Telomerasa y cncer

Estudios recientes sugieren que podramos revertir el proceso de senescencia incrementando de forma artificial la cantidad de telomerasa en nuestras clulas. Incluso se podran revertir algunas atrofias de nuestros tejidos debidas a la vejez, induciendo la sntesis de telomerasa. Sin embargo hay que considerar una consecuencia indirecta de alterar los genes de la inmortalidad celular: el cncer, ya que las clulas cancerosas, a diferencia de las clulas somticas normales, no tienen senescencia tras un nmero definido de divisiones. Estudios demuestran que cuando se estimula la actividad telomerasa y se inactiva un gen supresor de tumores (el gen p16INK4a) se produce inmortalizacin celular, lo cual constituye un importante paso hacia la formacin de un tumor. Muchas clulas cancerosas derivan de clulas somticas, y se ha comprobado la presencia de telomerasa en el 75-80% de las lneas tumorales. Esto no quiere decir que la telomerasa induzca el cncer. Es ms, Kathleen Collins de la Universidad de Berkeley en California encontr que enfermos con una enfermedad congnita muy poco frecuente, la disqueratosis congnita, tenan niveles de telomerasa anormalmente bajos, muriendo no obstante en muchos casos de cncer gastrointestinal. A pesar de esta incongruencia, se sabe que la agresividad de las clulas tumorales est relacionada con sus niveles de telomerasa y que niveles altos de esta enzima son indicativos de la malignidad del tumor FUNCIONES TELOMERASA

Puede desempear un papel en la formacin, mantenimiento y renovacin de los telmeros y en los procesos tales como el envejecimiento y el cncer, y a la cuestin del uso de agentes antitelomerasa como frmacos antitumorales.
La telomerasa cumple la funcin fisiolgica de replicar el DNA a nivel de los telmeros donde se encuentre presente hTERT evitando el acortamiento telomrico. Como se seal anteriormente, el RNA de la telomerasa esta constituido por 10 12 ribonucletidos complementarios al DNA de los telmeros. DNA telmero = 5 - TTAGGGTTAGGG - 3 RNA telomerasa = 3 - AAUCCCAAUCCC - 5

LAS TELOMERASAS
Fig. 2. Mecanismo de accin de la telomerasa. (1) La enzima contiene el ARN telomersico con un sector complementario a la secuencia de los telmeros. (2) La unin del ADN telomrico con el ARN telomersico se produce por apareamiento de bases complementarias. (3) La enzima alarga el telmero usando como molde el ARN. (4) Al completar un alargamiento la enzima se desplaza y comienza un nuevo ciclo de alargamiento y as sucesivamente.

El descubrimiento de las telomerasas resolvi en principio el problema de la replicacin de los extremos de molculas lineales de ADN.. En la referencia7 aparece una revisin de los principales trabajos sobre esta enzima. La enzima es una ribonucleoprotena y para su actividad son esenciales tanto el componente protenico como el ARN. En Tetrahymena el ARN telomersico (ARNtl) tiene una longitud de 159 nucletidos (nt) y contiene 9 repeticiones del molde 5' CAACCCCAA3'. Esta caracterstica que se observa tambin en todos los otros ARNtl identificados, permite el apareamiento del telmero en crecimiento con el ARNtl y que an quede una regin que pueda servir de molde. Las telomerasas difieren de todas las polimerasas en que utilizan un molde interno en vez de uno externo, lo cual impone limitaciones estricas especficas para la elongacin del iniciador y la catlisis. La telomerasa alarga el ADN iniciador por la adicin uno a uno de los desoxinuclesidos trifosfatados y as genera las repeticiones en tanden de los telmeros. La de Tetrehymena puede alargar ADN iniciadores Oxytricha, humanos, plantas y levaduras. Esto sugiere que la enzima tiene afinidad general por las secuencias ricas en G ms que por un motivo especfico como sucede con otras protenas de unin al ADN. Pero en todos los casos, la secuencia aadida se corresponde con el molde de ARN de la enzima. Actualmente, se propone la existencia de 2 sitios enzimticos independientes de interaccin con el ADN iniciador. Uno contiene el molde de ARN y alnea el extremo 3' del iniciador para su elongacin en el centro cataltico. El otro se une al ADN iniciador hacia el lado 5del molde y proporciona una va de salida para la hebra en crecimiento. Este modelo explica la adicin de varias repeticiones sin que la enzima se disocie del ADN iniciador. Este sitio cataltico nico debe moverse en relacin con el ARN molde. Experimentos en Euplotes apoyan este modelo de los 2 sitios. 8 La enzima posee tambin actividad endonucleoltica que pudiera estar relacionada con una funcin de correccin

