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com

Enlazador de genes GS®

cámara ultravioleta

Instrucción
Manual

Para Servicio Técnico

Llame a su oficina local de Bio-Rad o en
los EE. UU. Cal1 yo-800-4BIORAD
(1-800-424-6723)
 Declaración de garantía
La cámara GS Gene Linker de Bio-Rad Laboratories está garantizada contra defectos de materiales y
mano de obra durante 1 año. Si se produce algún defecto en el instrumento durante este período de
garantía, Bio-Rad reparará o reemplazará las piezas defectuosas sin cargo. No obstante, quedan
específicamente excluidos los siguientes defectos:

1. Defectos causados por una operación incorrecta.

2. Daños causados por accidente o mal uso.

3. Daños causados por desastre.

4. Corrosión debido al uso de solventes o detergentes inadecuados.

5. Reparación o modificación realizada por alguien que no sea Bio-Rad Laboratories o un agente
autorizado.

6. Uso de repuestos suministrados por alguien que no sea Bio-Rad Laboratories o un agente autorizado.

Los siguientes componentes no están cubiertos por la garantía:

1. Fusibles

2. Bombillas

Nota:No hay piezas o componentes reparables por el usuario dentro de la unidad. El servicio o la
reparación no autorizados pueden anular la garantía.

Para cualquier consulta relacionada con el funcionamiento del instrumento, llame al servicio técnico de Bio-Rad
al 1-(800) 4BIORAD o comuníquese con su representante local.

Para cualquier solicitud de servicio de reparación, determine el número de modelo y el número de serie de
su instrumento, el número de orden de compra y el número de factura, y en los EE. UU. llame al Servicio de
Instrumentos de Bio-Rad al 1-(800) 876-7614.
 Tabla de contenido

Sección 1 Introducción.............................................................................................................1
Sección 2 Especificación.s..................................................................................................................1
2.1 Seguridad ..................................................................................................................1
2.2 Especificaciones ..................................................................................................2
2.3 Componentes ..................................................................................................................3

Sección 3 Instrucciones de funcionamiento....................................................................................4

3.1 Configuración ................................................................................................................4
3.2 Arranque/Parada................................................................................................................4
3.3 Modos....................................................................................................................4
3.4 Supervisión ................................................................................................................5
3.5 Tabla de referencia rápida..........................................................................................6
Sección 4 Métodos...................................................................................................................7
4.1 Reticulación del ADN................................................................................................7
4.2 Esterilización ................................................................................................................8
4.3 Corte de ADN .............................................................................................................8
Sección 5 Limpieza y Mantenimiento.mi.............................................................................10
5.1 Limpieza ................................................................................................................10
5.2 Reemplazo de la bombilla .............................................................................................10
Sección 6 Equipo y accesorios..s..........................................................................10
6.1 Cámara UV Gene Linker y accesorios .......................................................................10
6.2 Equipos y reactivos de electroforesis...................................................................10
6.3 Equipos y reactivos de transferencia .......................................................................11
Sección 7 Referencia.s..........................................................................................................12
7.1 Reticulación ultravioleta del ADN a la membrana ..........................................................12
7.2 Entrecruzamiento UV de ADN a proteína...................................................................12
7.3 Corte UV del ADN ..........................................................................................................13
7.4 Huella UV de ADN...................................................................................................13
7.5 Reparación de daños en el ADN inducidos por UV..........................................................13
7.6 Reticulación UV de ARN a membrana ..........................................................................14
7.7 Reticulación UV de ARN a proteína ..........................................................................14
7.8 UV celular .............................................................................................................15
7.9 Mutagénesis inducida por UV .......................................................................................15
7.10 Esterilización UV de productos PCR ......................................................................15
Sección 1
Introducción
La cámara UV GS Gene Linker es útil para todas las aplicaciones de biología molecular que
requieren radiación UV. La cámara del GS Gene Linker tiene tres modos operativos diferentes:
Programa, Energía y Tiempo. El modo Programa tiene parámetros de energía o tiempo
preestablecidos para aplicaciones específicas. Puede usar uno de estos programas preestablecidos,
o puede establecer su propio nivel de energía o tiempo deseado usando el modo Energía o el modo
Tiempo. Este manual proporciona información sobre cómo operar la cámara GS Gene Linker junto
con valiosas pautas de aplicación.

Sección 2
Especificaciones
ultravioleta

2.1 Seguridad

Definición de Símbolos

ultravioleta

Precaución, riesgo de exposición UV Precaución (consulte el documento adjunto)

Advertencia

Este instrumento está destinado únicamente para uso en laboratorio.

Este producto cumple con los estándares de "Clase A" para emisiones electromagnéticas para
aplicaciones de equipos de laboratorio. Es posible que las emisiones de este producto interfieran
con algunos aparatos sensibles cuando se colocan cerca o en el mismo circuito que esos aparatos.
El usuario debe ser consciente de este potencial y tomar las medidas adecuadas para evitar
interferencias.

ultravioleta

Lámparas

Las lámparas dentro de este instrumento emiten radiación ultravioleta de onda corta. La sobreexposición a
la luz ultravioleta directa o reflejada puede causar daños graves en los ojos y la piel. Nunca mire a una lámpara
UV iluminada sin la protección adecuada para los ojos.

