11 .

tabolismo de la glucosa' EI eritrocito, más conocido

Ctrlll ' -
bl|ro roio es singu)ar entre todas las células del cuerpc' --' ' "
su única fuente de eners:"-
Ia glucosa y Ia glucólisis como
Asipues, el etitrocito es un modelo úti\ para.la introducci¡::
- Ia glucólisis.
a
producto fi'r-ra}
ut-pirr.ruto, un ácido de tres carbonos' es el
mol glucosa se forman 2 moles de
I de reacclones oe la glul
Icia'de'reaccisn§5.derlariglq€o'lisls'
Esquematizar la secuencia de la glucólisis: por cada de
mitocondrias y metabolismo oxi-
a¡aéióbiala,vfá¡e¡trat ¡eL méteboiitlide.lqs¡ldiá1gi poráo. En las células con
completamente en COu y H:O
,&tcaibonqen1ó,.qá1.|.a!§uQ!.:,i,,:i _ ::, L.,;-ri,.,^ñ.r^ dativo, el piruvato se convierte
xli¿rñiii-;¡;ár§a¡á.ae]a
-,ixáá¡rái,¡,*pti sl: §ls g¡aqr,ebig, ling!Úve'ndo
l

I
-la glucólisis en este ambiente oxidativo
se denomina glucó-
de mitocon-
;r¡n,ia',ütl,za!¡o¡,,Y,:foi,l¡ación'oe' I

IisiJaeróbica-. En los eritrocitos' que carecen

'Át¡,r:e1i¿nuimi4¡Úám"@,0úialie't4!uo!¡s¡¡: oxidativo' el piruvato se reduce a áci-
drias y de metabolismo
x*'ii'ói¡iá¡i*i.v-"iÑánismooetedÚ1a@'{635!a,enzimq
iJé.ñ i¿-lgtugaipftlnalOe,.resufatiél',q1ósré¡iiq','§e l do lactico, un hidroxiácido de tres carbonos
producto de Ia
mol de glucosa proporciona 2 mo-
:
glucólisis anaerobia. Cada
poi el AMP se excretan a la sangre'
x já¡¡iiiliáittas,:r,qatiione¡:de,lq,gl.u9ólisiS',eurfep,ré.sentan"el' :
les de lactato que, a continuación'
exactamente el
*ór'o¡l:. r¿aiiiO¡.es,á¡ dairpá!¡liCIp:Úllli,lás. reacciones Dos moléculu, d. a.ido láctico contienen
hidrógenos y oxígenos que una
i¿Ñai¡ár¡itam"ñt*esia@b.le¡fncluyondo'1;: f mismo número de carbonos,
existe suflcien-
.r,turféiiiá¿iéñrá:¡jve,fdérr9us!!'atQ, molécula de glucosa (Fig' 11' 1); sin embargo'
i, x*
,De§iii§ri las tu¡qo¡§ óisim§ort¡n,lqrloe...l9 l¡@al te energía libre disponible a partlr de la escisión y reagrupa-
á'j.tró'¿ii$!,!ás-.Gált¡l¡¡,nq.cteq$a5, para producir 2 moles
' .áá¡'ió*.i*t¡io,.ú I ción de la molécula de glucosa como
El eri-
§'l'b'¿ábii.:-l prrncioiduet en:.ayor,gLu9ola á. ¿fp por cada mol de glucosa convertida en lactato'
,'r',i;6¡¿¿ñiiacióñ&qluco:.ar'5a¡gu!¡eá:,
óXOásim.e¡oxiOasá,:i.eomgrseru§9.
eslerp.a,laryed
trocito utiliru tu mayoría de este AIP para mantener los gra-
través de su membrana
, x r,¡áiCIibii:k]irñció¡'dá
1á
glúcóJis.u'éúe¡laia:en dientes electroquÍmicos e iónicos a
'
, áiáeiá¡iabde,fáta¡ie'¿eñta!:vrlalncidqll§: plasmática.
x ,*ii¿áiél.or¡@metábolico& la:aridoiis:en l

,fá,á¡ráñeaá!.pÚ ,obsiigttiv¡,,c¡onicai
, x,áñi¿á !¡áa.¡iúiárÉii.ei:iÑilá¡a:,las unciones f
Conversión de gtucosa a [actato

" áé]látdéfi'e,neiasren:en,t i.S.lucolft'!¡ny]1ífung',i$"dela'

x ,áüiairúr¿¡,rr-áaa
¿iii6¡&
:¿ttitud:.el.eyqd!.
. ñM -> {=
2¿ATPA
oái a¡emi!,háCIeJitii¡rino,t1¡§1
H' ,o ,lÁop?.í-pil
'r,,1ó¡q¡éi.i..6r'fo1| .6egl¡@e,na!{
¡á¡,¡¡iA¡i¡j,én'p!¡sonás'eon'd¿ficiént-iáre¡:66Po ,c,, -Lry' r.- lY^ cooH

rl
Z
I ru
rrrl
HO-C-H
I L-ta«ato
H-c-0H {t'*uo'¡
INTRODUCCIÓN I
H-C-OH
La glucosa es el hidrato de carbono más
importante en IaTie- I

cH20H
y la unidad monomérica de la cehllo-
rraly Ia piedra angular D-gtucosa
es el único cornbustible utilizado
su y á.1 áml¿Orr' Asimismo, (c6H1206)
nuestro cuerpo' Todas estas células'
,o.,o¿ut las células de
io"loro los microbios de nuestros intestinos' comienzan el Fio 11 1 Conversión de glucosa a lactato durante la
glucólisis
de
metabolismo de Ia glucosa mediante una vía denominada ,ír"touiá ü" mol¿cula-ae glucosa se convierte en 2 moles
giucofms, es decir, hidrato de carbono (gluco) y partición ü.i.i" Jrtu*. la glucólisis inaeróbica' No se consume oxígeno
netode 2 moles
ni se produce CO, en esta vía' Hay un rendimiento
ñrrrr).tu glucólisis está catalizada por varias enzimas citosó- en lactato'
en el me- i" Áip p"r. cada molécula de glucosa convertido
ii.u, ,olrbl., y es la vía metabólica ubicua y central
 -'
moles de ATP de cada mol de triosa losiai' a: ;'
En el eritrocito, el 10-20% del intermedio glucolítico'
1,3-bisfosfoglicerato' es desviado a Ia síntesis de 2,3-bisfosfogli-
una cantidad neta de 2 moles de '{TP pLrr '::i -
' : ':
la cosa convertida en lactato' La glucólisis es ü:r
cerato (2,3-BPG), un regulador alostérico de Ia afinidad de \:.:
fosfato, una derivación de mente ineflcazparalaextracción de energra it .' * -
Hb por el Or. La vía de las pentosas
del rendimiento de 2 moles de ATP por cada rn'" :: ; - '
Ia glucólisis, es responsable de aproximadamente el 10%
glóbulo rojo' En los glóbulos presenta sólo el 5% aproximadamente de los I - - '
rrr.tubolir*o de la glucosa en el
contra el ponibles mediante Ia oxidación completa de i" ' .-
rojos esta vía tiene un papel especial en la protección
células nucleadas tam- y H2O en otros tejidos'
estrés oxidativo, mientras que en las : -l: -s
para las reacciones biosinté- UnopodríapreguntarseporquéserequiereLroá "
bién sirve como fuente de NADPH poCr'" r': - :-r: :'l
sos para convertir la glucosa en Iactato -ano
ticas y de pentosas para Ia síntesis de ácidos nucleicos' punto de :::' -':'1-r '
menos pasos?-. La respuesta, desde un
"
Iico, es que la glucólisis es una vía central 1'la mal'
: : :!: I '
intermediarios glucolíticos sirven como puntos i; : =-
EL ERITROCITO De esta manera' e' :-:: =-'¡ '-i-
ción para otras vías metabólicas'
mo de Ia glucosa se cruza con el metabolismo de ''' ;- ' '''
EI eritrocito o glóbulo rojo representael4O-45o/o del volumen :' -"' -
(eritroci- proteínas y ácidos nucleicos. asÍ como con otras via'
sanguíneo y más del 90% de los elementos formes .:: '-"
eritrocito es' tanto Lolismo de los hidratos de carbono' Algunas de esta'
tos, Ieucocitos y plaquetas) de la sangre' El
más simple del ciones metabólicas se muestran en Ia Figura 1 1'l '
estructural como metabólicamente, la céIula
cuerpo -el producto flnal de la maduración de los reticuloci-
tos de Ia médula ósea-. Durante su maduración' el eritrocito l-" fase de inversión de la glucólisis
pierde todos sus orgánulos subcelulares' Sin núcleo' carece
áe Ia capacidad de sintetizar DNA o RNA' Sin ribosomas
o re- Glucosa-6-fosfato
proteÍnas' - -
tículo endoplásmico no puede sintetizar o secretar La glucosa es captada por el glóbulo rojo mediante ' ": '
Como no puede oxidar las grasas, un proceso
que requiere
portador facilitado GLUT-I (Capítulo 7); esta proteina'
:'- .

