"Año del Fortalecimiento de la Soberanía Nacional"

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

FACULTAD DE CIENCIAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

LABORATORIO DE QUÍMICA ANALITICA

INFORME DE LA PRÁCTICA N°2 (GRUPO G*)

“Determinación de nitrógeno orgánico. Método de Kjeldahl”

PROFESORA: Dra. Carmen Alicia Rodríguez Best

MESA: 3

INTEGRANTES: CÓDIGO:

- Aliaga Rueda, Silvana Miyuit 20210987

- Conejo Fernandez Cielo Kristal 20200166
- Llacchuarimay Palomino, Nell Cinthya 20200183
- Miranda Horna, Roberto Carlos 20200190 (Coordinador)

Fecha de práctica: 04/10/2022

Fecha de entrega: 10/10/2022

LA MOLINA-LIMA-PERÚ
2022
 1. INDICE

1. INDICE 2
2. INTRODUCCIÓN: 3
1.1 OBJETIVOS 3
3. REVISIÓN DE LITERATURA: 3
4. MATERIALES Y MÉTODOS: 5
4.1 Materiales y equipos 5
4.2 Procedimiento 5
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN: 6
5.1 Resultados 6
5.2 Discusiones: 7
6. CONCLUSIONES 7
7. BIBLIOGRAFÍA 7
2. INTRODUCCIÓN:

Tanto en las plantas como en los seres humanos, el nitrógeno se usa para producir
aminoácidos, que producen las proteínas que construyen las células, y es uno de los
componentes básicos del ADN (Orchardson, 2020). El nitrógeno, desempeña un papel
fundamental en el metabolismo vegetal y es esencial para la estructura y las funciones
de las células, y para todas las reacciones enzimáticas, además de hacer parte de la
molécula de la clorofila (fotosíntesis) y ser un componente de las vitaminas

En relación con el sector ambiental, es necesario verificar los niveles de proteínas en

hojas y granos. Por ejemplo: la calidad de los granos de cebada para la producción de
malta es perjudicada cuando el contenido de proteínas en el grano sobrepasa el índice
de 12% (TECNAL, 2012).

En este contexto, tanto en el campo de alimentos, bebidas, carnes, como en el de los

suelos, forraje y aguas residuales, el método Kjeldahl es de vital importancia para
determinar los niveles de nitrógeno de las muestras, ya sean orgánicas o inorgánicas
(KROMTEK, 2020).
1.1 OBJETIVOS

● Determinar el contenido de nitrógeno y proteína de una muestra orgánica

utilizando el método de Kjeldahl.

3. REVISIÓN DE LITERATURA:

3.1 Método de Kjeldahl

Este método se utiliza para la determinación del contenido de nitrógeno en

muestras orgánicas e inorgánicas también para la determinación de nitrógeno en
aguas residuales, suelos y otras muestras. Consta de tres etapas.

Etapa de digestión:

La digestión conforme al método Kjeldahl se basa en el principio de que la muestra se

destruye por oxidación con ácido sulfúrico concentrado en presencia de un catalizador
y en ebullición. El nitrógeno orgánico se separa sin pérdidas de su matriz de enlace y
se transforma completamente en nitrógeno amoniacal inorgánico (NH4+-N). Una vez
finalizada la reacción de digestión, todo el nitrógeno de la muestra debe haberse
convertido en nitrógeno amoniacal (Gerhardt, 2021).

catalizador/
calor
CaHbNc + H2SO4 → (NH4)2 SO4 + CO2 + H2O

Etapa de destilación:

Durante el proceso de destilación los iones amonio (NH 4+) se convierten en amoniaco
(NH3) mediante la adición de un álcali (NaOH). El amoniaco (NH 3 ) es arrastrado al
vaso receptor por medio de una corriente de vapor de agua (PanReac, s. f.).
 (NH4)2SO4 + 2NaOH → 2NH3 + Na2SO4+ 2H2O

El vaso receptor para el destilado se llena con una solución absorbente para capturar
el gas amoniaco disuelto.

● La solución absorbente más común es el ácido bórico [B(OH) 3] en solución

acuosa al 2-4%. El amoniaco es capturado cuantitativamente por la solución
de ácido bórico formando iones amonio solvatados.