Se puede formar ozono cerca de las lámparas UV. La exposición excesiva al ozono puede causar
irritación en los ojos y molestias en las vías respiratorias. Opere la cámara del GS Gene Linker en un
área adecuadamente ventilada si se detecta ozono por medición u olor.

Sensor

El sensor de emisión UV se encuentra en la pared interior derecha. El sensor UV detecta solo la

salida de energía en el rango de 200-400 nm y apagará automáticamente las bombillas cuando se
haya entregado la cantidad deseada de energía UV acumulada. El sensor UV también mide la salida
de energía máxima de las bombillas, y la luz de Reemplazar bombilla se iluminará cuando la salida
de energía sea demasiado baja (aproximadamente 30%). Por estas razones, el sensor debe
permanecer claro y limpio para obtener lecturas de energía precisas (consulte la Sección 5 para el
mantenimiento).

1
Caracteristicas de seguridad

Interruptor de alimentaciónEl interruptor de encendido se puede utilizar en cualquier momento para detener cualquiera de las operaciones.

Iniciar/Detener El botón Iniciar/Detener detendrá cualquiera de las operaciones en curso. Si se

pulsa de nuevo, la operación comenzará al principio del ciclo.

Puerta abierta La cámara del GS Gene Linker no funcionará cuando la puerta de la cámara esté
abierta. Si la puerta está abierta, la luz de puerta abierta estará encendida. Cuando la
puerta esté correctamente cerrada, la luz de puerta abierta se apagará. La cámara
dejará de funcionar cuando se abra la puerta, pero volverá a funcionar cuando se cierre
la puerta.

Cámara La cámara sellada lo protege de cualquier radiación UV. La ventana de

visualización protegerá sus ojos y su cuerpo de la radiación ultravioleta.

Máximo La cámara del GS Gene Linker está equipada con un apagado automático después de
Operación 999 segundos de emisión de energía si el detector está cubierto, o 24 minutos si la
verificación del radiómetro no está apagada.

2.2 Especificaciones

Dimensiones Ancho x Profundidad x Altura

Afuera 42,7 x 30,5 x 26,4 cm (16,8 x 12 x 10,4 pulgadas)

Adentro 31,7 x 24,1 x 15,2 cm (12,5 x 9,5 x 6 pulgadas) 10
Peso kg (22 libras)

Funcional
Rango de voltaje de entrada 100 VCA/50 Hz/1 amperios
120 VCA/60 Hz/1 amperios
220 VCA/50 Hz/0,5 amperios
240 VCA/50 Hz/0,5 amperios

fusibles 2,0 amperios de soplado lento (100/120 V) o

1,0 amperios de soplado lento (220/240 V) tipo T

Ambiental
Operando 50 °F (10 °C) a 90 °F (32 °C) de temperatura 30–
80 % de humedad
Almacenamiento 0 °C (32 °F) a 60 °C (140 °F) de temperatura 10–
90 % de humedad

Fuente de energía ultravioleta

bulbos germicidas (5) formato G8T5, minipin

Producción Energía máxima de 253,7 nm

Nota:Este equipo ha sido probado y cumple con los límites para un dispositivo digital de Clase
A, de conformidad con la Parte 15 de las normas de la FCC. Estos límites brindan una
protección razonable contra interferencias perjudiciales cuando el equipo funciona en un
entorno comercial. Este equipo genera, utiliza y puede irradiar energía de radiofrecuencia y, si
no se instala y utiliza de acuerdo con el manual de instrucciones, puede causar interferencias
perjudiciales, en cuyo caso el usuario deberá corregir la interferencia por su propia cuenta.

2
2.3 Componentes
1.Interruptor de alimentación Interruptor de encendido para encender o apagar la cámara del GS Gene
Linker.

2.Pantalla LED Aquí se muestra el programa, la energía o el tiempo seleccionados. Referencia

3.Cuadro de referencia rápida sobre programas preestablecidos.

4.Programa El botón de programa se utiliza para seleccionar el modo de programa.

5.Energía El botón de energía se utiliza para seleccionar el modo de energía. La

energía se mide en milijulios.
6.Tiempo El botón de tiempo se utiliza para seleccionar el modo de tiempo. El tiempo se
mide en segundos.

7.Energía real La luz de programa y la luz de energía están encendidas cuando la

8.Tiempo transcurrido
9.Iniciar/Detener
energía acumulada se muestra en el LED.
La luz de Energía y la luz de Tiempo están encendidas cuando el LED
muestra el tiempo transcurrido.
El botón Start/Stop se utiliza para iniciar el ciclo de irradiación o para detener
un ciclo.

10Aumentar Aumenta el modo seleccionado. Disminuye el

11Más bajo modo seleccionado. Para abrir y cerrar la

12Manejar puerta de la cámara.

13luz de la puerta La luz de puerta abierta indica que la puerta de la cámara está abierta. La luz de

14Bombilla Reemplazar bombilla indica que las bombillas UV necesitan reemplazo.

