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Corresponde al estudio de la ultraestructura de los tejidos en relación con la función que tienen las células que
forman los órganos. La estructura de los tejidos y la forma de las células que forman un órgano en particular
están íntimamente relacionada con la función del órgano.
Ejemplo de parénquima
• En la imagen de la izquierda se muestran las dos grandes zonas del estómago en relación con su función.
Al fondo y al cuerpo gástrico se les conoce colectivamente como región oxíntica y su principal función es
la secreción de HCl, pepsinógeno. La región antral, en cambio, tiene principalmente una función
endocrina.
• El esquema de la derecha muestra los dos tipos básicos de glándulas gástricas que forman la mucosa
gástrica.
• Glándulas oxínticas: contienen múltiples tipos celulares, cada uno con una función específica. Las células
parietales (verde) secretan HCl, también hay células secretoras de mucinas (amarillo), células principales
(morado) secretoras de pepsinógeno (digestión de proteínas) y células endocrinas, las cuales secretan
hormonas que controlan la función de las otras células de la glándula
• Glándulas pilóricas: están formadas por células endocrinas que participan en la regulación de la función
de las glándulas de la región oxíntica. Hay células secretoras de somatostatina (células D) y gastrina
(células G)
Lo importante de este ejemplo es saber que el parénquima está formado por más de un tipo celular que
desempeña una función dada.
¿Por qué la histología es importante para la medicina?
1. Porque conocer la estructura de los tejidos y la ultraestructura de las células que la forman permiten
una mejor compresión de la función de los tejidos y los órganos que forman los sistemas
2. Porque conocer la estructura normal de los tejidos que forman un órgano permite inferir sobre la
estructura anormal de una muestra de órgano (biopsia).
Las diferentes formas de microscopía son la herramienta para la observación de la estructura y ultraestructura
de tejidos y células
• Microscopía óptica
• Microscopía electrónica de transmisión
• Microscopía electrónica de barrido
El microscopio tiene dos funciones básicas que están relacionadas entre sí:
Microfotografía óptica
Tinción HE
Hematoxilina (azul→núcleo)
Eosina (rosado→citoplasma)
Corteza: se pueden observar estructuras esféricas correspondientes a los corpúsculos y los túbulos renales.
Médula renal: no se observan los corpúsculos y se observan túbulos
Microfotografías ópticas tomadas con aumento 20x. Corteza. Con el aumento 20x se pueden observan más
detalles sobre un área menor del corte. Se pueden observar más detalles de los corpúsculos y túbulos renales
presentes en la corteza renal.
Microfotografía óptica del mismo corte de riñón tomado con aumento 40x.
• Corteza: ahora se observan más detalles sobre un área todavía menor que en la imagen 20x. Se puede
observar claramente la estructura de un corpúsculo renal que está rodeado de túbulos renales cortados
transversalmente y longitudinalmente. En las células tubulares se puede distinguir el núcleo de color azul y
el citoplasma de color rosado.
• Médula. En la médula ahora se puede observar con más detalle las células que forman los distintos túbulos
renales. Este corte en particular fue teñido con una tinción para mostrar la presencia de oligosacáridos en la
célula (fijarse en la ubicación del color fucsia). También se puede observar la forma de las células que
forman el túbulo. También puede ver claramente el núcleo de cada célula tubular.
4x 10x
20x 40x
Secuencia de imágenes de aumento progresivo desde 4x hasta 40x de un corte de riñón de rata.
• En la imagen 4x usted solo puede diferenciar la corteza de la médula renal, pero con aumento tan bajo no
puede diferencia estructuras dentro de la corteza o la médula. El rectángulo negro señala el área de la
corteza renal de la imagen que se irá ampliando en sucesivas microfotografías.
• 10x, esta imagen está aumentada 2,5 veces más respecto de la anterior. En la microfotografía usted ya
puede distinguir túbulos renales y estructuras esféricas que son los corpúsculos renales.
