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INTRODUCCIÓN
La genética es una rama de la Biología que ha estado encargada durante mucho tiempo del estudio de
los genes y la herencia, es decir, la transmisión de la información contenida en el ADN de parentales a
descendientes. Esto ha permitido establecer ciertos patrones de acuerdo con rasgos fenotípicos
observados en diferentes generaciones para establecer lo que Gregor Mendel, reunió en tres
principios o leyes fundamentales: uniformidad, segregación y transmisión independiente
(Pierce,2009). No obstante, la herencia no se rige por completo por dichos principios, y es allí donde
se presenta la primera gran división en el estudio de los genes: la genética mendeliana y la genética
no mendeliana. Esta última, estudiada en gran parte por Thomas Morgan (1866-1945), describe
situaciones donde existen genes ligados al sexo (cromosomas sexuales) o ligamiento a un mismo
cromosoma (Griffiths et al., 2015). En el presente proyecto, se hará uso del organismo biológico
modelo más estudiado y utilizado en la genética, la mosca de la fruta (Drosophila melanogaster),
donde se pretenden establecer comportamientos mendelianos y no mendelianos en los caracteres
observables de las mutaciones Sepia y Forked mediante la realización de cruces y pruebas estadísticas.
Todo esto, con el fin de adquirir herramientas y conocimientos que demuestren la relación teórico-
práctica de la genética y cómo, mediante diferentes hipótesis, se llega a conclusiones importantes que
hace aproximadamente dos siglos, cambiaron por completo la perspectiva de la herencia y el
comportamiento de los genes.
MARCO TEÓRICO
Drosophila melanogaster
Existen diversos organismos cuyas características les permiten ser estudiados de forma sencilla y de
acuerdo con las necesidades experimentales. Estos individuos, denominados organismos modelo,
presentan entre otros atributos, su fácil reproducción y alojamiento en ambientes no naturales, como
lo son laboratorios. El organismo modelo más famoso en la genética es la mosca de la fruta, Drosophila
melanogaster. Su importancia radica en que es un organismo idóneo para estudios genéticos, de
desarrollo animal y de diferenciación celular dadas sus características tales como: son individuos
pequeños, tienen cortos tiempos de generación, altas tasas de fertilidad, estadios del desarrollo
fácilmente distinguibles, mutantes definidas, estudiadas y variadas, pocos cromosomas, y
secuenciamiento completo del genoma (Matta, 2010).
D. melanogaster presenta cuatro pares de cromosomas de los cuales el primero es sexual (XX para
hembras y XY para machos) y tres pares autosómicos. Cuando un carácter específico se encuentra
ubicado en el primer par de cromosomas, se dice que es ligado al sexo, mientras que si se encuentra
en cualquiera de los siguientes (2, 3 o 4) se dice que es autosómico. La diferenciación entre machos y
hembras (dimorfismo sexual) se presenta de forma muy marcada y visible con claridad en
instrumentos como estereoscopios. Los tres aspectos más importantes que diferencian el sexo en D.
melanogaster son: presencia de peine sexual en machos, ausencia en hembras; pigmentación
pronunciada en la zona posterior del segmento abdominal en machos y ausente en hembras; y por
último, generalmente se presentan diferencias en tamaños donde la hembra suele ser más grande que
el macho (Matta, 2010) (Fig. 1).
Figura 1. Dimorfismo sexual en Drosophila melanogaster. A la izquierda, macho con pigmentación abdominal
marcada y peine sexual visible en el primer par de patas (anteriores). A la derecha, hembra sin pigmentación y
con ausencia de peine sexual. Tomado de Bilen & Bonini (2005).
El ciclo de vida que presenta en D. melanogaster es corto, tarda alrededor de diez días desde huevo
hasta individuo adulto y puede variar inversamente proporcional a la temperatura en la que se
encuentre. El ciclo se completa a 25 ºC en 10 días y va aumentando hasta los 57 días a 10 ºC
presentando cuatro estadios de desarrollo: huevo, larva, pupa y adulto (Matta, 2010). Así, los huevos
eclosionan alrededor de 20 horas después de la fecundación. La etapa larval toma tres días, tiempo en
el cual se obtiene alimento y busca un lugar adecuado para la siguiente etapa de pupa. En está, se
presenta la diferenciación celular que dará origen a la formación de los órganos tomando de cuatro a
cinco días. En la etapa adulta se presenta el dimorfismo sexual (Lakhotia & Ranganath, 2021).
