PROCEDIMIENTO DETERMINACIÓN DE CARGA PARASITARIA EN

ESPECIES ANIMALES
MÉTODO: Mc MÁSTER

PT-AN-011

Versión: 01

ELABORÓ REVISÓ APROBÓ

Juliana Pineda Liz Kerguelen Melisa Román
Fecha de elaboración Versión Fecha de revisión Fecha de aprobación
2021/10/30 01 2021/11/04 2021/11/04
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INDICE

Pág.

1. OBJETIVO....................................................................................................................... 3
2. ALCANCE....................................................................................................................... 3
4.3 LIMITACIONES E INTERFERENCIAS...........................................................................3
4.4. RECOLECCIÓN Y PRESERVACIÓN DE LA MUESTRA..............................................4
4.5. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS....................................................................4
4.5.1 Equipos.................................................................................................................. 4
4.5.2 Materiales.............................................................................................................. 4
4.5.3 REACTIVOS........................................................................................................... 5
4.6 PREPARACION DE SOLUCIONES...............................................................................5
4.7 Seguridad industrial.....................................................................................................5
4.8 CONTROL DE CALIDAD EN LOS ANÁLISIS................................................................5
4.9 DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO DE ANÀLISIS.................................................6
4.10 CÁLCULOS DE RESULTADOS.................................................................................7
4.11 FLUJOGRAMA……………………………………………………………………………….7
4.12 DISPOSICIÓN DE RESIDUOS……………………………………………………………..8
5. DOCUMENTOS DE REFERENCIA..................................................................................8
6. REGISTROS................................................................................................................... 8
7.CONTROL DE CAMBIOS.................................................................................................8
8. ANEXOS……………………………………………………………………………………….…9
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1. OBJETIVO

Establecer el procedimiento para la determinación de carga de parásitos

gastrointestinales mediante el método Mc Máster

2. ALCANCE

Este procedimiento es aplicable para determinar la carga de parásitos

gastrointestinales en muestras de heces de bovinos y ovinos.

3. Definiciones

Heces: Materia compuesta de residuos de alimento que un organismo elimina por

el ano tras haber hecho la digestión.
Parásitos: Organismos que se alimentan de las sustancias que elabora un ser
vivo de distinta especie, viviendo en su interior o sobre su superficie, con lo que
suele causarle algún daño o enfermedad.
HPG: (Huevos por gramos de heces) Es una referencia del conteo microscópico
de huevos de parásitos.

4. Contenido:

4.1 Generalidades.
La técnica Mc Máster utiliza cámaras de conteo que posibilitan el examen
microscópico de un volumen conocido de suspensión fecal (2 x 0.15 ml). Por lo
tanto, si se usan un peso de heces y un volumen de líquido de flotación conocidos
para preparar la suspensión, entonces podemos calcular el número de huevos por
gramo de heces (h.p.g.).

4.2 Políticas de operación.

 Este procedimiento es realizado en el laboratorio por el personal técnico
 Para la realización de la técnica se hace necesario seguir el presente
documento y estar autorizado para dicha función.
 En el caso de prácticas académicas se debe aplicar el código reglamento
para aprendices.
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4.3 LIMITACIONES E INTERFERENCIAS

Este método está sujeto a factores que pueden interferir en el resultado, descritos
a continuación:

 Algunos huevos de diferentes especies son indistinguibles (particularmente

trichostrongílidos y strongílidos). Lo cual limita la interpretación clínica
debido a que algunas especies (e.g. Haemonchus) producen muchos más
huevos por día que otras (e.g. Ostertagia).

 Algunos tipos de huevos son más pesados que otros y podrían no flotar
bien en soluciones de baja gravedad específica (e.g. Fasciola).

 Los huevos son producidos solamente por hembras, adultas, fértiles (o

hermafroditas) y, por tanto, podrán estar ausentes en infecciones con
parásitos inmaduros o de un solo sexo.

 No tardar más del tiempo recomendado para el conteo dado que el fluido de
flotación puede deformar o destruir huevos delicados. Por consiguiente, se
recomienda procesar únicamente pocas muestras a la vez.