actividad mitocondrial, el eritrocito depende exclusivamente tuye aproximadamente el 5% del total de las proie::'' '' '
:

a del glóbulo rojo, de tal manera que e1 rans:' '

de
de Ia glucosa sanguínea como combustible' EI metabolismo
:-
con- -á-b.at
Ia glucosa en el eritrocito es enteramente anaeróbico' no es un limitador de Ia tasa de glucólisis' El primer
pá: - i' - :
gruente con Ia función básica del eritrocito en el transporte compromete la glucosa hacia Ia glucólisis es Ia
foslorii"- ' -
de oxígeno y su liberación, más que en su utilización' de Ia glucosa a GIc-6-R catalizada por Ia enzima
he\o'::: ' ''=
(Fig. 11.3, parte superior). La formación de Glc-6-P a pa:: :

GLUCÓHSIS
ufl LEAetÓN oE:, GliucosA
Visión general EN,EL EBITR,O,€IT§'

Laglucosaentraeneleritrocitomediantedifusiónfacilitada, Una persona de 70 kg tiene aproximadame¡te

5 L.de sangre
de insu- y un poco más de 2 kS (2 f) de eritrocitos' Estas células
a t.aves del transportador de glucosa independiente
no totai
lina GLUT-1. La concentración de glucosa en el eritrocito .onriituy.n aproximaáamente el 3% de la masa corporal
y 20 g (0,1 mol) de. glucosa por
varía de forma signiflcativa con respecto a Ia del
plasma' las y .onrr*.n aproximadamente
reprerentándo aproximadamente el 1O% del metabolismo
determinaciones en el laboratorio clínico de Ia concentración
áía,
corpolat total de la jlucosa. El eritrocito tiene la tasa
específica
prácticamen-
de glucosa en plasma, suero y sangre total son que cualquier otra célula
*ei .lt. de utilizacián de glucosa
te idénticas. g de glucosa/kg de tejido/día'
J"t .r"rpo, aproximadamánte 1O
La glucólisis sigue a través de una serie de intermediarios .o*prr.ión con - 2,5 g de glucosa/kg de tejido/día para
fosforilados, comenzando con Ia síntesis de glucosa-6-fosfato "n
el resto del cuerPo.
(GIc-6-P). Durante este proceso, que implica 10 pasos distin- En el eritrocito, aproximadamente el 90% de la
glucosa
de glucólisis'
tos catalizados enzimáticamente, se gastan dos moléculas (- 18 g'o 0,1 mol) se metaboliza a través de la
AIP (fase de inversión) para construir un intermediario casi propolcionand o - 0,2 moles de lactato (- 18 g/día) A pesar
tiene
simétrico, Ia fructosa-1,6-bisfosfato (Fru-1,6-BP) que' a con- de su elevada tasa de consumo de glucosa, el eritrocito
que cualquier otra
una de las tasas más bajas de síntesrs de ATP
tinuación, es escindida (fase de escisión) en dos triosas fosfato
Iactato célula del cuerpo, - 0,2 moles de ATP por día, reflejando
de tres carbonos. Finalmente, éstas se convierten en glucosa
el hecho de que la mayoría de su metabolismo de
durante la fase de rendimiento de Ia glucólisis' Esta fase de se realiza meáiante la glucÓlisis anaeróbica,
que produce lactato
rendimiento incluye reacciones redox y de fosforilación' dan- y atrapa solamente una fracción de la energía disponible
para
do lugar a la formación de cuatro moléculas de 'ATP durante ia combustión completa de la glucosa a COz y HzO'

la ctrnvcrsión de dos triosas fosfato en lactato' Se forman dos

 Fig. 11.2 lnteracciones ent¡e
glucólisis y otras vías
Gtucótisis y otras vías metabóticas
metabólicas. Los cuadros
coloreados en verde indican
o
GIucosa
intermediarios imPlicados
en la vía de la glucólisis. otros
cuadros ilustran algunas de
las interacciones metabólicas
entre glucólisis Y otras vías
metabólicas en la célula. No
todas estas vías son activas en
el glóbulo rojo que tiene una
capacidad biosintética Iimitada
y que carece de mitocondrias.
Glc-6-P = glucosa-6-fosfato;
Fru-6-P = f ructosa-6-fosf ato;
Fru-1,6-BP = fructosa-1,6-
bisfosfato.

--T--
f-- Gtl*r"t-3+-_l

/'->-
/Y
v?
Trigticéridos
Fosfo[ípidos

Lipoqénesis

de la glucosa libre y de fosfato inorgánico es energéticamen- Fructosa-6-fosfato

te desfavorable, de tal manera que debe gastarse una molécu- '
la de,AIP o invertirse en Ia reacción de fosforilación -la hi- EI segundo paso de Ia glucólisis es Ia conversión de GIc-6-P en

drólisis del .ATP se acopla a Ia síntesis de GIc-6-P-. La Glc-6-P
es atrapada en el eritrocito, junto con otros intermediarios
fosforilados de la glucólisis, dado que no hay sistemas de
transporte para los azúcares fosforilados en Ias membranas
plasmáticas de las células de mamífero.
Fru-6-P mediante Ia fosfoglucosa isomerasa (Fig' 1 1;3, parte
intermedia). Las isomerasas catalizan reacciones en equilibrio
fácilmente reversibles en este caso Ia interconversión aldosa-
cetosa. La Fru-6-P puede ahora fosforilarse en el C-1 mediante
la fosfofructocinasa-1 (PFI(-1) para dar lugar al intermediario
seudosimétrico, fouctosa 1,6-bisfosfato (Fru-1,6-BP), que tiene
Fases de inverción y escisión de la gkrótisb
un éster fosfato en cada extremo de la molécula. La PFK-1
requiere ATP como sustrato y, como la hexocinasa, cataliza
una reacción prácticamente irreversible (K"n= 500). Ambas,
Ia hexocinasa y Ia PFI(-1, son importantes enzimas regulado-
ras de la glucólisis, pero la PFI(-1 constituye el paso crítico.
Esta reacción compromete Ia glucosa en Ia glucólisis, la única
vía para el metabolismo de Fru-1,6-BP.

La fase de escisión de Ia glucólisis

En Ia fase de escisión de Ia glucólisis, Ia Fru-1,6-BP se escinde
por Ia mitad mediante una reacción inversa de una condensa- cH2-o-@
ción aldólica (Fig. 1 1. 3, parte inferior), de ahí el nombre aldo-
Gtc-6 -@
Iasa. La reacción catalizada por la aldolasa es una reacción en
equilibrio fácilmente reversible, proporcionando dos triosas
fosfato, dihidroxiacetona fosfato y gliceraldehído-3-fosfato, de
la mitad superior e inferior de la molécula, respectivamente.
Sólo el gliceraldehído-3-fosfato continúa hasta el estadio de
":3'J:;::: @1
rendimiento de la glucólisis, pero la triosa fosfato isomerasa
cataliza la interconversión de dihidroxiacetona fosfato a glice- @-o-cLi,r_r,o\-cH20H
raldehído-3-fosfato, de tal manera que ambas mitades de Ia
molécula de Ia glucosa se metabolizan a lactato.
\ HotroH Fru-6 _@