La mutación Forked, cuyo símbolo es f, fue descubierta por Morgan y Bridges en 1916. El gen
relacionado con esta mutación se ubica en el cromosoma X viéndose afectado el desarrollo, pero no
la reproducción ni el comportamiento. Se trata de una mutación espontánea, con un fenotipo de tipo
visible, recesivo y ligado al sexo (Matta, 2010).
En esta mutación se codifica una proteína involucrada en el ensamblaje de los filamentos de actina,
por lo que se encuentra involucrado en múltiples procesos tales como: los patrones de formación de
la cutícula, la percepción sensorial y la morfogénesis de órganos (NCBI, 2022). Se ven afectadas la
forma de las cerdas de la cabeza y el tórax, siendo éstas más cortas y truncadas en la punta (Petersen
et al., 1994) (Fig. 4).
Figura 4. Afectación de las cerdas en la mutación Forked de Drosophila melanogaster. A la izquierda, individuo
silvestre no afectado. A la derecha, individuo afectado. Tomado de: Castillo, s.f.
El gen Forked (1-56.7) está ubicado en la subdivisión cromosómica 15F (Fig. 5) y codifica seis
transcritos diferentes además de dos ARN principales, los cuales terminan prematuramente en
elementos transponibles gypsy y springer (Ishimaru & Saigo, 1993). Se estima que, el exón de la región
que codifica uno de los ARN suprime completamente la formación de transcritos de tipo silvestre por
lo que las cerdas que se acortan y se bifurcan (Hoover et al., 1993). El número de loci modificadores
que alteran la expresión Forked en estos alelos sugiere que se puede alterar la expresión del gen por
múltiples mecanismos. Uno de estos que la proteína su(Hw) que actúa en el nivel de inicio de la
transcripción puede interferir en la estabilidad del ARNm (Hoover et al., 1993).
La afectación se puede producir en varios grados de acuerdo al alelo que esté involucrado, con lo que
se pueden producir quetas cortas, nudosas, inclinadas, con extremos bifurcados o inclinados (Lindsley
& Zimm, 1992) dado por un ensamblaje anormal de las estructuras citoplasmáticas fibrilares
necesarias para la morfogénesis de la queta (Petersen et ál., 1994) (Fig. 5). Además, cabe mencionar,
que la severidad del fenotipo varía desde los alelos f17h y f3 que presentan cambios leves, hasta los
alelos fhd, f36a y f 14k que propician cambios severos (Hoover et al., 1993).
Se estima que la aparición de las cerdas pupales está siendo afectadas y las retromutaciones ocurren
espontáneamente (Green, 1956) y que el producto del gen es esencial durante un período de 24
horas justo antes de la secreción de cerdas, dado que las estructuras de los haces de fibras son
temporales y solo aparecen entre 40 y 43 horas después de la formación de las pupas. La desaparición
de estas estructuras corresponde a la aparición de una densa cutícula alrededor de la periferia del
eje de las cerdas (Hoover et al., 1993).
Figura 5. Ubicación citogenética de la mutante Forked de D. melanogaster. Tomado de NCBI (2022).
Las mutaciones en el gen Forked dan como resultado una falla del ensamblaje fibrilar para anclarse
adecuadamente a la membrana celular, comprometiendo el soporte estructural. El estrés creado por
la presión citoplásmica dentro del rudimento de las cerdas provoca el pandeo del eje y da como
resultado el fenotipo Forked: niveles insuficientes o un desequilibrio de los materiales necesarios para
el ensamblaje fibrilar normal (Hoover et al., 1993).
Los ojos Sepia no tienen pigmento rojo, pero si acumulan pigmento amarillo (Matta, 2010). Está
mutante y su gen ortólogo (genes homólogos de especies diferentes que evolucionaron a partir de
un ancestro común en un proceso de especiación) ha permitido realizar estudios como el realizado
en 2011, donde a través del uso de la D. melanogaster, fue posible estudiar la enfermedad de
parkinson y comprender los mecanismos de neuroprotección (Kim et al., 2012) (Fig. 7).