FUNCIONES DE LOS TELMEROS Los telmeros representan estructuras esenciales para las clulas, pues evitan la fusin cromosmica, desempean un importante papel en mantener la estabilidad cromosmica17 y participan tanto en la meiosis como en la mitosis. Sin embargo, su funcin ms notoria es la de servir como un reloj mittico que mide y regula el nmero de las divisiones celulares.19 Los telmeros se acortan con cada divisin celular y el nmero de divisiones que la clula puede experimentar se correlaciona con la longitud de los telmeros.20 Este acortamiento pudiera eliminar genes indispensables para la vida o silenciar genes cercanos por el efecto de posicin del telmero. Una longitud crtica pudiera ser la seal para la entrada en la senescencia celular. Sin embargo, vale tener presente que no est relacionada con la edad del organismo. La actividad de la telomerasa vara en diferentes etapas de la vida. Se ha detectado en ovarios y testculos en fetos, recin nacidos y adultos, pero no en vulos ni espermatozoides maduros. El lastocisto y la mayora de los tejidos somticos de 16 a 20 semanas de desarrollo exhiben un alto nivel de telomerasa que desaparece despus del nacimiento.21 Tambin es alta en tejidos adultos con una intensa proliferacin celular como en las clulas endoteliales22 y el endometrio.23 En otras clulas puede ser inducida en determinadas etapas de la vida como ocurre con la activacin de los linfocitos T y los B. Esta funcin de los telmeros los relaciona de inmediato con la transformacin cancerosa. En uno de los primeros trabajos sobre el tema se encontr que en clulas cultivadas de 18 diferentes tejidos humanos 98 de cada 100 inmortales y ninguna de 22 mortales mostraban actividad de telomerasa. Asimismo 90 de 101 biopsias de 12 tipos de tumores y ninguna de 50 de tejidos somticos normales posean actividad de la enzima. Estudios posteriores han confirmado una actividad incrementada de telomerasa en cncer de mama,27 prstata,28 astrocitomas y otros. Estos hallazgos pudieran tener importantes implicaciones clnicas. La determinacin de la actividad de telomerasa pudiera ser utilizada para el diagnstico precoz del cncer en pruebas no invasivas30 y los inhibidores de la enzima pudieran ser usados como agentes antitumorales con un alto grado de selectividad para las clulas transformadas. PERSPECTIVAS

El descubrimiento de la singular estructura nucleoprotenica de los telmeros y su conservacin filogentica estructural y funcional demuestran el carcter esencial de esas estructuras para la vida de la clula. La existencia de las telomerasas soluciona el viejo problema sobre la replicacin de los extremos de molculas lineales de ADN. Sin embargo, estos hallazgos plantean nuevos problemas. Entre ellos est determinar la funcin del ARNtl en la zona que no funciona como molde y su posible participacin en la catlisis enzimtica. Los factores que regulan la actividad de la enzima por una parte y la longitud de los telmeros por otra. Dilucidar los mecanismos moleculares que vinculan los telmeros con la regulacin de la proliferacin celular. Tambin ser interesante y trascendental la posible aplicacin de estos conocimientos para el diagnstico y tratamiento de enfermedades proliferativas, especialmente el cncer.