• 20x. Esta imagen está aumentada al doble respecto de la anterior. Ya puede distinguir con mayor claridad
los túbulos renales y la manera como ellos están cortados (transversal, longitudinal); también puede
distinguir un corpúsculo renal y la arteriola que lo alimenta.
• 40x: En esta imagen puede distinguir claramente túbulos renales cortados transversalmente. En cada
túbulo, usted puede observar el lumen tubular, la membrana orientada al lumen y la membrana orientada
al espacio intersticial. Esta membrana la puede distinguir por su cercanía con una línea roja que rodea el
perímetro de cada túbulo y corpúsculo renal. La línea roja corresponde a colágeno detectado que forma
parte de la lámina basal.
Comparación de dos imágenes tomadas al mismo aumento (40x). Las imágenes derivan de cortes de riñón
teñidos con tinciones distintas. La imagen izquierda está teñida con una tinción que revela la presencia de
oligosacáridos (fucsia); en tanto que la imagen de la derecha está teñida para revelar la presencia de colágeno
(rojo). Por tanto, diferentes tinciones dan diferente información.
PROCESAMIENTO DE ÓRGANOS PARA MICROSCOPÍA ÓPTICA
• Se puede obtener de una biopsia o también de un tejido post mortem, en donde el material proviene de
una necropsia.
• Una vez que se extrajo el riñón desde un animal debidamente sacrificado, el órgano se lava con suero
fisiológico y después se hace una sección de 3-4 mm de espesor.
ETAPA 2: FIJACIÓN
ETAPA 3: DESHIDRATACIÓN
• La sección de riñón pasa por una sucesión de soluciones de etanol de concentración creciente (desde
60% hasta 100%; cada concentración de etanol se repite dos veces).
• La finalidad de este parte del proceso es la extracción de agua desde la sección del tejido.
• Cuanto más concentrado está el etanol mayor es su capacidad para extraer agua.
• Esta parte del proceso es importante porque en la siguiente etapa se utilizarán solventes orgánicos
hidrofóbicos.
ETAPA 4: ACLARAMIENTO
• El tejido se sumerge en un solvente orgánico, generalmente xileno o tolueno, que desplaza al alcohol y
que es solvente de la parafina
ETAPA 5: IMPREGNACIÓN DE PARAFINA
ETAPA 6: CORTE
ETAPA 8: HIDRATACIÓN
• Una vez que el corte está libre de parafina debe ser rehidratado; este proceso se hace incubando el
corte en solución de alcohol puro hasta alcohol 60%
ETAPA 9: TINCIÓN
• Una vez que el corte está hidratado entonces se puede usar en cualquier protocolo.
• Recuerde que los cortes de tejido absorben la luz visible; para observar el corte al microscopio, este
debe ser teñido. La finalidad del colorante es proporcionar contraste a la imagen agrandada que usted
verá en el microscopio.
• Las tinciones están formadas por moléculas que son hidrosolubles las que no penetrarían al corte si este
tuviera parafina.
TINCIONES
• Las tinciones se basan en colorantes que son moléculas que se fijan el compartimientos celulares con cierto
grado de afinidad.
• La interacción entre la molécula de colorante y componentes celulares se basa en interacciones
electrostáticas, interacciones de tipo débil, formación de puentes H-H y enlaces covalentes.
• El color se genera por la absorción de energía electromagnética de la luz visible en alguna parte del
espectro
• La función más general de las tinciones es la de contrastar compartimientos celulares y/o componentes
específicos del espacio extracelular
• Los colorantes son moléculas orgánicas formados por:
Una estructura formada por uno o más anillos bencénicos
Un grupo cromóforo responsable del color
Un grupo auxocromo responsable de unirse a estructuras intra o extracelulares
• Eosina: citoplasma
• Hematoxilina: núcleo
• PAS, Alcien Blue: gránulos secretores citosólicos con contenido polianiónico
• Sudan: lípidos en el citosol
• Van Gieson o la de Masson: fibras de colágeno I;
• Tinciones con plata: fibras reticulares de la matriz extracelular que están formadas por colágeno I y III.
