO
IS0 9408 Calidad del agua. Determinación de la biodegradación de compuestos La norma ISO 9408 es aplicable Método para todo tipo de materiales de ensayo.
Evaluación de la orgánicos y aguas residuales por microorganismos aerobios a cualquier compuesto orgánico. Requiere un respirómetro que produzca curvas
biodegradabilidad aerobia en un sistema de ensayo acuoso estático. La mezcla para el Es necesario un cuidado continuas de biodegradación. La DBO es un
«final» de los compuestos ensayo contiene un medio inorgánico, el compuesto orgánico especial para compuestos poco indicador claro de biodegradación. Las sustancias
orgánicos en medio acuoso, como única fuente de carbono y energía a una concentración solubles en agua y para de ensayo que contienen nitrógeno pueden estar
mediante la determinación generalmente de 100 mg/L ó 100 mg/L DTO y como inóculo, compuestos volátiles. La nitrificadas, y esto se debería consultar en el
de la demanda de oxígeno usualmente lodo activado a 30 mg/L de peso seco. La mezcla sustancia de ensayo no debería resultado del ensayo.
en un respirómetro cerrado. se agita durante 28 d en el recipiente de ensayo cerrado de alcanzar ni reaccionar con el
un respirómetro. El dióxido de carbono que se libera se absorbente del CO2 y no debería
absorbe y el cambio resultante en el procedimiento se usa inhibir los microorganismos de
para determinar la DBO. La DBO se compara con la DTO. La ensayo a la concentración de
biodegradación se expresa como un porcentaje. ensayo.
ISO 9439 Calidad del agua. Determinación de la biodegradación de compuestos La NTC 4449 (ISO 9439) es Método de ensayo para todo tipo de material de
(NTC 4449) Evaluación de la orgánicos y aguas residuales por microorganismos aerobios aplicable a cualquier compuesto ensayo. La emisión de CO2 es un indicador claro
biodegradabilidad aerobia mediante un ensayo en medio acuoso estático. La mezcla orgánico. Es necesario un de biodegradación. Con la medición de la COD
final de los compuestos para el ensayo contiene un medio inorgánico, el compuesto cuidado especial para adicional es posible una buena diferenciación
orgánicos en medio acuoso. orgánico como única fuente de carbono y energía a una compuestos poco solubles en entre la biodegradación y la eliminación abiótica,
Ensayo de liberación de concentración comprendida entre 10 mg/L y 40 mg/L, y como agua y compuestos volátiles. La por ejemplo, adsorción.
dióxido de carbono. inóculo usualmente lodos activados a un peso seco de 30 mg/L. sustancia de ensayo no debería
La mezcla se agita durante 28 d. El CO2 liberado queda inhibir los microorganismos de
atrapado en recipientes externos y se determina por un ensayo a la concentración del
método analítico apropiado. El CO2 biogénico se compara ensayo. Para compuestos
con la cantidad teórica, CTCO2. La biodegradación se solubles en agua, la eliminación
expresa como porcentaje. del COD también se puede
determinar (véase el Anexo D,
En el Anexo D se presenta una modificación al ensayo. NTC 4449 (ISO 9439).
Como información adicional, se determina con regularidad
la eliminación de la DBO.
ISO 9509 Calidad del agua. Ensayo La norma ISO 9509 especifica un método para evaluar los El método requiere un lodo Ensayo especial para nitrificación sin valor
de toxicidad para evaluar la efectos inhibitorios a corto plazo de las sustancias de activado nitrificador y es aplicable predictivo para ensayos de biodegradación.
inhibición de la nitrificación ensayo, sobre las bacterias nitrificadoras en lodos a sustancias solubles en agua no
de microorganismos en activados. El efecto inhibidor se estima durante un período volátiles y a aguas residuales.
lodos activados. de exposición de 4 h en recipientes paralelos en presencia
y ausencia de un material de ensayo. Se evalúa la
concentración de nitrito y nitrato producidos por la oxidación
del amonio, y se determinan las concentraciones efectivas
(valores CE).
13
Número de
norma Título Principio Objeto Recomendación
ISO
ISO 9887 Calidad del agua. Evaluación de Sistema de ensayo acuático semiestático que utiliza La NTC 4182 (ISO 9887) es aplicable a Ensayo con alto potencial de
(NTC 4182) la biodegradabilidad aerobia de componentes de ensayo orgánicos y un medio orgánico compuestos orgánicos que son: biodegradación, especialmente para
los compuestos orgánicos en fácilmente biodegradable (aguas residuales) como la fuente compuestos que no son fácilmente
medio acuoso. Método de carbono y energía para un inóculo de alta densidad de - Solubles en agua a la concentración de degradables y para aguas
semicontinuo con lodos lodos activados. Llenado y extracción de los recipientes de ensayo (20 mg/L a aproximadamente 50 mg/L residuales, incluida la degradación
activados. ensayo con aguas residuales y compuesto de ensayo, y COD); de co-metabólica. Es un método útil
(SCAS). medición de la eliminación del COD en los recipientes de para intentar la preadaptación de un
ensayo y de control del blanco para determinar la - No volátiles o que posean una presión de inóculo.
biodegradabilidad final dentro del tiempo de ensayo de hasta vapor insignificante;
26 semanas. Evaluación de los resultados del ensayo
mediante comparación de la concentración del COD antes y - No hay pérdida por espumado de la
después del procedimiento de llenado y extracción. solución de ensayo;
- No es significativamente adsorbible sobre