4.4. RECOLECCIÓN Y PRESERVACIÓN DE LA MUESTRA

Las muestras serán recepcionadas en bolsas de polipropileno, debidamente

rotuladas y depositadas en una nevera transportadora de muestras, con una
temperatura de 4 °C máximo, para su análisis inmediato.
En caso de no poder analizar la muestra de inmediato, debe refrigerarla a 4°C
máximo durante 24 horas. Evite la agitación de la muestra y una prolongada
exposición al aire.

4.5. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS.

4.5.1 Equipos:

 Microscopio óptico.
 Balanza.
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4.5.2 Materiales:
 Mortero.
 Probeta.
 2 Beaker de 100 ml.
 Pipeta de Pasteur.
 Frasco Lavador.
 Colador.
 Cámara de Mc Máster.
 Espátula.
 Gasa estéril.
 Agitador (Baja lengua).

4.5.3 REACTIVOS.
N/A
4.6 PREPARACION DE SOLUCIONES.

Solución de flotación (Solución Sal/azúcar):

Código: SPT-011-01

Gravedad específica: 1.28

Solución de propósito general:

Cloruro de sodio: 400 gramos.

Agua: 1000 ml.
Azúcar: 500 gramos.

Disolver la sal en agua para hacer una solución saturada.

Agregar el azúcar a la solución salina saturada.

Revolver hasta que el azúcar se disuelva. (Registrar en el formato preparación de

soluciones).

4.7 Seguridad industrial.

Al realizar el método de Mc Máster se debe tener la siguiente indumentaria que

garantice la seguridad personal:

 Bata
 Guantes
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 Gafas
 Gorro

4.8 CONTROL DE CALIDAD EN LOS ANÁLISIS

Analice un control por cada 10 muestras.

 Un duplicado aleatorio del lote.
 Un blanco de reactivos.
 Una muestra ciega, de concentración desconocida para el analista, incluido en
un lote de muestras rutinarias para evaluar cada 30 días la calidad del método
y analista.

Nota: El porcentaje de la diferencia entre los duplicados no debe ser mayor al

10%. Si la variación excede este límite, debe repetirse el análisis o en su defecto
revisar el método.

Cuando los resultados se encuentren fuera de los límites de control debe

reexaminarse el procedimiento completo, y si fuere necesario se debe repetir el
análisis a todo el lote de muestras. No realice más análisis hasta verificar que
sucede, si el problema persiste comuníquele al gestor de calidad.

4.9 DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO DE ANÀLISIS.

1) Pesar 4,0 g de heces y transfiéralas a un beaker de 100 ml, el recipiente

debe estar etiquetado de manera inequívoca.

2) Añadir 56 ml de solución de flotación mediante una probeta. Si se pesan

menos de 4 g de heces, el volumen de fluido de flotación debe ajustarse en
consecuencia (proporción: 14 ml de fluido de flotación por 1,0 g de
excrementos).

3) Mezclar bien las heces y el fluido de flotación con un agitador, hasta

obtener su homogenización.

4) Verter la suspensión fecal a través de un colador de té con una sola capa

de gasa y deposítelo en un beaker de 100 ml debidamente rotulado,
inmediatamente después de agitar, los residuos retenidos se descartan.

5) Tomar una submuestra con una pipeta Pasteur inmediatamente después

del procedimiento de filtrado cuando la suspensión aún está bien mezclada.
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6) Llenar ambos lados de la cámara de recuento Mc Máster con las heces en

suspensión. Se debe tener cuidado para evitar burbujas de aire.

7) Dejar reposar la cámara Mc Máster llena sobre la mesa durante 3-5 minutos
antes de contar para permitir que todos los huevos floten.

8) Examinar la submuestra bajo un microscopio compuesto con aumento de

10 x 10.

9) Identificar y contar el número de huevos en ambos campos de conteo y

calcule el número de huevos por gramo de heces multiplicando el número
de huevos por 50.