• Orceína: fibras elásticas
Son moléculas que en su estructura tienen Son moléculas que en su estructura tienen
abundancia de cargas positivas y tienen la abundancia de cargas negativas y tienen la
tendencia a unirse a moléculas que tienen tendencia a unirse a moléculas con predominio
abundantes cargas negativas de cargas positivas
Tiñen el núcleo y carbohidratos ácidos Ejemplo: eosina
Ejemplo: hematoxilina Tiñen el citoplasma
Corte de riñón de rata montado en parafina y teñido con la
dupla H/E.
Hematoxilina
• La hematoxilina se obtiene del árbol palo de Campeche de México. La tintura se obtiene hirviendo
rebanadas del tronco. Este colorante prehispánico da coloraciones azules en los teñidos. La hematoxilina
no es un tinción por sí misma, más bien tiene baja por los tejidos, cuando se oxida en presencia de luz y
aire o de agentes oxidantes se produce hematina que sí es un agente colorante.
• La hematina es un anión que tiene afinidad por moléculas ricas en cargas negativas.
• La hematoxilina por sí misma no es un colorante, pero en presencia de ion férrico forma hematina-Fe+3,
responsable del típico color que contrasta el núcleo.
• Existen muchas fórmulas para preparar distintas soluciones de Hematoxilina. En tiempos prehispánicos,
el agente oxidante era el aire y sol.
• En el laboratorio, la oxidación química es la vía usada para generar hematina, es el mordiente puede ser
ion férrico. La hematoxilina tiene afinidad por los ácidos nucleicos como el DNA.
Cortes teñidos con la dupla Hematoxilina/Eosina (H/E).
La eosina es un colorante con cargas negativas que contrasta el citoplasma con un color rosado a fucsia,
dependiendo del pH. Con este par de tinciones, todas las células en un corte histológico pueden ser
contrastadas en sus dos compartimientos básicos: citosol y núcleo.
Corte de intestino delgado teñido con H/E (680x). Corte de
las glándulas tubulares de intestino delgado.
• La imagen izquierda está teñida con H/E. Note que los núcleos están contrastados con color violeta que da
la hematoxilina; el citoplasma rosado está contrastado con hematoxilina. Las células mucosas (G) muestran
el acúmulo de gránulos con mucinas como un círculo blanco (ninguno de los colorantes los reconoce).
• La imagen derecha muestra dos vellosidades del intestino delgado teñidas con PAS hematoxilina. Ahora es
evidente la localización de oligosacáridos tal como la diapositiva anterior. Ambas imágenes dan información
que es complementaria.
• A: Corte de intestino delgado teñido con tinción PAS y hematoxilina. El anillo negro muestra la colección
de gránulos con mucinas de una célula goblet secretoras de mucinas. La colección de gránulos aparece
como una sola masa fucsia debido a la reacción PAS. Esta colección de gránulos se localiza en el
citoplasma apical de la célula goblet. El contraste que da la hematoxilina revela la posición del núcleo en
el citoplasma basal de la célula.
• B: Microfotografía electrónica de transmisión mostrando una célula goblet entre dos células absortivas.
El anillo muestra la colección de gránulos secretores de mucinas, localizados en el citoplasma apical.
Dado el mayor poder de resolución de la microscopía electrónica, es posible observar la individualidad
de los gránulos. Entonces, se puede hacer una correlación entre las dos microfotografías en relación con
la localización de las células secretoras de mucinas y de la colección de gránulos secretores en el
citoplasma apical.