vidrio y lodos activados.
- No inhibe los microorganismos de ensayo

a la concentración de ensayo.
ISO 9888 Calidad del agua. Evaluación de la Sistema de ensayo acuático estático que utiliza compuestos de La NTC 4255 (ISO 9888) es aplicable a Método estático para evaluación
(NTC 4255) biodegradabilidad aerobia final de ensayo orgánicos como la única fuente de carbono y energía compuestos orgánicos que son: de la eliminación y
los compuestos orgánicos en para un inóculo de alta densidad de microorganismos aerobios - Solubles en agua a la concentración de biodegradación de los
medio acuoso. Ensayo estático mixtos (lodos activados). La medición de la eliminación del DQO ensayo (50 mg/L a 400 mg/L COD); compuestos de ensayo y las
(Método Zahn-Wellens). para determinar la biodegradabilidad final o eliminación del agua - No volátiles o con una presión de vapor aguas residuales. Valor predictivo
en 28 d. Evaluación de los resultados de ensayo mediante insignificante; para plantas de tratamiento de
comparación de la concentración del COD al comienzo y al final - No hay pérdida por espumado de la aguas residuales.
del ensayo. solución de ensayo;
- No inhibe los microorganismos de ensayo
a la concentración de ensayo.
ISO Calidad del agua. Directrices para Descripción de las técnicas para la preparación de La norma ISO 10634 es aplicable a No hay método de ensayo de
10634 la preparación y tratamiento de compuestos orgánicos poco solubles en agua e introducción compuestos de ensayo poco solubles en biodegradación.
compuestos orgánicos poco de estos en recipientes de ensayo para realizar el ensayo agua.
solubles en agua para la posterior de biodegradabilidad en un medio acuoso .
evaluación posterior de su
biodegradabilidad en medio
acuoso.
14
(Continuación)
Número de
ISO
ISO Calidad del agua. Evaluación de Sistema de ensayo acuático estático que utiliza Esta norma es aplicable a compuestos orgánicos Método de ensayo para
10707 la biodegradabilidad aerobia compuestos de ensayo orgánicos como la única que son: concentraciones de ensayo
“final” de compuestos orgánicos. fuente de carbono y energía para un inóculo de - Solubles en agua a la concentración de ensayo (2 bajas, recomendado
Método por análisis de la baja concentración de microorganismos aerobios mg/L a 10 mg/L); especialmente para compuestos
demanda bioquímica de oxígeno mixtos. Medición de la eliminación del DBO en - Insolubles en agua a las condiciones de ensayo, de ensayo volátiles y tóxicos. Las
(ensayo en recipientes cerrados). botellas completamente cerradas para siempre y cuando se use una técnica de condiciones de ensayo causan
determinar la biodegradabilidad final en 28 d. dosificación adecuada. un potencial de degradación
Evaluación de los resultados de ensayo - Volátiles, siempre y cuando se use una técnica bastante bajo.
mediante comparación de la DBO con la DTO. de dosificación adecuada.
- No inhibitorios de los microorganismos de
ensayo a las concentraciones de ensayo bajas
usadas.
ISO 10708 Calidad del agua. Evaluación de Sistema de ensayo acuático estático que utiliza Esta norma es aplicable a compuestos orgánicos Método de ensayo
la biodegradabilidad aerobia final compuestos de ensayo orgánicos como la única que: especialmente para compuestos
de compuestos orgánicos, en un fuente de carbono y de energía para un inóculo - Son solubles en agua a la concentración de ensayo de ensayo poco solubles en
medio acuoso. Determinación de de microorganismos aerobios mixtos. La (100 mg/L DTO); agua usando equipo sencillo.
la demanda bioquímica de medición de la demanda bioquímica de oxígeno - Son insolubles en agua a las condiciones de
oxígeno en una botella cerrada, (DBO) en botellas cerradas con espacio de ensayo, siempre y cuando se use una técnica de
en dos fases. cabeza para determinar la biodegradabilidad final dosificación adecuada;
a los 28 d. Evaluación de los resultados de - No son adsorbidas significativamente sobre el
ensayo mediante la comparación de la DBO, electrodo de oxígeno ni reaccionan con él;
incluida la captación de oxígeno desde el - No inhiben los microorganismos de ensayo a las
espacio de cabeza con la DTO. concentraciones bajas usadas.
ISO 10712 Calidad del agua. Pseudomonas La norma ISO 10712 especifica un método para Esta norma es aplicable a aguas residuales y a El ensayo no se recomienda para la
putida. Ensayo de inhibición del evaluar el efecto inhibidor de una muestra en sustancias químicas. No es adecuada para predicción de toxicidad bacteriana
crecimiento (ensayo de inhibición Pseudomonas putida mediante la medición del muestras muy coloreadas, para muestras con en ensayos de biodegradación o
de la multiplicación de las células crecimiento celular bajo la influencia de diferentes materiales volátiles o sin disolver, o que plantas de tratamiento de aguas
de Pseudomonas). diluciones de la muestra de ensayo, en reaccionan con la solución de nutriente o residuales.
comparación con el crecimiento celular de un experimentan cambios durante el ensayo.
cultivo obtenido bajo las mismas condiciones,
pero sin la muestra de ensayo. Determinación de
la concentración celular como densidad óptica
después de un período de ensayo de 16 h.
Cálculo de CE10 y CE50.
15
Número de
ISO
ISO 11348-1 Calidad del agua. Determinación Determinación de la emisión de luz mediante cultivos Las normas ISO 11348-1, ISO 11348-2 e ISO El ensayo no se recomienda
ISO 11348-2 del efecto de inhibición de las de Vibrio fisheri. El criterio de ensayo es la reducción 11348-3 son aplicables a aguas residuales, para la predicción de toxicidad
ISO 11348-3 muestras de agua sobre la de la luminiscencia, medida después de un contacto extractos acuosos y lixiviados, agua dulce, agua bacteriana en ensayos de
emisión de luz de Vibrio fischeri de 15 min a 30 min en un luminómetro. Cálculo de salobre y agua intersticial. biodegradación o plantas de
(ensayo de bacterias EC20 y EC50. tratamiento de aguas residuales.
luminiscentes)
Parte 1: Método usando bacterias

