“AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO”

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Facultad de Ingeniería Industrial

Práctica de laboratorio 09 - Biología para ciencias

e ingenierías - Sección 3 - L2/201

EXTRACCIÓN DE PIGMENTOS CELULARES

Docente: Analí Jiménez Campean

Integrantes:
● Chaparrea Andrade, Iván Cód. 23170283

● Paucar Rondinel, Miguel Angel Cód. 17170212

● Vargas Solis, Liliana Cód. 05170168

● Villena Acosta, André Pier Cód. 23170076

Lima, Perú
2023
TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCIÓN .......................................................................................................... 3
OBJETIVOS ................................................................................................................. 4
DESARROLLO ............................................................................................................. 5
Actividad 1: Procedimiento de extracción de pigmentos ............................................ 5
- Esquematice todo el proceso de extracción mediante imágenes ............. 5
- Registre el tiempo de avance de cada banda de los resultados, mediante
dibujo o fotografía cuántas bandas o zonas de distintos colores se pueden
distinguir en las hojas de las dos plantas empleadas ...................................... 9
- Interpretar los resultados comparando con el patrón de bandas obtenido
con la posición de bandas referenciales de los pigmentos patrón (clorofila,
xantofila, carotenos). ......................................................................................... 10
- Señale qué pigmento representa cada extracto de hojas y explique las
razones de los colores para cada pigmento. ................................................... 11
- Tomando los resultados de las hojas verdes y no verdes, discuta las
razones de las diferencias encontradas. ......................................................... 12
CUESTIONARIO .................................................................................................... 13
- ¿Cuáles son las razones por las cuales se emplea alcohol en esta
práctica?............................................................................................................. 13
- ¿Qué otros métodos se utilizan para separar pigmentos?...................... 13
- Explique las diferencias entre distancias y tiempos de la cromatografía
de las plantas. .................................................................................................... 14
- Mencione entre 5 a 10 plantas (indicando nombre común, nombre
científico, importancia) comestibles (entre verduras y frutas diferentes a los
mostrados en la clase) que contengan carotenoides (carotenos y xantófilas)
16
CONCLUSIONES ....................................................................................................... 18
REFERENCIAS .......................................................................................................... 19
INTRODUCCIÓN

Los cloroplastos son los organelos encargados de llevar a cabo la fotosíntesis

en plantas; estos evolucionaron a partir de bacterias fotosintéticas. Los
cloroplastos contienen su propio ADN, en el cual se encuentran codificados
genes necesarios para su funcionamiento. El genoma de los cloroplastos o
plastoma se divide en cuatro regiones con características distintivas. El estudio
de la secuencia, estructura y composición de los plastomas es una herramienta
útil. La clorofila es en realidad toda una familia de pigmentos, que son los
responsables de dar a las plantas su color verde característico. Se trata de una
biomolécula de importancia vital en el escenario de la vida sobre nuestro planeta,
ya que, sin ella, la fotosíntesis que las plantas y otros seres vivos que realizan no
sería posible. La distinta variedad de clorofila se percibe en clorofila A, B, C, D y
F.

La clorofila a, llamado también molécula del pigmento clave captadora de luz en

los cloroplastos, absorbe fuertemente las luces violeta, azul y roja, pero refleja la
verde, dando así el color verde a las hojas. Los pigmentos accesorios incluyen
clorofila b, una forma ligeramente diferente de la clorofila a que refleja la luz de
color verde-amarillo y absorbe algunas de las longitudes de onda de las luces
azul y rojo-naranja que la clorofila a omite. Los carotenoides son pigmentos
accesorios que se encuentran en todos los cloroplastos; absorben las luces
verde y azul y, por lo tanto, aparecen principalmente en colores amarillo o
anaranjado.

Figura 1. Figura 2.
OBJETIVOS

• El objetivo principal del experimento es extraer los pigmentos celulares de

las plantas y determinar cuáles están presentes en la muestra. Esto
implica identificar los diferentes tipos de pigmentos, como los
carotenoides (carotenos y xantofilas)

• Comparar la composición de pigmentos entre diferentes plantas,

extracciones de pigmentos celulares de diferentes plantas y comparar las
composiciones de pigmentos entre ellas. Esto permite determinar si hay
variaciones en los tipos y concentraciones de pigmentos presentes en
diferentes especies vegetales.
DESARROLLO
Actividad 1: Procedimiento de extracción de pigmentos

- Esquematice todo el proceso de extracción mediante imágenes

Preparación de la muestra

1) Limpieza de las hojas

Figura 3. Figura 4.