-OH

La fase de rendimiento de la glucólisis

(síntesis de ATP por fosforilación
a nivel de sustrato)
La fase derendimiento de Ia glucólisis produce 4 moles de AIP,
proporcionando una cantidad neta de 2 moles de AIP por ca- @ - o -cu.,u,o:.., c Hr- o -@
da mol de glucosa convertido a lactato (Fig. 1 1.4). La síntesis \ Hro/_oH Fru_1,6_Bp

de AIP se consigue mediante cinasas que catalizan lafosJorila- -

OH

ción a nivel de sustrato, un proceso en el cual el compuesto fos-

nLa.u*@ I
fato de alta energÍa transflere su fosfato al ADP Para establecer
el estadio adecuado para que se dé nivel de sustrato, el grupo
- ¡;;1;
aldehÍdo del gliceraldehído-3-fosfato se oxida a ácido carboxíli-
co y se utiliza Ia energía disponible de Ia reacción de oxidación, OH
en parte para atrapar el fosfato de Ia reserva citoplasmática cH,-o-@
\\/
como acil-fosfato. Esta reacción está catalizada por Ia gliceral- t- d> c
I
_OH
C=0 H- C
dehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH), suministrando el I I

cH20H Triosa fosfato cH2-o-@

compuesto de alta energía 1,3-bisfosfoglicerato (1,3-BPG). La
isomerasa
coenzima NAD* simultáneamente se reduce a NADH' Fosfato
dihidroxiacetona
- G[iceraldehído-
3-fosfato

Gliceraldehído-3-fosfato desh idrogenasa

Fig. 11.3 Las fases de inversión y escisión de la glucólisis. Nótese
La reacción catalizada por Ia GAPDH proporciona una repre- el consumo de ATP en las reacciones de la hexocinasa y de la
sentación interesante de Ia función de Ios intermediarios fi- fosfofructoci nasa-1 .

gados a Ia enzima en Ia formación de fosfatos de alta energÍa.

¿Cómo Ia oxidación de un aldehído y la reilucción del NAD*
dan lugar a Ia formación de un enlace acil fosfato en 1'3-BPG?
¿Cómo entra en la reacción el fosfato y se activa hasta un esta-
do de alta energía? La inhibición de la GAPDH por reacti-
vos tales como yodo-acetamida, p-cloromercuriobenzoato y
N-etiimaleimida apunta hacia la implicación de un residuo
sulfidrilo en el centro activo, dando lugar al mecanismo de
acción propuesto para esta enzima, descrito en Ia Figura 1 1. 5.
Fosforilación a nivel de sustrato
La fosfoglicerato cinasa cataliza Ia transferencia del grupo
fosfato del acil fosfato de alta energía de 1,3-BPG a ADP, for-
¡ Reaccién catatizada por ta gticeraldehido-3'focffio
Fase de rendimiento de [a glucó[isis
deshidrogenasa (G3PDHl

OH
\\/
C
G[icera ldehído-3Josfato

HO
I

H_C_OH \//
c
I

6 [icera[dehído-3-fosf ato É>. R

deshidrogenasa (G3PDH)

001
o
\\/
C
I
1,3-bisfosfog [i cerato
H-C_OH
(1,3-BPG)
I

^ A- cH2-o-@

,.jli:*É1*{,t
r\^\ V
@
Fosfogticeratocinasa a-)
o o-
\ z-
ll. *-'{*
(PGK)

n-l-on
c

lH,-oo
3-fosfog [icerato
ll_\É
t -l
I [r,¡ron) - | INADHJ
d @ [--¡
oi - Fosfogli cerato mutasa

\\/ Fig. 11.5 Mecanismo de la reacción catalizada por la gliceraldehído-

c
t^ 3-iosfato deshidrogenasa (G3PDH). En el Paso 1, un grupo sulfidrilo
H-c-o{B) 2-fosfogticerato del sitio activo de la G3PDH forma un aducto tiohemiacetal con el
ir,-0, gliceraldehído-3-fosfato. En el Paso 2, el tiohemiacetal se oxida a
tioéster medlante NAD., unido también al centro activo de la
enzima. En el Paso 3, el fosfato entra en el centro activo en una
y,
L,,O @ reacción del tipo fosforilasa, desplaza al grupo tiol, produciendo
Enolasa '1,3-bisfosfoglicerato y regenerando el grupo sulfidrilo' En el Paso 4'
ot*
\\/
la enzima cambia NADH por NAD., completando el ciclo
catalítico'

C
t^ Fosfoenolpiruvato
C-O{D (PEP) mando ATP. Esta reacción de fosforilación a nivel de sustrato
il
proporciona el primer AIP producido en la glucólisis' El gru-
po iosfato restante en el 3-fosfoglicerato es un éster de fosfato

-***Sffi,-g rl*"''nu", y no tiene sufi.ciente energÍa para fosforilar el ADP' de tal ma-
nera que se sigue de una serie de reacciones de isomerización
\ z- c
\., t@ \\c/
o-
y deshidratación para convertir el éster fosfato en un fosfato
de alta energÍa. El primer paso es desplazar el fosfato'a Ia
po-

cotr
ti-{+l
.+> c:o sición C-2 del glicerato, convirtiendo el 3-fosfoglicerato en
\rf*no*lHo-c-tt 2-fosfoglicerato, catalizado por Ia enzima fosfoglicerato mu-
tH, CH¡ A CH¡
tasa (ver Fig. 1 1.4). Las mutasas catalizan la transferencia de
Piruvato Piruvato iactato @ L-tactato
grupos funcionales dentro de una molécula' La fosfoglicerato
(forma eno[) (forma ceto) deshidroqenasa (LDH)
mutasa tiene un centro activo con un residuo histidina' y
durante lá reacción de transferencia del fosfato se forma un
Fig. 11.4 La fase de rendimiento de la glucólisis' Las reacciones de
aducto de fosfohistidina como un intermediario Iigado a Ia
fosforilación a nivel de sustrato catalizadas por la fosfoglicerato
cinasa y la piruvato cinasa producen ATP, utilizando los compuestos
enzima.
de alta energía 1,3-bisfosfoglicerato y fosfoenolpiruvato, A continuación, el 2-fosfoglicerato sufre una reacción de
respectivaménte. Nótese que el NADH producido durante la deshidratación, catalizada por la enolasa, para proporcionar
reacción catalizada por la gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa fosfoenolpiruvato (PEP), un compuesto de fosfato de alta
se vuelve a convertir en NAD* durante la reacción de lactato
energÍa. EI PEP se utiliza por la piruvato cinasa para fosfori-
deshidrogenasa, permitiendo que la glucólisis continúe en
presencia de cantidades solamente catalíticas de NAD.' lar el ADP, proporcionando piruvato y el segundo ATP, otra