recién preparadas.

deshidratadas

liofilizadas
ISO 11733 Calidad del agua. Evaluación de la Sistema de ensayo acuático de operación continua La NTC 4256 (ISO 11733) es aplicable a
(NTC 4256) eliminación y de la que utiliza compuestos de ensayo orgánicos y un compuestos orgánicos que son:
biodegradabilidad de compuestos medio orgánico fácilmente biodegradable (aguas
orgánicos en un medio acuoso. residuales) como la fuente de carbono y energía para - Solubles en agua o que se pueden dispersar
Ensayo de simulación de lodos un inóculo de microorganismos aerobios mixtos satisfactoriamente a la concentración de ensayo
activados. (lodos activados). La adición continua de aguas (10 mg/L a 20 g/L DQO);
residuales y compuesto de ensayo a los recipientes
de ensayo y la medición de la COD y la DQO en el - No volátiles, o con una presión de vapor
afluente y el efluente de ensayo y las unidades de insignificante.
control para determinar la biodegradabilidad final
dentro del tiempo de ensayo hasta 12 semanas. - No inhibidores de los microorganismos de ensayo
Evaluación de los resultados de ensayo mediante el a la concentración de ensayo.
cálculo de la eliminación del DQO. Adicionalmente,
se pueden usar análisis específicos para determinar
la biodegradabilidad primaria de un compuesto de
ensayo.
16
Número de
norma ISO
ISO 11734 Calidad del Agua. Evaluación de Sistema de ensayo acuático estático que utiliza La NTC 4233 (ISO 11734) es aplicable a Ensayo usado para evaluar la
(NTC 4233) la biodegradabilidad anaerobia compuestos de ensayo orgánicos como la única compuestos orgánicos que son: biodegradabilidad anaerobia.
“final" de los compuestos fuente agregada de carbono y energía para un
orgánicos con lodos digeridos. inóculo de microorganismos aerobios mixtos (lodos - Solubles en agua a la concentración de ensayo
Método que utiliza la medición digeridos diluidos). Medición del gas biógeno (20 mg/L a 100 mg/L de carbono orgánico);
de la producción de biogás. producido (dióxido de carbono y metano) mediante
medición de la presión y el carbono inorgánico - Insolubles en agua bajo las condiciones de
disuelto para determinar la biodegradabilidad final a ensayo, siempre y cuando se use una técnica de
los 60 d. Evaluación de los resultados del ensayo dosificación adecuada.
mediante comparación de la producción de biogás,
con la cantidad teórica. Adicionalmente, se puede - Volátiles, siempre y cuando se use una técnica
usar un análisis específico para determinar la de dosificación adecuada (decisión caso por
biodegradabilidad primaria de un compuesto de caso).
ensayo.
- No inhibidores de los microorganismos de
ensayo a la concentración de ensayo.
ISO 13641-1 Calidad del agua. Determinación Método de selección para evaluación de la toxicidad La norma ISO 13641-1 es aplicable a sustancias Este método se recomienda
de la inhibición de la producción anaerobia potencial. Alícuotas de una mezcla de que son solubles o insolubles en agua que para predecir efectos tóxicos
de gas de bacterias anaerobias. lodos en digestión no diluidos anaerobiamente y un incluyen sustancias químicas volátiles, mezclas, en digestores anaerobios.
Parte 1: ensayo general sustrato degradable se incuban solos (control) y aguas residuales, efluentes, lodos u otras
simultáneamente con un rango de concentraciones muestras ambientales para la producción de
del material de ensayo en botellas selladas durante 2 d biogás a partir de la digestión anaerobia de lodos
a 3 d, a 35 °C. La tasa de crecimiento de las bacterias de aguas residuales durante períodos de hasta 3
anaerobias es mucho más baja en comparación con la d. La información obtenida con este método es
de los microorganismos aerobios. Por esta razón, los una guía para el efecto probable de un material
períodos de ensayo en los métodos anaerobios son de ensayo sobre la producción de biogás, en los
más prolongados que los de las bacterias aerobias. La digestores anaerobios y también puede ser útil
cantidad de biogás producida se mide mediante el para escoger las concentraciones iniciales
incremento en la presión en las botellas de ensayo y de adecuadas para ensayos anaerobios de
control. Se calculan el porcentaje de inhibición y las biodegradabilidad.
concentraciones efectivas tales como CE50.
17
Número de
norma ISO
ISO 13641-2 Calidad del agua. Determinación Método de selección para evaluación de la toxicidad La norma ISO 13641-2 es aplicable a sustancias Este método se recomienda
de la inhibición de la producción anaerobia potencial. Alícuotas de mezclas de lodos que son solubles o insolubles en agua, que para predecir efectos tóxicos
de gas de bacterias anaerobias. en digestión diluidos u otras fuentes de anaerobios, y incluyen sustancias químicas volátiles, mezclas, en ambientes naturales
Parte 2: Determinación de un sustrato degradable se incuban solos y aguas residuales superficiales y profundas, anaerobios y como preensayo
concentraciones bajas de simultáneamente con un rango de concentraciones efluentes, lodos u otras muestras ambientales para ensayos de
biomasa. del material de ensayo en botellas selladas durante para la producción de biogás de medios biodegradación anaerobia.