2) Quite las nervaduras de las hojas 3) Coloque las hojas en el tazón o mortero cerámico

Figura 5. Figura 6.
Trituración de la muestra

1) Pique y triture las hojas con la ayuda del mortero añadiendo alcohol etanol 96º
(máx. 50ml)

Figura 7.

Figura 8.

Muestra lista

1) Triturar hasta obtener un líquido de color de la hoja intenso.

Figura 9.
Dilución de la sustancia

1) Preparar el embudo, papel filtro y el embase 2) Agregar la sustancia

Figura 10.

3) Obtener una sustancia filtrada (diluida)

Figura 11. Figura 12.

Coloración de la sustancia en el papel filtro

1) Coloque el lápiz y el papel filtro de esta manera

Figura 13.

2) Gradúe 10 min y analice la coloración.

Figura 14.
3) Repita el paso anterior por otros 10 min

Figura 15.

Figura 16.

- Registre el tiempo de avance de cada banda de los resultados,

mediante dibujo o fotografía cuántas bandas o zonas de distintos
colores se pueden distinguir en las hojas de las dos plantas
empleadas

En los 10 primeros minutos hay dos o tres franjas o zonas de distinto

color.

Figura 17.
 En los siguientes 10 minutos se distingue cinco o seis franjas de distinto
color.

Figura 18.

- Interpretar los resultados comparando con el patrón de bandas

obtenido con la posición de bandas referenciales de los pigmentos
patrón (clorofila, xantofila, carotenos).
Dado que el pigmento utilizado en el experimento en la hoja verde exhibe
un patrón de bandas similar al patrón de los pigmentos, podemos concluir
que contiene principalmente clorofila. La clorofila muestra características
de absorción en las regiones azul y roja del espectro, las cuales pueden
ser identificadas mediante técnicas de espectroscopia. Si las bandas del
pigmento de la hoja verde coinciden con las bandas de referencia de la
clorofila, esto respaldaría la presencia de clorofila en dicho pigmento.

En el caso de la hoja roja, el pigmento utilizado en el experimento revela

bandas de absorción en las regiones del espectro asociado con las
antocianinas, como el rojo, el púrpura o el azul. Esto indicaría la presencia
de antocianinas en el pigmento. Las antocianinas presentan bandas de
absorción características en esas regiones del espectro, y la posición de
estas bandas puede variar según el tipo y la acidez del entorno.
 Figura 19.

- Señale qué pigmento representa cada extracto de hojas y explique

las razones de los colores para cada pigmento.
Los pigmentos principales que se encuentran en una hoja verde son la
clorofila y los carotenoides, mientras que en una hoja roja predominan los
pigmentos conocidos como antocianinas.
En una hoja verde, el color verde se debe principalmente a la presencia
de clorofila, que es el pigmento más abundante en las plantas. La clorofila
desempeña un papel fundamental en la fotosíntesis, que es el proceso
mediante el cual las plantas determinarán la energía solar en energía
química para su crecimiento y desarrollo. La clorofila absorbe
principalmente la luz en las longitudes de onda azul y roja del espectro,
reflejando la luz verde. Por lo tanto, percibimos las hojas como verdes
porque la clorofila refleja esa luz verde.
Además de la clorofila, también hay otros pigmentos presentes en las
hojas verdes, como los carotenoides. Estos pigmentos absorben la luz en
diferentes longitudes de onda y contribuyen a capturar una gama más
amplia de energía lumínica para la fotosíntesis. Aunque los carotenoides
pueden tener colores amarillos, naranjas o rojos, su coloración es
opacada por la clorofila en las hojas verdes.
 En contraste, el color rojo en las hojas se debe principalmente a los
pigmentos llamados antocianinas. Estas antocianinas son producidas por
las plantas en respuesta a diversos factores ambientales, como la
intensidad de la luz solar, la temperatura y la acidez del suelo. Estos
pigmentos se encuentran en las células vegetales y pueden presentar
colores rojos, púrpuras o azules, dependiendo de la acidez del entorno.
Cuando las plantas producen altas concentraciones de antocianinas,
estas pueden ocultar el color verde de la clorofila y dar lugar a hojas de
color rojo. Además de su función estética, las antocianinas también
actúan como protectores de la planta, ya que ayudan a absorber la luz
adicional y protegen contra el daño causado por la radiación ultravioleta.

