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Archivos  de  Biología  Oral  132  (2021)  105275

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Archivos  de  Biología  Oral

página  de  inicio  de  la  revista:  www.elsevier.com/locate/archoralbio

Efecto  de  las  soluciones  de  TiF4/NaF  y  quitosano  sobre  la  formación  de  biopelículas  y  
la  prevención  de  la  desmineralización  de  la  dentina

Mariele  Vertuán , Julia  França  da  Silva , Aline  Silva  Braga, Beatriz  Martínez  de  Souza Ana

,
Carolina  Magalhaes  ̃ *
Departamento  de  Ciencias  Biológicas,  Facultad  de  Odontología  de  Bauru,  Universidad  de  S˜  
aoPaulo,  Bauru,  SP,  Brasil

INFORMACIÓN  DEL  ARTÍCULO ABSTRACTO

Palabras  clave: Objetivo:  Este  estudio  evaluó  el  efecto  de  soluciones  experimentales  que  contenían  TiF4/NaF  y  quitosano  sobre  especies  bacterianas  
Quitosano
de  microcosmos  biofilm  y  sobre  la  desmineralización  de  la  dentina.
Caries  dental
Diseño:  Se  produjo  una  biopelícula  de  microcosmos  a  partir  de  saliva  humana  mezclada  con  medio  McBain  (sacarosa  al  0,2  %)  sobre  
Fluoruro
dentina  bovina  durante  5  días,  bajo  5  %  de  CO2  y  37  ◦C.  Del  2°  día  al  5°  día  se  aplicaron  los  tratamientos  (control  positivo);  (2)  TiF4  y  
biopelícula  oral
(500  ppm  F−  ppm  F­ ;  NaF:  190  ppm  F− );  (3)  similar  a  2  NaF  (TiF4:  190  ppm  Ti4+  y  300  (1×60s/día)  de  la  siguiente  manera:  (1)  NaF  
más  quitosano  al  0,5%  (Ch  500  mPa.s,  75%  desacetilación),  (4)  solución  tampón  de  fosfato  (control  negativo)  y  (5)  quitosano  al  0,5%  
(Ch  500  mPa.s,  75%  desacetilación).  se  realizó  para  microorganismo  total,  estreptococos  totales,  lactobacilos  totales  y  estreptococos  
mutans.La  desmineralización  de  la  dentina  se  midió  mediante  microrradiografía  transversa­TMR.Los  datos  se  compararon  mediante  
ANOVA/Tukey  o  pruebas  de  Kruskal­Wallis/Dunn  (p  <  0,05 ) .

Resultados:  No  se  encontraron  diferencias  entre  los  tratamientos  con  respecto  al  conteo  de  UFC  (p  >  0.05).  La  dentina  tratada  con  TiF4/
NaF  más  solución  de  quitosano  presentó  la  desmineralización  más  baja  en  comparación  con  el  control  negativo  y  la  solución  de  
quitosano  puro.  Por  otro  lado,  esta  solución  experimental  no  difirió  significativamente  de  la  solución  TiF4/NaF,  siendo  ambas  capaces  
de  reducir  significativamente  la  pérdida  de  mineral.
Conclusión:  TiF4/NaF  más  solución  de  quitosano,  a  un  pH  adecuado  para  ser  clínicamente  aplicable,  no  tuvo  efecto  antimicrobiano,  
pero  fue  capaz  de  reducir  el  desarrollo  de  caries  dentinaria  bajo  este  modelo.

1.  Introducción que  el  cepillado  diario  con  pasta  dental  fluorada  (1000  ppm  F)  podría  detener  las  lesiones  
no  cavitadas,  así  como  las  lesiones  de  caries  de  la  dentina  (Duangthip  et  al.,  2015).  Sin  
Durante  el  envejecimiento,  a  menudo  se  produce  una  recesión  gingival  fisiológica  o   embargo,  aun  así,  la  frecuencia  y  la  calidad  de  la  higiene  bucal  pueden  no  ser  suficientes  
¨
patológica  y,  como  consecuencia,  las  superficies  radiculares  quedan  expuestas   para  proteger  contra  la  caries  de  la  dentina,  especialmente  para  aquellos  pacientes  con  
(Gostemeyer  et  al.,  2018).  Estas  superficies  tienen  un  alto  riesgo  de  desarrollo  de  caries,   alto  consumo  de  azúcar  (Kumar  et  al.,  2016;  Lagerweij  et  al.,  2020)  y  exposición  de  la  
ya  que  la  dentina  de  la  raíz  tiene  un  pH  crítico  más  alto  para  la  disolución  de  minerales   raíz  ( Zhang  et  al.,  2019).  Luego,  es  posible  que  algunos  pacientes  necesiten  intensificar  
que  el  esmalte,  debido  a  su  bajo  contenido  de  minerales  ricos  en  hidroxiapatita   la  fluoración  (Carey,  2014)  para  detener  la  caries  de  la  dentina  (Gao,  et  al.,  2016).
¨
carbonatada  (Gostemeyer  
et  al.,  2018) .  En  la  dentina  se  produce  un  proceso  bioquímico.  
Bajo  una  biopelícula  en  la  disbiosis,  los  ácidos  que  suelen  producir  las  bacterias   El  fluoruro  de  sodio  ya  está  bien  establecido  en  la  literatura,  siendo  ampliamente  
cariogénicas  desmineralizan  la  dentina,  exponiendo  la  matriz  orgánica  y  activando  las   utilizado  como  agente  anticaries.  Recientemente,  TiF4  ha  sido  probado  contra  caries  de  
proteasas,  lo  que  conduce  a  una  rápida  progresión  del  proceso  carioso  (Marsh,  2018;   esmalte  (Comar  et  al.,  2017b;  Souza  et  al.,  2018)  y  dentina  (Dos  Santos  et  al.,  2019).  
Takahashi  &  Nyvad,  2011,  2016;  Tj¨  aderhane  et  al.,  1998). Dos  Santos  et  al.  (2019)  demostraron  el  efecto  de  superioridad  del  barniz  TiF4  en  
comparación  con  el  barniz  NaF  en  la  prevención  de  la  caries  dentinaria  utilizando  un  
Para  proteger  la  superficie  dental  de  los  ácidos  bacterianos  producidos  por  el  biofilm   modelo  de  biopelícula  de  microcosmos  (Dos  Santos  et  al.,  2019).
en  la  disbiosis,  se  recomienda  la  desorganización  diaria  del  biofilm  mediante  el  cepillado   A  pesar  del  interesante  efecto  del  barniz  TiF4,  su  aplicación  requiere  que  los  
de  los  dientes  con  dentífrico  fluorado.  Los  estudios  han  demostrado pacientes  visiten  con  frecuencia  el  consultorio  dental.  Para  permitir  su  uso  en  el  hogar,