METACROMASIA
Azul de toluidina
• Las tinciones tricrómicas tienen por función resaltar las fibras de proteínas de la matriz extracelular
respecto de otras estructuras como las células
• En general, una tinción tricrómica es la mezcla de 3 ingredientes: 2 ácidos complejos y una tercera
molécula que funciona como tinción nuclear (hematoxilina)
• Ejemplos: Tinción tricrómica de Masson y de van Giesson
Tricrómica de Masson:
Tinción tricrómica de Masson. Esta tinción reconoce de color azul las fibras de colágeno de la matriz
extracelular. Estas fibras son parte del tejido conectivo que está rodeando las estructuras tubulares que se
muestran en ambas microfotografías ópticas.
CRIOCORTES
Los criocortes o cortes congelados dan menos información sobre la estructura de tejidos o células. Los criocortes
se pueden usar en al menos dos situaciones distintas:
• Biopsias rápidas en el pabellón para hacer un diagnóstico histopatológico rápido usando microscopía de
luz
• Estudios de inmunofluorescencia
• Hibridización in situ
Metodología general para la elaboración de criocortes. Los cortes montados en parafina tienen una
preparación y procesamiento lento. Es posible obtener cortes de tejido para un uso más inmediato o para otros
protocolos experimentales. Los criocortes son cortes de tejido fresco congelado en una matriz coloidal que se
fijan y tiñen en forma muy rápida y pueden ser analizados y diagnosticados de manera rápida por un patólogo.
Posteriormente este diagnóstico es verificado mediante el análisis del mismo tejido, pero procesado para cortes
en parafina.
CRIOSTATO
Método directo: La enzima reportera está Método indirecto: El antígeno es reconocido por el
conjugada al anticuerpo que reconoce al antígeno anticuerpo primario, el que a su vez es reconocido
(Ag). La enzima es la HRP en el ejemplo por un anticuerpo secundario que tiene conjugada la
enzima reportera HRP en el ejemplo
La ventaja del método indirecto con respecto del directo es la sensibilidad. El método indirecto es más sensible y
por ende permite detectar el un corte histológico antígenos que tengan baja expresión o abundancia en la
célula.
INMUNOFLUORESCENCIA
• La inmunofluorescencia utiliza una molécula que emite energía en aquellos sitios donde se formó el
complejo antígeno-anticuerpo.
• El antígeno presente en la célula es detectado por un anticuerpo primario; éste a su vez es detectado por
un anticuerpo secundario.
• El fluoróforo es una molécula que cuando es excitada emite luz en una longitud de onda específica que
significa un color específico detectado mediante un filtro adecuado en el microscopio.
• El fluoróforo reemplaza a la enzima reportera.
• Es posible combinar fluoróforos que al ser excitados generan colores distintos
• Los fluoróforos se pueden usar con el sistema biotina-avidina para amplificar la señal
• Con el desarrollo del microscopio laser confocal es posible hacer detectar varias proteínas distintas en
forma simultánea en un mismo corte histológico.
• Hay fluoróforos que emiten fluorescencia en color rojo, verde. azul. Comparada con inmunohistoquímica
basada en la enzima reportera, la inmunofluorescencia es más sensible.
• La observación y análisis de resultados de estudios de inmunofluorescencia requiere de un microscopio de
fluorescencia con los filtros necesarios para observar en la longitud de onda que emiten los fluoróforos.
• La luz visible o luz blanca está formada por una gama de colores
• Cada color está asociado con una longitud de onda específica que se expresa en nm
• Las propiedades del espectro de la luz visible son importantes para comprender la inmunofluorescencia
Microscopio laser confocal
• AQP3. El anticuerpo secundario estaba acoplado a un fluoróforo Cy2 que emite luz en el espectro verde.
La imagen generada muestra que la AQP3 se localiza en la membrana basolateral de las células en
estudio. La señal verde solo proviene de las células que están en la superficie y no en las criptas
intestinales. Por lo tanto, la imagen muestra inequívocamente que la AQP3 se localiza en la membrana
basolateral de las células superficiales del colon.