15.Ejecutar luz La luz Run Complete se enciende cuando finaliza el ciclo de

irradiación.
dieciséis.Ventana ventana de visualización

3
Seccion 3
Instrucciones de operación

3.1 Configuración

1. Enchufe el cable de alimentación de la cámara en el tomacorriente adecuado.

2. Presione el interruptor de encendido. La pantalla digital debeC d-bLmi. Si la pantalla muestra

ERRAR, la cámara funciona mal y necesita reparación. Comuníquese con su representante local de
Bio-Rad o llame al Servicio de instrumentos de Bio-Rad al 1-800 876-7614.

3.2 Iniciar/Parar
El botón Iniciar/Parar se utiliza para iniciar un ciclo de irradiación determinado. Cuando se inicia un
ciclo, el botón Iniciar/Detener se puede utilizar para detener el ciclo. Los parámetros del ciclo
permanecerán en la memoria temporal y se pueden reiniciar al comienzo del ciclo presionando
nuevamente el botón Start/Stop.

La luz sobre el botón de inicio/parada se encenderá cuando esté en uso y se apagará una vez
finalizado el ciclo de irradiación.

3.3 Modos
La cámara del GS Gene Linker se puede operar en 3 modos diferentes: Programa, Tiempo o Energía.
El modo se indica mediante la luz encima de estos botones. Las siguientes instrucciones describen cómo
configurar y utilizar cada uno de estos modos.

Programa

Cada programa se establece en energía o en tiempo. Para ver el valor del programa preestablecido,
presione el botón Energía para mostrar la energía de este programa, o presione el botón Hora para
mostrar la hora de este programa. El LED mostrará - - - cuando el parámetro Tiempo o Energía no esté
preestablecido. Al presionar los botones Subir o Bajar mientras se visualiza el tiempo o la energía
establecidos, se sale del modo Programa y se pasa al modo indicado.

1. Coloque el material a irradiar dentro de la cámara del GS Gene Linker. Use papel de filtro o envoltura
de plástico para sostener las membranas. Cierra la puerta de la cámara.

2. Pulse el botón Programa. Seleccione el programa deseado presionando el botón Subir o

Bajar.

3. Inicie el programa seleccionado presionando el botón Iniciar/Detener. La luz sobre el botón

Start/Stop estará encendida durante la irradiación. El LED mostrará la energía real o el
tiempo transcurrido con las dos luces sobre los botones que indican qué unidades se
muestran.

4. La unidad GS Gene Linker se detendrá automáticamente después de alcanzar el tiempo

establecido o el nivel de energía establecido. Al final del programa, la cámara del GS Gene
Linker emitirá un tono durante unos segundos. Este tono se puede detener presionando
cualquier botón. La luz sobre el botón Start/Stop estará apagada y la luz Run Complete estará
encendida. El LED mostrará la energía o el tiempo indicado por la luz sobre el botón.

4
Energía

1. Coloque el material a irradiar dentro de la cámara del GS Gene Linker. Cierra la puerta de la
cámara.

2. Pulse el botón Energía. Seleccione el nivel de energía deseado presionando el botón

Subir o Bajar.
3. Inicie el nivel de energía seleccionado presionando el botón Start/Stop. La luz sobre el
botón Start/Stop estará encendida durante la irradiación. El LED mostrará la energía real
con la luz sobre los botones Programa y Energía encendida.

4. La unidad GS Gene Linker se apagará automáticamente después de alcanzar el nivel de energía

establecido. Al final del ciclo de irradiación, la cámara del GS Gene Linker emitirá un tono
durante unos segundos. Este tono se puede detener presionando cualquier botón. La luz sobre
el botón Start/Stop estará apagada y la luz Run Complete estará encendida. El LED mostrará la
energía acumulada.

Tiempo

1. Coloque el material a irradiar dentro de la cámara del GS Gene Linker. Cierra la puerta de la
cámara.

2. Pulse el botón Hora. Seleccione el tiempo de irradiación deseado presionando el botón

Subir o Bajar.

3. Inicie el tiempo seleccionado presionando el botón Start/Stop. La luz sobre el botón Start/
Stop estará encendida durante la irradiación. El LED mostrará el tiempo transcurrido y la
luz sobre los botones de tiempo y energía estará encendida.

4. La unidad GS Gene Linker se apagará automáticamente después de alcanzar el tiempo

establecido. Al final del ciclo de irradiación, la cámara del GS Gene Linker emitirá un tono
durante unos segundos. El tono se puede detener presionando cualquier botón. La luz sobre el
botón Start/Stop estará apagada y el LED Run Complete estará encendido. El LED mostrará el
tiempo transcurrido.

3.4 Monitoreo
En cualquier momento durante o después de un ciclo de irradiación, se puede determinar el tiempo transcurrido o la
energía acumulada.

1. Para determinar el tiempo transcurrido, presione simultáneamente el botón Energía y el botón

Tiempo. El tiempo transcurrido en segundos aparecerá en el LED.

2. Para determinar la energía acumulada, presione el botón Energía y el botón Programa

simultáneamente. La energía acumulada en milijulios aparecerá en el LED.
3. Presione solo el botón Energía o Tiempo y el LED mostrará los valores establecidos.