Figura 7. Ubicación citogenética de la mutante Sepia de Drosophila melanogaster. Tomado de:
https://flybase.org/
Dos clases de pigmentos, los ommocromos (marrones) y las drosopterinas (rojos), son responsables
del color de ojos típico de Drosophila. Las drosopterinas constan de al menos cinco compuestos que
están formados por una porción de pirimidodiazepina (PDA) y una porción de pteridina (Kim et al.,
2006). En la ruta biosintética de estos pigmentos se involucran diversas enzimas, como la PDA
sintetasa, se estima que el gen CG6781 corresponde a la secuencia de la PDA sintetasa que está
directamente relacionado con la mutación Sepia, por lo que alteraciones significativas en esta
secuencia provoca el daño en la funcionalidad de esta enzima, y por tanto el truncamiento de la ruta
biosintética de los pigmentos rojos (drosopterinas) y acumulación de pigmentos marrones
(ommocromos) (Kim et al., 2006).
En el alelo 1 de sepia se cambian de AAGAA a GTG y que esto conduce a una mutación que causa un
codón de terminación prematuro (TGA) en los nt 273–275 en el segundo exón, produciéndose la
mutación en los nt 190–194 que se cambian de AAGAA a GTG y que afecta la producción de PDA a
partir de 6-PTP (Kim et al., 2006) (Fig. 8).
Figura 8. Ilustración de la mutación Sepia de Drosophila melanogaster. Tomado de: LabXchange (2022).
CONCEPTOS BÁSICOS
OBJETIVOS
Objetivo General
comprobar por medio de cruces experimentales el tipo de herencia asociada a las mutaciones Forked
y Sepia en Drosophila Melanogaster
Objetivos específicos
1. Comprobar que la mutación Sepia en D. melanogaster presenta herencia recesiva y
autosómica.
2. Comprobar que la mutación Forked en D. melanogaster presente herencia recesiva y ligada
al sexo.
3. Analizar, comprender y socializar detalladamente los mecanismos moleculares, bioquímicos,
de señalización implicados en la aparición del fenotipo en las mutaciones de Forked y Sepia
en D. melanogaster
HIPÓTESIS
Teniendo en cuenta los objetivos del proyecto se fijan las siguientes hipótesis:
H0: Los datos experimentales no difieren con las proporciones mendelianas, siendo Sepia una
mutación autosómica y recesiva se espera que el 100% de los individuos sean silvestres para color de
ojos en la F1 del cruce con parentales Sepia puro y silvestre para color ojos.
H1: Los datos experimentales difieren estadísticamente de las proporciones esperadas según los
postulados de Mendel, siendo Sepia una mutación autosómica y recesiva no se espera que el 100% de
los individuos sean silvestres para color de ojos en la F1 del cruce con parentales Sepia puro y silvestre
para color ojos.
H1: Los datos experimentales cumplen con las proporciones mendelianas, siendo Forked una mutación
ligada al sexo y recesiva no se espera que el 100% de los machos sean Forked y el 100% de las hembras
sean silvestres para quetas en la F1 con parentales hembra Forked pura y macho silvestre para quetas,
y en la F1 del cruce reciproco no se espera que el 100% de los individuos sean silvestres para quetas.
METODOLOGÍA
Inicio y Réplica
Las cepas serán suministradas por el laboratorio de genética del Departamento de Biología de la
Universidad Nacional de Colombia (Bogotá), donde se llevará a cabo todo el experimento. Se tomaron
dos líneas puras, una de cada mutante Sepia y Forked. Estas serán entregadas en frascos de cristal con
medio compuesto por agar-agar, harina de maíz, levadura y ácido propiónico. El alojamiento de los
organismos en el medio, se hace en incubadoras a 25°C aproximadamente.
Posteriormente, se procederá a realizar las primeras réplicas. El proceso de réplica se hará como parte
del mantenimiento y continuidad de las mutantes para preservarlas siempre en medios con buenas
condiciones, ya que este al ser material orgánico proveedor de alimento para las moscas, se va
degradando y va tomando un color oscuro a medida que pasa el tiempo (Fig. 8.). El proceso para
realizar las réplicas se iniciará preparando los medios nuevos, los cuales incluirán su respectivo tapón
de gasa, y las líneas puras. Adicional a esto, también se tendrán dos mecheros encendidos cubriendo
la zona de trabajo para evitar posibles contaminaciones bacterianas o fúngicas y será el tapón de
anestesiar (tapón de gasa con removedor de esmalte). El procedimiento iniciará dando pequeños
golpes en la parte inferior o base del medio para que las mosquitas en la parte superior caigan. Luego
de esto, se retirará el tapón de la línea pura y rápidamente se remplaza por el tapón de anestesiar.