! N HrBrcróN DE rÁ,rosFonrmelóN
A NIVET D,E SUSTRATO:
POR EL ARSENIATO
El arsénico está justo debajo del fósforo en la tabla periódica
de los elementos, y puede esperarse que comparta alguna de
las propiedades y reactividad del fosfato. De hecho,
el arseniato trene valores de pKa similares a los del fosfato
y puede ser utilizado por la G3PDH, produciendo 1-arseniato-
3-fosfoglicerato. Sin embargo, el enlace acil-arseniato
es inestable y se hidroliza rápidamente en agua. Dado que
el enlace de alta energía acil-fosfato se descarga de forma
no enzimática, no se genera ATP por Ia fosforilación a nivel
de sustrato. Mientras que el arseniato no inhibe ninguna de
las enzimas de la glucólisis, disipa la energía redox disponible
a partir de la reacción de la G3PDH y evita Ia formación de ATP
por la fosforilación a nivel de sustrato en la reacción
de la fosfoglicerato cinasa. En efecto, el arseniato desacopla
la energía disponible a partir de la oxidación de la G3PDH
para la fosforilación del adenosindifosfato (ADP). En presencia
de arseniato, el rendimiento neto de ATP por la glucólisis
anaeróbica desciende a cero moles de ATP por cada molécula
de glucosa convertido en lactato.
vez por fosforilación a nivel de sustrato. Parece extraño que el
fosfato de alta energía unido al PEP pueda formarse por una
simple secuencia de reacciones de isomerización y deshidra-
tación. Sin embargo, Ia fuerza termodinámica que impulsa
estas reacciones probablemente derive de Ia repulsión de las
cargas entre los grupos fosfato y carboxilato del 2-fosfoglice-
rato y de la isomerización del enolpiruvato hasta piruvato
tras Ia reacción de fosforilación.
Lactato deshidrogenasa (LDH)
La fosfoglicerato cinasa y la piruvato cinasa catalizan las
reacciones de generación de ATP en la glucólisis, proporcio-
nando 2 moles de ATP por mol de triosa fosfato, o un total de
4 moles de ATP por cada mol de Fru-1,6-BP. Tras el ajuste del
ATP invertido en las reacciones catalizadas por la PFI(-1, el
rendimiento neto de energÍa es de 2 moles de ATP por cada
mol de glucosa convertido a piruvato. Dos moléculas de piru-
vato tienen exactamente el mismo número de carbonos y
oxígeno que una molécula de glucosa; sin embargo, existe un
déficit de cuatro hidrógenos -cada piruvato tiene cuatro hi-
drógenos, un total de ocho hidrógenos por cada dos piruva-
tos, en comparación con 12 en una moléculas de glucosa-.
Los cuatro hidrógenos oque faltan, permanecen en la fornfa
de 2NADH y 2 H* formados en la reacción.catalizada por la
G3PDH. Dado que el NAD* está presente sólo en cantidades
catalíticas en la célula y es un cofactor esencial en la glucóli-
sis {¡, en otras reacciones), debe haber un mecanismo de re-
generación del NAD* para que la glucólisis prosiga.
La oxidación del NADH se consigue en condiciones anaeró-
bicas por la lactato deshidrogenasa (LDH) que cataliza la re-
ducción de piruvato a lactato mediante NADH * H*, regene-
rando NAD*. En los mamÍferos, todas las células tienen LDH.
y el lactato es el producto final de la glucólisis en condicione:
anaeróbicas. En condiciones aeróbicas, las mitoconüias ori-
dan el NADH a NAD* y convierten el piruvato en CO2 ¡'H,O.
asÍ que no se forma lactato. Sin embargo, a pesar de su capaci-
dad para el metabolismo oxidativo, algunas células a vece)
pueden «hacerse glucolíticasr, formando lactato, por ejempl,
en el músculo durante la deflciencia de oxígeno y en los lag.--
citos en el pus o en los tejidos escasamente perfundidos. Er:
condiciones anaeróbicas o en los glóbulos rojos, el lactato s:
excreta a la sangre, donde es recuperado por el hÍgado para
utilizarlo como sustrato en Ia gluconeogénesis (Capítulo 1l .
Fermentación
Fermentación es un término general para el metabollsnll
anaeróbico de la glucosa. Algunas bacterias anaeróbicas, tale:
como los lactobacilos, producen lactato, mientras que otras
tienen mecanismos alternativos para Ia oxidación anaerÓbic¿.
del NADH formado en la glucólisis. Durante Ia fermentación
en las levaduras, la vía de Ia glucólisis es idéntica a la del eri-
trocito, excepto que el piruvato se convierte en etanol. PriIne-
ro, el piruvato se descarboxila por Ia piruvato descarboxilasa
hasta acetaldehído, liberando CO:. A continuación, el N,{DH
producido en Ia reacción catalizada por la GAPDH se vueh'e a
oxidar por el alcohol deshidrogenasa, regenerando NAD- ¡'
produciendo etanol (Fig. 11.6). EI etanol es un compuestr\
tóxico, y la levadura muere cuando la concentración de eta¡ol
en su medio alcanza aproximadamente el72o/r, que es 1a con-
centración aproximada del alcohol en los vinos naturales.
Glucótisis anaeróbica en ta levadura
ott
ro' coz @@
!:, L cH,-clH t¿ cHj-cH2oH
,,,.llr"@n..ur¿.r,-ilo@Etanor
Piruvato AlcohoI
descarboxilasa deshid rogenasa
Fig. 11.6 §lucólisis anaeróbica en la levadura. Formación de etanol
por la glucólisis anaeróbica durante la fermentación. El piruvato se
descarboxila por la piruvato descarboxilasa, produciendo
acetaldehído y CO2. La alcohol deshidrogenasa utiliza NADH para
reducir el acetaldehído a etanol, regenerando NAD. para la glucólisis.
Regulación de Ia glucólisis en los er¡troc¡tos
Los eritrocitos consumen glucosa a una tasa bastante cons-
tante. No son fÍsicamente activos como el músculo ni requie-