5
3.5 Cuadro de referencia rápida
El cuadro de referencia rápida de la cámara GS Gene Linker que se reproduce a continuación se encuentra
detrás de un protector de plexiglás en la puerta de la cámara. Esta tabla se puede utilizar como una guía de
aplicaciones. Bio-Rad publicará gráficos actualizados a medida que se desarrollen nuevos programas o
protocolos. Para recibir estas actualizaciones, es importante que esté incluido en la base de datos de clientes de
GS Gene Linker. Comuníquese con su representante de Bio-Rad para que lo incluyan.

Gráfico de referencia rápida de la cámara UV del enlazador de genes GS

Asegúrese de que haya material en la cámara y que la puerta esté bien cerrada. Encienda la
alimentación. La pantalla LED debe reaCd-L.Seleccione el modo de operación presionando el botón
Programa, Energía o Tiempo. Presione el botón Subir o Bajar para configurar el programa, el nivel
de energía o el tiempo que desee. Pulse el botón Iniciar/Parar para iniciar el ciclo de irradiación. Al
finalizar el ciclo, sonará un tono y la luz ultravioleta se apagará automáticamente.

Programa*
Solicitud Condiciones (Lectura LED) Configuración

reticulación Transferencia de puntos/NaOH NHOAc

4
CL 125 mjulios
Sonda Zeta seca
mellar Geles de campo pulsado nic 60 mjulios
Esterilización material resistente a los rayos ultravioleta Calle 90 segundo

reticulación Membrana seca Dot blot/ C1 30 mjulio

reticulación húmeda Zeta-Probe Southern C2 50 mjulio
reticulación Membrana húmeda del sur C3 150 mjulio
reticulación Transferencia de puntos/NaOH NHOAc
4
C4 250 mjulios
membrana seca 312 nm

* Programa
(Lectura LED) Sección
CL 4.1
nic 4.2
Calle 4.1
C1 4.1
C2 4.3
C3 4.3
C4 [Bombillas de 312 nm (por lanzar)]

6
Sección 4
Métodos
Bio-Rad Laboratories ha desarrollado protocolos para el entrecruzamiento UV de ácidos nucleicos a la
membrana de nailon, el corte del ADN inducido por UV antes de la transferencia a la membrana y la
esterilización UV. Tenemos un programa de investigación en curso para desarrollar nuevos protocolos
para aplicaciones de biología molecular. Nuestros estudios indican que la energía requerida para la
reticulación óptima del ácido nucleico a la membrana depende de varios parámetros. Estos incluyen el
tipo de membrana (nylon cargado frente a nailon neutro), el tampón de transferencia, si la membrana
está húmeda o seca, así como la aplicación (dot blot frente a Southern genómico). Se recomiendan los
siguientes protocolos, dependiendo de la aplicación.

4.1 Entrecruzamiento de ADN

Ranura o Dot Blot/membrana Zeta-Probe húmeda

1. Desnaturalizar el ADN en una concentración final de NaOH 0,4 N.

2. Montar el aparato de microfiltración según las recomendaciones del fabricante. Utilice una
membrana de nailon cargada positivamente como Zeta-®PG RoTbemembrana.

3. Aplicar las muestras de ADN directamente sobre la membrana.

4. Retire la membrana del aparato y coloque la membrana húmeda dentro de la cámara del GS Gene
Linker. Use papel de filtro o envoltura de plástico para sostener la membrana.

5. Siga las instrucciones de la Sección 3.3, Modo de programación. Seleccione el programa con la
lectura del LEDC1(30 mJ). Inicie el ciclo de irradiación presionando el botón Start/Stop.
Continúe con el protocolo de hibridación preferido.

Ranura o Dot Blot/NaOH NH 4OAc/zeta-sonda seca Membrana

1. Desnaturalice la muestra de ADN agregando NaOH y EDTA hasta una concentración final de
NaOH 0,4 N y EDTA 10 mM. Calentar la muestra a 100 °C durante 10 minutos.

2. Neutralice la muestra de ADN añadiendo un volumen igual de acetato de amonio

(NHOAc) 2 M 4
frío, pH 7,0.

3. Montar el aparato de microfiltración según las recomendaciones del fabricante. Utilice una
membrana de nailon cargada positivamente como la membrana Zeta-Probe GT.

4. Aplicar las muestras de ADN directamente sobre la membrana.

5. Retire la membrana del aparato y coloque la membrana húmeda entre 2 papeles de filtro.
Permita que la membrana se seque. Retire el papel de filtro superior y coloque la
membrana dentro de la cámara del GS Gene Linker.

6. Siga las instrucciones de la Sección 3.3, Modo de programación. Seleccione el programa con la
lectura del LEDCL(125 mJ). Inicie el ciclo de irradiación presionando el botón Start/Stop.
Continúe con el protocolo de hibridación preferido.

Nota:Cuando utilice una membrana neutra, seleccione prog.Creal academia de bellas artes3metro (150 mJ).

Traslado Sur
1. Despurine el ADN sumergiendo el gel en HCl 0,25 N durante 10-15 minutos.

2. Desnaturalizar el ADN colocando el gel en un baño de NaOH 0,5 N durante 30 minutos.

3. Neutralice el gel sumergiéndolo en Tris-HCl 0,5 M, pH 7,4, NaCl 1 M durante 30 minutos.

7
4. Transfiera el ADN a una membrana de nailon utilizando 10x SSC o 10x SSPE como tampón de
transferencia. La membrana puede ser un nailon neutro o una membrana de nailon cargada
positivamente como la membrana Zeta-Probe GT.