- Tomando los resultados de las hojas verdes y no verdes, discuta las

razones de las diferencias encontradas.
Dado que el pigmento utilizado en el experimento en la hoja verde exhibe
un patrón de bandas similar al patrón de los pigmentos, podemos concluir
que contiene principalmente clorofila. La clorofila muestra características
de absorción en las regiones azul y roja del espectro, las cuales pueden
ser identificadas mediante técnicas de espectroscopia. Si las bandas del
pigmento de la hoja verde coinciden con las bandas de referencia de la
clorofila, esto respaldaría la presencia de clorofila en dicho pigmento.
En el caso de la hoja roja, el pigmento utilizado en el experimento revela
bandas de absorción en las regiones del espectro asociado con las
antocianinas, como el rojo, el púrpura o el azul. Esto indicaría la presencia
de antocianinas en el pigmento. Las antocianinas presentan bandas de
absorción características en esas regiones del espectro, y la posición de
estas bandas puede variar según el tipo y la acidez del entorno.

Figura 20.
CUESTIONARIO

- ¿Cuáles son las razones por las cuales se emplea alcohol en esta
práctica?
Debido a que los pigmentos clorofílicos son insolubles en agua, pero si
son solubles en solventes orgánicos como el alcohol etílico. Además, este
solvente es llamado también como extractante ya que extrae
simultáneamente todos los pigmentos de las hojas.

Figura 21. Estructura química de la clorofila que evidencia el fitol como

una cadena 20 carbonos con un doble enlace.
Fuente: https://www.questoesdevestibular.com.br/questao/analise-as-
estruturas-das-clorofilas-a-e-bwwwinfoescola

- ¿Qué otros métodos se utilizan para separar pigmentos?

A continuación, se menciona otros métodos empleados para la
separación de pigmentos fotosintéticos diferentes al de cromatografía en
papel:

Cromatografía en capa fina: Este método es similar a la cromatografía

en papel, pero se utiliza una placa de vidrio o una placa recubierta con un
material absorbente, como gel de sílice, en lugar de papel. La muestra
vegetal se aplica en forma de una pequeña mancha en la placa y luego
se coloca en un solvente. A medida que el solvente se desplaza, los
pigmentos se separan y se forman bandas en la placa. Este método
 permite una mayor resolución y separación de los pigmentos que la
cromatografía en papel.

Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC): Es un método más

avanzado y preciso que permite separar y cuantificar los diferentes
pigmentos con mayor exactitud. Se utiliza un sistema de columna
cromatográfica y una fase móvil que consiste en una mezcla de solventes
adecuada. La muestra se inyecta en la columna y a medida que la fase
móvil se mueve a través de la columna, los pigmentos se separan en
función de sus propiedades físico-químicas. Se detectan y se registran las
señales de los diferentes pigmentos.

Espectroscopía de absorción: Este método se basa en la medición de

la absorbancia de los pigmentos a diferentes longitudes de onda de luz.
Se utiliza un espectrofotómetro para registrar la cantidad de luz absorbida
por los pigmentos a lo largo del espectro electromagnético. Cada
pigmento tiene un espectro de absorción característico, lo que permite
identificar y cuantificar los pigmentos presentes en la muestra.

Estos son solo algunos de los métodos de separación de pigmentos

fotosintéticos más comunes. Cada método tiene sus ventajas y
desventajas, y la elección del método depende de los objetivos de la
investigación, la precisión requerida y los recursos disponibles. Es posible
combinar varios métodos para obtener resultados más completos y
precisos.
- Explique las diferencias entre distancias y tiempos de la
cromatografía de las plantas.
La cromatografía es una técnica que permite separar y analizar los
componentes de una mezcla basándose en la diferencia de afinidad de
cada componente por una fase móvil y una fase estacionaria. En el caso
de la cromatografía de pigmentos celulares, la fase móvil generalmente
es un solvente o una mezcla de solventes, y la fase estacionaria es un
papel cromatográfico.

Los tiempos de la cromatografía de las plantas se refiere al tiempo que

tarda cada pigmento en moverse a través de la fase estacionaria. Los
pigmentos con mayor afinidad por la fase móvil se moverán más rápido,
mientras que aquellos con menor afinidad se moverán más lentamente.
Esto puede deberse a diferencias en la polaridad, tamaño molecular u
otras características de los pigmentos.

Por otro lado, las distancias recorridas por los pigmentos se refieren a la
separación física entre los puntos de aplicación y los puntos finales
alcanzados por cada pigmento en la fase estacionaria. Los pigmentos que
tienen una mayor afinidad por la fase móvil se desplazarán más lejos
desde el punto de aplicación, mientras que los pigmentos con menor
afinidad se quedarán más cerca del punto de aplicación.