tNHtBtctóN DE,ENo
POR FLUORURO
La medición de la concentración de glucosa en sangre se utiliza
en el diagnóstico de la diabetes. Frecuentemente, estas
determinaciones se realizan en el laboratorio clínico más de
'I h después de la recogida de la muestra de sangre. Como los
eritrocitos pueden metabolizar la glucosa a lactato, incluso
en un tubo anaeróbico sellado, la glucosa de la sangre
se consumirá, con la consiguiente producción de lactato,
lo que conlleva la acidificación de la muestra de sangre. Estas
reacciones se producen en el eritrocito a temperatura ambiente,
de tal manera que la concentración de glucosa en la sangre
y el pH disminuirán mientras se espera. ¿Cómo puede evitarse
esto? Se consigue fácilmente añadiendo un inhibidor
de la glucólisis. Podrían funcionar los reactivos sulfidrilo -son
inhibidores de la GAPDH-; sin embargo, la mayoría
de las muestras sanguíneas se recogen con una pequeña
cantidad de un reactivo mucho más barato, el fluoruro sódico,
en el tubo de recogida de la muestra. El fluoruro es un inhibidor
fuertemente competitivo de la enolasa, bloqueando la glucólisis
y la producción de lactato por los eritrocitos. Es un inhibidor
competitivo inusual, ya que el fluoruro se parece poco
al 2-fosfoglicerato. En este caso, el fluoruro forma un complejo
con el fosfato y el Mg2* en el centro activo de la enzima,
bloqueando el acceso de sustrato.
ren energía para el transporte de O2 o CO2. Parece que la glu-
cólisis en los glóbulos rojos está regulada simplemente por
las necesidades energéticas de la célula, es decir, el requeri-
miento de AIP para mantener Ios gradientes iónicos, el cual
es relativamente constante. EI equilibrio entre el consumo de
ATP y su producción se controla alostéricamente en tres si-
tios: las reacciones catalizadas por Ia hexocinasa, Ia fosfo-
fructocinasa-1 y Ia piruvato cinasa (Fig. 11.2). Basándose en
las determinaciones de V*o* de diversas enzimas en los lisa-
dos de eritrocitos in vifro, Ia hexocinasa presenta la actividad
más baja de todas las enzimas glucolíticas. Su actividad má-
xima sólo es de unas cinco veces la tasa de consumo de glu-
cosa por el eritrocito. Sin embargo, también está sujeta a una
inhibición por retroalimentación (feedback) alostérica por su
producto GIc-6-P, y es Ia etapa limitante con respecto a Ia
tasa de utilización de la glucosa en el eritrocito -en contraste,
el transportador de glucosa GLUT-1 está presente en concen-
tración y actividad mucho mayores, representando más del
5olo de las proteínas totales de la membrana del eritrocito-.
La hexocinasa tiene un 30% de homologÍa entre sus domi-
nios N y C terminales, resultado de la duplicación y fusión de
un gen primordial; la unión de Ia Glc-6-P al dominio N-ter-
minal inhibe la actividad de Ia enzima y la producción de GIc-
6-P en el centro activo del dominio C-terminal.
La PFK-1 es el lugar primario de la regulación de Ia glucó-
lisis, controlando el flujo de Fru-6-P a Fru-1,6-BP e, indirec-
tamente a través de la reacción catalizada por Ia fosfoglucosa
isomerasa, el nivel de Glc-6-P y la inhibición de Ia hexoci-
nasa. Aunque está presente en concentraciones 20 veces
superiores a las de la hexocinasa, la actividad de la PFK-1 es
particularmente sensible al estado energético de la célula.
Sorprendentemente, el ATP es a la vez un sustrato y un inhi-
bidor alostérico de la PFK-1 -una función dual que permite
el control fino de Ia actividad de Ia enzima- (Fig. 1 1 . 7). EI
AMP y el ADP liberan Ia inhibición por el AIP, de tal manera
que Ia actividad global de Ia PFK-1, y por 1o tanto la tasa de
glucólisis, depende del cociente de concentración celular
(AMP + ADP)/ATP. Estos productos son convertibles entre sí
por Ia reacción catalizada por la adenilato cinasa:
2 ADP <= ATP + AMP
Regutación de la PFK-I por et ATP
o/o de actividad
máxima de PFK-1
ffi),.,*
23
ATP (mmot/L)
Fig. 11.7 Regulación alostérica de la fosfofructocinasa-'l (PFK-1) por el
ATP El AMP es un activador potente de la PFK-I en presencia de ATP.
Cuando el ATP se consume y aumenta el ADR se forma
AMP. El aumento en las concentraciones de ADP y AMP libe-
ran la inhibición de la PFK-1 por el ATP, activando la glucóli-
sis. La fosforilación del ADP durante Ia glucólisis y después
del AMP por Ia reacción catalizada por la adenilato cinasa
restaura gradualmente Ia concentración de NIP o Ia carga
energética de la célula y, a medida que la concentración de
AMP disminuye, la tasa de glucólisis se reduce hasta un nivel
estable. En general, Ia glucólisis opera a una tasa constante
en el glóbulo rojo, donde el consumo de ATP es constante,
pero Ia actividad de esta vía cambia rápidamente en respues-
ta al consumo de ATP (y la generación de AMP) en el múscu-
Io durante el ejercicio.
Como se muestra en Ia Figura ll.7,la concentración de
AIP en el eritrocito (1-2 mmol/L) se sitúa en Ia zona de pen-
diente más pronunciada de la curva de concentración-res-
puesta de Ia inhibición de la PFK-1 por el ATP. En condicio-
nes normales, la actividad de la PFK-1 está muy suprimida
por el ATP ambiental. El AMP, que está presente en una con-
centración mucho menor (- 0,05 mmol/L) disminuye esta
inhibición. En efecto, las pequeñas conversiones fracciona-
das del ATP a AMP en el eritrocito proporcionan aumentos
relativamente grandes en la concentración de AMP. De esta
manera, la actividad de la PFK-1 en el glóbulo rojo (y espe-
cialmente en el músculo) se hace exquisitamente sensible a
Ios cambios en el estado energético de la célula, de acuerdo
con Ia medición de la concentración de AMP. EI AMP no sola-
mente disminuye la inhibición de la PFI(-1 por el ATP, sino que
también disminuye la K- para el sustrato Fru-6-P, aumen-
tando ulteriormente Ia eflciencia catalítica de la enzima.
Además de la regulación de la hexocinasa y la PFI(-1, Ia pi-
ruvato cinasa hepática se activa alostéricamente por la Fru-
1 ,6-BP, el producto de la reacción de la PFI(- 1 . Este proceso,
conocido como regulación por retroalimentación positiva,
puede ser importante en el eritrocito para limitar Ia acumula-
ción de intermediarios reactivos triosa fosfato en el citosol.
Cada una de las tres enzimas implicadas en Ia regulación
de la glucólisis -hexocinasa, PFI(-1 y piruvato cinasa- tiene
rasgos característicos de las enzimas reguladoras: son enzi-
mas diméricas o tetraméricas, están presentes a una V-u,
baja en comparación con otras enzimas de la vía, y catalizan
reacciones irreversibles. La regulación de Ia glucólisis en el
hígado, el músculo y otros tejidos es más complicada que en
el eritrocito (Tabla 1 1.1), debido a la mayor variabilidad en la
tasa de consumo de combustible y a la interrelación entre el
metabolismo de los hidratos de carbono y los lípidos durante
el metabolismo aeróbico. En estos tejidos la cantidad y Ia acti-
vidad de las enzimas reguladoras están reguladas por otros
efectores alostéricos, por modiflcación covalente, y por la in-
ducción o represión de Ia actividad enzimática.
Tabla 11.7 Regulación de la glucólisis en el glóbulo rojo.
*-;*----*
SINTESIS DE 2,3,BISFOSFOG LICERATO
EI2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG) (Fig. 11.8) es un subpro-
ducto importante de la glucólisis en los eritrocitos, alcanzan-
do a veces una concentración de 5 mmol/L, comparable con
Ia concentración molar de Hb en el eritrocito. De hecho, es el
intermediario fosforilado más importante del eritrocito, pre-
sente en concentraciones incluso superiores a las de ATP
(1-2 mmol/L) o de fosfato inorgánico (1 mmolil). EI2,3-BPG
es un efector alostérico negativo de la afinidad de Ia Hb por
el O2. Disminuye la afinidad de Ia desoxihemoglobina por el 02,
favoreciendo la liberación de 02 en tejidos periféricos. La pre-
sencia de 2,3-BPG en el eritrocito explica la observación de
que la aflnidad de la HbA puriflcada por el 02 es mayor que la
Síntesis y degradación det 2,3-BPG
2,3-bisfosfoglicerato
fosfatasa
Fig. 11.8 Vía de la biosíntesis y degradación del 2,3-bisfosfoglicerato
(2,3-BPG), La BPG mutasa cataliza la conversión de 1,3-BPG en 2,3-
BPG. La misma enzima tiene actividad bisfosfoglicerato fosfatasa,
que hidroliza el grupo 2-fosfato. produciendo 3-fosfoglicerato.
Nótese que esta vía es una derivación de la reacción catalizada
por la fosfoglicerato cinasa, de tal manera que el rendimiento global
de ATP por cada mol de glucosa está disminuido.
de los eritrocitos enteros. La concentración de 2,3-BPG
aumenta en el eritrocito durante la adaptación a altitudes
elevadas y en Ia anemia, favoreciendo la liberación de Oz en
los tejidos cuando disminuyen la tensión de O2 y Ia satura-
ción de hemoglobina en el pulmón. La hemoglobina fetal
(HbF) es menos sensible que la Hb del adulto (HbA) a los efec-
tos del 2,3-BPG, Io que favorece la transferencia eflcaz del O2
a través de la placenta desde Ia HbA a la HbF (ver Capítulo 4).
LA VIA DE LAS PENTOSAS FOSFATO
Visión general
La vÍa de las pentosas fosfato es una vía citosólica presente en
todas las células, denominada así porque es la vÍa primaria
para la formación de pentosas fosfato en Ia sÍntesis de los nu-
cleótidos para Ia polimerización para formar DNA y RNA. Esta
vÍa es una rama de la glucólisis que parte del nivel de,la Glc-6-P,
y de ahÍ su designación alternativa, el «cortocircuito» hexosa
monofosfato. La vía de las pentosas fosfato también se describe
como un cortocircuito, o derivación, más que como una vía,
porque cuando las pentosas no son necesarias para las reac-
ciones biosintéticas los intermediarios pentosa fosfato son
reciclad,os a Ia corriente principal de Ia glucólisis mediante
conversión en Fru-6-P y gliceraldehído-3-fosfato. Esta recon-
ducción es especialmente importante en los eritrocitos y en Ias
células que no están en división o están quiescentes, donde
existe una necesidad limitada para Ia síntesis de DNA y RNA.
El NADPH es un producto principal de Ia vía de las pentosas
fosfato en todas las células. En los tejidos con una biosÍntesis
lipídica activa, por ejemplo eI hÍgado, la corteza suprarrenal o
Ias glándulas mamarias durante la lactancia, el NADPH se
utiliza en las reacciones redox requeridas para Ia biosíntesis
de los ácidos grasos, el colesterol, Ias hormonas esteroideas y
las sales biliares. El hígado también utiliza el NADPH para las
reacciones de hidroxilación implicadas en la desintoxicación
y excreción de fármacos. EI eritrocito tiene poca actividad bio-
sintética pero, con todo, deriva aproximadamente el 10% de
Ia glucosa a Ia vía de las pentosas fosfato' casi exclusivamente
en este caso para la producción de NADPH. El NADPH se uti-
Iiza principalmente pára Ia reducción del glutatión, un tripép- -*+*ffi@:hi#*,.,.
tido que contiene cisteína (GSH) V que es un cofactor esencial
en la protección antioxidante (Capítulo 3 5).
La vía de las pentosas fosfato se divide en un estadio redox
irreversible, que proporciona NADPH y pentosas fosfato, y un
estado de interconversión reversible, en el que el exceso de
pentosas fosfato se convierte en intermediarios glucolíticos.
Ambos estadios son importantes en el eritrocito' ya que requie-
ren NADPH para la reducción del glutatión, aunque tienen
una necesidad limitada para la síntesis de novo de pentosas.