varios días a 35 °C. La tasa de crecimiento de las anaerobios con baja concentración de biomasa.
bacterias anaerobias es mucho menor en La tasa de crecimiento de las bacterias
comparación con la de los microorganismos aerobios. anaerobias es mucho más baja, en comparación
Por esta razón, los períodos de ensayo en los con la de los microorganismos aerobios. El
métodos anaerobios son más prolongados que los de inóculo se puede recolectar a partir de
las bacterias aerobias. La cantidad de biogás sedimentos anaerobios o digestores anaerobios
producida se mide en el ensayo y en botellas de a gran escala o de laboratorio. La información
control mediante el incremento en la presión antes y obtenida con este método puede ser útil antes de
después de adicionar ácido para liberar dióxido de llevar a cabo el ensayo de biodegradabilidad
carbono de los carbonatos. Se calcula el porcentaje anaerobia con bajas concentraciones de inóculo y
de inhibición de la producción de biogás, al igual que para estimaciones de los efectos potenciales de
las concentraciones efectivas tales como el CE50. Es las sustancias químicas y aguas residuales en los
posible usar esta técnica para investigaciones procesos anaerobios en hábitats caracterizados
especiales, por ejemplo, con sedimentos de sitios de por una biomasa anaerobia relativamente baja,
naturaleza anaerobia. En este caso, la temperatura por ejemplo, suelos y sedimentos naturales.
de incubación en las botellas de ensayo puede ser la
de los sedimentos naturales. Los sedimentos
anaerobios pueden contener una alta cantidad de
materia inorgánica y el número de células y en
consecuencia la actividad bacteriana puede ser muy
baja en estos casos, de manera que el período de
incubación se debería extender.
ISO 14592-1 Calidad del agua. Evaluación Sistema de ensayo que simula las condiciones de un La norma ISO 14592-1 es aplicable a compuestos Método relativamente
de la biodegradabilidad aerobia sistema estático de agua superficial aerobia. orgánicos que: sencillo para determinar la
de compuestos orgánicos a Determinación de la biodegradabilidad primaria de - Se sabe que en principio son biodegradables; cinética de la biodegradación
concentraciones bajas. una sustancia de ensayo soluble en agua bajo - Son solubles en agua a la concentración de bajo condiciones ambientales
condiciones ambientales reales especialmente a ensayo; reales en un sistema
-- Parte 1: Ensayo estático de concentraciones bajas. La biodegradabilidad final se - No son volátiles, estático.
matraces con agitación, con puede determinar si la sustancia de ensayo es
agua superficial o agua radioetiquetada en la(s) posición(es) apropiada (s). y para los cuales hay disponibles una técnica
superficial/suspensiones de analítica específica para la sustancia o sustancias
sedimentos radio-etiquetadas.
18
Número de
norma ISO
ISO 14592-2 Calidad del agua. Sistema de ensayo que simula las condiciones de un La norma ISO 14592-2 es aplicable a Método de ensayo complejo
Evaluación de la sistema dinámico de agua superficial aerobia (río). compuestos orgánicos que: para determinar la cinética de
biodegradabilidad aerobia Determinación de la biodegradabilidad primaria de una - Se sabe que en principio son biodegradables; la biodegradación bajo
de compuestos orgánicos a sustancia de ensayo soluble en agua bajo condiciones - Son solubles en agua a la concentración de condiciones ambientales
concentraciones bajas. ambientales reales especialmente a concentraciones bajas. ensayo; reales en un sistema
Parte 2: Modelo de río de La biodegradabilidad final se puede determinar si la - No son volátiles, dinámico.
flujo continuo con biomasa. sustancia de ensayo es radio-etiquetada en la(s)
posición(es) apropiada (s). y para los cuales hay disponibles una técnica
analítica específica para la sustancia o hay
disponibles sustancias radio-etiquetadas.
ISO 14593 Calidad del agua. Evaluación Sistema de ensayo acuático estático que usa compuestos Esta norma es aplicable a compuestos orgánicos Método de ensayo para
de la biodegradabilidad de ensayo orgánicos como la única fuente de carbono y de que son: compuestos de ensayo,
aerobia final de compuestos energía para un inóculo de microorganismos aerobios - Solubles en agua a la concentración de ensayo solubles en agua, poco
orgánicos en un medio mezclados. Botellas cerradas, herméticas a los gases con (20 mg/L DQO); solubles y volátiles usando un
acuoso. Método por análisis oxígeno suficiente en el espacio de cabeza. La medición de - Insoluble en agua a las condiciones de ensayo. parámetro analítico de origen
de carbono inorgánico en dióxido de carbono (CO2) producido biogénicamente - Volátiles; estrictamente biológico.
recipientes sellados (ensayo después de la acidificación directamente en la fase gaseosa - No inhibitorios de los microorganismos de
de espacio de cabeza de o después de la alcalización en forma de carbono inorgánico ensayo a la concentración de ensayo.
CO2). disuelto (CID) para determinar la biodegradabilidad final
dentro de 28 d. Evaluación de los resultados de ensayo por
comparación del rendimiento de CO2 con la cantidad teórica.