B(OH)3 + NH3 + H2O ⇋ NH4 + + B(OH)4

● También pueden utilizarse otros ácidos, dosificados con precisión, como el

ácido sulfúrico o clorhídrico para capturar el amoniaco en forma de iones
amonio solvatados

H2SO4 (total) + 2NH3 → SO42- + 2NH4+

Etapa de valoración:

La concentración de los iones amonio capturados puede determinarse por medio de

dos tipos de valoración:

● Cuando se utiliza el ácido bórico como solución absorbente, posteriormente se

lleva a cabo una valoración ácido-base utilizando una solución estandarizada
de ácido sulfúrico o clorhídrico y una mezcla de indicadores. El rango de
concentración de la solución utilizada varía entre 0,01N a 0,5N dependiendo
de la cantidad de iones de amonio presentes. El punto final de la valoración
también se puede determinar potenciométricamente con un electrodo de pH.
Esta valoración se llama valoración directa (PanReac, s. f.).

B(OH)O4- + HX ⇋ X- + B(OH)3 + H2O

HX=ácido fuerte (X=Cl-, etc.)

● Cuando se utiliza una solución valorada de ácido sulfúrico como solución

absorbente, el ácido sulfúrico residual (es decir, el exceso que no reacciona
con NH3 ) se valora con una solución estandarizada de hidróxido sódico y la
cantidad de amoniaco se calcula por diferencia. Esta valoración se llama
valoración indirecta o por retroceso (PanReac, s. f.).

H2SO4(residual) + 2NaOH → SO42- + 2Na+ + 2H2O

3.2. Composición de nitrógeno proteico

El contenido de proteína cruda de un ingrediente se determina usualmente por medio

del método Kjeldahl en el cual se mide el contenido de nitrógeno total en la muestra,
convirtiendo luego este resultado a un valor total de proteína cruda, mediante una
multiplicación por el factor empírico 6.25 (este factor de conversión se basa en la
suposición de que la proteína promedio, contiene alrededor de 16% de nitrógeno por
unidad de peso, aun cuando en la práctica es posible una variación entre 12 y 19% de
nitrógeno entre proteínas individuales). En la Tabla 1 se muestra el rango de factores
de conversión de proteína usados para convertir valores de nitrógeno a proteína cruda
en diferentes materiales (NUTRICION Y ALIMENTACION DE PECES Y
CAMARONES CULTIVADOS MANUAL DE CAPACITACIÓN, s. f.).
 TABLA 1. Factores de conversión de proteína usados para convertir nitrógeno a
proteína, entre diferentes ingredientes alimenticios.

Ingredientes Factores de conversión

CEREALES

Trigo, duro, medio o suave

Harina, harina integral 5.83

Harina, extracción media o baja 5.70

Macarrones, espagueti, pastas de trigo 5.70

Salvado 6.31

Arroz 5.95

Centeno 5.83

Cebada 5.83

Avena 5.83

LECHE Y QUESO

Leche, todo tipo, fresca o seca 6.38

Queso, duro o suave

Suero de queso

ACEITE Y GRASAS

Margarina (vegetal o animal) 6.38

Mantequilla

4. MATERIALES Y MÉTODOS:

4.1 Materiales y equipos

● Muestra de alimento
● Espátula
● Balón Kjeldahl
● Vasos de precipitado
● Probetas
● Pipetas
● Balanza Analítica
● Digestor Kjeldahl
● Destilador Kjeldah
● Sistema de titulación

4.2 Procedimiento

En este laboratorio se utiliza el método de Kjeldahl, el cual consta de tres etapas:

 Digestión:

● Pesar 1,0 g de muestra en una balanza analítica y registrar.

● Introducir la muestra en el balón Kjeldahl, luego adicionar el catalizador y 8 mL
de ácido sulfúrico concentrado
● Colocar el balón en el digestor dentro de la campana extractora y proceder con
el calentamiento durante ± 2 horas hasta obtener un líquido incoloro.
● Dejar enfriar el residuo incoloro
● Añadir agua destilada y diluir el residuo incoloro

Destilación:

● Acondicionar el equipo de destilación haciendo circular agua por el

refrigerante.
● Medir 25 mL de H2SO4 0,05 M estandarizado en un matraz erlenmeyer, añadir
unas gotas de fenolftaleína y colocar a la salida del refrigerante.
● Adicionar el contenido del balón de digestión a la cámara en la muestra.
● Medir 5 ml de NaOH 20 M en una probeta y adicionar a la cámara de la
muestra. Cerrar las válvulas de la cámara de la muestra y de la trampa de
vapor suministrando vapor de agua para la ebullición de la muestra a partir del
agua hirviendo.
● Destilar durante 5 minutos aproximadamente después que la muestra
alcalinizada bullir comience a ebullir.
● Retirar el matraz erlenmeyer conteniendo el destilado.

Retrovaloración:

● Colocar el matraz del sistema en el sistema de titulación con la bureta

conteniendo el NaOH 0,1M estandarizado.
● Titular el destilado hasta alcanzar el punto final rosa. Registrar el volumen de
NaOH gastado.