La fase redox de !a vía de las pentosas

fosfato (síntesis de NADPH)
EI NADPH se sintetiza mediante dos deshidrogenasas, en la
primera y tercera reacciones de la vÍa de Ias pentosas fosfato
(Fig. 11.9). En el primer paso de la vía, Ia reacción catalizada
por la GIc-6-P deshidrogenasa (G6PDH) produce NADPH
mediante Ia oxidación de la GIc-6-P a G-fosfoglucono-lacto-
na, un azúcar que es un éster cíclico. La lactona se hidroliza a
ácido 6-fosfoglucónico mediante Ia lactonasa. La descarboxi- cH20-@
Iación oxidativa del 6-fosfogluconato, catalizada por la 6-fos-
fogluconato deshidrogenasa, suministra a continuación el
azicar cetosa, ribulosa 5-fosfato, más 1 mol de COz y el se-
gundo y último mol de NADPH.

CONCENTRACION E5 DE COENZIMAS
REDOX EN LA CÉIUN

La G6PDH y la 6-fosfogluconato deshidrogenasa mantienen

un cociente citoplasmático de NADPH/NADP* = 100' Es in-
teresante, cómo se requiere NAD* para la glucólisis, el co-
ciente de NADH/NAD* en el citoplasma es casi el inverso, Fig. 11.9 El estadio redox de la vía de las pentosas fosfato' Una
menos de 0,01. Aunque la concentración total (formas oxi- seluenc¡a de tres enzimas forma 2 moles de NADPH por cada mol de
dadas más reducidas) de NAD(H) y NADP(H) en el eritrocito Glc-6-P, que se convierte en ribulosa-5-fosfato, con producción de CO2'
son similares (- 25 pmollL), la célula mantiene estos dos sis-
pueden existir simultáneamente concentraciones elevadas
temas redox que tienen potenciales redox similares a unas
de NAD* y de NADPH en el mismo compartimiento'
condiciones diferentes dentro de Ia misma célula mediante el
aislamiento de su metabolismo a través de Ia especiflcidad de
las deshidrogenasas citoplasmáticas. Las enzimas glucolíti- La fase de interconvers¡ón de la vía
cas (G3PDH y LDH) utilizan solamente el NAD(H)' mientras de las pentosas fosfato
que las enzimas de Ia vía de las pentosas fosfato utilizan sola-
mente el NADP(H). No hay enzimas en el eritrocito que cata- En las células con síntesis activa de ácidos nucleicos, Ia ribu-
licen Ia reducción del NAD* por el NADPH, de tal manera que Iosa-S-fosfato se isomeriza a ribosa-S-fosfato para Ia síntesis
 de ribonucleótidos y desoxirribonucleótidos para el RNA y el
La vía de las pentosas fosfato DNA (Fig. 11.10). En las células que no están en división, ias
pentosas fosfato se vuelven a dirigir hacia Ia glucólisis. Esto
(Rib"tq.r+-Fl se consigue mediante una serie de reacciones en equilibrio
Gbrt..+-Pl
'6" .6' en las cuales 3 moles de ribulosa-S-fosfato se convierten en
2 moles de Fru-6-P y 1 mol de gliceraldehído-3-fosfato. En las

ll
cH20H
It
HO
\/
reacciones de interconversión existen ciertas restricciones
impuestas -sólo se pueden realizar por Ia transferencia de
dos o tres unidades de carbono entre los azúcares fosforila-
c
I
dos-. Cada reacción debe implicar también un donador ceto-
c:0 I

H-C-0H sa y un receptor aldosa. Las isomerasas y las epimerasas pro-

d>@
I
H0-c-H I

porcionan la aldosa de cinco carbonos y los sustratos cetosa

H-C-OH
I

H_C_OH I fosfato para el estadio de interconversión. La transcetolasa.

H-C-oH
I una enzima dependiente de tiamina, cataliza las reacciones
curo-@ I

ctro @ de transferencias de dos carbonos. La transaldolasa actúa

Xitulosa-5 @ Ribosa-5@ similarmente a la aldolasa en la glucólisis excepto en que la
unidad de tres carbonos se transflere a otro azú.car, en vez de

rc"
Iiberarse como una triosa fosfato libre en el citoplasma.
Como se muestra en la Figura 1 1.10 y en Ia Tabla 1 1.2, dos
moléculas de ribulosa S-fosfato, el primer producto pentosa de
este estadio redox, se convierten en productos separados: una
molécula se isomeriza alazúcar aldolasa, ribosa-5-fosfato, y la
cH20H otra se epimeriza a xilulosa-5-fosfato. La transcetolasa cataliza
HO
\/ I
c:0 entonces Ia transferencia de dos ca¡bonos desde Ia xilulosa-S-
fosfato a Ia ribosa-5-fosfato, dando un azicar cetosa de siete
C

I I

H-C-oH H-C-0H carbonos, Ia sedoheptulosa-7-fosfato, y el gliceraldehído-3-fos-

I
I
(cH0H)3 fato de tres carbonos. A continuación, Ia transaldolasa catali-
cttro@ I
za una transferencia de tres carbonos entre los dos productos
cHro@
transcetolasa, desde la sedoheptulosa-7-fosfato al gliceralde-
Gticeratdehído-3 @ Sedoheptutosa-7-@
hído-3-fosfato, proporcionando el primer intermediario gluco-
Iítico, Ia Fru-6-P, y una eritrosa-4-fosfato residual. Una segun-
da molécula de xilulosa-S-fosfato dona dos carbonos a la
eritrosa-4-fosfato en una segunda reacción transcetolasa, pro-
porcionando una segunda molécula de Fru-6-P y una molécu-
Ia de gliceraldehído-3-fosfato, entrando ambas en Ia glucólisis.
cH20H HO
I
\//
c:0 c
I
I

