Laboratorio de Diagnóstico Microbiológico Oral y Herramientas Moleculares

PRÁCTICA No. 4

SIEMBRA POR AGOTAMIENTO POR ESTRÍAS

OBJETIVO: El alumno aprenderá a realizar la siembra por agotamiento por estrías y obtendrá
muestras de diferentes sitios de la cavidad bucal para el cultivo y aislamiento de microorganismos.

INTRODUCCIÓN:
Sembrar un microorganismo es colocarlo en un ambiente artificial apropiado para que lleve a
cabo su metabolismo, su desarrollo y reproducción. Tiene como finalidad el cultivo, que es el
crecimiento de poblaciones microbianas en un medio de cultivo bajo condiciones de
laboratorio. Al sembrar el material proveniente de una muestra clínica, por lo general se
obtiene un cultivo mixto (más de una clase de microorganismos), por lo que es importante
llevar a cabo una técnica de estriado en placa que permita obtener colonias aisladas para
facilitar su identificación. La siembra por agotamiento por estrías, es un procedimiento que
permite ir disminuyendo la cantidad de muestra según se avanza en cada cuadrante de
manera que las estrías iniciales proporcionan un crecimiento confluente mientras que a lo
largo de las últimas estrías se desarrollan colonias bien aisladas.

Materiales:
1. Muestra: saliva, materia alba de la superficie dental
2. Hisopo estéril
3. Placa de Petri con Agar Sangre
4. Asa de platino
5. Mechero

Procedimiento:

1. Recuerda que siempre debes trabajar cerca del mechero y garantizar la esterilidad del
asa antes y después de usarla.
2. Toma la muestra frotando la superficie del diente o de una gota de saliva con un
hisopo estéril
3. Con la mano contraria a la del asa procede a levantar la placa de Petri, que se
encuentra boca abajo. En este momento debes evitar hablar, toser, estornudar,
moverte lejos del mechero entre otras acciones que puedan contaminar el medio de
cultivo.
4. Lleva el hisopo hasta uno de los extremos del agar y deposita la muestra frotando
cuidadosamente para no romper el medio y cierra la placa.
5. Coloca el hisopo directamente a la flama del mechero para incinerarlo y deschalo.
6. Toma el asa de platino y esterilízala directamente a la flama del mechero, con la otra
mano levanta y abre la placa Petri y en un extremo enfría el asa hundiendo el extremo
en el agar. A continuación procede a realizar un estriado (zig-zag) de forma muy
delicada sobre la superficie donde se depositó la muestra cuidando de no levantar el
asa de la superficie, ocupando más o menos una tercera parte de la placa.
7. Levanta el asa, esterilízala, enfría, gira la placa tratando de ubicar el asa en el extremo
final derecho del estriado que hiciste y realiza otro estriado perpendicular al anterior
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tomando parte de éste. Este segundo estriado, ocupa más o menos un tercio de la
superficie no utilizada de la placa.
8. Levanta el asa, esterilízala, enfría y gira la placa en el mismo sentido y comienza un
nuevo estriado en el extremo final derecho siguiendo la misma técnica.
9. Levanta una vez más, gira y realiza el último estriado separando un poco más las
estrías sin hacerlas muy amplias, cerrando este último cuadrante hacia el centro de la
placa sin haber tocado ninguno de los otros cuadrantes y en forma de rabito de
cochino. (Ver figura 1)

Muestra

Figura 1. Técnica de Agotamiento por estría

10. Identificar las cajas de Petri con plumón indeleble o con etiquetas con los siguientes
datos: fecha, lugar de la toma de muestra, nombre del que realizó el cultivo, no. de
equipo.
11. Lleva las placas inoculadas a la estufa bacteriológica para incubarlas a 37°C por 24 hrs.

ACTIVIDADES:

1. Menciona cuáles son los requerimientos para llevar a cabo cultivos de

microorganismos aerobios
2. Menciona cómo se lleva a cabo el cultivo de microorganismos anaerobios
3. Defina qué es una colonia bacteriana y describa cómo se clasifican de acuerdo a sus
características macroscópicas (forma, color, borde, elevación, textura, consistencia).
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DÍA 2

Una vez transcurrido el periodo de incubación, observar los cultivos y

describir las características macroscópicas de los diferentes tipos de colonias bacterianas.

Colonias o Características Macroscópicas

clonas
bacterianas
Forma Color Borde Elevación Textura Consistencia

Colonia 1

Colonia 2