*  Autor  correspondiente.
Correos  electrónicos:  mariele.vertuan@usp.br  (M.  Vertuan),  juliafranca@usp.br  (JF  da  Silva),  aline_s.braga@hotmail.com  (AS  Braga),  beatrizmartines@hotmail.
com  (BM  de  Souza),  acm@usp.br  (AC  Magalhaes).  ̃

https://doi.org/10.1016/j.archoralbio.2021.105275  Recibido  el  
21  de  julio  de  2021;  Recibido  en  forma  revisada  el  23  de  septiembre  de  2021;  Aceptado  el  24  de  septiembre  de  2021  
Disponible  en  línea  el  27  de  septiembre  de  
2021  0003­9969/©  2021  Elsevier  Ltd.  Todos  los  derechos  reservados.
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M.  Vertuan  et  al. Archivos  de  Biología  Oral  132  (2021)  105275

propusieron  una  solución  que  contenía  TiF4/NaF,  con  un  valor  de  pH  (4,5)  y  una   Tabla  1  

concentración  de  F  (500  ppm  F­ )  adecuados,  que  ha  mostrado  un  efecto  protector  sobre   Soluciones  de  tratamiento  experimental.
el  desgaste  dental  erosivo  in  vitro  e  in  situ  (Souza  et  al.,  2014;  de  Souza  et  al.,  2018),   Tratos Composición  pH
compatible  con  una  solución  de  fluoruro  comercial  que  contiene  estaño.
(1)  NaF:  control   8.8  500  ppm  F­
Para  mejorar  el  efecto  protector  de  la  solución  TiF4/NaF,  nuestro  grupo  de  investigación   positivo
combinó  las  sales  de  fluoruro  con  quitosano,  que  puede  aumentar  la  viscosidad  de  la   (2)  TiF4  +  NaF 4.2  0,049  %  TiF4  y  0,042  %  NaF  (TiF4:  190  ppm  Ti4+
solución  y  puede  mejorar  la  interacción  del  fluoruro  con  la  superficie  dental  (de  Souza  et   y  300  ppm  F­ ;  NaF:  190  ppm  F­ )
al.,  2020). ;  Souza  et  al.,  2020).  Esta  combinación  se  ha  probado  solo  contra  el  desgaste   (3)  TiF4  +  NaF  + 5.2  0.049%  TiF4  y  0.042%  NaF  (TiF4:  190  ppm  Ti4+  y  300  
Quitosano ppm  F­ ;  NaF:  190  ppm  F­ )  +  0.5%  Ch  500  mPa.s  
dental  erosivo  (de  Souza  et  al.,  2020;  Souza  et  al.,  2020).
(75%  desacetilación)
(4)  PBS:  control   7.6  Solución  tampón  de  fosfato  que  contiene:  cloruro  de  
Además  del  efecto  del  quitosano  sobre  la  reacción  del  fluoruro  con  el  diente negativo sodio  (NaCl),  fosfato  de  sodio  (NaHPO4),  fosfato  
superficie,  se  sabe  que  el  quitosano  tiene  un  efecto  antimicrobiano  debido  a  la  interacción   de  potasio  (KH2PO4)  y  cloruro  de  potasio  (KCl)

de  sus  grupos  amino  cargados  positivamente  con  las  superficies  celulares  microbianas  
(5)  Chitosán 5,5  0,5%  Ch  500  mPa.s  (75%  desacetilación)
cargadas  negativamente,  lo  que  da  como  resultado  la  pérdida  de  la  función  de  barrera  de  
la  pared  celular  microbiana  y  la  fuga  de  material  proteínico  y  otro  material  intracelular   *Nota:  El  término  mPa.s  corresponde  a  milipascal  por  segundo  y  es  una  unidad  para  medir  

( Busscher  et  al.,  2008;  Pichaiaukrit  et  al.,  2019). la  viscosidad  cinemática.

Por  lo  tanto,  el  objetivo  de  este  trabajo  fue  evaluar  el  efecto  de  la  solución  de  TiF4/NaF   Alemania)  se  disolvió  en  una  solución  de  ácido  acético  al  1%  y  luego,  esta  solución  se  
y  quitosano  en  el  desarrollo  de  caries  dentinaria  bajo  un  modelo  de  microcosmos  de   mezcló  con  agua  1:1  (de  Souza  et  al.,  2020;  Souza  et  al.,  2020).
biopelícula.  La  hipótesis  nula  es  que  la  asociación  de  TiF4/NaF  y  quitosano  no  es  superior   Todas  las  soluciones  (soluciones  de  tratamientos  y  saliva  artificial)  se  prepararon  con  los  
a  la  solución  de  TiF4/NaF  o  NaF  en  la  reducción  de  microorganismos  UFC  en  el  biofilm  así   reactivos  grado  analítico  de  Sigma­Aldrich  (St.  Louis,  EE.  UU.)  y  sus  valores  de  pH  se  
como  en  la  protección  contra  la  desmineralización  de  la  dentina. midieron  con  un  pHmetro  (Orion  Star  Series,  Thermo  Fisher  Scientific,  Waltham,  EE.  UU.),  
después  de  calibración  con  estándar  4  y  7.