H-C_OH
H-C-0H
I
I

H_C_OH
H-C-0H
I
I

H-C-0H cHro@
I Eriirosa-4-@
cttro-@

Fru-6@

GticeratdehÍdo-3 -@
Xitutosa-5-@

Fig. 11.10 El estadio o fase de interconversión de la vía de las

pentosas fosfato. Las estructuras carbonadas de tres moléculas de
ribulosa-5-fosfato son utilizadas para formar 2 moléculas de Fru-6-P Tabla 11.2 Resumen de reacciones en equilibrio en la vía
y una molécula de gliceraldehído 3-fosfato. de las pentosas fosfato.
 abanicodeagresionesoxidativasyquímicas(Capítulo35).La
por Ia
MEDIOÓN DE LA.GLUCOSA mayoría del ÑADPH formado en los eritrocitos se utiliza
iÁr,laulr'¡EA (ANALlsls DE azÚcan glulafión reductasa para mantener al GSH en su estado redu-
actividades
REDUCTOR) Iido. Durante su función como coenzima para las
antioxidantes, el GSH se oxida a Ia forma disulfuro'
GSSG'
glucosa sanguínea miden que, a continuación, se regenera por la acción de Ia glutatión
Las determinaciones originales de la
sangre Estos análisis funcionan
la actividad reductora de la reductasa (Fig. 1 1.12).
porque la glucosa, a una concentraciÓn de 5 mM'
es la sustañcia reductora más importante de la
sangre'
alcalinas
Los análisis de Fehling y Benedict utilizan soluciones
glucosa se descompone Actiüdades anüoxidantes del gtutatión
de sal de cobre. Con el calor la
de ácidos
áxidatiramente proporcionando una mezcla compleja
el iÓn Hzoz
orgánicos y aldehidos. La oxidaciÓn del azúcar reduce
.¿óri.o (cálor azul-verde) a ión cuproso (color naranja-rojo) NADP+ Z.rr R00H
proporcional
en la solución. El color producido es directamente
de glucosa en la muestra' Los análisis de azúcar
al contenido
reductor no distinguen entre glucosa, fructosa o galactosa' :.,Ix':l:@ @;:::l';,'1,.
En las enfermedades del metabolismo de la fructosa
y galactosa, tales como la intolerancia hereditaria a la
fructosa NADPH § *o**nro
2H20
análisis darían
áJ la galactosemia (Capítulo 25), estos
,.rrttáaos positivos de azúcares elevados en plasma y en orina'
.12 Actividades antioxidantes del glutatión' El
GSH es la
creando la falsa impresiÓn de una diabetes' Fig. 11
que desintoxica.el peróxido
cáenrima de la glutatión peroxidasa
y hidroperóxidos orgánicos (lípidos)'
a" f,larOg"no los
forman
Así pues, Ios tres azicaresfosfato de cinco carbonos
forma- rip"rO*láo de hidrógeno y los peróxidos lipídicos se
pentosas fosfato se con- eñel glóbulo rojo, catalizados por reacciones
dos en el estadio redox de Ia vía de Ias "rüonijn"ur"nte oxígeno
y .ái.r"iár"t del hierro deihemo durante el transporte de
vierten en un intermediario glucolítico de tres carbonos por Ia hemoglobina (Capítulo 35)'
dos de seis carbonos. En el eritrocito' estos intermediarios
glucólisis'
glucolíticos continúan normalmente, mediante Ia
temporal la El GSH tiene una serie de funciones protectoras en la célula'
hasta lactato, representando que sólo de forma en todas las célu-
glucólisis' La glutatión peroxidasa (GPx) se encuentra
glucosa es desviada de la corriente principal de la del perÓxido de
Ias-y utiliza el GSH para la desintoxicación
(IÍpidos) en el citosoi y en
hidrógeno y los peróxidos orgánicos
Función de la vía de las pentosas fosfato
en el eritrocito
M EPiiIéN. DE. tA Gü.ÜCO§A
glutatión (GSH) es un tripéptido y-glutamil-cisteinil-glicina
El
SANGUíNEA (ANÁtEIS'
(frg. f f .f f). Está presente en las células a una concentración
(tiol)' y es una ENZIMÁTlcos)
de Z-5 mmol lL, eI99% en su forma reducida
para la protección de Ia célula frente a un
coenzima esencial En el laboratorio clínico, la glucosa en
plasma y orina
automatizados'
se determina mediante métodos enzimáticos
ri p.áJi*i.nto de análisis más frecuente utiliza una
mezcla