ISO 15522 Calidad del agua. La norma ISO 15522 especifica un método para evaluar la La norma ISO 15522 es aplicable al agua, aguas Ensayo adecuado para la
Determinación del efecto toxicidad potencial de un material de ensayo para el residuales y sustancias químicas que son determinación de los efectos
inhibitorio de los crecimiento de bacterias aerobias presentes en los lodos solubles en las condiciones del ensayo. Se debe tóxicos en los lodos
componentes de agua sobre activados. Los matraces que contienen medio de ensayo tener cuidado especial con los materiales de activados.
el crecimiento de orgánico y material de ensayo se inoculan con un cultivo de ensayo turbios, volátiles y coloreados. La
microorganismos en lodos microorganismos de lodos activados dejados durante la información generada por este método puede ser
activados noche e incubados en un dispositivo de agitación a 22 °C. La útil para estimar el efecto tóxico sobre lodos
duración total del ensayo es de 6 h usualmente, incluido un activados y para escoger concentraciones
tiempo de exposición de aproximadamente 4,5 h. Se iniciales adecuadas para ensayos de
determina la biomasa de estos cultivos y de los blancos de biodegradabilidad aerobia.
control sin material de ensayo, por ejemplo, mediante
medición de la turbiedad en un espectrómetro. El porcentaje
de inhibición del crecimiento al final de la incubación se
calcula por comparación con los blancos de control, y se
traza contra la concentración del material de ensayo para
obtener las concentraciones efectivas, tales como valores de
EC50.
19
Número de
norma ISO
ISO 16221 Calidad del agua. Guía para la La norma ISO 16221 especifica cinco métodos para La norma ISO 16221 es aplicable a compuestos Métodos de ensayo
determinación de la determinar la biodegradabilidad aerobia final de los orgánicos que: recomendados para la
biodegradabilidad en ambiente compuestos orgánicos en el ambiente marino investigación de screening* la
marino mediante microorganismos aerobios en sistemas de - Son solubles en agua bajo las condiciones de biodegradación en el
ensayo acuosos estáticos. Los métodos de ensayo usadas; ambiente marino.
degradación estándar desarrollados para el
ensayo en agua dulce se modifican y adaptan - Tienen baja solubilidad en agua bajo las
para condiciones marinas. Estos métodos están condiciones del ensayo usadas, en cuyo caso
en las siguientes normas: ISO 7827, ISO 10707, pueden ser necesarias medidas especiales para
ISO 10708, NTC 4449 (ISO 9439) e ISO 14593. lograr una buena dispersión del compuesto;
Se preparan mezclas de ensayo que contienen agua
de mar natural o artificial, bacterias marinas y el - Son volátiles, siempre y cuando se use un
compuesto orgánico como la única fuente de ensayo apropiado con condiciones adecuadas;
carbono y energía a una concentración adecuada.
Las mezclas de ensayo y controles se incuban a la - No inhiben los microorganismos de ensayo a la
temperatura deseada. La biodegradación final se concentración escogida para los ensayos. La
realiza durante un período especificado, mediante la presencia de efectos inhibitorios se puede determinar
medición de los parámetros de suma COD, como se especifica en la norma ISO 16221.
DBO/DTO, CO2/CTCO2, como se describe en los
métodos de ensayo básicos respectivos para agua
dulce. Si se requiere, y si hay disponible un método
analítico específico para la sustancia, se puede
obtener información sobre la degradabilidad primaria
midiendo la pérdida del componente de ensayo
durante el ensayo, o la biodegradación se puede
determinar a una baja concentración usando
compuestos de ensayo de radioetiquetado
14
(usualmente C).
20
Tabla 1. (Final)
Número de
norma ISO
ISO 18749 Calidad del agua. Adsorción de La norma ISO 18749 especifica un método para la La norma ISO 18749 es aplicable a sustancias Método recomendado para
sustancias sobre lodos determinación de la adsorción de sustancias sobre el para las cuales hay a disposición un método sustancias solubles en agua
activados. Ensayo estático lodo activado o el lodo primario en una planta de analítico con exactitud suficiente. Deberían ser poco biodegradables.
usando métodos analíticos tratamiento de aguas residuales. La mezcla de solubles en agua o permitir suspensiones,
específicos. ensayo contiene un medio inorgánico, lodo activado dispersiones o emulsiones suficientemente
y el compuesto de ensayo. La dureza del medio estables si tienen poca solubilidad en el agua,
inorgánico, la concentración de los sólidos que no se pierdan por procesos de
suspendidos de los lodos activados y la cantidad de despojamiento, espumado u otros procesos
compuesto de ensayo agregado simulan condiciones abióticos de la solución de ensayo y no perturben
reales de las plantas de tratamiento de aguas los floculados de lodos activados
residuales y se especifican. La medición de la
concentración del compuesto de ensayo usando
métodos analíticos específicos para sustancias se
hace al comienzo del ensayo, durante su realización
y al final. Los valores medidos se usan para calcular
el grado de adsorción y opcionalmente el coeficiente
de distribución y el balance de masa.
21
ANEXO A
(Informativo)
COMPARACIÓN DE NORMAS INTERNACIONALES ISO CON LAS DIRECTRICES DE LA

