UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE

CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES

INFORME 1: RECORRIDO DEL LABORATORIO (COMPARACIÓN)

Integrantes: Camila Mena - Sophia Polit

NRC: 9297
Fecha de entrega: 2022/11/08

Introducción
El cultivo de tejidos vegetales se define como un conjunto de diversas técnicas, que permiten que se
cultive de forma aséptica y controlada un explante; uno de los aspectos más importantes a tener en
cuenta es la preservación de la asepsia, por ello dentro de los laboratorios en donde se realicen dichos
procedimientos es necesario que se mantenga la seguridad tanto del operador como de las muestras
vegetales con las que se trabaje.
Los laboratorios destinados al cultivo de tejidos se distinguen de otros laboratorios, dado que cuentan
con ciertos requisitos de diseño, tales como contar con un aislamiento adecuado para una mejor
protección de temperaturas extremas, vientos fuertes y vibraciones externas, disponer de instalaciones
de agua y electricidad adecuadas tomando en cuenta que estas se encuentren ubicadas en lugares
separados con el fin de evitar accidentes, asimismo el laboratorio debe contar con fuentes de agua de
buena calidad, un sistema de eliminación de las aguas residuales apropiado y un generador que
proporcione energía en caso de emergencia (Mageau, 1993).
Un laboratorio de cultivo de tejidos debe disponer de varias áreas diseñadas de acuerdo al tipo de
actividad que en ellas se realizan, por ello se distinguen áreas sucias en donde se pueden encontrar la
recepción, oficinas y bodega; áreas semi limpias que incluyen la sala de preparación de medios y
explantes y la sala de lavado o esterilización y finalmente las áreas limpias que abarcan las salas de
siembra, incubación y el invernadero, a continuación se detallan las características más importantes de
cada una de ellas:

1) Área de recepción y oficinas

El área de oficina es un espacio destinado para el director del laboratorio, técnico de laboratorio, así
como para las actividades de secretaría, mantenimiento de registros, entre otras, por lo cual deben
contar con un computador, impresora, hojas de cálculo y base de datos para la gestión del inventario y
progreso de los cultivos. De acuerdo a la disposición del laboratorio la sala de oficinas también puede
albergar la zona de recepción, la cual está diseñada principalmente para el envío y recepción de
muestras.Esta zona puede mantener condiciones sanitarias normales, sin embargo deben estar
separadas de la “zona limpia” (International Atomic Energy Agency, 2004).
El laboratorio de cultivo de tejidos de la Universidad de las Fuerzas Armadas “ESPE” cuenta con dos
oficinas una para la docente y otra para la técnica de laboratorio.

2) Área de bodega
El área de bodega está designada para el almacenamiento de los reactivos, cristalería e insumos del
laboratorio. Esta zona debe estar diseñada de acuerdo al tamaño de los artículos que se van a
almacenar y de igual forma debe contar con estanterías ajustables, armarios con puertas, iluminación
acorde con el tipo de reactivo almacenado y una sistema de ventilación adecuado. Al igual que el área
de recepción y oficinas esta zona debe estar separada de las “zonas limpias” (Mageau, 1993).
Dentro del laboratorio universitario el área de bodega fue adecuada como un espacio compartido para
la oficina de la técnica de laboratorio,cabe destacar que esto no es lo más adecuado dado al peligro que
pueden llegar a constituir los reactivos que allí se encuentran almacenados.