Acortamiento telomrico y actividad de telomerasa

La enzima telomerasa cuyo rol es mantener la integridad telomrica, actuara elongando los extremos cromosmicos erosionados a expensas de un componente de ARN que contiene un dominio que es complementario a la secuencia de ADN telomrico. Ese dominio permite alinear la enzima con el sustrato y provee de un templado para la adicin de novo de deoxinucletidos a las secuencias telomricas. Por retrotranscripcin, la telomerasa genera una copia de ADN de su propia copia de ARN, la cual es entonces fusionada al extremo 3' del telmero. La extensin de los telmeros por la telomerasa es requerida para llegar a la contraccin normal que ocurre despus de cada replicacin del ADN 22. Se detect actividad de telomerasa en las fases G1, S y G2 del ciclo celular, observndose una represin cuando las clulas entran en G0 debido a la carencia de factores de crecimiento, inhibicin por contacto de la divisin celular, induccin de la senescencia por reversin en una lnea celular inmortalizada o por diferenciacin 3. El tamao de las secuencias telomricas terminales, vara dependiendo de diversos procesos biolgicos. Se ha observado una reduccin progresiva del nmero de repeticiones telomricas in vitro, asi como en funcin del envejecimiento celular, in vivo4,13, 29. Despus de un cierto nmero de divisiones celulares, la clula adquiere una longitud telomrica crtica, pudiendo resultar en la prdida de secuencias de regiones subtelomricas que podran llevar a la muerte celular. La prdida de estas repeticiones terminales durante la proliferacin celular debido a una incompleta replicacin puede ser contrarrestada por la elongacin de los telmeros por parte de la telomerasa. Se han identificado cuatro genes que codifican protenas que controlan el equilibrio entre la elongacin por a telomerasa y el acortamiento debido a la actividad de exonucleasa. Una de las protenas ms importantes es TRF130, sta se une al ADN telomrico doble cadena y regula negativamente la longitud telomrica31 manteniendo la estabilidad cromosmica. Recientemente se ha identificado la protena TIN2 que interacta con TRF1 y es esencial en la regulacin de la longitud telomrica, demostrndose adems que TRF1 sola sera insuficiente para controlar la longitud telomrica en clulas humanas32. Se ha sugerido que los telmeros que llegan a una longitud mnima crtica no son capaces de reclutar la protena TRF2, dando como resultado fusiones entre los extremos de los cromosomas33. Existen distintas evidencias que indicaran que el acortamiento telomrico durante el envejecimiento de clulas somticas normales in vitro jugara un rol causal en la senescencia celular. Una longitud telomrica crtica estara asociada con un bloqueo en la replicacin caracterstico de las clulas senescentes. Se estudi la longitud telomrica en fibroblastos y linfocitos de personas sanas centenarias, encontrndose un acortamiento telomrico durante la propagacin in vitro de los fibroblastos, as como una correlacin inversa entre las longitudes telomricas y la edad del donante. Tambin se efectu un anlisis de expresin de genes inducidos durante la senescencia, slo la expresin de fibronectina mostr una correlacin positiva con la edad del donante. Estos resultados sugirieron que el acortamiento telomrico podra jugar un rol diferente en el envejecimiento de distintos tipos celulares34. El modelo propuesto acerca del rol del acortamiento telomrico, en el envejecimiento y la inmortalidad celular, involucra varios pasos. El ADN telomrico protege a los extremos de los cromosomas de eventos de recombinacin y su longitud servira como un reloj mittico, el cual permite la salida del ciclo celular cuando los telmeros llegan a ser suficientemente cortos. La longitud de stos, en condiciones fisiolgicamente normales, declina con las sucesivas divisiones celulares llegando progresivamente a un estadio de reduccin crtica caracterstico del proceso de senescencia. Las mutaciones en los genes p53, Rb (Retinoblastoma) o la adicin de secuencias de ADN virales, conferira la capacidad de saltear los signos que ejercen el control del crecimiento celular que normalmente llevan a un primer estadio de mortalidad. Adems, el modelo sugiere que las mutaciones producidas en genes que codifican protenas que actan detectando anomalas cromosmicas o regulando el ciclo celular, pueden permitirle a una poblacin clonal escapar de la senescencia y continuar proliferando, causando prdidas telomricas continuas, inestabilidad cromosmica y tas. Las clulas que escapan de ese primer estadio de mortalidad celular, llegaran a una segunda etapa, denominada crisis. La mayor parte de las clulas que ingresan a ese perodo, moriran, mientras que una pequea subpoblacin con defectos cromosmicos sobrevivira a la misma por renovacin en la produccin de telomerasa y la consecuente estabilizacin de sus telmeros, que llevaran a una proliferacin indefinida35.