5. Después de la transferencia, enjuague la membrana en 2x SSC durante 5 minutos. La membrana puede estar húmeda
o seca.

6. Siga las instrucciones de la Sección 3.3 Modo de programación. Seleccione el programa con la
lectura del LEDC2(50 mJ) si la membrana está seca,C o3(150 mJ) si la membrana es
húmedo. Inicie el ciclo de irradiación presionando el botón Start/Stop. Continúe con el
protocolo de hibridación preferido.

4.2 Esterilización
La cámara del GS Gene Linker tiene un ciclo de esterilización predeterminado. Siga las instrucciones en la
Sección 3.3 Modo de programa. Seleccione el tercer programa con el LED reSatdren (9g0 seg).
Inicie el ciclo de irradiación presionando el botón Start/Stop. La cámara GS Gene Linker
esterilizará solo las áreas expuestas de cualquier objeto en la cámara.

4.3 Corte de ADN25

La eficiencia de transferencia de ADN grande (>20 kb) de geles de agarosa es baja a menos que se corte el
ADN antes de transferirlo a una membrana de nailon. El ADN se puede escindir mediante depuración con HCl o
mediante irradiación UV. La reacción de depuración es más difícil de controlar y es extremadamente sensible a
la temperatura. La exposición a la luz ultravioleta de longitud de onda corta (254 nm) es un método más fiable
para cortar el ADN en geles de campo pulsado antes de la transferencia. Para obtener resultados óptimos, se
debe seguir rigurosamente el siguiente protocolo.

1. Teñir el gel con 1,0 µg/ml de bromuro de etidio (EtBr) durante exactamente 30 minutos con
agitación constante. No destiñe el gel antes de cortarlo. Utilice una nueva dilución de EtBr
para cada gel.

2. Coloque el gel en una bandeja de vidrio para transportar el gel a la cámara del GS Gene Linker.

3. Coloque el gel dentro de la cámara y cierre la puerta.

4. Siga las instrucciones de la Sección 3.3 Modo de programación. Seleccione el segundo programa
con la lectura del LEDnic(60 mJ).

5. Inicie el ciclo de irradiación presionando el botón Start/Stop. El gel se puede fotografiar,

pero se debe minimizar la exposición a la radiación UV (< 10 segundos). Si se desea, el gel
puede decolorarse antes de la fotografía.

6. Remoje el gel en NaOH 0,4 N, NaCl 1,5 M durante 15 minutos.

7. Transfiera el ADN a la membrana Zeta-Probe GT utilizando dos litros de NaOH 0,4 N,

NaCl 1,5 M como disolvente de transferencia.

8. Configure la transferencia capilar de la siguiente manera, de abajo hacia arriba:

A. Plato de cristal Corning Pyrex (28 x 18 x 4 cm).

B. Una caja de plexiglás o plástico como soporte, de unos 3 cm de alto y lo suficientemente pequeña como para caber en

el plato de vidrio.mi(.gramo., gradilla de puntas de pipeta amarilla Eppendorf).

C. Placa de vidrio (16 x 20 cm).

D. Tres hojas de papel secante a modo de mecha (18 x 30 cm) (S&S, GB002).

8
 E. Gel de agarosa (con el lado del pozo hacia abajo).

F. Membrana Zeta-Probe cortada al mismo tamaño que el gel y prehumedecida con agua
destilada.

G. Tres hojas de papel secante (18 x 15 cm) (S&S, GB002).

H. Una pila de toallas de papel de 10 cm de espesor.

9. Transfiera el ADN durante 24 a 48 horas.

10. Retire con cuidado la toalla de papel y los papeles secantes. Retire la membrana junto con el
gel, dé la vuelta a la membrana y al gel, colóquelos con el gel hacia arriba y marque la
ubicación de los pocillos y el marcador de orientación en la parte superior del gel. La posición
de los pocillos se puede marcar con precisión en la membrana utilizando un rotulador de
alcohol permanente de punta fina, cortando los fondos de los pocillos.

11. Neutralice la membrana en Tris 0,5 M, pH 7,0 (tampón de neutralización) durante 5 minutos y
luego enjuague brevemente en 2x SSC. El ADN transferido se puede visualizar en la
membrana colocando la mancha húmeda en un transiluminador.

12. Seque la membrana con papel secante de 3MM u otro papel adsorbente y proceda a la
hibridación. No se recomienda la reticulación UV del ADN a la membrana con este
método de transferencia alcalina.

Discusión
1. El procedimiento se basa en geles de aproximadamente 6 mm de espesor. Si se utilizan geles
más espesos, el período de tinción puede prolongarse para permitir la difusión de EtBr en el
medio de los geles. El ADN que no se tiñe con EtBr no se cortará con la luz ultravioleta y, por lo
tanto, no se transferirá del gel.

2. El remojo previo del gel en NaOH antes de la transferencia reduce el ruido de fondo y aumenta la eficiencia de
la transferencia.