3) Área de preparación de medios y material vegetal

En cuanto a la infraestructura de la sala es esencial mencionar que el número de puertas debe ser
mínimo, adicionalmente estas deben ser corredizas y dar a un pasillo común y no directamente al
exterior. La iluminación de la sala debe ser adecuada con el fin de facilitar la visibilidad del trabajo y
en relación a la ventilación se puede disponer de ventanas, pero estas deben ser selladas contra el aire
que proviene del exterior (Mageau, 1993).
Algunos de los elementos de seguridad con los que debe contar la sala incluye un extintor de
incendios, ducha de seguridad, manta ignífuga, estación de lavado de ojos y un botiquín de primeros
auxilios (Mageau, 1993).
Dado que el área se considera parte de las zonas limpias es importante que el operador lleve el cabello
recogido, mandil y zapatones (Mageau, 1993).
Por otra parte, la sala de preparación de medios en un laboratorio de cultivo de tejidos vegetales se
debe encontrar provista de una mesa de trabajo cubierta con granito o tablero laminado,
adicionalmente esta debe contar con bancos alrededor de la misma, además tanto la mesa como los
bancos deben poseer una altura adecuada de manera que permitan al operador trabajar de pie, de igual
manera se puede disponer de cajones en la parte inferior de la mesa de trabajo (Dantu & Bhojwani,
2013, p.13).
Por otro lado, el laboratorio debe contar con equipos tales como balanzas, medidor de pH, agitadores
magnéticos, hot plates, cristalería, entre otros. En cuanto a las balanzas se puede mencionar que se
debe disponer de una balanza electrónica de carga superior con sistema de tarado y una balanza
analítica, es importante tomar en cuenta que estas deben encontrarse aisladas en una pequeña cámara
si el área de preparación de medios cuenta con autoclaves (Dantu & Bhojwani, 2013, p.13).
Asimismo la sala debe disponer de estanterías, frigoríficos y congeladores destinados al
almacenamiento a corto plazo de sustancias químicas, materiales vegetales y soluciones de reserva, sin
embargo en caso de que no se cuente con el espacio necesario para colocar ambos dispositivos en la
sala estos pueden ser situados en el pasillo. De igual manera para la esterilización por filtración de
medios o soluciones de compuestos termolábiles se puede proporcionar un aspirador o bomba de vacío
(Dantu & Bhojwani, 2013, p.13) .También es importante contar con destiladores de agua, puesto que
el agua utilizada para la preparación de medios debe ser altamente purificada, motivo por el cual debe
evitarse el uso del agua potable, dado que esta constituye una fuente rica de sales, partículas y diversos
microorganismos (Kumar, 2015).
En comparación con la bibliografía se puede mencionar que el laboratorio de cultivo de tejidos
vegetales de la Universidad de las Fuerzas Armadas “ESPE” cumple con varias de las especificaciones
mencionadas anteriormente, puesto que la sala de preparación de medios de cultivos y material vegetal
cuenta con un mesón central, bancos y cajones en la parte inferior de la mesa destinados al
almacenamiento, de igual manera cuenta con balanzas analíticas, hot plates con agitación, pHmetro,
refrigeradores, congeladores, estanterías y material de vidrio, no obstante, la sala actualmente no
dispone de un destilador de agua funcionando, por lo que el agua destilada es provista por el
laboratorio de microbiología de la universidad. Con respecto a la infraestructura la sala del laboratorio
universitario cuenta con una puerta corrediza que desemboca a un pasillo de uso en común, sin
embargo a diferencia de como se menciona en la bibliografía la sala posee ventanas que dan al exterior
y la instalación eléctrica se encuentra ubicada encima del lavabo. En contraste con los elementos de
seguridad mencionados anteriormente se puede mencionar que la sala de preparación no dispone de
extintores contra incendios cargados.
 4) Área de lavado o esterilización
Dependiendo de la disponibilidad de espacios del laboratorio las zonas de lavado pueden estar
localizadas en salas separadas o en una sala común (Dantu & Bhojwani, 2013, pp.12-13)
Dentro del laboratorio el área de lavado o esterilización puede estar conectada con la sala de
preparación de medios y material vegetal, puesto que el medio fresco debe ser llevado a esta sala para
su respectiva esterilización y el material de vidrio limpio debe ser devuelto al área de preparación de
medios. En cuanto a la infraestructura la sala debe ser provista con un suelo y paredes tolerantes al
vapor y a la humedad. De igual manera esta área puede contar con un extractor para eliminar el aire
húmedo y caliente en caso de ser necesario, no obstante este debe contar con rejillas móviles que se
abran solo cuando se encuentre en funcionamiento (Mageau, 1993).
La zona de lavado debe disponer de un suministro apropiado de agua corriente fría y caliente,
fregadero grande, profundo y resistente a los ácidos y álcalis, tinas de acero o plástico para remojar el
material empleado, cepillos de diversos tamaños para la limpieza de la cristalería, varias autoclaves
destinadas a la esterilización de los medios a emplearse en los experimentos, así como para la
esterilización del material y medios contaminados. Adicionalmente se puede disponer de estanterías
destinadas al almacenamiento de suministros de limpieza, cristalería limpia, entre otros (Dantu &
Bhojwani, 2013, pp.12-13).