Gtutatión de glucosa oxidasa y peroxidasa

(Fig 1 1 '13) La glucosa oxidasa
para la glucosa, pero oxida solamente
es riuy específica
el anómero p del azúcar, lo que represenla -
64ok
§tÉ!.
Por lo tanto' la mezcla del ensayo
''','i"'ft áe tu qtr.ota de la soluciÓn
que cataliza rápidamente
0 cH2H se coÁplementa con mutarotasa,
llll
CCHN
y-Gtu-Cys-GtY
ia interionversión de anÓmeros, aumentando
Ia sensibilidad
I
producido en la reacción
/\/\/\ S Jel análisi.s en - 50%. EI HrO2
cH1 N c cH2 I por la oxidasa se utiliza, a continuación' para oxidar
iutut¡r.Au
t-llll S
un cromógeno produciendo un cromóforo coloreado'
cH2 H o cooH I
proporcional
y-Gtu{ys-GtY La intensiáad de color es directamente
I
de glucosa de la muestra Hay versiones
H-C-NH2 GSSG
al contenido
elevada'
I fluorométricas dá este análisis para una sensibilidad
un electrodo de oxígeno para
c00H y un analizador comercial utiliza
de disminución de la concentración de oxígeno
GSH medir la tasa
.n tu *r"ttr., que también es directamente proporcional
Fig. 11.17 Glutatión. Estructura del glutatión reducido
(GSH) a la concentración de glucosa'
y del glutatión oxidado (GSSG)'
 Et aná[isis mediante qlucosa oxidasa/peroxidasa
para [a determinación de la glucosa ianguínea
Fig. 1 .13 El análisis mediante glucosa oxidasa/peroxidasa para la
1 en los laboratorios de bioquímica clínica, estiman
determinación de la glucosa sanguínea. El color producido en este
análisis es directamente proporcional a la concentración de glucosa
en sangre.
MEDICION DE LA GLUCOSA
SANGU|NEA (T|RAS REACTTVAS
Y MEDIDORES DE GLUCOSA)
La persona con d¡abetes normalmente monitoriza su glucosa
en sangre varias veces al día utilizando tiras reactivas
y medidores de glucosa. Las tiras reactivas están impregnadas
con un reactivo de glucosa oxidasa-peroxidasa. En la versión
manual de este análisis, la intensidad del cambio de color
de la tira está relacionada con la concentración de glucosa
-típicamente en una escala de +l a +4-. Los medidores
de glucosa utilizan una pequeña gota de sangre y electrodos
amperométricos para medir la corriente producida por una
reacción redox catalizada por la glucosa oxidasa. Estos análisis
requieren solamente - 5 ¡rL de sangre entera. No son tan
precisos como los métodos de laboratorio, pero se usan
habitualmente cuando se requieren mediciones rápidas
o frecuentes de la glucosa sanguínea.
Anátisis mediante glucosa oxidasa/peroxidasa
Gtc (15 mmo[/L)
Absorbancia
finaI
Absorbancia
Gtc (5 mmot/L)
Vetocidad
inicia I
MEDICIÓN DE LA GLUCOSA
SANGUíNEA (nrr¡Áltsts ctNÉTtcos)
En el análisis que se muestra en la Figura 1 1.13 y represe-:._-_
gráficamente con distintas concentraciones de glucosa
en la Figura 11.14A, se permite que la reacción siga hasta
su punto final, es decir, hasta que se ha oxidado toda
la glucosa, y después se mide el cambio de color. La produ:: _-
de color se lleva a la gráfica comparado con un estándar pa',
determinar la concentración de glucosa (Fig. 1 1.148).
Los analizadores cinéticos, que se usan habitualmente
la concentración de glucosa en una muestra midiendo la
velocidad inicial de la reacción. El análisis de la cinética
mostrada en la Figura 11 .14A, por ejemplo, indica que
el ensayo de punto final y de la tasa de glucosa oxidasa
depende de la concentración de glucosa.
Así pues, el analizador puede medir el cambio en la absorbanc ¿
(o algún otro parámetro) durante los estad¡os iniciales
de la reacción y comparar esta velocidad con la de una solucio-
estándar para estimar la concentración de glucosa
(Figura 1 1 . 14C). Estos análisis se hacen con analizadores
de inyección de flujo o de centrífuga para asegurar una mezcl¿
rápida de los reactivos y la muestra. Los analizadores cinéticos
son inherentemente más rápidos que los análisis de punto final
porque estiman la concentración de glucosa antes de que
el ensayo alcance su punto final. Estos ensayos funcionan
porque la glucosa oxidasa tiene una K. elevada
y, a las concentraciones de glucosa que se encuentran
en la sangre, la velocidad de la reacción catalizada por
la glucosa oxidasa es proporcional a la concentración
de glucosa, es decir, en Ia región de primer orden
de la ecuación de Michaelis-Menten.
Fig. 11.14 Análisis mediante glucosa
oxidasa/peroxidasa (punto final
frente a ensayos cinéticos). (A)
Análisis gráfico de la determinación
a punto final. (B) Las absorbancias
finales (punto final) se representan
gráficamente como una función
de la concentración de glucosa,
proporcionando una línea recta.
(C) Las velocidades iniciales de las
reacciones se estiman mediante
mediciones múltiples al principio
del análisis (líneas punteadas en el
cuadro A), y se trasladan a la gráfica
frente a la concentracíón de
glucosa. Cuando se obtienen
trazados no lineales, se analizan
por ordenador.
IGlucosa] (mmot/L)
 EL DÉFICIT DE GLUCOSA-6.FOSFATO
DESHIDROGENASA PRODUCE
ANEM¡A HEMOLíflCA
Justo antes de un viaie planeado a los trÓpicos, un paciente
visitó a su médico quejándose de debilidad y notando que
recientemente su orina se había vuelto inexplicablemente
oscura. La exploración física mostró una esclerótica ligeramente
ictérica (amarilla). Las pruebas de laboratorio indicaban
un hematocrito bajo, un recuento de reticulocitos elevado,
y una concentraciÓn sanguínea de bilirrubina significativamente
áumentada. El paciente estaba realmente sano en una visita
previa 1 mes antes cuando recibió vacunaciones y recetas para
fármacos antiPalúdicos.
Comentario. Una serie de fármacos, concretamente
la primaquina y los antipalúdicos relacionados,
sufren reacciones redox en la célula, produciendo
grandes cantidades de especies reactivas de oxígeno (ROS)'
Las ROS producen oxidación de los grupos -SH
en la hemoglobina y peroxidaciÓn de los lípidos
de membrana. Algunas personas tienen
un defecto genético en la Glc-6-P deshidrogenasa
(Capítulo 11), que resultó ser una enzima inestable que tiene
una vida media más corta en los eritrocitos o es inusualmente
más sensible a la inhibiciÓn por el NADPH' En cualquier caso,
dada la actividad disminuida de esta enzima y la producción
insuficiente de NADPH bajo estrés, la capacidad de las células
para reciclar GSSG a GSH está disminuida, y el estrés oxidativo
inducido por el fármaco da lugar a la lisis de los eritrocitos
(hemólisis) y anemia hemolítica. La bilirrubina, un producto
del metabolismo del hemo, sobrecarga las vías de
plasma
desintoxicaciÓn hepática, y también se acumula en el
la es lo
y en los tejidos, produciendo ictericia. Si hemÓlisis
la Hb pasa a la orina produciendo
suficientemente intensa,
hematuria y una orina de coloración oscura' Los cuerpos de
Heinz, agregados de hemoglobina entrecruzados
por sulfuro'
en las extensiones sanguíneas'
también aparecen
La deficiencia en Glc-6-P deshidrogenasa es asintomática,
excepto en respuesta a un estímulo oxidativo, que
puede estar
por fármacos (antipalúdicos, sulfamidas), la dieta
inducido
(habas) o una infección grave.
Existen más de 200 mutaciones conocidas en la Glc-6-P
deshidrogenasa, produciendo una amplia variación
en la gravedad de la enfermedad. Parece que el eritrocito
es especialmente sensible al estrés oxidativo porque,
a diferencia de otras células, no puede sintetizar y reemplazar
enzimas. Las células más viejas, que tienen una actividad
Glc-6-P inferior, están por lo tanto particularmente afectadas'
La actividad de todas las enzimas del eritrocito disminuye con
la edad de la célula, y la muerte celular es el resultado
de la incapacidad de las células para producir suficiente ATP
para mantener los gradientes iónicos celulares El aumento
gradual del Ca2* citosólico y la disminución en la actividad
áe la vía de las pentosas fosfato en las células más viejas
es uno de los mecanismos que dan lugar a enlaces cruzados
de las proteínas de membrana y al recambio de los eritrocitos
en el bazo.
DEFIC¡ENC¡A DE PIRUVATO CINASA
Un niño presentaba ictericia y dolor a la palpaciÓn abdominal
(esplénica), que se desarrolló tras un catarro intenso'
Las pruebas de laboratorio revelaban un hematocrito
y una concentraciÓn de hemoglobina bajos, eritrocitos
normocrómicos con morfología normal, y reticulocitosis leve'
La bilirrubina sérica estaba aumentada'
Comentario. La deficiencia en piruvato cinasa es la forma
más habitual de anemia hemolítica como consecuencia
de una deficiencia en una enzima glucolítica' Es un trastorno
autosómico recesivo que ocurre con una frecuencia
de 1/1 0.000 (- 1% de frecuencia del gen) en la población
mundial. Ocurre en segundo lugar después de la deficiencia
en G6PDH como causa enzimática de anemia hemolítica'
Estas enfermedades se diagnostican mediante mediciones
de los niveles eritrocíticos de enzimas o metabolitos. mediante
la demostraciÓn de anomalías en las actividades enzimáticas
o por análisis genético. Los defectos enzimáticos en la piruvato
cinasa que se han caracterizado incluyen termolabilidad,
aumento de Km para el PEP y activación disminuida
por la Fru-1,6-BP.
La deficiencia en piruvato cinasa varía significativamente
en su gravedad, desde una afección leve y compensada
que requiere poca atención hasta una enfermedad
grave q'ue requiere transf usiones. La anemia es el resultado
áe la incapacidad de sintetizar ATP, necesario para
el mantenimiento del metabolismo del eritrocito, los
gradientes
iónicos y la configuraciÓn celular' De forma ¡nteresante,
los pacientes pueden tolerar la anemia bastante bien'
La acumulación de 2,3-bisfosfoglicerato en sus eritrocitos
disminuye la afinidad de la hemoglobina por el oxígeno'
favoreciándo la liberación de oxígeno en el músculo durante
el ejercicio e incluso al feto durante el embarazo'
las membranas celulares (Fig. 11.12)' Como la GPx contiene
que
un residuo selenio-cisteÍna en su centro activo, el selenio'
se requiere como oligoelemento de la dieta, a menudo se des-
cribe como un nutriente antioxidante (ver Capítulo 10)'
EI GSH también actúa como un tampón sulfidrilo intiace-
proteínas
Iular, manteniendo los grupos -SH expuestos de las
y enzimas en el estado reducido. En circunstancias normales'
cuando las proteínas se exponen al O2, sus grupos sulfidrilo
Iibres gradualmente se oxidan para formar disulfuros' bien
proteínas' En el
sea dentro de la propia molécula o con otras
rojo, el GSH mantiene los grupos -SH de Ia hemoglo-
"bina
"gtóbulo
en su estado reducido, inhibiendo la unión cruzada oxi-
dativa de Ia Proteína.
Resumen
Este capítulo describe dos vías metabólicas antiguas comu-
nes a todas Ias células del cuerpo: la glucólisis y Ia vía de Ias
pentosas fosfato, Se utiliza como modelo en Ia exposición de
estas vÍas el eritrocito, que carece de mitocondrias y de Ia ca-
pacidad del metabolismo oxidativo y que obtiene toda su
energía del ATP por la glucólisis. La glucólisis anaeróbica en
el eritrocito proporciona una cantidad limitada de ATP me-
diante la conversión del azúcar de seis carbonos, glucosa, en
dos moléculas de lactato. hidroxiácido de tres carbonos.
A través de una serie de intermediarios de azúcar fosforilado,
la glucólisis proporciona metabolitos para puntos de enlace
con otras vías metabólicas numerosas, incluyendo Ia vía de
Ias pentosas fosfato. Esta vía proporciona pentosas para la
1. ¿Por qué §e seleccionó Ia glucosa comO azri¿ar sangufneo
durante la evolución, en vez de otros azúcares, por ejemplo,
síntesis de DNA y RNA en las células nucleadas, y \.\DH
para las reacciones biosintéticas. El NADPH también es na-*
sario para el mantenimiento del glutatión reducido. que -
un cofactor esencial para los sistemas de defensa antioxidac-
tes que protegen a Ia célula contra el estrés oxidativo.
Lecturas recomendadas
Arya R, Layton DlvI, Bellingham AJ. Hereditary red cell enzSmopathies. Blm'
R¿vi¿ws 1995:9:165-1 75.
Brown SP Keith WB. The effect of acute exercise on levels of erythrocyte 2. l-
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McMullin M. The molecular basis of disorders of red cell enzymes. / ClinPath,.l
7999:52:241-244.

2.
gálactósar,,f ructosa o sacarosa ?
Describa las reacciones enzimáticas acopladas, utilizando
Páginas web útiles
solamenteienzirnás del eritrocito, que 1p9§láh utilizarie para
American Society of Hematology: Case Studies on
medir la §iumsa sangulnea y lasrcolceñtiációnes de factato anemia:www.ashteachingcases.org
3. ¿Qué,lproe6d irnientO de análisis sé uti lizárpára'rmédi r la National Institutes oI Health:
glucosa sangufnea en el hospital de su localidad? Exponga ww.nlm.nih. gov/medlineplus/ency/article/000 5 2 8.htm
los principios y los valores normales de esta determinación. E-Medicine: m.emedicine.com/med/topic1980.htm and ....topic900.htm
Glucose-6-P dehydrogenase deficiency: ww.rialfo.coml g6pd,l