3. Los geles de campo pulsado también se pueden transferir a las membranas utilizando 10x SSC como tampón
de transferencia con desnaturalización alcalina estándar seguida de neutralización. La transferencia alcalina
sobre membranas de nylon brinda una sensibilidad tan buena o mejor que las transferencias estándar sobre
filtros de nitrocelulosa. El procedimiento alcalino es mucho más simple y rápido. Además, las membranas de
nailon se pueden reutilizar muchas más veces que los filtros de nitrocelulosa. Algunas transferencias se
pueden reutilizar hasta veinte veces.

4. ADN separado en el CHEF-D ®RMapa II o CHEF®El sistema r también puede ser vacío.
se transfirió a una membrana de nailon en 4 horas utilizando el secante al vacío modelo 785
(165-5001, 120 V) y NaOH como tampón de transferencia.

5. El ADN se transfiere desde la parte posterior del gel (el lado opuesto a los pocillos) a la
membrana debido a que con frecuencia se producen irregularidades en la superficie del gel
durante la solidificación de estos geles de alto porcentaje (1%). Estos artefactos superficiales
interferirán con la transferencia de los ADN del gel. La transferencia desde el otro lado del gel
asegura un contacto superficial suave entre el gel y la membrana.

6. Es esencial neutralizar la membrana después de la transferencia para evitar que cambie el pH

del tampón de hibridación durante la hibridación.

7. No es necesario hornear las membranas de nailon después de la transferencia alcalina, ya que

el NaOH debe fijar el ADN a la membrana.

9
 8. Para controlar la eficacia de la transferencia, tiñe el gel en tampón de neutralización
durante 30 minutos con 1,0 µg/ml de EtBr. Fotografíe el gel postransferido y compárelo
con la imagen original.

Sección 5
Limpieza y mantenimiento
5.1 Limpieza
Afuera- Limpie el exterior de la cámara UV del GS Gene Linker con una toalla húmeda. No
utilice disolventes ni detergentes fuertes.

Adentro- Limpie las paredes interiores de aluminio de la cámara con etanol (grado reactivo) y
una toalla suave. El sensor está ubicado en la pared interior derecha. Limpie el sensor con una
toalla suave y etanol. Tenga cuidado de no rayar el sensor con una toalla abrasiva.

5.2 Reemplazo de bombillas

La cámara del GS Gene Linker está equipada con un modo de radiómetro. Este modo se
utiliza para determinar el brillo de la bombilla. Ingrese al modo de radiómetro presionando
los botones Subir y Bajar al mismo tiempo. Las luces UV se encenderán y el LED mostrará una
'L' junto con la iluminancia UV medida en mW2/C. metro Después de 1 minuto,

la lectura debe estabilizarse. Si la iluminancia UV≤es 2 mW/cm2TODOS los 5 focos deben ser
reemplazados. Detenga el modo de radiómetro presionando cualquier botón.

Apague la alimentación de la cámara del GS Gene Linker y desenchufe el cable de alimentación. Retire la
bombilla sujetando cualquiera de los extremos metálicos y gírela 1/4 de vuelta. La bombilla se deslizará fuera del
portalámparas a través de las ranuras en la parte inferior. Inserte la bombilla nueva a través de las ranuras y
gírela 1/4 de vuelta hasta que encaje en su lugar.

Sección 6
Equipos y Accesorios
6.1 Accesorios y cámara UV GS Gene Linker
165-5031 Cámara UV GS Gene Linker,120 VCA/60 Hz; incluye cinco bombillas de 254
nm y manual de instrucciones

165-5032 Cámara UV GS Gene Linker,220 VCA/50 Hz; incluye cinco bombillas de 254
nm y manual de instrucciones

165-5033 Cámara UV GS Gene Linker,240 VCA/50 Hz; incluye cinco bombillas de 254
nm y manual de instrucciones

165-5034 Cámara UV GS Gene Linker,100 VCA/50 Hz; incluye cinco bombillas de 254
nm y manual de instrucciones

165-5035 Bombillas de repuesto para cámara UV GS Gene Linker2,54 nm, 5 bombillas

6.2 Equipos y reactivos de electroforesis

170-4300 Celda de electroforesis de ADN de subcélulas sin bandeja
170-4304 de fundición Celda de electroforesis de ADN de subcélulas
170-4343 con bandeja de fundición de 15x20 cm de ancho
170-4307

10
Reactivos y equipos de electroforesis (Continuado)

165-5052 Fuente de alimentación PowerPac 2001,00/120V

165-5053 Fuente de alimentación PowerPac 2002,20/240V

Agarosas de ADN ultra puras

162-0017 Agarosa de grado preparativo de bajo punto de fusión,25

162-0020 g Agarosa de grado preparativo de bajo punto de fusión,

162-0125 250 g Agarosa de grado analítico de alta resistencia,100 g

162-0126 Agarosa de grado analítico de alta resistencia,500 g

162-0133 Agarosa certificada en biología molecular,100 g Agarosa

162-0134 certificada en biología molecular,500 g Agarosa de grado

162-0135 cromosómico2 ,5g

162-0136 Agarosa de grado cromosómico1 , 00 g
161-0733 Tampón TBE premezclado 10x,1 litro