ORGANIZACIÓN PARA LA COOPERACIÓN Y EL DESARROLLO ECONÓMICO (OCDE)
Norma internacional ISO

Número Año Directriz OCDE
comparable
301 A 1993 Biodegradabilidad inmediata: Ensayo de COD 7827
301 B 1993 Biodegradabilidad inmediata: Ensayo de evolución de CO2 9439
301 C 1993 Biodegradabilidad inmediata: Ensayo MITI modificado (I) --
301 D 1993 Biodegradabilidad inmediata: Ensayo de la botella cerrada 10707
301 E 1993 Biodegradabilidad inmediata: Ensayo OECD de detección 7827
modificado
301 F 1993 Biodegradabilidad inmediata: Ensayo respirométrico 9408
manométrico
302 A 1993 Biodegradabilidad inherente: Ensayo SCAS modificado 9887
302 B 1993 Biodegradabilidad inherente: Ensayo Zanh Wellens/EMPA 9888
302 C 1993 Biodegradabilidad inherente: Ensayo MITI modificado (II) ---
302 D 2001 Biodegradabilidad inherente: Ensayo Concawe ---

Proyecto
303 A 2001 Ensayo de simulación - Tratamiento aerobio de aguas 11733
residuales: Unidades de lodos activados
303 B 2001 Ensayo de simulación – Tratamiento aerobio de aguas ---
residuales: Biopelículas
306 1992 Biodegradabilidad en agua de mar 16221
308 2001 Transformación aeróbica y anaeróbica en sistemas de ---
sedimentación acuática
309 2001 Mineralización aeróbica en agua superficial: Ensayo de 14592
simulación de la biodegradación
310 2001 Biodegradabilidad inmediata: producción de CO2 en 14593
Proyecto recipientes cerrados (ensayo de espacio de cabeza)
311 2001 Biodegradabilidad inmediata anaerobia: producción de gas 11734
Proyecto a partir de lodos residuales anaerobios diluidos
22
ANEXO B
(Informativo)
BIBLIOGRAFÍA
[1] NOPENS, l., VERBRUGGE, T. SEGHERS, D. and VANROLLEGHEM, P. OECD Criteria

for Ready Biodegradability: Environmental Interpretation and Study of Alternatives,
COST 624 WG4, Rome, 2001.
[2] REUSCHENBACH, P., PAGGA, U. and STROTMANN, U. (2003). A Critical Comparison

of Respirometric Biodegradation Tests Based on OECD 301 and Related Test Methods.
Water Res., 37, 2003, pp. 1571-1582.
[3] STROTMANN, U., REUSCHENBACH, P., SCHWARZ, H. and PAGGA, U. Development