2.  Material  y  métodos
2.4.  Formación  de  biopelículas  de  microcosmos

2.1.  Aspectos  éticos  y  recogida  de  saliva
Se  mezcló  saliva  humana  con  medio  McBain  (McBain,  2009),  como  se  describió  
El  Comité  de  Ética  (CEEA  #32049820.5.0000.5417)  de  la  Facultad  de  Odontología  de   recientemente  (Braga  et  al.,  2020),  en  una  proporción  de  1:50,  para  ofrecer  nutrientes  al  
Bauru  ­  USP  (Bauru­SP,  Brasil)  aprobó  el  estudio. microorganismo  para  el  crecimiento  del  biofilm.  El  biofilm  del  microcosmos  se  produjo  
El  estudio  se  realizó  de  acuerdo  con  la  Declaración  de  Helsinki. durante  5  días,  bajo  5%  de  CO2  ya  37  ◦C.  Cada  muestra  de  dentina  se  colocó  en  una  
En  primer  lugar,  los  participantes  firmaron  el  consentimiento  informado.  Diez  participantes   placa  de  microtitulación  de  24  pocillos.  Se  añadió  solución  de  saliva  humana/medio  
sanos,  que  cumplieron  con  los  criterios  de  inclusión,  fueron  sometidos  a  la  recolección  de   McBain  (v  =  1,5  ml/pocillo)  y  las  placas  se  incubaron  durante  las  primeras  8  h.  
saliva  bajo  estimulación  mecánica,  como  se  informó  anteriormente  (Braga  et  al.,  2019).  La   Posteriormente,  los  especímenes  se  lavaron  con  PBS  y  se  expusieron  a  medio  McBain  
saliva  humana  se  recolectó  una  vez  en  el  período  de  la  mañana;  La  reserva  de  saliva  de   fresco  que  contenía  sacarosa  al  0,2%  y  se  incubaron  en  las  mismas  condiciones  hasta  
los  10  donantes  se  diluyó  en  glicerol  (70  %  de  saliva  y  30  %  de  glicerol)  y  se  almacenaron   completar  el  primer  día  del  experimento.
alícuotas  de  1  ml  a  ­80  ◦C  (Pratten  et  al.,  2003).
Del  2°  al  5°  día,  los  especímenes  fueron  tratados  con  las  soluciones  experimentales  
(Tabla  1)  a  temperatura  ambiente,  una  vez  al  día  (1  mL/pozo,  1  min)  antes  del  reemplazo  
2.2.  Preparación  de  muestras  de  dientes del  medio  (medio  McBain  fresco  con  0,2%  de  sacarosa). ).  Los  experimentos  se  realizaron  
por  triplicado  (n  =  4/triplicado).
El  estudio  también  fue  aprobado  por  el  Comité  de  Ética  en  Uso  Animal  (CEUA,  número  
˜
003/2020,  Facultad  de  Odontología  de  Bauru,  Universidad  de  Sao  Paulo,  Bauru­SP,  Brasil)  
siguiendo  las  directrices  del  CONCEA  (Consejo  Nacional  de  Control  de  Animales).   2.5.  Análisis  de  biopelículas:  unidades  formadoras  de  colonias  (UFC)
Experimentación).
Los  dientes  bovinos  fueron  donados  por  ganado  sacrificado  en  la  industria  de   Se  utilizaron  cuatro  tipos  diferentes  de  agar  para  el  conteo  de  UFC:  (1)  agar  de  infusión  
´
transformación  de  alimentos  (Frigol  SA,  Lençois  Paulista­SP,  
Brasil).  Luego,  se  prepararon   de  cerebro  y  corazón  (BHI;  Difco,  Detroit,  EE.  UU.)  para  microorganismos  totales;  (2)  agar  
sesenta  especímenes  de  dentina  de  raíz  bovina  (4  mm  ×  4  mm),  se  pulieron  (para  que  se   mitis  salivarius  (MSA;  Neogen,  Indaiatuba,  Brasil)  para  estreptococos  totales;  (3)  agar  mitis  
usaran  de  manera  similar:  0,33  ±  0,12  mm)  y  se  evaluaron  con  respecto  a  la  rugosidad   salivarius  modificado  con  sacarosa  al  20%  (SB  20)  para  estreptococos  mutans;  y  (4)  
promedio  (rugosidad  aritmética  ­  Ra)  utilizando  un  perfilómetro  de  contacto .  (Mahr,   rogosa  (agar  MRS;  Kasvi,  Curitiba,  Brasil)  para  Lactobacillus  sp.  Las  suspensiones  
¨
Gottingen,  Alemania)  para  estandarizar  la  superficie  de  la  dentina  para  el  crecimiento  de   bacterianas  se  diluyeron  (10−  BHI  y  agar  MRS  y  10−  placas  (25  μL/placa)  y  luego,   5 para
biopelículas  (Braga  et  al.,  2019).  Dos  partes  de  cada  1/3  de  la  superficie  de  la  dentina   las  placas  se  incubaron  bajo  5%  de  4 para  MSA  y  SB­20)  y  esparcido  en  Petri
fueron  cubiertas  con  esmalte  de  uñas  rojo  (Estreia­Colorama®,  Rio  de  Janeiro­RJ,  Brasil)   CO2  y  a  37  ◦C,  durante  48  h.  Los  números  de  UFC  se  contaron  y  convirtieron  a  log10  UFC/
para  protegerlo  del  biofilm  y  crear  dos  áreas  de  referencia  (dentina  sana),  permitiendo  un   mL.
posterior  análisis  apropiado  por  TMR.  Posteriormente,  las  muestras  se  esterilizaron  con  
óxido  de  etileno  [tiempo  de  exposición  al  gas  (30  %  ETO/70  %  CO2)  durante  4  h  a  una  
presión  de  0,5  ±  0,1  kgF/cm2].  Los  especímenes  de  dentina  se  distribuyeron  aleatoriamente   2.6.  Análisis  de  desmineralización:  microrradiografía  transversal  (TMR)
en  cinco  grupos  (n  =  12,  Tabla  1),  utilizando  su  Ra  promedio  como  criterio  (Ra:  0,330  ±  
0,11  µm). Las  muestras  de  dentina  se  limpiaron,  se  seccionaron  transversalmente,  se  pulieron  y  
se  sumergieron  en  propilenglicol  durante  24  h  antes  de  someterlas  a  microrradiografía  (20  
kV  y  20  mA,  Softex,  Tokio,  Japón).
2.3.  Grupos  de  tratamiento Las  placas  reveladas  se  analizaron  utilizando  un  microscopio  de  luz  transmitida  equipado  
con  un  objetivo  de  20  ×.  Se  obtuvieron  dos  imágenes  por  muestra  mediante  la  adquisición  
Los  grupos  se  describen  en  la  Tabla  1.  Las  soluciones  experimentales  se  prepararon   de  datos  (versión  2012)  y  se  interpretaron  mediante  el  software  de  cálculo  (versión  2006)  
utilizando  agua  desionizada.  Para  las  soluciones  que  contienen  quitosano,  1%  del  tipo   de  Inspektor  Research  System  (Ámsterdam,  Países  Bajos).  El  contenido  mineral  se  calculó  
respectivo  de  quitosano  (Heppe  Medical  Chitosan,  Halle, asumiendo  un  50%  en  volumen  de

2
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M.  Vertuan  et  al. Archivos  de  Biología  Oral  132  (2021)  105275

contenido  mineral  para  una  dentina  sana  y  que  la  profundidad  de  la  lesión  (LD)  termina   capa  desmineralizada.  La  muestra  del  grupo  TiF4  +  NaF  fue  la  única  que  quedó  con  la  
cuando  la  dentina  presenta  el  95%  de  su  contenido  mineral  (alrededor  del  47,5%)  (Dos   capa  superficial  mineralizada  muy  delgada  preservada.
Santos  et  al.,  2019).  La  pérdida  mineral  integrada  (ΔZ,  vol%  μm),  la  profundidad  de  la  
lesión  (LD,  μm)  y  la  pérdida  mineral  media  (R,  vol%)  se  calcularon  a  partir  de  dos  
imágenes  por  muestra. 4.  Discusión