Esto hará que los organismos vayan quedando dormidos paulatinamente y posterior a esto poderlos
llevar al nuevo medio pegando muy bien las bocas del envase uno con otro. Una vez se hayan
depositado la mayor cantidad posible de moscas en el nuevo medio, se colocarán los tapones
correspondientes y se esperará a que los organismos despierten. En caso de tener algún organismo
fuera de los respectivos medios, es necesario depositarlo en una mezcla de jabón y agua a la cual se le
denomina cementerio.
Figura 8. A la izquierda, línea pura principal de Sepia dos semanas después de la entrega. Véase la coloración
del medio degradado. A la derecha, replica de la mutante Sepia en un medio nuevo.
Posibles Dificultades
Durante el proceso de réplica puede haber diversas dificultades que se pueden presentar. A
continuación, se presentarán dos de las más comunes y sus soluciones.
Figura 10. Desprendimiento del medio ocasionando la muerte total de los organismos adultos. Observe
también allí la presencia de larvas hacia la parte central del frasco.
Con el fin de poder obtener resultados confiables, se hace necesaria la separación de hembras vírgenes
las cuales serán fecundadas posteriormente por el macho propuesto en el desarrollo experimental y
siguiendo los lineamientos teóricos. Dicha selección se ha realizado seleccionando pupas maduras e
identificando hembras y machos a partir del peine sexual ya visible (Cooper, 1950).
Cruces y Nomenclatura
Para realizar los cruces teóricos y obtener las proporciones, es necesario establecer algunos
parámetros de nomenclatura a usar, establecidos universalmente. La mutante Forked, se representará
con “f”, la mutante Sepia, será designada como “se”. El carácter silvestre se designará como un “+” en
superíndice a la mutación autosómica y acompañando a la mutación como superíndice del cromosoma
que contiene el carácter ligado al sexo, por ejemplo: se+ y Xf+.
Para realizar los cruces, es necesario recordar que la mutación Forked es recesiva y ligada al sexo, así
como Sepia es recesiva y autosómica. Teniendo esto en cuenta, se realizarán cruces recíprocos que
incluyan hembras Forked X machos Sepia (Xf /Xf ;se+ /se+ * Xf+ /Y;se/se) y hembras Sepia X machos
Forked (Xf+ /Xf+ ;se /se * Xf /Y;se+/se+). Esto se realizará con el fin de corroborar el carácter recesivo
de ambas mutantes propuesto en los objetivos 1 y 2.
El primer cruce propuesto, para corroborar el carácter recesivo de las mutantes es entre hembra
Forked y macho Sepia (Xf /Xf;se+ /se+ * Xf+ /Y;se/se), alojado en la tabla 1.
Tabla 1. Cruce entre hembra Forked y macho Sepia: (Xf /Xf ;se+ /se+ * Xf+ /Y;se/se)
y; se Xf/y; se+/se
En este cruce se puede evidenciar que la totalidad de las hembras presentan fenotipo silvestre de tipo
heterocigoto, siendo el caracter Forked opacado por el silvestre al igual que en la mutación Sepia. En
el caso de los machos, se puede evidenciar que la descendencia presenta un fenotipo Forked en su
totalidad y sin presentar alteración en la coloración de los ojos, es decir, que el carácter silvestre ha
opacado el carácter Sepia por ser este último recesivo.
En el siguiente cruce, P2, reciproco respecto al P1, se ha realizado el cruce entre macho Forked y
hembra Sepia (Xf+ /Xf+ ; se /se * Xf /Y;se+/se+) (Tabla 2)
Tabla 2. Cruce entre macho Forked y hembra Sepia: (Xf+ /Xf+ ;se /se * Xf /Y;se+/se+)
Cruce P2 Xf+; se
Machos Forked ½
Total 1 𝑥2 =
Machos silvestres ½
Total 1 𝑥2 =
Diagrama de Flujo del Proceso Teórico-práctico.
Figura 11. Diagrama de flujo del procedimiento teórico-práctico llevado a cabo para la obtención de mutantes
Forked-Sepia y su respectivo análisis estadístico.
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
Tabla 3. Cronograma de actividades para el desarrollo del proyecto y logro de objetivos planteados.
Actividades sep sep sep sep oct oct oct oct nov nov nov nov
12-16 19-22 19-23 26-30 03-07 03-07 24-28 31-04 7-11 14-18 21-25 28-2
Réplica de cada x x x
mutación
2. Obtención de x x x
hembras vírgenes línea
pura mediante revisión
de pupas maduras
3. Realizar cruces P1 y x x x
P2
4. Solicitud de frascos x x x x x
con medio
6. Análisis datos x x
experimentales
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