6.3 Equipos y reactivos de transferencia

165-5000 Blotter de vacío modelo 785 con regulador,incluye: Regulador de vacío;
Unidad base con etapa de vacío; placa de vacío porosa; junta tórica del sello del
depósito; marco de sellado; Surtido de juntas de ventana; tapa del secante al
vacío; Manual de instrucciones
165-5001 Sistema de papel secante al vacío modelo 785:igual que 165-5000 excepto con
bomba de vacío (120 V)

165-5002 Sistema de papel secante al vacío modelo 785:igual que 165-5000 excepto con
bomba de vacío (220/240 V)

165-5003 Unidad básica del secante al vacío modelo

170-6545 785 Aparato Bio-Dot

170-6542 Formato de ranura Bio-Dot

170-3910 Trans-Blot Celda de transferencia electroforética

162-0190 Membrana Zeta-Probe GT,hojas, 9 x 12 cm, 15
162-0191 Membrana Zeta-Probe GT,hojas, 10 x 15 cm, 15
162-0192 Membrana Zeta-Probe GT,hojas, 15 x 15 cm, 15
162-0193 Membrana Zeta-Probe GT,hojas, 15 x 20 cm, 15
162-0194 Membrana Zeta-Probe GT,hojas, 20 x 20 cm, 15
162-0195 Membrana Zeta-Probe GT,hojas, 20 x 25 cm, 3
162-0196 Membrana Zeta-Probe GT,rollo 30 cm x 3,3 m, 1
162-0197 Membrana Zeta-Probe GT,rollo 20 cm x 3,3 m, 1
162-0198 Membrana Zeta-Probe GT,rollo 30 cm x 30 m, 1 Kit de
170-3557 etiquetado de ADN de cebador aleatorio,25
165-0962 reacciones Soporte de papel de filtro,35 x 45 cm, 25
165-0921 hojas Soporte de papel de filtro,18 x 34 cm, 25 hojas

11
Sección 7
Referencias
7.1 Reticulación UV de ADN a membrana
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7.2 Reticulación UV de ADN a proteína

10. Molitor, JA, Walker, W., Doerre, S., Ballard, DW y Greene, WC, NF-kB: una familia de proteínas de
unión a potenciadores inducibles y expresadas diferencialmente en TC humana PRmiotodosCs..

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polipéptidos que requieren la caja TATA para unirse a Drosphila hsp70 Prom METROootyomi.ra.Dakota del Norte
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azidoadeninasnorte
14. Becker, Michael M., Lesser, David, Kurpiewski, Michael, Baranger, Anne y Jen-Jacobson, Linda, Ultraviolet
Footprinting mapea con precisión los contactos específicos de la secuencia y el doblamiento del ADN en la
endonucleasa EcoRI - DNA ComplePAGXr.jefe. nacional Academia Carolina del Sur,i.85, 6247-6251 (1988).

15. Schnapp, Andreas, Clos, Joachim, Hadelt, Wolfgang, Schreck, Ralf., Cvekl, Ales y Grummt,
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17. Pfleiderer, Christa, Smid, Amke, Bartsch, Ingrid and Grummt, Ingrid, An Undecamer DNA
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23. Meffert, R. y Dosis, KF.,Cartas EBS2,39, 190-194 (1988).

7.3 Corte ultravioleta del ADN

24. Harding, Fiona A., Cohen, Nicholas and Litman, Gary W., Organización y complejidad del gen de
cadena pesada de inmunoglobulina en el SkR enamij,una erinaces. Investigación de ácidos nucleicos1rc8h(4),
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25. Comunicación personal con Eric Lai University of North Carolina, Chapel Hill.

7.4 Huella UV de ADN

26. Uchida, Kiyoshi, Pyle, Anna Marie, Morii, Takashi y Barton, Jacqueline K., High
Huella de resolución de EcoRI y Distamicina con Rh(phi) 2(bpy)3+, un nuevo
Reactivo para fotohuellasnorte t.Investigación de ácidos ucleicos1h,7(24), 10259-10279 (1989).

7.5 Reparación de daños en el ADN inducidos por UV

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28. Gekik, Catherine M. y Collins, Andrew R., Comparación de los efectos de la fostriecina, la novobiocina y la
camptotecina, inhibidores de las topoisomerasas del ADN, en la replicación y reparación del ADN en células
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reparación de ADN RAD6 que codifica una enzima conjugadora de ubiquitina, aumenta en respuesta al
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13
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Aumento en la respuesta a la luz ultravioleta y en la meiosis, pero permanece constante en el ciclo celular
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7.6 Reticulación UV de ARN a membrana

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células de músculo liso después de una lesión vascular en el arte de la carótida de rataPAG muyo.C.
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7.7 Reticulación UV de ARN a proteína

48. Garcia-Blanco, Mariano A., Anderson, Gordon J., Beggs, Jean and Sharp, Phillip A., A
Mammalian Protein of 220 kDa Binds Pre-mRNAs in the Spliceosome: A Potential Homólogo
of the Yeast PRP8 ProtePAGenRo.C. nacional Academia ciencia8,7, 3082-3086 (1990).
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14
7.8 UV celular
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7.9 Mutagénesis inducida por UV

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7.10 Esterilización UV de productos PCR

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flanquean una inserción de transposón Tn5 mediante la reacción en cadena de la polimerasa, Investigación de
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contaminación de PCR a la inactivación UVB,iotecnias10(5), 591-593 (1991).