Se  aceptó  la  hipótesis  nula  ya  que  no  se  encontraron  diferencias  entre  las  soluciones  
2.7.  Análisis  estadístico
de  TiF4  +  NaF,  con  o  sin  quitosano,  con  respecto  a  la  desmineralización  de  la  dentina.  
Nuestro  trabajo  estuvo  motivado  por  investigaciones  previas  en  el  campo  del  desgaste  
Los  datos  se  compararon  estadísticamente  utilizando  el  software  Graph  Pad  Prism  
dental  erosivo,  que  probaron  la  aplicación  de  TiF4/NaF  asociado  o  no  a  quitosano  con  
(GraphPad  Software,  San  Diego,  EE.  UU.).  La  distribución  y  la  homogeneidad  se  
interesantes  resultados  in  vitro  (de  Souza  et  al.,  2020;  Souza  et  al.,  2020) .  Teniendo  en  
probaron  utilizando  las  pruebas  de  Kolmogorov  y  Smirnov  y  Bartlett,  respectivamente.  
cuenta  el  efecto  beneficioso  contra  el  desgaste  dental  erosivo  que  presentaron  las  
Todos  los  datos  se  compararon  mediante  la  prueba  de  comparaciones  múltiples  de  
soluciones  de  fluoruro  que  contenían  quitosano  en  ambos  trabajos  recientes,  pensamos  
ANOVA/Tukey  (para  microorganismos  totales,  estreptococos  mutans  y  Lactobacillus  sp  
que  esta  solución  podría  tener  potencial  para  reducir  el  desarrollo  de  caries  dentinaria.  
y  para  la  pérdida  mineral  integrada  y  la  pérdida  mineral  media)  o  la  prueba  de  
De  hecho,  esta  solución  experimental  tuvo  un  efecto  muy  interesante  contra  la  
comparaciones  múltiples  de  Kruskal­Wallis/Dunn  (para  estreptococos  totales  y  para  la  
desmineralización  de  la  dentina,  que  no  fue  superior  al  TiF4/  NaF  solo.  Por  otro  lado,  los  
profundidad  de  la  lesión) .  El  nivel  de  significación  se  fijó  en
5%. valores  de  pH  de  la  solución  que  contiene  TiF4/  NaF  +  quitosano  son  más  adecuados  
para  ser  clínicamente  aplicables  que  los  presentados  por  TiF4/NaF  solo.  Las  

3.  Resultados concentraciones  de  F  probadas  en  el  presente  estudio  se  consideran  los  valores  
máximos  permitidos  para  ser  incluidos  en  los  enjuagues  bucales  con  el  objetivo  de  ser  
aplicados  diariamente.  Por  otro  lado,  la  elección  del  0,5%  de  quitosano  se  basó  en  
3.1.  Conteo  de  UFC
estudios  previos  (de  Souza  et  al.,  2020;  Souza  et  al.,  2020;  Vertuan  et  al.,  2021).

En  general,  el  recuento  de  UFC  para  todos  los  microorganismos  analizados  osciló  
entre  7,07  y  7,86  log10/mL,  y  las  soluciones  de  tratamiento  que  contenían  fluoruro,  
El  mecanismo  de  acción  de  TiF4  es  bien  conocido  y  se  basa  en  la  precipitación  de  
quitosano  o  fluoruro  con  quitosano  no  tuvieron  efecto  antimicrobiano,  como  se  muestra  
en  la  Tabla  2. dióxido  de  titanio,  fosfato  de  titanio  hidratado  y  fluoruro  de  calcio  en  la  superficie  del  
diente  (Comar  et  al.,  2017a).  Los  precipitados  inducidos  por  TiF4  son  capaces  de  
proteger  contra  la  desmineralización  de  la  dentina  como  se  mostró  anteriormente  
3.2.  análisis  TMR (Büyükyilmaz  et  al.,  1997;  D´erand  et  al.,  1989).
Recientemente,  Dos  Santos  et  al.  (2019)  confirmaron  el  efecto  protector  del  barniz  TiF4  
La  figura  1  y  la  tabla  3  muestran  las  imágenes  y  los  datos  de  TMR,  respectivamente.   contra  la  desmineralización  de  la  dentina  cariogénica  bajo  un  biofilm  de  microcosmos  
La  solución  de  TiF4/  NaF  más  quitosano  presentó  la  menor  pérdida  mineral  integrada,   (Dos  Santos  et  al.,  2019).  Es  importante  tener  en  cuenta  que  todos  los  estudios  anteriores  
no  diferenciándose  de  las  otras  soluciones  de  fluoruro,  pero  solo  de  PBS  y  quitosano  (p   probaron  TiF4  en  alta  concentración,  simulando  una  aplicación  profesional.  Esta  es  la  
<  0,0001).  La  solución  de  NaF  y  TiF4/NaF  también  pudo  reducir  la  pérdida  de  minerales   primera  vez  que  una  solución  de  TiF4/  NaF  de  baja  concentración  se  prueba  contra  la  
integrados  en  comparación  con  PBS  y  quitosano. desmineralización  dentinaria  cariogénica,  bajo  un  valor  de  pH  más  apropiado  para  ser  
Se  encontraron  resultados  similares  para  la  pérdida  media  de  minerales,  pero  en  este   clínicamente  aplicable  que  los  trabajos  anteriores.  No  se  incluyó  en  la  investigación  una  
caso  solo  la  solución  TiF4/NaF  más  quitosano  y  TiF4/NaF  diferían  significativamente  del   solución  pura  de  TiF4 ,  ya  que  su  pH  es  demasiado  bajo  para  ser  clínicamente  aplicable.
PBS  (p  <  0,0001  para  ambos).  No  se  encontraron  diferencias  entre  los  grupos  con  
respecto  a  la  profundidad  de  la  lesión. La  literatura  ya  ha  demostrado  que  el  aumento  de  la  viscosidad  de  las  soluciones  de  
La  mayoría  de  las  muestras  de  dentina  pertenecientes  al  grupo  PBS  y  algunas   flúor,  mediante  la  adición  de  quitosano,  conduce  a  una  reducción  de  la  erosión  del  
pertenecientes  al  grupo  Chitosan  presentaron  cavitación  (75%  y  25%,  respectivamente)   esmalte  (Pini  et  al.,  2016;  Sakae  et  al.,  2018).  El  quitosano  es  un  polímero  natural  
como  se  muestra  en  la  Fig.  1.  Para  todos  los  grupos  tratados  con  F  (con  o  sin  quitosana),   derivado  de  la  desacetilación  de  la  quitina  que  tiene  la  capacidad  de  interactuar  
las  lesiones  de  caries  de  dentina  mostraron  un  patrón  de  capas  desmineralizadas   electrostáticamente  con  la  estructura  dental  y  la  película  adquirida  y  adsorberse  
(radiotransparentes)  y  remineralizadas  (radiopacas)  por  debajo  de  las  capas  superficiales  altamente
fácilmente  a  la  superficie  formando  una  capa  protectora,  debido  a  su  carga  positiva  
(Claesson  &  Ninham,  1992;  Keegan  et  al.,  2012;  Pini  et  al,  2020;  Svensson  et  al,  2006;  
Tabla  2   Young  et  al.,  1997).
Media  ±  desviación  estándar  o  mediana  (intervalo  intercuartílico)  del  recuento  de   En  un  contexto  general,  el  quitosano  ha  sido  ampliamente  probado  para  mejorar  la  
unidades  formadoras  de  colonias  (UFC)  (log10  UFC/mL)  para  microorganismos  totales,   adhesión  de  los  materiales  al  sustrato  de  dentina,  como  agente  antimicrobiano  y  como  
estreptococos  totales,  estreptococos  mutans  y  Lactobacillus  sp. modificador  de  los  materiales  restauradores,  con  el  objetivo  de  restaurar  el  diente  con  
Tratos mutans Lactobacillus una  lesión  cariosa  (Curylofo­Zotti  et  al.,  2019) . ;  Machado  et  al.,  2019).
Microorganismos  totalesEstreptococos  totalesestreptococos sp. Además,  se  ha  demostrado  que  el  uso  de  quitosano  fosforilado  induce  una  deposición  
(1)  NaF:   7,26  ±  0,31a 7.01  (1.03)a 7,64  ±  0,22a 7,07  ±  0,53a significativa  de  minerales  de  fosfato  de  calcio  en  la  superficie  parcialmente  
control   desmineralizada,  en  comparación  con  el  efecto  del  fluoruro,  lo  que  facilita  la  
positivo
remineralización  de  la  dentina  (Xu  et  al.,  2011).
(2)  TiF4  + 7,46  ±  0,20a 7,42  (0,61)a 7,77  ±  0,32a 7,17  ±  0,22a
NaF A  pesar  de  que  la  literatura  ha  demostrado  el  efecto  antimicrobiano  y  anticaries  del  
(3)  TiF4  + 7,47  ±  0,27a 7,43  (0,83)a 7,83  ±  0,27a 7,21  ±  0,33a quitosano  (Busscher  et  al.,  2008;  Rabea  et  al.,  2003),  su  efecto  depende  de  varios  
NaF  + factores  como  el  grado  de  desacetilación,  el  peso  molecular,  la  concentración  y  el  tipo  
Quitosano
de  vehículo.  Además,  los  modelos  de  estudio  a  menudo  varían  entre  los  trabajos,  lo  que  
(4)  PBS  –   7,52  ±  0,28a 7,66  (0,31)a 7,79  ±  0,25a 7,43  ±  0,25a
dificulta  compararlos  y  justificar  la  falta  de  efecto  del  quitosano  en  el  presente  estudio.
control  
negativo  
(5) 7,44  ±  0,20a 7,33  (0,78)a 7,86  ±  0,24a 7,35  ±  0,26a Se  sabe  que  el  quitosano  tiene  una  clara  tendencia  a  adsorberse  en  las  películas  
Quitosano salivales  con  un  efecto  profundo  en  las  propiedades  superficiales  de  la  película  (van  der  

