TEMA 5

EXAMEN DE OTROS FLUIDOS CORPORALES,

ASPIRADOS Y TEJIDOS
CULTIVO E INOCULACION ANIMAL Y XENODIAGNÓSTICO
 DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO

MDD: Coprología: Directo, concentración, tinciónes, técnicas especiales

PROTOZOOS INTESTINALES (quistes
ooquistes, trofozoitos)
HELMINTOS INTESTINALES (huevos, larvas)
. Hematología: Directo, concentración, tinciones, cultivos, xenodiagnóstico, inoc.anim.
PROTOZOOS y NEMATODOS HEMÁTICOS

Otros fluidos (Esputos, orina, biópsia, etc.):

PROTOZOOS / HELMINTOS / ARTROPODOS

D.Molecular (PCR): PROTOZOOS / HELMINTOS

(Ag): ELISA, IFI, ICT: PROTOZOOS / HELMINTOS

MDI (Serológico): Precipitación., Aglutinación, anticuerpos marcados

(AL, HAI, IEF,IFI, ELISA, WB)
PROTOZOOS / HELMINTOS TISULARES
ORINA
EXUDADO VAGINAL / URETRAL
ESPUTOS
ASPIRADO: DUODENAL
INTESTINAL
ESTOMAGO
ABCESOS
GANGLIONAR
MEDULA OSEA Y BAZO
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEOS
BIOPSIAS DE TEJIDOS
PIEL
 ORINA: Parásitos implicados

• Schistosoma haematobium (huevos)

• Wuchereria brancofti y Onchocerca volvulus (microfilarias)

S. haematobium: Métodos de búsqueda

Sedimentación (menos sensible, más sencillo)

Muestra de
orina.
Agitar bien Sedimentar 1-2 horas, 2000 g 2 min
retirando sobrenadante

Examen del sedimento

S. haematobium: Métodos de búsqueda

Filtración (estimaciones cuantitativas)

Filtrar 10 ml de orina

Muestra de orina.
Agitar suavemente
Teñir con lugol

Huevos en el filtro

La tasa de infección se mide por el número

de huevos en cada 10 ml de orina.

1 – 49 huevos / 10 ml orina > 50 huevos / 10 ml orina

Infección leve Infección grave
Examen microscópico
Microfilarias en orina (Wuchereria brancofti y
Onchocerca volvulus): Métodos de búsqueda

Triple concentración
Timerosal 1ml/100 ml
Recoger entre 10 y 30 ml

Dispositivo Baermann

Muestra de orina

Reposo durante la noche

400g, 3 -5 min

Eliminar sobrenadante,
resuspender en ClNa y
volver a centrifugar

Examinar el sedimento
Wuchereria brancofti

Onchocerca volvulus
 T. vaginalis: Muestras
• Exudado vaginal

• Exudado uretral

• Semen

• Orina (primera porción de la orina matinal)

 T. vaginalis: Métodos de diagnóstico

Examen en FRESCO

Cultivo (Medio TYM, Diamond modificado)

Tinciones permanentes
– Papanicolau
– Giemsa Suárez-Peregrín
– Naranja de acridina (microscopio de fluorescencia)

Detección de Ag
– ELISA directo
– IFD
– ICT (inmunocromatografía)

PCR: Secuencia ITS-1 (ARNr 18S)

 Observación en
Trichomonas vaginalis
fresco
 T. vaginalis: CULTIVO

2-7 días, 37 °C, 5% CO2

Medio de cultivo
(TYM, Diamond)
T.vaginalis: Tinciones permanentes

Papanicolau

Naranja de acridina
Giemsa
 EXAMEN DE ESPUTO

DIAGNÓSTICO:

Paragonimus sp
- Huevos (también en heces)

Ocasionalmente:

-Quiste hidatídico pulmonar (escólices, ganchos, vesículas, membranas)

-Amebosis pulmonar (Entamoeba histolytica, Trofozoitos)

No confundir con E. gingivalis (boca)

- Larvas de Ascaris, Ancylostoma, Necator, Strongyloides

-Cryptosporidium
 EXAMEN DE ESPUTO

MUESTRA:
-Tracto respiratorio inferior , no únicamente saliva
-A primera hora de la mañana
-Tras una expectoración (solución de propilén glicol)
-Conservación en formol 10% (PVA sospecha de protozoos)

EXAMEN:

-Directo: en fresco, con solución fisiológica o yodo

Esputo mucoso o espeso
fluidificar: sodio al 3% o tripsina y centrifugar

-Tinciones: - Giensa (amebas)

- Kinyou o con monoclonales (Cryptosporidium)
- Azul de algodón (larvas)
 EXAMEN DE ASPIRADOS