Estas diferencias en los tiempos y distancias de la cromatografía de las

plantas permiten identificar y separar los diferentes pigmentos presentes
en una muestra. Al analizar los resultados de la cromatografía, es posible
determinar qué pigmentos están presentes en mayor cantidad, así como
identificar posibles pigmentos adicionales que puedan estar presentes en
menor proporción.
 - Mencione entre 5 a 10 plantas (indicando nombre común, nombre
científico, importancia) comestibles (entre verduras y frutas
diferentes a los mostrados en la clase) que contengan carotenoides
(carotenos y xantófilas)

Nombre
Nombre Científico Carotenoides Importancia
común
Contiene vitamina A,
esencial para la salud
Zanahoria (Daucus carota) a - y b -caroteno
ocular y la función
inmunológica.
Tienen propiedades
antioxidantes y
Violaxantina, b - pueden ayudar a
Naranja (Citrus sinensis) criptoxantina, promover la salud del
luteína,zeaxantina sistema
inmunológico, la piel
y la visión.
Aporta beneficios
antioxidantes y
Violaxantina, b - puede ayudar a
Mango (Mangifera indica)
caroteno promover la salud
ocular y la función
inmunológica.
Tiene propiedades
antioxidantes y se ha
relacionado con la
Tomate (Lycopersicumesculentum) Licopeno
reducción del riesgo
de ciertos tipos de
cáncer.
Ofrecen beneficios
Pimiento Capsantina,
(Capsicumanuum) antioxidantes y
rojo capsorrubina
antiinflamatorios.
Beneficiosos para la
salud ocular y
pueden ayudar a
zapallito luteína y la
Cucurbita pepo proteger contra la
italiano zeaxantina
degeneración
macular relacionada
con la edad.
Tiene propiedades
b- antioxidantes y
Papaya (Carica papaya) criptoxantina, b - beneficios para la
caroteno salud de la piel y la
visión.
Excelente fuente de
vitamina C y fibra
b -caroteno y
Kiwi Actinidia deliciosa dietética, lo que lo
luteína
convierte en una
opción saludable
 para promover la
salud inmunológica
Tienen propiedades
antioxidantes y
antiinflamatorias, y se
Remolacha Beta vulgaris betalainas ha demostrado que
tienen efectos
beneficiosos para la
salud cardiovascular.
Tienen propiedades
a - y b -caroteno, antioxidantes y
Calabaza Cucurbitaspp.
luteína beneficios para la
salud de la visión.
Tabla 1.
CONCLUSIONES

• Debido a la presencia de una cadena de fitol con un enlace doble, la

clorofila presenta una naturaleza cerosa que explica su insolubilidad en
agua y buena solubilidad en solventes orgánicos.

• Se concluye que debido a la selectividad del pigmento a extraer o el tipo

de muestra que se va a trabajar, se emplearan diferentes métodos de
separación de pigmentos.
• Podemos concluir que la presencia de clorofila en la hoja verde y de
antocianinas en la hoja roja se puede determinar mediante la observación
de los patrones de absorción de los pigmentos. Las clorofilas son
responsables del color verde en las hojas verdes y tienden a migrar
lentamente durante la cromatografía, mientras que las antocianinas dan
el color rojo en las hojas rojas y se mueven más rápidamente en el
proceso. Estos pigmentos desempeñan un papel importante en la
fotosíntesis y en la adaptación de las plantas a su entorno.
REFERENCIAS

• Analise as estruturas das clorofilas a e b.(www.infoescola. [Internet].

Questões de Vestibular. [citado el 01 de julio de 2023]. Disponible en:
https://www.questoesdevestibular.com.br/questao/analise-as-estruturas-das-
clorofilas-a-e-bwwwinfoescola
• Cromatografía en papel de pigmentos Vegetales. [Internet] 2018-11-07
[citado 2023 Jul 01]. Disponible en: htts://quimicafacil.net/manual-de-
laboratorio/ cromatografia-en-papel-de-pigmentos-vegetales.
• Meléndez-Martínez Antonio J., Vicario Isabel M., Francisco J. Heredia.
Importancia nutricional de los pigmentos carotenoides. ALAN [Internet].
2004 Jun [citado 2023 Jul 01] ; 54( 2 ): 149-155. Disponible en:
http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0004-
06222004000200003&lng=es.
• Mancilla, C., Castrejon, C., Rosas, T., Blanco, E., &Perez, S. Extracción y
separación de pigmentos vegetales. [Internet] 2013 [citado 1 de julio
de2023]. Disponible en:
https://d1wqtxts1xzle7.cloudfront.net/48551062/extraccion-y-separacion-de-
pigmentos-vegetales
• Pigmentos fotosintéticos [Internet]. www.slideshare.net. [citado el 01 de
julio de 2023]. Disponible en: https://es.slideshare.net/yomismtz/pigmentos-
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• Pigmentos fotosintéticos: qué son, tipos y ejemplos - Resumen [Internet].
ecologiaverde.com. Disponible en:
https://www.ecologiaverde.com/pigmentos-fotosinteticos-que-son-tipos-y-
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