and Evaluation of an online CO2 Evolution Test and a Multicomponent Biodegradation
Test System. Appl. Env. Microbiol., 70, 2004, pp. 4621-4628.
[4] ISO 5815-1, Water Quality - Determination of Biochemical Oxygen Demand after n days
(BODn) - Part 1. Dilution and seeding method with allylthiourea addition.
[5] ISO 5815-2, Water Quality - Determination of Biochemical Oxygen Demand after n Days
(BODn) Part 2. Method for Undiluted Samples.
[6] ISO 6107-3: 1993, Water Quality - Vocabulary - Part 3. (NTC 3650-3, Calidad del agua.
Vocabulario. Parte 3).
[7] ISO 7827, Water quality - Evaluation in an Aqueous Medium of the "Ultimate" Aerobic
Biodegradability of Organic Compounds - Method by Analysis of Dissolved Organic
Carbon (DOC).
[8] ISO 8192. Water Quality - Test for Inhibition of Oxygen Consumption by Activated
Sludge (Carbon and Ammonium Oxidation).
[9] ISO 9408, Water Quality - Evaluation in an Aqueous Medium of Ultimate Aerobic
Biodegradability of Organic Compounds in Aqueous Medium by Determination of
Oxygen Demand in a Closed Respirometer.
[10] ISO 9439: 1999, Water Quality - Evaluation of Ultimate Aerobic Biodegradability of
Organic Compounds in Aqueous Medium - Carbon Dioxide Evolution Test. (NTC 4449,
Calidad del agua. Evaluación de la biodegradabilidad aeróbica "última" de compuestos
orgánicos en un medio acuoso. Método de análisis del dióxido de carbono liberado).
[11] ISO 9509, Water Quality - Toxicity Test far Assessing the Inhibition of Nitrification of
Activated Sludge Microorganisms.
[12] ISO 9887, Water Quality - Evaluation of Aerobic Biodegradability of Organic Compounds in
Aqueous Medium. Semi-continuous Activated Sludge Method (SCAS) (NTC 4182, Gestión
ambiental. Calidad del agua. Determinación de la biodegradabilidad aerobia de los
compuestos orgánicos en medio acuoso. Método semicontinuo con lodos activados
(SCAS)).
23
[13] ISO 9888, Water Quality - Evaluation of Ultimate Aerobic Biodegradability of Organic
Compounds in Aqueous Medium - Static Test (Zahn-Wellens Method) (NTC 4255
Gestión ambiental. Calidad de agua. Evaluación de la biodegradabilidad aerobia de los
compuestos orgánicos en medio acuoso. Ensayo estático (Método ZAHN-WELLENS)).
[14] ISO 10634, Water Quality- Guidance for the Preparation and Treatment of Poorly Water-
Soluble Organic Compounds Far the Subsequent Evaluation of their Biodegradability in
an Aqueous Medium.
[15] ISO 10707, Water Quality - Evaluation in an Aqueous Medium of the "Ultimate " Aerobic
Biodegradability of Organic Compounds. Method by Analysis of Biochemical Oxygen
Demand (Closed Bottle Test).
[16] ISO 10708, Water Quality - Evaluation in an Aqueous Medium of the Ultimate Aerobic
Biodegradability of Organic Compounds - Determination of Biochemical Oxygen
Demand in a two-phase Closed Battle Test.
[17] ISO 10712, Water Quality - Pseudomonas Putida Growth Inhibitian Test (Pseudomonas
Cell Multiplication Inhibition Test).
[18] ISO 11348-1, Water Quality. Determination of the Inhibitory Effect of Water Samples on
the Light Emission of Vibrio Fischeri (Luminescent Bacteria Test) - Part 1: Method Using
Freshly Prepared Bacteria.
[19] ISO 11348-2, Water Quality - Determination of the Inhibitory Effect of Water Samples on
the Light Emission of Vibrio Fischeri (Luminescent Bacteria Test). Part 2: Method Using
Liquid-Dried Bacteria.
[20] ISO 11348-3, Water Quality. Determination of the Inhibitory Effect of Water Samples on
the Light Emission of Vibrio Fischeri (Luminescent Bacteria Test). Part 3: Method Using
Freeze-Dried Bacteria.
[21] ISO 11733, Water Quality - Determination of the Elimination and the
Biodegradability of organic compounds in an Aqueous Medium - Activated Sludge
Simulation Test (NTC 4256:1997, Gestión ambiental. Calidad de agua. Evaluación de la
eliminación y biodegradabilidad de compuestos orgánicos en un medio acuoso. Ensayo de
simulación de lodos activados).
[22] ISO 11734, Water Quality - Evaluation of the "Ultimate " Anaerobic Biodegradability of
Organic Compounds in Digested Sludge - Method by Measurement of the Biogas
Production (NTC 4233:1997 Gestión ambiental. Calidad de agua. Evaluación de la
biodegradabilidad anaeróbica "última" de los compuestos orgánicos en lodos de
digestión. Método por medición de la producción de biogás).
[23] ISO 13641-1, Water Quality. Determination of Inhibition of Activity of Gas Production of
Anaerobic Bacteria. Part 1: General Test.
[24] ISO 13641-2, Water Quality - Determination of Inhibition of Activity of Anaerobic

Bacteria. Part 2. Test for Low Biomass Concentration.
[25] ISO 14592-1, Water Quality - Evaluation of the Aerobic Biodegradability of Organic
Compounds at Low Concentrations. Part 1: Shake-Flask Batch Test with Surface Water
or surface Water/Sediment Suspensions.
24
[26] ISO 14592-2, Water quality - Evaluation of the Aerobic Biodegradability of Organic
Compounds at Low Concentrations. Part 2: Continuous Flow River Model with Attached
Biomass.
[27] ISO 14593, Water Quality - Evaluation of Ultimate Aerobic Biodegradability of Organic
Compounds in Aqueous Medium. Method by Analysis of Inorganic Carbon in Sealed
Vessels (C02 Headspace Test).
[28] ISO 15522, Water Quality - Determination of the Inhibitory Effect of Water Constituents
on the Growth of Activated Sludge Microorganisms.
[29] ISO 16221, Water Quality. Guidance for Determination of Biodegradability in the
Marine Environment.
[30] ISO 18749, Water Quality. Adsorption of Substances on Activated Sludge - Batch Test
Using Specific Analytical Method.
[31] NTC 3629, Calidad de agua. Demanda química de oxígeno -DQO-.
25
DOCUMENTO DE REFERENCIA
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. Water Quality. Selection of