1. ASPIRADOS DUODENALES Giardia duodenalis

MUESTRA:

- Cápsula duodenal (Entero-test)

- Examen inmediato (preparación húmeda)
- Fijar con Formol al 5%
- Mezclar con PVA para tinción permanente

Giardia duodenalis- TROFOZOITOS

 EXAMEN DE ASPIRADOS

2. INTESTINO GRUESO. SIGMOIDOSCOPIA

-Para Amebiasis intestinal (reiterados análisis coprológicos negativos)

MUESTRA:

-Defecación normal o tras 2-3h después de la purga con laxante (no emplear
enemas)
-Tomar la muestra de la superficie de la mucosa o de las lesiones que se
observan

EXAMEN:

- Inmediatamente
- Fijar (PVA o fijador de Schaudin)
-Teñir
 EXAMEN DE ASPIRADOS

3. ESTÓMAGO.ENDOSCOPIA (Anisakis, Pseudoterranova)

 EXAMEN DE ASPIRADOS

4. ASPIRADOS DE ABCESOS PULMONARES

O HEPATICOS

Trofozoito de E. histolytica

EXAMEN:
-
-Directo
-Tinciones permanentes
-Cultivo
 EXAMEN DE ASPIRADOS

5. ASPIRADOS DE GANGLIOS LINFATICOS

-Trypanosomas africanos ( T. brucei gambiense, T brucei rhodesiense)
(Fase intermedia de la enfermedad)

EXAMEN:
-Directo
-Tinción: Giemsa

6. ASPIRADOS DE MÉDULA ÓSEA Y BAZO

-Leishmaniosis visceral amastigote

EXAMEN:
-Tinciones Giemsa
-Cultivo

promastigote
promastigote
 EXAMEN DE LÍQUIDO CEFALORRAQUIDEO

DIAGNÓSTICO:

1. Tripanosomosis africana (enfermedad del sueño)

(Fases finales de la enfermedad (invasión del SNC))

Pruebas: 1.-Centrifugación LCR (900g, 10 min) deteccion de

Trypanosomas en el sedimento

EXAMEN:
-Directo
-Tinción: Giemsa
 EXAMEN DE LÍQUIDO CEFALORRAQUIDEO

DIAGNÓSTICO:

2. Meningoencefalitis amebiana

Naegleria, Acanthamoeba, Balamuthia

-LCR sin teñir (amebas móviles)

-Preparación teñida núcleo sin cromatina periférica, con un gran
cariosoma

3. Angiostrongylus cantonensis

- Nematodo parásito propio de la rata

- Hombre causa meningoencefalitis eosinofílica
-En LCR: preadultos junto con elevado nº de eosinófilos
 EXAMEN DE LÍQUIDO CEFALORRAQUIDEO

MUESTRA:
- El examen del LCR debe ser rápido tras su obtención
- Los tripanosomas sólo sobreviven unos 20 minutos
- Las amebas pueden redondearse y perder motilidad.
 BIOPSIAS DE TEJIDOS

Procesamiento según el tejído:

-Estudio histológico de rutina (fijación, corte y tinción)

-Frescas no fijadas para cultivos o inoculación en animales
de experimentación

Trichinella spiralis – musculo

Toxocara canis (LMV)– varios tejídos
Toxoplasma gondii – varios tejídos
Loa loa – ojo
Trypanosoma cruzi – corazón
Trypanosomas africanos – cerebro
Plasmodium falciparum – higado/cerebro
 BIOPSIAS DE TEJIDOS

DIAGNÓSTICO DE Trichinella spiralis

En humanos:
-Datos clínicos y epidemiologicos (antecedentes de ingestión de ciertos alimentos)
-Pruebas serológicas

En animales, a pequeña escala:

-Compresión de tejido entre dos placas de vidrio
-Digestión artificial (clorhídrico y pepsina)
-Cortes histológicos
Biopsias
Toxoplasma
Q.tisulares

LMV
granuloma

Hígado: célula repleta de merozoites de P.f

Loa loa
T.Cruzi (amastigotes en corazon)
 cerebro
(autopsias)

African Trypanosomiasis: Acute haemorrhagic leucoencephalopathy

Malaria cerebral por P.falciparun (autopsias)
 PIEL Y/ FANERAS:

PROTOZOOS: Leishmanias cutaneas

HELMINTOS: Oncocercosis
LMC (Ancylostomas animales)
Sarna de los nadadores (cercarias de
esquistosomas)

ARTROPODOS: Sarna
Miasis
Pulicosis
Paralisis por garrapatas
Pediculosis
 PIEL
ÚLCERAS CUTÁNEAS
-Leishmania (leishmaniosis cutáneas y mucocutáneas)