Las  mismas  letras  en  la  misma  columna  indican  que  no  hay  diferencias  significativas   Mei  et  al.,  2007).  Por  lo  tanto,  la  falta  de  beneficio  del  quitosano  puede  explicarse  por  el  
entre  los  tratamientos.  ANOVA  (microorganismos  totales  p  =  0,15;  estreptococos   modelo  experimental.  Si  el  quitosano  se  hubiera  aplicado  después  de  la  formación  de  la  
mutans  p  =  0,30  y  Lactobacillus  sp.  p  =  0,09).  Kruskal­Wallis  (estreptococos  totales  p   película  adquirida  y  antes  del  crecimiento  de  la  biopelícula,  el  efecto  podría  haber  sido  
=  0,26). diferente,  como  comentan  Busscher  et  al.  (2008).

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M.  Vertuan  et  al. Archivos  de  Biología  Oral  132  (2021)  105275

Fig.  1.  Imágenes  de  TMR  de  una  muestra  representativa  
por  tratamiento:  1­  NaF,  2­  TiF4  +  NaF,  3  ­  TiF4  +  NaF  
+  quitosano,  4­  PBS,  5­  Chitosan.  *  Nota:  Para  los  
grupos  fluorados  ­  como  NaF  (1),  TiF4  +NaF  (2)  y  
TiF4  +NaF+Chitosan  (3)  ­  las  lesiones  de  caries  de  
dentina  presentaron  un  patrón  de  capas  
desmineralizadas  (áreas  más  radiolúcidas)  y  
remineralizadas  (áreas  más  radiolúcidas).  áreas)  por  
debajo  de  una  superficie  muy  desmineralizada.  
También  se  puede  notar  que  el  grupo  2  permaneció  
con  la  capa  superficial  mineralizada  muy  delgada  
preservada.  Por  otro  lado,  muestras  de  dentina  
pertenecientes  al  grupo  PBS  (4)  y  algunas  
pertenecientes  al  grupo  Chi  tosan  (5)  presentaron  
cavitación,  como  se  observa  en  las  imágenes  (4)  y  (5).

Declaración  de  contribución  de  autoría  CRediT
Tabla  3  
Media  ±  desviación  estándar  o  mediana  (intervalo  intercuartílico)  de  la  pérdida  mineral  
Confirmamos  que  el  manuscrito  ha  sido  leído  y  aprobado  por  todos  los  autores  
integrada  (ΔZ,  vol%  μm),  profundidad  de  la  lesión  (LD,  μm)  y  pérdida  mineral  media  (R,  
nombrados,  todos  los  autores  contribuyeron  con  el  presente  estudio.  Las  contribuciones  de  
vol  %)  que  presentan  las  muestras  de  dentina  desmineralizada.
los  autores  fueron:  AC  Magalhaes  ̃ :  Conceptualización,  Metodología,  Validación,  Análisis  
Tratos ΔZ  (%vol.μm) DL  (μm)   R  (%  en  volumen)
formal,  Recursos,  Redacción  –  borrador  original,  Redacción  –  revisión  y  edición,  Visualización,  
(1)  NaF:  control  positivo 3116,0  ±  669,7b  132,4  (25,5)a  2820,0   24,3  ±  2,9b   Supervisión,  Administración  del  proyecto,  Adquisición  de  fondos.  M.  Vertuan,  JF  Silva,  AS  
(2)  TiF4  +  NaF ±  804,0ab  129,7  (16,2)a  2398,0  ±   20,5  ±  2,5ª
Braga  y  BM  Sousa:  Metodología,  Validación,  Análisis  formal,  Investigación,  Recursos,  
(3)  TiF4  +  NaF  +  Quitosano 587,6ª  130,8  (15,4)a  3853,6  ±  314,6c   18,6  ±  3,3ª
Adquisición  de  fondos.  Redacción:  borrador  original,  Redacción:  revisión  y  edición,  
(4)  PBS:  control  negativo 140,4  (18,2)  a  27.  8  ±  3.9bc  4458.5  ±  571.3c  149.0  
(5)  Chitosán ( 11.1)a  29.4  ±  2.5c Visualización.