Tal y como se menciona en la bibliografía, la sala de lavado y esterilización del laboratorio de cultivos
de la Universidad de las Fuerzas Armadas “ESPE” actualmente se encuentra conectada con el área de
preparación de medios, igualmente esta cuenta con cuatro autoclaves, de las cuales una de ellas se
encuentra destinada a la esterilización del material contaminante, mientras que el resto son empleadas
para los medios de cultivos, cristalería y camisetas usadas por los estudiantes, adicionalmente se puede
mencionar que la primera y tercera autoclaves son automáticas, y la segunda y cuarta son
semiautomáticas, asimismo la sala cuenta con una estantería metálica, un lavabo, tina para la
desinfección del material y un aire acondicionado el cual es encendido siempre y cuando las
autoclaves no se encuentren en funcionamiento.

5) Área de siembra
En el laboratorio de cultivo de tejidos vegetales de la Universidad de las Fuerzas Armadas “ESPE” el
área de siembra se considerada como limpia, aquí se realizan los pasos necesarios para la
transferencia de los explantes a los medios de cultivo, para dicho procedimiento se debe mantener
una asepsia total y por ello el área cuenta con cámaras de flujo laminar caseras y automáticas, por
otro lado los laboratorios descritos en bibliografía establecen que el trabajo de escisión, inoculación y
transferencia del material vegetal requieren del máximo nivel de asepsia ambiental, por lo que es
obligatorio el uso de cámaras de flujo laminar horizontal o vertical, en donde el aire se encuentre
filtrado bajo presión, se aconseja también la construcción de cuartos de transferencia aislados (Smith,
2013, p.24). Por otro lado, en los laboratorios universitarios existen dos salas de siembra, en donde el
sistema de ventilación no está completamente controlado, ya que una de ellas fue adecuada dentro de
una sala con ventilación sellando este sistema de forma manual lo que podría causar fugas de aire
que causen daño a las cámaras de flujo laminar, los laboratorio descritos en bibliografía determinan
que es necesario mantener el área libre de corrientes de aire que puedan dañar los filtros de las
cámaras de flujo laminar, es por ello que las mismas se ubican en un lugar alejado de las puertas y la
sala no presenta ningún tipo de ventilación (Smith, 2013, p.24).
En cuanto a los instrumentos y equipos de uso obligatorio en esta área se distinguen pinzas,
mecheros, alcohol al 70% y savlon, en el laboratorio universitario los accidentes que involucren
fuego son tratados con savlon y la ayuda del docente, sin embargo en los laboratorios profesionales
es obligatorio contar con un extintor debido al uso constante de fuego y calor dentro de la cámara
 (Dantu & Bhojwani, 2013, p.15). Es importante mencionar que para mantener las condiciones de
asepsia los operadores deben cambiar su ropa común por ropa de trabajo que incluye una camiseta,
cofia y mascarilla que se encuentren completamente estériles y hayan pasado por un proceso de
autoclavado, dicho cambio será realizado dentro de una esclusa de cambio en donde se realizará un
lavado de manos hasta los codos por 2 minutos; estos pasos de limpieza previa son seguidos de
manera similar en los laboratorios descritos en bibliografía (Smith, 2013, p.24).