• Na+,K+-ATPasa. El anticuerpo secundario estaba acoplado a Cy5, fluoróforo que emite en el espectro
del rojo. La señal roja proviene de las membranas basolaterales de las células de la superficie y también
de las criptas intestinales. Es decir, en las células de la superficie, la AQP3 comparte localización con la
Na+,K+-ATPasa. Por lo tanto, si se superponen ambas imagen, en la parte que coincide la localización de
la proteínas, el color resultante debiera ser la combinación de rojo y verde
Inmunofluorescencia con microscopía laser confocal en corte de criostato de colon distal de rata.
Inmunolocalización de AQP3 y Na+,K+ATPasa. La superposición de las imágenes individuales de AQP3 y de la
Na+,K+-ATPasa de la diapositiva anterior, da como resultado la combinación de color rojo y verde en un color
amarillo en las zonas donde hay coincidencia. Las zonas sin coincidencia conservan sus colores originales. La
imagen de la derecha muestra el criocorte de colon como se vería en un microscopio óptico.
Por lo tanto, la inmunofluorescencia simultánea con 2 anticuerpos primarios y observada en microscopio laser
confocal permitió establecer que la AQP3 se localiza en la membrana basolateral de las células del colon, donde
mismo está la Na+,K+-ATPasa que se usó como marcador. También permite establecer claramente las partes de
colon donde no hay coincidencia de señales (solo verde o rojo)
PARTE II: VIAJE POR LA CÉLULA
El núcleo
• A: microfotografía óptica de un corte de cartílago teñido con H/E. La célula del recuadro corresponde a
un condrocito, se observa el núcleo teñido con hematoxilina. Note que en esta imagen podemos ver
varias células. Note también que en algunas células no se observa el núcleo, lo que significa que no está
en el plano del corte y por ende no aparece, pero no debe interpretarse como ausencia de núcleo. Otra
información que entrega esta imagen es relativa a la abundancia de eucromatina y heterocromatina. La
heterocromatina aparece condensada y relacionada con la envoltura nuclear.
• B: microfotografía electrónica de transmisión de un condrocito. El núcleo se observa claramente.
También se puede observar con detalle la colección de organelos del citosol. Claramente se pueden
apreciar las cisternas del retículo endoplásmico, mitocondrias, peroxisomas y lisosomas. Note que
ninguno de los organelos puede ser resueltos con el poder de resolución del microscopio óptico que
generó la imagen A.
• C: Microfotografía electrónica de barrido de un condrocito. El núcleo se observa como un
compartimiento claramente delimitado rodeado. De nuevo, el poder de resolución del microscopio
electrónico le permite observar, además del núcleo, la topografía del citoplasma y su colección de
organelos
Posición del núcleo. En los esquema de células, generalmente se asume que la posición del núcleo es
central.
• En este aspecto, A y B son microfotografías de células que tienen núcleos en posición central.
• C: La microfotografía es un ejemplo de células que no tienen el núcleo en posición central.
• Las células de la imagen son parte de la mucosa intestinal. Son células de forma más bien cilíndricas.
• Las células indicadas con las flechas verdes son células absortivas; note que su núcleo tiene una
forma más bien alargada consistente con la forma cilíndrica de la célula.
• Puede observar también que el núcleo se localiza más hacia la base de la célula que hacia la parte
más apical (donde están las flechas verdes).
• Las células marcadas con flechas rojas son secretoras de mucinas. Observe que gran parte de su
volumen de citoplasma está ocupado por la colección de gránulos secretores de mucinas.
• Las flechas rojas indican la posición y forma de núcleo.
• Observe primero que el núcleo está relegado a la base de la célula.
La imagen de microscopía electrónica de transmisión fue tomada con un aumento que es 11 veces mayor que el
de la imagen de recuadro superior derecho. Usted puede apreciar la diferente información que le entregan las
imágenes.