Letras  diferentes  en  la  misma  columna  indican  diferencias  significativas  entre  los  
tratamientos.  ANOVA  (ΔZ  y  Rp  <  0,0001).  Prueba  de  Kruskal­Wallis  y  Dunn  (LD  p  =  
0,0529). Agradecimientos  y  fuentes  de  financiación

Agradecemos  al  PIBIC­CNPq  Conselho  Nacional  de  Desenvolvimento  Científico  e  
Esta  especulación  debe  probarse  en  estudios  futuros  utilizando  un  modelo  similar,  pero   ´
Tecnologico  por  otorgar  una  beca  al  segundo  autor  (#138505/2020­9).  Esta  fuente  de  
aplicando  quitosano  antes  del  crecimiento  de  la  biopelícula.
financiación  no  participó  en  el  diseño  del  estudio;  en  la  recopilación,  análisis  e  interpretación  
El  propio  NaF  no  ha  mostrado  ningún  efecto  antimicrobiano  (Thurnheer  &  Beliba  sakis,  
de  datos;  en  la  redacción  del  manuscrito;  y  en  la  decisión  de  someter  el  artículo  para  su  
2018),  mientras  que  el  efecto  antimicrobiano  del  TiF4  sigue  siendo  controvertido  (Alexandria  
publicación.
et  al.,  2019).  En  el  presente  estudio,  ninguno  de  los  fluoruros  presentó  efecto  antimicrobiano.  
¨ y  enjuagues  con  fluoruro  de  sodio  (NaF)  y  
Gostemeyer  et  al.  (2018)  probaron  barnices  
fluoruro  de  diamina  de  plata  (SDF)  con  respecto  a  su  efecto  preventivo  de  caries  en  un  
modelo  de  biopelícula  de  caries  artificial  y  demostraron  que  ninguno  de  los  agentes  tenía  un   Declaración  de  divulgación

efecto  antimicrobiano  significativo,  aunque  eso  en  relación  con  minerales.  pérdida:  el  lavado  
regular  con  flúor  tuvo  un  gran  efecto  preventivo  sobre  la  caries  de  la  raíz  (Gostemeyer  et  al.,   Los  autores  declaran  no  tener  ningún  conflicto  de  interés  potencial.
¨
2018),  de  acuerdo  con  nuestros  hallazgos.
Referencias
A  pesar  de  la  falta  de  efecto  antimicrobiano,  todas  las  soluciones  de  flúor  experimentales,  
´
excepto  el  quitosano  solo,  tuvieron  un  efecto  protector  contra  la  desmineralización  de  la   Alexandria,  AK,  Nassur,  C.,  Nobrega,  CBC,  Branco­de­Almeida,  LS,  Dos
Santos,  KRN,  Vieira,  AR,  …  Maia,  LC  (2019).  Efecto  del  barniz  TiF4  sobre  cambios  
dentina,  lo  que  debe  deberse  a  su  interacción  directa  con  la  estructura  dental.  Los  resultados  
microbiológicos  y  prevención  de  caries:  modelos  in  situ  e  in  vivo.  Investigación  oral  clínica,  
están  de  acuerdo  con  trabajos  similares  anteriores  realizados  en  esmalte  (Vertuan  et  al.,   23(6),  2583–2591.  https://doi.org/10.1007/s00784­018­2681­x  (https://doi:).
2021).  El  efecto  protector  de  caries  fue  más  pronunciado  para  TiF4/NaF,  independientemente   ´
Braga,  AS,  Girotti,  LD,  de  Melo  Simas,  LL,  Pires,  JG,  Pela,  VT,  Buzalaf,  MAR,  &  Magalh˜  aes,  
de  la  presencia  de  quitosano,  lo  que  puede  deberse  a  la  precipitación  de  una  capa  similar  a  
AC  (2019).  Efecto  de  dentífricos  y  enjuagues  bucales  comerciales  a  base  de  hierbas  en  la  
un  esmalte,  rica  en  óxido  de  titanio,  fosfato  de  titanio  hidratado  y  fluoruro  de  calcio,  como  se   prevención  de  la  desmineralización  del  esmalte  utilizando  un  modelo  de  biopelícula  de  
mostró  previamente  (Comar  et  al .  al.,  2017a),  que  actúa  como  barrera  química  y  mecánica   microcosmos  (https://doi:)  Biofouling,  35(7),  796–804.  https://doi.org/
10.1080/  08927014.2019.1662897.
frente  a  los  ácidos.
Braga,  AS,  Simas,  LLM,  Pires,  JG,  Souza,  BM,  de  Melo,  FPSR,  Saldanha,  LL,  …  Magalh˜  aes,  
AC  (2020).  Efectos  antibiopelícula  y  anticaries  de  un  enjuague  bucal  experimental  que  
El  quitosano  podría  no  haber  mejorado  la  reacción  del  fluoruro  y  el  titanio  con  la  dentina;   contiene  extracto  de  Matricaria  chamomilla  L.  bajo  microcosmos  de  biopelícula  sobre  el  
sin  embargo,  pudo  aumentar  el  pH  de  la  solución,  lo  que  podría  ser  interesante  al  planificar   esmalte  (https://doi:)  Journal  of  Dentistry,  99,  artículo  103415.  https://doi.org/  10.1016/
j .jdent.2020.103415.
futuros  ensayos  preclínicos.  Este  hallazgo  merece  ser  confirmado  bajo  modelos  in  situ  y   Busscher,  HJ,  Engels,  E.,  Dijkstra,  RJ  y  van  der  Mei,  HC  (2008).  Influencia  de  un  quitosano  
clínicos  que  consideren  el  papel  de  la  saliva  humana  en  el  mecanismo  de  acción  de  la en  la  adhesión  bacteriana  oral  y  el  crecimiento  in  vitro  (https://doi:)  European  Journal  
of  Oral  Science,  116(5),  493–495.  https://doi.org/10.1111/j.1600­0722.2008.00568.x .

soluciones  experimentales,  para  confirmar  los  resultados  aquí  encontrados.
Büyükyilmaz,  T.,  Ogaard,  B.,  Duschner,  H.,  Ruben,  J.  y  Arends,  J.  (1997).  El  efecto  preventivo  
En  conclusión,  la  solución  TiF4/NaF,  con  o  sin  quitosano,  no  tuvo  efecto  antimicrobiano,   de  caries  del  tetrafluoruro  de  titanio  en  las  superficies  radiculares  in  situ  según  lo  evaluado  
pero  fue  capaz  de  reducir  el  desarrollo  de  caries  dentinaria  en  un  45%  en  comparación  con   por  microrradiografía  y  microscopía  de  escaneo  láser  confocal  (https://doi:)  Advances  in  
Dental  Research,  11(4),  448–452.  https://doi.org/10.1177/  
el  control  (PBS)  bajo  este  modelo. 08959374970110041101.
Carey,  CM  (2014).  Centrarse  en  los  fluoruros:  actualización  sobre  el  uso  de  fluoruro  para  la  
prevención  de  la  caries  dental  (https://doi:)  The  Journal  of  Evidence­Based  Dental  
Practice,  14,  95–102.  https://doi.org/10.1016/j.jebdp.2014.02.004.