6) Área de incubación
El área de incubación y crecimiento dentro de un laboratorio de cultivo de tejidos es de suma
importancia ya que permitirá el correcto desarrollo del explante sembrado en el medio de cultivo
enriquecido; en el laboratorio universitario se mantienen condiciones controladas de luz, temperatura,
humedad y fotoperiodo dependiendo del explante que se incube, además la sala de incubación está
conformada por distintas estanterías metálicas con 6 pisos de 50 cm de altura cada una, y la cantidad
de luz y temperatura se controla a través de un temporizador; en cuando al laboratorio descrito de en
bibliografía se recomienda mantener una humedad baja para evitar posibles focos de contaminación, la
temperatura de la mayoría de cultivos se mantiene en un rango de 25 a 27°C bajo un fotoperiodo de
16 horas de luz y 8 de oscuridad, de forma general la iluminación utilizada es de luz blanca fría
montadas a 12 pulgadas de distancia del cultivo (Dantu & Bhojwani, 2013, p.25). Dentro de esta zona
es de suma importancia mantener la limpieza, en el laboratorio universitario esto se logra haciendo uso
de un sistema de ventilación que además mantiene la temperatura de la habitación a 25 ± 2°C., la
puerta de entrada es corrediza y las ventanas se mantienen cerradas para evitar el flujo de aire
contaminado; en el caso de los laboratorios profesionales descritos en bibliografía se hace uso de una
presión de aire positiva en toda el área o una cortina de aire en la entrada que permita la eliminación
del polvo de la superficie, además existe una sola puerta y se restringe el uso de ventanas para evitar
que la luz externa interfiera con el ciclo controlado de luz interna, además se recomienda que las
paredes sean redondeadas y no angulares para evitar la formación de telarañas, para mantener la
ventilación y la temperatura se utilizan aires acondicionados de ventana o split para enfriar y un
soplador de aire caliente usado en el invierno, en casos especiales se puede hacer uso de incubadoras
con luces fluorescentes incorporadas que pueden mantenerse incluso fuera de la sala, siempre y
cuando se mantengan las medidas adecuadas (Dantu & Bhojwani, 2013, p.16). En cuanto a la
humedad ambiental dentro del laboratorio universitario es necesario que se mantenga en un nivel del
60% de humedad relativa y dentro de cada frasco con los medios debe ser mayor a 90%, en cuanto al
laboratorio descrito en bibliografía se debe mantener una humedad del 50% en el ambiente, en caso de
ser mayor se deberá hacer uso de un deshumidificador, ya que el exceso de humedad puede causar la
contaminación del cultivo (Dantu & Bhojwani, 2013, p.16).

7) Área de invernadero
Esta área es de suma importancia para la aclimatación gradual de las plantas producidas in vitro, es por
ello que las condiciones de luz y humedad deben ser controladas de forma rigurosa, el laboratorio
universitario actualmente no cuenta con un invernadero, sin embargo los cultivos son trasplantados en
macetas, bandejas o camas apropiadas que son llevadas a mini-invernaderos en donde el suelo se
encuentra esterilizado para evitar contaminación y se controla la luz y humedad con cámaras húmedas
de plástico; en el caso de los laboratorios descritos en bibliografía, los invernaderos son de vidrio,
polietileno o policarbonato y deben encontrarse aislados con mallas especializadas para evitar el paso
de insectos, además existe un sistema de riego especial usando la técnica de micronebulización debido
a que el goteo puede estresar a las plantas, se debe mantener una alta humedad y es obligatoria la
instalación de ventiladores y almohadillas, además se debe contar con un autoclave que permita
esterilizar macetas o pequeñas cantidades de suelo (Dantu & Bhojwani, 2013, p.16).
Conclusiones
La asepsia es el parámetro a controlar más importante dentro de un laboratorio de cultivo de tejidos
vegetales, es por ello que la correcta distribución del espacio es necesaria para evitar la contaminación
en cada una de las áreas; distribuirlas y equiparlas de forma adecuada permite que la materia vegetal
cultivada in vitro se desarrolle efectivamente y su aclimatación sea sencilla.
Además es importante mencionar que los laboratorios descritos en bibliografía presentan
características mucho más técnicas y rigurosas que las presentadas en los laboratorios universitarios de
docencia, sin embargo ambos indican un desempeño favorable en la obtención de plantas cultivadas in
vitro.

Bibliografía

Dantu, P. K., & Bhojwani, S. S. (2013). Plant Tissue Culture: An Introductory Text. Springer India.

International Atomic Energy Agency. (2004). Low cost options for tissue culture technology in

developing countries. https://www-pub.iaea.org/mtcd/publications/pdf/te_1384_web.pdf

Kumar, R. (2015). Laboratory Requirements in Plant Tissue Culture. ResearchGate.

https://www.researchgate.net/publication/301564270_Laboratory_Requirements_in_Plant_Tis

sue_Culture?enrichId=rgreq-b32c2f69bb4680b208186d393586969e-XXX&enrichSource=Y2

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Mageau, O. (1993). Laboratory design. Micropropagation. SpringerLink.

https://link.springer.com/chapter/10.1007/978-94-009-2075-0_2

Smith, R. (2013). Plant Tissue Culture Techniques and Experiments. Elsevier.

https://www.elsevier.com/books/plant-tissue-culture/park/978-0-12-821120-5