10)Después de contar, la cámara Mc Máster debe lavarse bajo agua corriente

del grifo, agitar para eliminar la mayor parte del agua y secar con un paño
de algodón por fuera y con una tira de papel de filtro dentro de la cámara.
4.10 CÁLCULOS DE RESULTADOS

El número de huevos por gramo puede ser calculado de la siguiente manera:

 Contar el número de huevos dentro de la rejilla de cada cámara, ignorando
aquellos fuera de los cuadros.
 Multiplicar el total por 50 – esto da la cantidad de huevos por gramo de
heces (h.p.g.).

Por ejemplo:

12 huevos observados en la cámara 1 y 15 en la cámara 2:

= (12 +15) x 50 = 1350 h.p.g.

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4.11 FLUJOGRAMA.
Muestra
Residuo 3
Tomar una submuestra con una
pipeta Pasteur inmediatamente
después del procedimiento de
filtrado cuando la suspensión aún
está bien mezclada.
Examinar la submuestra bajo
un microscopio compuesto con
aumento de 10 x 10.
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Residuo 1
Pesar 4,0 g de heces y
transfiéralas a un beaker de 100
ml, el recipiente debe estar
etiquetado de manera inequívoca.
Verter la suspensión fecal a través
de un colador de té con una sola
capa de gasa y deposítelo en un
beaker de 100 ml debidamente
rotulado inmediatamente después
de agitar, los residuos retenidos se
descartan.
Residuo 2
Llenar ambos lados de la
cámara de recuento Mc Máster
con las heces en suspensión.
Se debe tener cuidado para
evitar burbujas de aire.
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Solución
Añadir 56 ml de solución de
flotación mediante una probeta. Si
se pesan menos de 4 g de heces,
el volumen de fluido de flotación
debe ajustarse en consecuencia
Mezclar bien las heces y el
fluido de flotación con un
agitador, hasta obtener su
homogenización.
Dejar reposar la cámara Mc
Máster llena sobre la mesa
durante 3-5 minutos antes de
contar para permitir que todos los
huevos floten.
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Después de contar, la cámara Mc Identificar y contar el número de

Máster debe lavarse bajo agua corriente
del grifo, agitar para eliminar la mayor
parte del agua y secar con un paño de
algodón por fuera y con una tira de
papel de filtro dentro de la cámara.
huevos en ambos campos de
conteo y calcule el número de
huevos por gramo de heces
multiplicando el número de
huevos por 50.

Residuo 4

Continuidad
Ingreso
Residuo
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4.12 DISPOSICION DE RESIDUOS.

Descripción Tipo de Característica Clasificación Etiqueta Código

del residuo. residuo de según de de las
peligrosidad decreto transporte naciones
según SGA. 4741/2005 (UN)

Heces
frescas. 1

Heces+
solución
flotación.
Infeccioso
2 bilógico UN3373
(A4020,3)
Heces+
solución 3
flotación.
Heces+ 4
solución
flotación.

5. DOCUMENTOS DE REFERENCIA
FECHA DE
N° REFERENCIA BREVE DESCRIPCIÓN
EMISIÓN
FAO. Epidemiology diagnosis and control of Guía para el diagnóstico
1 1998
poultry parasites. parasitológico veterinario
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6. REGISTROS.
Responsabl Medio Tiemp
Lugar
Códig e de de o de Disposició
Nombre de
o diligenciarl archiv archiv n
archivo
o o o

FT- Registro de toma

de datos en campo Personal C-023 Físico 2 años Eliminación
MU-
(ensayos clínicos) Técnico
010
Registro de uso de
FT-EQ- equipos(microscopi Personal C-007 Físico 2 años Eliminación
007 o) Técnico

FT-AN- Consumo de Personal

reactivos C-011-2 Físico 2 años Eliminación
014 Técnico

7. CONTROL DE CAMBIOS.
Fecha de Descripción del
Versión Revisó Aprobó
revisión cambio
Este es un documento
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8. ANEXOS
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Ejemplo de huevos por gramos, cámara Mc Máster.