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M.  Vertuan  et  al. Archivos  de  Biología  Oral  132  (2021)  105275

Claesson,  PM  y  Ninham,  BW  (1992).  interacciones  dependientes  del  pH  entre  adsorbidas Rabea,  EI,  Badawy,  ME,  Stevens,  CV,  Smagghe,  G.  y  Steurbaut,  W.  (2003).
capas  de  quitosano.  Langmuir,  8(5),  1406–1412. El  quitosano  como  agente  antimicrobiano:  aplicaciones  y  modo  de  acción  (https://doi:)
Comar,  LP,  Souza,  BM,  Al­Ahj,  LP,  Martins,  J.,  Grizzo,  LT,  Piasentim,  IS,  … Biomacromoléculas,  4(6),  1457–1465.  https://doi.org/10.1021/bm034130m.
Magalhaes,  ̃  AC  (2017a).  Mecanismo  de  acción  de  TiF4  en  la  superficie  del  esmalte  dental:  SEM/ Sakae,  LO,  Bezerra,  SJC,  Jo˜  ao­Souza,  SH,  Borges,  AB,  Aoki,  IV,
EDX,  F  soluble  en  KOH  y  análisis  de  difracción  de  rayos  X  (https://doi:)  Caries  Research,   Aranha,  ACC  y  Scaramucci,  T.  (2018).  Un  estudio  in  vitro  sobre  la  influencia  de  la  viscosidad  y  
51(6),  554–567.  https://doi.org/10.1159/000479038. la  frecuencia  de  aplicación  de  soluciones  de  fluoruro/estaño  en  la  progresión  de  la  erosión  del  
Comar,  LP,  Souza,  BM,  Martins,  J.,  Santos,  MG,  Buzalaf,  MAR,  & esmalte  bovino  (https://doi:)  Archives  of  Oral  Biology,  89,  26–30.  https://doi.org/10.1016/
Magalhaes,  ̃  AC  (2017b).  Respuesta  del  esmalte  cariado  al  tratamiento  con  barniz  TiF4  bajo   j.archoralbio.2018.01.017 .
diversas  actividades  cariogénicas  in  situ.  Revista  de  Odontología,  63,  81–84. Souza,  BM,  Fernandes  Neto,  C.,  Salom˜  ao,  PMA,  Vasconcelos,  LRSM,
Curylofo­Zotti,  FA,  Scheffel,  DLS,  Macedo,  AP,  Souza­Gabriel,  AE,  Hebling,  J.  y  Corona,  SAM  (2019).   Andrade,  FB,  &  Magalh˜  aes,  AC  (2018).  Análisis  de  los  efectos  antimicrobiano  y  anticaries  del  
Efecto  de  la  irradiación  con  láser  Er:YAG  y  la  biomodificación  con  quitosano  sobre  la   barniz  TiF4  bajo  microcosmos  de  biopelícula  formada  sobre  el  esmalte  (https://doi:)  Journal  of  
estabilidad  de  la  unión  entre  resina  y  dentina  bovina  desmineralizada  (https://doi:)  Journal  of  the   Applied  Oral  Science:  Revista  FOB,  26,  Artículo  20170304.  https://doi.  org/
Mechanical  Behavior  of  Biomedical  Materials,  91,  220–228.  https://doi.org/10.1016/ 10.1590/1678­7757­2017­0304.
j.jmbbm.2018.12.022 . Souza,  BM,  Lima,  LL,  Comar,  LP,  Buzalaf,  MA,  &  Magalh˜  aes,  AC  (2014).  Efecto  de  enjuagues  bucales  
D´erand,  T.,  Lodding,  A.  y  Petersson,  LG  (1989).  Efecto  de  soluciones  tópicas  de  F  en  caries  como   experimentales  que  contienen  la  combinación  de  NaF  y  TiF4  sobre  el  desgaste  erosivo  del  esmalte  
lesiones  en  superficies  radiculares  (https://doi:)  Caries  Research,  23(3),  135–140.  https://doi.org/ in  vitro  (https://doi:)  Archives  of  Oral  Biology,  59(6),  621–624.  https://doi.org/10.1016/
10.1159/000261166 . j.archoralbio.2014.03.008 .
Dos  Santos,  DMS,  Pires,  JG,  Silva,  AB,  Salomao,  ̃  PMA,  Buzalaf,  MAR,  &  Magalhaes,  ̃  AC  (2019).   Souza,  BM,  Machado,  PF,  Vecchia,  LR  y  Magalhaes,  ̃  AC  (2020).  Efecto  de  las  soluciones  de  quitosano  
Efecto  protector  del  barniz  de  tetrafluoruro  de  titanio  al  4  %  sobre  la  desmineralización  de  la   con  o  sin  fluoruro  sobre  la  protección  contra  la  erosión  de  la  dentina  in  vitro  (https://doi:)  European  
dentina  mediante  un  modelo  de  biopelícula  de  microcosmos  (https://doi:)  Caries  Research,   Journal  of  Oral  Science,  128(6),  495–500.  https://doi.org/10.1111/eos.12740 .  de  Souza,  BM,  
53(5),  576–583.  https://doi.org/10.1159/000499317. Santi,  LRP,  Jo˜  ao­
Duangthip,  D.,  Jiang,  M.,  Chu,  CH  y  Lo,  EC  (2015).  Tratamiento  no  quirúrgico  de  la  caries  dentinaria  en   Souza,  SH,  Carvalho,  TS,  &  Magalhaes,  ̃  AC
niños  en  edad  preescolar:  revisión  sistemática  (https://doi:)  BMC  Oral  Health,  3,  15–44.  https:// (2020).  Efecto  de  las  soluciones  de  tetrafluoruro  de  titanio/fluoruro  de  sodio  que  contienen  
doi.org/10.1186/s12903­015­0033­7. quitosano  a  diferentes  viscosidades  sobre  la  protección  de  la  erosión  del  esmalte  in  vitro  (https://
Gao,  SS,  Zhang,  S.,  Mei,  ML,  Lo,  EC  y  Chu,  CH  (2016).  Remineralización  de  caries  y  efecto  de  detención   doi:)  Archives  of  Oral  Biology,  120,  artículo  104921.  https://doi.org/10.1016/j .  
en  niños  mediante  tratamiento  con  fluoruro  aplicado  profesionalmente:  una  revisión  sistemática   arcoralbio.2020.104921.
(https://doi:)  BMC  Oral  Health,  16,  12.  https://doi.org/10.1186/  s12903­016­0171­6. de  Souza,  BM,  Santi,  LRP,  de  Souza  Silva,  M.,  Buzalaf,  MAR,  &  Magalh˜  aes,  AC
¨ (2018).  Efecto  de  un  enjuague  bucal  experimental  que  contiene  NaF  y  TiF4  sobre  la  erosión  
Gostemeyer,  G.,  Kohls,  A.,  París,  S.  y  Schwendicke,  F.  (2018).  Prevención  de  caries  radicular  a  través   dental  y  la  abrasión  in  situ  (https://doi:)  Journal  of  Dentistry,  73,  45–49.  https://doi.org/10.1016/
de  fluoruro  de  sodio,  clorhexidina  y  fluoruro  de  diamina  de  plata  in  vitro  (https://doi:) j.jdent.2018.04.001 .
´
Odontología,  106(3),  274–281.  https://doi.org/10.1007/s10266­018­0341­x. Svensson,  O.,  Lindh,  L.,  Cárdenas,  M.  y  Arnebrant,  T.  (2006).  Ensamblaje  capa  por  capa  de  mucina  y  