5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN:

5.1 Resultados
En el laboratorio se registraron los datos que nos serán útiles para realizar los siguientes
cálculos como:

Peso muestra = 1,014 g

VH2SO4 = 25,0 mL

MH2SO4 = 0,0574M

VNaOH = 24,5 mL

MNaOH = 0,1034M

PF N = 14,0067

Factor de conversión = 6,25

Ahora, con los datos ya obtenidos, procedemos a calcular:

 # mmoles N= (# mmoles H2SO4 - # mmoles NaOH x ½) x 2
# mmoles N= (1.435 - 1.2666) x 2
# mmoles N= 0.3367 mmoles

Masa N(g) = # mmoles N x peso de 1 mmol N (g)

Masa N(g) = 0.3367x 0,0140067
Masa N(g) = 0.0047606 g

También se calculó los porcentajes de nitrógeno y proteína total obtenidos:

% N =([VH2SO4 x MH2SO4 - VNaOH x MNaOHx0,5] x 2 x 0,0140067 g/mmol)/ peso

muestra x 100
% N =0.0047606 / 1.014 x 100
%N = 0.465

% Proteína = % N x Factor de conversión

% Proteína = 0.465 x 6.25= 2.9077
5.2 Discusiones:

Según PanReac AppliChem. (s.f.), el contenido de proteínas en su muestra de harina

de trigo es de 13,7 % a comparación del nuestro que es de 2.9077%, esta diferencia
puede ser a causa del receptor del amoniaco ya que esta solución absorbente captura
el gas amoníaco disuelto, también este resultado pudo deberse al tiempo de duración
de la destilación para recuperar el amoniaco; además en el proceso de digestión, el
tipo de catalizador pudo ser otro factor para que el resultado sea diferente. Por otro
lado, podemos considerar un error en el proceso en laboratorio y la diferencia de
cereal utilizado. Sin embargo, en el laboratorio se siguieron los pasos correctos y se
puede percibir una precisión entre resultados con otras mesas.

Otra explicación para la diferencia de contenido de proteínas en muestras puede ser

por el método utilizado, ya que el método de Kjeldahl presenta algunas desventajas
a la hora del cálculo, por ejemplo, en el proceso interfieren compuestos nitrogenados
no proteicos y la elección del factor de conversión ya que en los cálculos se
considera el contenido de nitrógeno de la proteína principal y no de toda la mezcla,
además la fracción analizada de la muestra no necesariamente es proteína pura

6. CONCLUSIONES

● Se logró comprender y aplicar el método de KJELDAHL en la determinación de

nitrógeno orgánico.
● Mediante la aplicación de la teoría y los cálculos realizados, se logró obtener la
composición proteica de una muestra orgánica

7. BIBLIOGRAFÍA

Gerhardt. (2021, enero). ANÁLISIS DE NITRÓGENO - EL MÉTODO DE JOHAN

KJELDAHL. Recuperado 10 de octubre de 2022, de

 https://www.gerhardt.de/fileadmin/Redaktion/downloads/Stickstoffanalyse_-

_Die_Methode_von_Johan_Kjeldahl_gekuerzt_f_Homepage-spa-ES.pdf

KROMTEK. (2020). LA IMPORTANCIA DEL METODO KJELDAHL PARA LA

SEGURIDAD ALIMENTARIA. Recuperado 10 de octubre de 2022, de

https://www.cromtek.cl/2020/09/14/la-importancia-del-metodo-kjeldahl-para-

la-seguridad-alimentaria/

NUTRICION Y ALIMENTACION DE PECES Y CAMARONES CULTIVADOS

MANUAL DE CAPACACITACION. (s. f.). Recuperado 10 de octubre de 2022,

de https://www.fao.org/3/ab492s/AB492S06.htm

Orchardson, E. (2020). El nitrogeno en la agricultura - El nutriente más esencial en la

producción mundial de cultivos es también uno de los más difíciles de manejar.

Recuperado 10 de octubre de 2022 de https://www.cimmyt.org/es/noticias/el-

nitrogeno-en-la-agricultura/

PanReac AppliChem. (s.f.) DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO POR EL MÉTODO

KJELDAHL. Itwreagents.com. Recuperado el 10 de octubre de 2022, de

https://www.itwreagents.com/uploads/20180122/A173_ES.pdf

TECNAL. (2012) El nitrógeno desempeña un papel fundamental en el metabolismo

vegetal. Recuperado 10 de Octubre de 2022, de

https://tecnal.com.br/es/blog/86_las_etapas_de_digestion_destilacion_y_titulac

ion_componen_el_metodo_tradicional_de_determinacion_de_nitrogeno#:~:text

=El%20m%C3%A9todo%20Kjeldahl%20es%20uno,posibilita%20menor%20ch

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