ESTRUCTURA Y COMPOSICION DE LA TELOMERASA TERT O hTERT (Telomerasa Transcriptasa Inversa)

La telomerasa es un complejo de ribonucleoproteina con actividad transcriptasa inversa(es

decir una enzima que sintetiza ADN utilizando una cadena molde de ARN). que
tiene un peso molecular de aproximadamente un megadalton.

Posee un ARN pequeo de origen nucleolar, (no confundir con el ARN pequeo de origen nuclear), y una subunidad cataltica proteica. El ARN pequeo provee de una molcula molde 3`-AAUCCC-5` en los maferos y se lo denomina TERC por su sigla en ingls (Componente de ARN de la Telomerasa). La subunidad proteica se la denomina TERT (Transcriptasa Reversa de la Telomerasa). Es una enzima compuesta por una protena y una secuencia de ARN que acta como molde para el ADN del telmero.
La actividad de telomerasa fue detectada por primera vez en Tetrahymena y despus en otros eucariontes

En uno de los experimentos se removi, en ratones, el gen de la telomerasa y se observ el comienzo del envejecimiento La observacin de los ratones a los que le faltaba la telomerasa demostr que no se desarrollaban bien, se comprometa la estabilidad de los cromosomas y la integridad de las clulas. Disminuy la fertilidad, los rganos reproductivos se achicaron y los testculos, el bazo y la mdula sea degeneraron.
Con este estudio se concluy que la telomerasa, por si misma, no causa el cncer, sino que es un proceso de mltiples pasos que requiere la participacin de muchos genes.

Se debe recalcar tambien que en el 2009 tres estadounidenses, Elizabeth Blackburn, Carol W. Greider y Jack W. Szostak, fueron galardonados con el Nobel de Medicina por sus trabajos sobre la telomerasa. FUNCIONES DE LA TELOMERASA La enzima telomerasa cuyo rol es mantener la integridad telomrica por adicin de repeticiones del tipo 5'-TTAGGG-3'., actuara elongando los extremos cromosmicos erosionados a expensas de un componente de ARN que contiene un dominio que es complementario a la secuencia de ADN telomrico.

El mecanismo de la telomerasa se realiza mediante un modelo de cuatro pasos: a. b. c. d. Telomerasa reconoce el sustrato en el telmero y la terminacin TTGGGG se aparea con las bases del RNA de la regin CAACCCCAA. El RNA es copiado hasta el final de la regin de la plantilla. Mediante translocacin se realiza la reposicin de la secuencia terminal y se expone plantillas adicionales de secuencia para una segunda vuelta de sntesis. Otra vuelta de reproduccin de la plantilla produce un enlongamiento de la secuencia terminal.

Se han identificado cuatro genes que codifican protenas que controlan el equilibrio entre la elongacin por a telomerasa y el acortamiento debido a la actividad de exonucleasa. Una de las protenas ms importantes es TRF130, sta se une al ADN telomrico doble cadena y regula negativamente la longitud telomrica31 manteniendo la estabilidad cromosmica. Recientemente se ha identificado la protena TIN2 que interacta con TRF1 y es esencial en la regulacin de la longitud telomrica, demostrndose adems que TRF1 sola sera insuficiente para controlar la longitud telomrica en clulas humanas

ENVEJECIMIENTO CELULAR Se debe a que la longitud telomrica queda por debajo de ciertos lmites.La causa del acortamiento de los telmeros derivara de una reduccin progresiva de la sntesis de la enzima TELOMERASA.

CELULAS CANCEROSAS Y SU RELACION CON LA TELOMERASA

Las caractersticas poco usuales de la telomerasa, su ausencia en clulas somticas puede ser un objetivo prometedor para buscar nuevas armas teraputicas contra el cncer
Si la actividad de la telomerasa es alta, la longitud del telmero se mantiene, y la senescencia celular se retrasa. Este es el caso de las clulas cancergenas, con largos telmeros y gran actividad de la enzima telomerasa, a las que se atribuye vida eterna.

Fig. 2. Mecanismo de accin de la telomerasa. (1) La enzima contiene el ARN telomersico con un sector complementario a la secuencia de los telmeros. (2) La unin del ADN telomrico con el ARN telomersico se produce por apareamiento de bases complementarias. (3) La enzima alarga el telmero usando como molde el ARN. (4) Al completar un alargamiento la enzima se desplaza y comienza un nuevo ciclo de alargamiento y as sucesivamente