Keegan,  GM,  Smart,  JD,  Ingram,  MJ,  Barnes,  LM,  Burnett,  GR  y  Rees,  GD quitosano:  influencia  de  las  propiedades  de  la  superficie,  la  concentración  y  el  tipo  de  mucina  
(2012).  Micropartículas  de  quitosano  para  la  entrega  controlada  de  flúor  (https://doi:) (https://doi:)  Journal  of  Colloid  and  Interface  Science,  299(2),  608–616.  https://doi.org/
Revista  de  Odontología,  40(3),  229–240.  https://doi.org/10.1016/j.jdent.2011.12.012. 10.1016/j.jcis.2006.02.027.
Kumar,  S.,  Tadakamadla,  J.  y  Johnson,  NW  (2016).  Efecto  de  la  frecuencia  del  cepillado  de  dientes  en   Takahashi,  N.  y  Nyvad,  B.  (2011).  El  papel  de  las  bacterias  en  el  proceso  de  la  caries:  perspectivas  
la  incidencia  y  el  incremento  de  la  caries  dental:  revisión  sistemática  y  metanálisis  (https://doi:)   ecológicas  (https://doi:)  Journal  of  Dental  Research,  90(3),  294–303.  https://doi.  org/
Journal  of  Dental  Research,  95(11),  1230–1236.  https://doi.org/  10.1177/0022034516655315. 10.1177/0022034510379602.
Takahashi,  N.  y  Nyvad,  B.  (2016).  Hipótesis  ecológica  de  la  caries  dentinaria  y  radicular
Lagerweij,  M.  y  van  Loveren,  C.  (2020).  Capítulo  7:  Azúcar  y  caries  dental  (https://doi: )  Monographs  in   (https://doi:)  Caries  Research,  50(4),  422–431.  https://doi.org/10.1159/000447309.
Oral  Science,  28,  68–76.  https://doi.org/10.1159/000455373. Thurnheer,  T.  y  Belibasakis,  GN  (2018).  Efecto  del  fluoruro  de  sodio  en  el  biofilm  oral
Machado,  AHS,  García,  IM,  Motta,  ASD,  Leitune,  VCB,  &  Collares,  FM microbiota  y  desmineralización  del  esmalte  (https://doi:)  Archives  of  Oral  Biology,  89,  77–83.  https://
(2019).  Chitosan  cargado  con  triclosán  como  agente  antibacteriano  para  resina  adhesiva  (https:// doi.org/10.1016/j.archoralbio.2018.02.010.
doi:)  Journal  of  Dentistry,  83,  33–39.  https://doi.org/10.1016/j.jdent.2019.02.002. Tjaderhane,  ̈  L.,  Larjava,  H.,  Sorsa,  T.,  Uitto,  VJ,  Larmas,  M.,  &  Salo,  T.  (1998).  La  activación  y  
Marsh,  PD  (2018).  En  la  enfermedad  y  en  la  salud.  ¿Qué  significa  para  nosotros  el  microbioma  oral?   función  de  las  metaloproteinasas  de  la  matriz  del  huésped  en  la  descomposición  de  la  
Una  perspectiva  ecológica  (https://doi:)  Advances  in  Dental  Research,  29(1),  60–65.  https:// matriz  dentinaria  en  las  lesiones  de  caries  (https://doi:)  Journal  of  Dental  Research,  77(8),  
doi.org/10.1177/0022034517735295. 1622–1629.  https://doi.org/10.1177/00220345980770081001.  van  der  Mei,  
McBain,  AJ  (2009).  Capítulo  4:  Modelos  de  biopelículas  in  vitro:  una  descripción  general  (https://doi:) HC,  Engels,  E.,  de  Vries,  J.,  Dijkstra,  RJ  y  Busscher,  HJ  (2007).
Avances  en  microbiología  aplicada,  69,  99–132.  https://doi.org/10.1016/S0065­2164  (09)69004­3. Adsorción  de  quitosano  en  películas  salivales  (https://doi:)  European  Journal  of  Oral  Science,  
115(4),  303–307.  https://doi.org/10.1111/j.1600­0722.2007.00454.x.
Pichaiaukrit,  W.,  Thamrongananskul,  N.,  Siralertmukul,  K.  y  Swasdison,  S.  (2019). Vertuan,  M.,  Machado,  PF,  de  Souza,  BM,  Braga,  AS  y  Magalhaes,  ̃  AC  (2021).
El  barniz  de  fluoruro  que  contiene  quitosano  demostró  una  liberación  sostenida  de  fluoruro   Efecto  de  las  soluciones  de  TiF4/NaF  y  quitosano  en  el  desarrollo  de  caries  del  esmalte  bajo  un  
(https://doi:)  Dental  Materials  Journal,  38(6),  1036–1042.  https://doi.org/10.4012/dmj.2018­112 . modelo  de  biopelícula  de  microcosmos  (http://doi:)  Journal  of  Dentistry,  111,  Artículo  103732.  
https://doi.org/10.1016/j.jdent.  2021.103732.
Pini,  NI,  Lima,  DA,  Lovadino,  JR,  Ganss,  C.  y  Schlueter,  N.  (2016).  Eficacia  in  vitro  de  soluciones   Xu,  Z.,  Neoh,  KG,  Lin,  CC  y  Kishen,  A.  (2011).  Deposición  biomimética  de  minerales  de  fosfato  de  
experimentales  que  contienen  quitosano  como  agentes  antierosivos  en  el  esmalte  (https:// calcio  en  la  superficie  de  dentina  parcialmente  desmineralizada  modificada  con  quitosano  fosforilado  
doi:)  Caries  Research,  50(3),  337–345.  https://doi.org/10.1159/000445758. (https://doi:)  Journal  of  Biomedical  Materials  Research  Part  B:  Applied  Biomaterials,  98(1),  150–159.  
Pini,  NIP,  Lima,  DANL,  Luka,  B.,  Ganss,  C.  y  Schlueter,  N.  (2020).  La  viscosidad  del  quitosano  afecta  la   https://doi.org/10.1002/jbm.b.31844.
eficacia  de  las  pastas  dentales  que  contienen  F/Sn  contra  el  desgaste  erosivo/abrasivo  del   Young,  A.,  Smistad,  G.,  Karlsen,  J.,  Rolla,  ̈  G.  y  Rykke,  M.  (1997).  Potenciales  zeta  de
esmalte  (https://doi:)  Journal  of  Dentistry,  92,  artículo  103247.  https://doi.org/10.1016/j.jdent.   esmalte  humano  e  hidroxiapatita  medidos  con  Coulter  DELSA  440  (https://doi:)  Advances  in  Dental  
2019.103247. Research,  11(4),  560–565.  https://doi.org/10.1177/  08959374970110042501.
Pratten,  J.,  Wilson,  M.  y  Spratt,  DA  (2003).  Caracterización  de  biopelículas  bacterianas  orales  in  vitro  
por  métodos  tradicionales  y  moleculares  (https://doi:)  Oral  Microbiology  and  Immunology,  18(1),   Zhang,  J.,  Leung,  KCM,  Sardana,  D.,  Wong,  MCM  y  Lo,  ECM  (2019).  Predictores  de  riesgo  de  caries  
45–49.  https://doi.org/10.1034/j.1399­302x.2003.180107.x. de  la  raíz  dental:  una  revisión  sistemática  (https://doi:)  Journal  of  Dentistry,  89,  artículo  
103166.  https://doi.org/10.1016/j.jdent.2019.07.004.