Tests For Biodegradability. Genève: ISO, 2007, 21 p. (ISO /TR 15462-2006).
26

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GUÍA TÉCNICA GTC

CALIDAD DEL AGUA.

E: WATER QUALITY. SELECTION OF TESTS FOR BIODEGRADABILITY.

CORRESPONDENCIA: esta guía es idéntica por traducción (IDT)

DESCRIPTORES: calidad del agua - biodegradabilidad;

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)

Prohibida su reproducción Editada 2007-08-03

El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo

La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica

La GTC 164 fue ratificada por el Consejo Directivo del 2007-07-25.

A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a

DOCTOR CALDERÓN ASISTENCIA IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA -

Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las

ACEITES Y GRASAS VEGETALES S.A. ASINAL LTDA.

1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN ........................................................................2

2. TÉRMINOS Y DEFINICIONES .....................................................................................2

3.1 MÉTODOS DE ENSAYO DE BIODEGRADACIÓN .....................................................5

3.2 PARÁMETROS ANALÍTICOS Y EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

3.3 NIVELES DE APROBACIÓN PARA BIODEGRADACIÓN .........................................7

3.4 TOXICIDAD A LAS BACTERIAS ................................................................................8

3.5 ESTRATEGÍAS DE ENSAYO ......................................................................................9

Tabla 1. Panorama de los métodos ISO .............................................................................12

CALIDAD DEL AGUA.

0.2 La biodegradación de sustancias e ingredientes de aguas residuales depende no

- Medios de ensayo acuáticos o terrestres.

- Condiciones de ensayo aerobias o anaerobias.

- Fuente y concentración de los microorganismos del inóculo.

- Aclimatación y adaptación del inóculo.

- Concentración del material de ensayo.

- Presencia de otro sustrato orgánico.

- Posibles efectos tóxicos del material de ensayo bajo condiciones de ensayo.

- Propiedades físicas y químicas y biodisponibilidad del material de ensayo (por ejemplo,

- Condiciones de ensayo (por ejemplo, mezclado, agitación, modo de aireación,

- Duración del ensayo.

1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

El presente documento presenta los aspectos generales de los ensayos de biodegradación

2.2 Demanda bioquímica de oxígeno, DBO (Biochemical Oxygen Demand, BOD).

2.3 Fase de biodegradación (Biodegradación Phase). Tiempo desde el final de la fase de

NOTA Se expresa en días.

2.6 Concentración de sólidos suspendidos de un lodo activado (Concentration of Suspended

NOTA También se usan con frecuencia sólidos mezclados suspendidos en licor.

NOTA Se expresa en días.

2.12 Nivel máximo de biodegradación (Maximum Level of Biodegradation). Grado máximo

NOTA Se expresa en porcentaje.

NOTA Se expresa en días.

2.15 Preacondicionamiento (Pre-conditioning). Preincubación de un inóculo bajo las

2.16 Pre-exposición (Pre-exposure). Pre-incubación de un inóculo en presencia de un

2.17 Biodegradación anaerobia primaria (Primary Anaerobic Biodegradation). Nivel de

2.18 Biodegradación primaria. (Primary Biodegradation). Cambio estructural (transformación)

2.21 Biodegradación aerobia final (Ultimate Aerobic Biodegradation). Disgregación de un

2.24 Cantidad teórica de carbono inorgánico, CTCO (Theorical Amount of Inorganic

NOTA Se expresa en miligramos de carbono por miligramo o gramo de compuesto de ensayo.

2.25 Biodegradación anaerobia final. (Ultimate Anaerobic Degradation). Nivel de

3.1 MÉTODOS DE ENSAYO DE BIODEGRADACIÓN

Los métodos de ensayo para biodegradabilidad aerobia no tienen potencial equivalente,

en ensayos de biodegradabilidad aerobia. Se debería dar prioridad para la aplicación a aquellas

La cinética y el grado de degradación pueden ser variables en diferentes compartimientos

Incluso dentro de un método de ensayo se pueden obtener resultados diferentes en recipientes

en paralelo con los procesos de biodegradación. Para la determinación de esta eliminación

3.2 PARÁMETROS ANALÍTICOS Y EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS DE ENSAYO

En la mayoría de ensayos normalizados se solicita información sobre biodegradabilidad

- la fase de degradación real, en la cual ocurre la conversión de la sustancia de ensayo,

El resultado del ensayo es usualmente el grado de degradación en porcentaje, determinado

3.3 NIVELES DE APROBACIÓN PARA BIODEGRADACIÓN