El proceso de PCR está cubierto por las patentes estadounidenses números 4,683,195, 4,683,202 y 4,899,818, propiedad de
Hoffmann-La Roche, Inc. y F. Hoffmann-La Roche, Ltd. La compra de este producto no otorga una licencia para usar el proceso
cubierto por estas patentes. El usuario de este producto para realizar PCR debe obtener una licencia de Hoffmann-La Roche, Inc.

15

Ciencias de la vida
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Bélgica,Bio-Rad Laboratories SA-NV, Begoniastraat 5, B-9810 Nazareth • Teléfono 09-385 55 11 • Teléfono gratuito 0800/97032 • Fax 09-385 65 54
Brasil,Laboratorios Bio-Rad (Brasil), Rua dos Invalidos 212 - 5 andar, Lapa - Rio de Janeiro - RJ, CEP 20331-020 • Teléfono 55 21 507 6191 Canadá,Bio-
Rad Laboratories (Canada) Ltd., 5671 McAdam Road, Mississauga, Ontario L4Z 1N9 • Teléfono (905) 712-2771 • Fax (905) 712-2990 Porcelana,Bio-Rad
China (Beijing), Rm 615, Shang Fang Plaza, No. 27, North Third Round Center Road, West District, Beijing 100029 Teléfono 86-10-8201-1366/68 • Fax
86-10-8201-1367
Dinamarca,Laboratorios Bio-Rad, Generatorvej 8 C, 2730 Herlev • Teléfono 45 44 52-1000 • Fax 45 44 52-1001 Finlandia,
Laboratorios Bio-Rad, Pihatörmä 1A, FIN-02240 Espoo • Teléfono 358 (0)9 804 2200 • Fax 358 (0)9 804 1110
Francia,Laboratorios Bio-Rad, 3, Boulevard Raymond Poincaré, 92430 Marnes-la-Coquette • Teléfono 01 47 95 69 65 • Fax 01 47 41 9133
Alemania,Bio-Rad Laboratories GmbH, Heidemannstraße 164, D-80939 München, Postfach 45 01 33, D-80901 München Teléfono 089 318
84-177 • Fax 089 318 84-123
Hong Kong,Bio-Rad Pacific Ltd., Unidad 1111, 11/F, New Kowloon Plaza, 38 Tai Kok Tsui Road, Tai Kok Tsui, Kowloon
Teléfono 852-2789-3300 • Fax 852-2789-1257
India,Laboratorios Bio-Rad (India) SA Ltd., B&B1, Enkay Towers Vanijyanikunj, Udhyog Vihar Phase V, Gurgaon, Haryana 122016
Teléfono (91-124)-6398112/113/114 • Fax (91-124)-6398115
Israel,Bio-Rad Laboratories, Ltd., 14 Homa Street, PO Box 5044, Rishon Le Zion 75150 • Teléfono 03 951 4124 • Fax 03 951 4129 Italia,
Bio-Rad Laboratories Srl, Via M. Peroglio 23, 00144 Roma • Teléfono 34 91 590 5200 • Fax 34 91 590 5211
Japón,Nippon Bio-Rad Laboratories KK, 7-18 Higashi-Nippori 5-chome, Arakawa-ku Tokio 116-0014 • Teléfono 03-5811-6270 • Fax 03-5811-6272 Corea,Bio-Rad
Korea Ltd., Cambridge Building, 1461-15 Seocho-Dong Seocho-Ku, Seúl 137-070 • Teléfono 82-2-3473-4460 • Fax 82-2-3472-7003 América Latina,Bio-Rad Latin
America, 14100 Palmetto Frontage Road, Suite 101, Miami Lakes, Florida USA 33016 • Teléfono 305-894-5950 • Fax 305-894-5960 México,Bio-Rad Laboratorios
México, Adolfo Prieto No. 1653, Col. De Valle, CP. 03100, México DF • Teléfono 52 5 534 2552 al 54 • Fax 52 5 524 5971 Los países bajos,Bio-Rad Laboratories BV,
Fokkerstraat 10, 3905 KV Veenendaal • Teléfono 0318-540666 • Fax 0318-542216 Nueva Zelanda,Bio-Rad Laboratories Pty Ltd., PO Box 300-571, Albany, Auckland
• Teléfono 64-9-4152280 • Fax 64-9-443 3097 Noruega,Laboratorios Bio-Rad, Johan Scharffenbergs vei 91, N-0694 Oslo • Teléfono 47-23-38-41-30 • Fax
47-23-38-41-39 Rusia,Bio-Rad Laboratorii, ul. Butirskaya 79 "B", oficina 156 RF-125015 Moscú • Teléfono 7 095 979 98 00 • Fax 7 095 979 98 56
Singapur,Laboratorios Bio-Rad, Singapur, 211 Henderson Rd. #03-02, Parque Industrial Henderson, 159552 • Teléfono 65-2729877 • Fax 65-2734835
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Hertfordshire HP2 7TD Teléfono 0181 328 2000 • Teléfono gratuito 0800-181134 • Fax 01442-259118
00-000 0000 Señal 1200
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