MUESTRA:

- Material aspirado de los bordes de la úlcera no de la

superficie o área necrótica

EXAMEN:
-Tinciones Giemsa
-Cultivo
PROTOZOOS: Leishmanias cutaneas

HELMINTOS: Oncocercosis
LMC (Ancylostomas animales)
Sarna de los nadadores (cercarias de
esquistosomas)

ARTROPODOS: Sarna
Miasis
Pulicosis
Paralisis por garrapatas
Pediculosis
 PIEL

DIAGNÓSTICO DE Onchocerca volvulus

MUESTRA:

-Si el paciente tiene nódulos tomar muestra de piel del

centro del nódulo

-Paciente sin nódulos tomar muestra de piel de la parte

alta de las nalgas, pantorrilla o espalda

EXAMEN:

-Poner 1 gota de solución salina depositar la piel con una gasa empapada en alcohol y
tapar con un cubre

-Dejar reposar 30 min. y observar con objetivo de 10x (microfilarias en movimiento)

-Si no hay dejar la piel durante 4h a temperatura ambiente y volver a observar

Nódulos subcutáneos - Despigmentación
Onchocerca volvulus
LMC (Larvas de Ancylostomas de perro y gato)
Sarna de los nadadores
(POR CERCARIAS DE Schistosomas de
animales)
PROTOZOOS: Leishmanias cutaneas

HELMINTOS: Oncocercosis
LMC (Ancylostomas animales)
Sarna de los nadadores (cercarias de
esquistosomas)

ARTROPODOS: Sarna (Sarcoptes scabiei)

Pediculosis (Pediculus humanus)
Miasis (Larvas de muscoideo)
Pulicosis (Pulgas)
Paralisis por garrapatas
Artropodos productores de
enfermedad

Sarcoptes scabiei

P.Humanus - HUEVO

D.folliculorum
 Dermatobia spp

MIASIS OTICA- COCHLIOMYA spp

MIASIS
Pulicosis

Ixodes ricinus

Parálisis por garrapatas

Parálisis motora flácida ascendente
Esta causada por las toxinas
salivales
Puede producir la muerte por
pérdida de la función muscular
(parálisis respiratoria) y otras
complicaciones
 CULTIVOS

1. Amebas de vida libre (Naegleria, Acanthamoeba, Ballamuthia)

MUESTRA: LCR, BIOPSIA O AUTOPSIAS

-Cultivo en placa de agar no nutriente sembrado con Escherichia coli. La muestra se

coloca en el centro y se deja incubar durante 10 días , examinándola diariamente

-Este sistema no es adecuado para Ballamuthia que requiere cultivos celulares

-Medios complejos
 CULTIVOS
2. Flagelados de sangre y tejido
-Leishmania
MUESTRA: Aspirados, material de biposia.

-Medio de cultivo NNN o Medio Tobie modificado + medio Drosophila de Schneider

-Trypanosoma
MUESTRA: Sangre, contenido intestinal de un redúvido

-Medio de cultivo LIT y NNN

3.- Flagelados cavitarios

- Trichomonas vaginalis
MUESTRA: Exudado vaginal/uretral, semen, orina
-Medio de cultivo: Diamond modificado
 4.-Apicomplejos tisulares

-Toxoplasma gondii

MUESTRA: Biopsia de cualquier tejido, LCR, líquido amniótico.

-Cultivo celular, monocapa de fibroblastos. Examen cada 7 días

(observación del efecto citopático)

Quistes tisulares de Toxoplasma gondii

 INOCULACIÓN ANIMAL

-Leishmania

Aspirado, biopsia
-muestra problema Úlceras cutáneas
( intraperitoneal) Bazo, hígado, LCR

-leishmaniosis mucocutánea
(vía intranasal o plantar)

Infección generalizada
Si el animal muere observar el aspirado del bazo
 INOCULACIÓN ANIMAL

-Trypanosoma

Sangre, aspirados de
-muestra problema nódulos linfaticos,
( intraperitoneal) LCR

Detección de Trypanosomas en sangre tras

la 1ª semana p.i.
 INOCULACIÓN ANIMAL

-Toxoplama gondii

Sangre, aspirados de
-muestra problema nódulos linfaticos,
( intraperitoneal) LCR

Infección fulminante y muerte (ratones)

Infección crónica (ratas)
Si el ratón sobrevive hacer pruebas serológicas
 XENODIAGNÓSTICO
Diagnóstico de enfermedad de Chagas (Trypanosoma cruzi)

Técnica que usa al hospedador artrópodo como indicador de la enfermedad

Alimentación con Examinar heces

sangre del paciente de la chinche
30-60
días
Triatoma spp