Forma y posición del núcleo. Estas microfotografías muestran núcleos de forma “no esférica”.
• La imagen A corresponde a un leucocito (eosinófilo) que tiene un núcleo que está formado por 3 lóbulos,
los que se encuentran conectados entre sí, pero los puentes de nucleoplasma que unen no se observan en
la imagen.
• La imagen B muestra el núcleo de un espermatozoide y en C se observa el núcleo de una célula absortiva
intestinal con núcleo alargado.
• Si bien la mayoría de los tipos celulares presentan núcleo redondo de localización central, hay numerosos
casos celulares con núcleo “no redondo” y “no central”
• A y B muestra núcleos con gran cantidad de heterocromatina, se observa poca eucromatina. Note que
en ambos casos la heterocromatina está asociada a la membrana interna de la envoltura nuclear.
• La abundancia relativa de estos dos tipos de cromatina da cuenta del estado de la célula en relación al
ciclo celular
Membrana plasmática
Microfotografías ópticas.
• A: Esquema de la estructura de la membrana plasmática, de acuerdo con el modelo del mosaico fluido
de Singer y Nicolson.
• B: Túbulo renal (H/E, 975x);
• C: Motoneurona de las astas ventrales de la médula espinal (540x, azul de toluidina). En todas estas
imágenes, usted puede ver claramente el límite de las células, puede inferir dónde está la membrana
plasmática pero el poder de resolución del microscopio de luz no le permite verla.
• D: (160000x) Microfotografía electrónica de transmisión que muestra la membrana plasmática con su
aspecto trilamelar. Al microscopio electrónico aparece como dos líneas oscuras separadas por un
espacio claro. Las líneas oscuras corresponden al conjunto de las cabezas de los fosfolípidos de la
monocapa externa e interna, mientras que la zona clara corresponde a la matriz hidrofóbica.
Membrana plasmática. Especializaciones. Microfotografía de microscopio electrónico de transmisión (820x).
• Algunas células presentan especializaciones de la membrana que están en directa relación con la
función celular.
• La célula de la imagen reabsorbe NaCl desde el líquido tubular.
• El área indicada dentro del recuadro rojo muestra la gran densidad de pliegues que presenta la
membrana plasmática.
• Estos pliegues son muy profundos y puede incluso llegar hasta la altura del núcleo (flecha verde).
• Los pliegues de la membrana plasmática forman bolsillos que contienen mitocondrias.
Mitocondria
B: Mitocondria ramificada en una fibra muscular esquelética. Note que la mitocondria envuelve miofibrillas (Fi)
que contienen los sarcómeros o unidades estructurales y funcionales de la contracción muscular. En ambos
casos se muestran mitocondrias que con alto nivel de adaptación a la función celular que por tratarse de células
musculares tiene que ver con la producción de ATP para la contracción muscular.
A: corte de una célula de la corteza adrenal que sintetiza corticosteroides como el cortisol y aldosterona. En esta
imagen puede observar que las crestas mitocondriales tienen la forma de túbulo.
B: Corte transversal de mitocondrias del mismo origen. La membrana interna aparece como grupos de túbulos.
Las células de la corteza adrenal están especializadas en la biosíntesis de cortisol y aldosterona a partir de
colesterol, proceso que ocurre en varias etapas, muchas de las cuales ocurren en la membrana mitocondrial
interna. Si bien la mitocondria es la principal fuente de ATP, en estas células la función está relacionada con la
función endocrina de estas células.
La forma y la estructura de las mitocondrias varía con la forma y la función de las células. Todas las mitocondrias
tienen una membrana externa y una interna. La principal relación entre ultraestructura y función radica en la
organización de la membrana mitocondrial interna. La ultraestructura de las mitocondrias no es otra cosa que
una manifestación de principio de que la forma sigue a la función.
RER
Complejo de Golgi
Forma de la célula acinar: columnar/piramidal. Vierten secreción regulada al lumen del acino