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Química Bioorgánica 128 (2022) 106054

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Química bioorgánica

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Diseño, síntesis, actividad antiviral y mecanismos de nuevos derivados del ácido

ferúlico que contienen un resto amida

Yuan Tinga, Zhengxing Wanga, Shichao Lana,b, Xiuhai Gana,*

aState Key Laboratory Base de mejoramiento de pesticidas verdes y bioingeniería agrícola, Key Laboratory of Green Pesticide and Agricultural Bioingeniery, Ministerio de Educación,
Universidad de Guizhou, distrito de Huaxi, Guiyang 550025, China
bFacultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Educación de Guizhou, Guiyang 550018, China

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

Palabras clave: Para explorar los nuevos compuestos con alta actividad antiviral, se diseñaron y sintetizaron gradualmente tres series de
Ácido ferúlico derivados del ácido ferúlico que contenían un resto amida basándose en el seguimiento de la actividad antiviral. Los
Actividad antiviral
resultados del bioensayo mostraron que algunos compuestos objetivo tenían actividades antivirales notables contra el virus
Virus del marchitamiento del tomate
del marchitamiento del tomate (TSWV) y el virus del mosaico del pepino (CMV). CompuestosY1,Y2,Y8,Z1yZ2presentó
Virus del mosaico del pepino
espléndidas actividades curativas, protectoras e inactivadoras de TSWV y CMV a 500 μg/mL. Especialmente, estos compuestos
acoplamiento molecular
mostraron efectos de inactivación sobresalientes en TSWV con la EC50valores de 225,9, 126,1, 224,6, 216,1 y 147,3 μg/mL, que
fueron superiores a la ningnanmicina (249,1 μg/mL) y la ribavirina (315,7 μg/mL). Además, los mecanismos antivirales del
compuestoY2fueron investigados mediante la realización de un experimento de termoforesis a microescala y un experimento
de acoplamiento molecular. Los resultados sugirieron que el compuestoY2realizó una excelente afinidad de unión a la
proteína de la cubierta de TSWV (TSWV CP) con una constante de unión de 2,14 μM, que debido a dos fuertes enlaces de
hidrógeno del compuestoY2a los aminoácidos clave ARG94 de TSWV CP. Por lo tanto, compuestoY2puede considerarse como
una estructura líder para el desarrollo del agente antiviral potencial.

1. Introducción incluyendo antivirales[13,14], antibacteriano[15]y actividades herbicidas

Los virus de las plantas podrían reducir el rendimiento y la calidad de la producción
agrícola[1]. El virus del marchitamiento del tomate (TSWV) y el virus del mosaico del
pepino (CMV) son dos de los diez virus de plantas más importantes del mundo.
[2]. Como un virus de ARN de cadena negativa transmitido por trips, el TSWV tiene una
gama de huéspedes extremadamente amplia, que incluye dicotiledóneas y
monocotiledóneas, y genera pérdidas económicas de hasta mil millones de dólares al
año.[3–7]. El CMV es uno de los virus de ARN monocatenario e infecta a muchas plantas y
causa más del 80 % de la pérdida de rendimiento en años epidémicos severos.[8]. En la
actualidad, el control de TSWV y CMV depende principalmente de agentes químicos como
la ningnanmicina y la ribavirina (Figura 1)[9]. Sin embargo, sus efectos de control son
insatisfactorios en el campo para la aplicación a largo plazo.[10]. Por lo tanto, es de vital
importancia diseñar y descubrir nuevos inhibidores antivirales con actividades
significativas y amigables con el medio ambiente.
Los productos naturales, con una rica estructura, especificidad para las especies
objetivo, modo de acción único y biodegradabilidad, se han convertido en una fuente de
inspiración para descubrir compuestos de plomo de plaguicidas.[11]. Como esqueleto
activo natural, el ácido ferúlico se distribuye ampliamente en las plantas.[12]. El ácido
ferúlico y sus derivados poseen una amplia gama de bioactividades,
[dieciséis]. En nuestros trabajos anteriores, se diseñaron y sintetizaron una gran
cantidad de derivados del ácido ferúlico con buena actividad antiviral para el virus
del mosaico del tabaco (TMV) y el CMV.[17–22]. Además, como grupo funcional
importante, el enlace amida se forma al combinar ácido carboxílico y amina, y
generalmente se introdujo en el compuesto principal para el desarrollo de nuevos
fármacos con un amplio espectro de actividad biológica, como antivirales.[18,23],
antibacteriano[24,25]y actividades antifúngicas
[26].
En vista de los hechos antes mencionados, el ácido ferúlico puede considerarse
obviamente como una estructura líder para desarrollar nuevos fármacos antivirales. En
nuestros trabajos anteriores, algunos derivados del ácido ferúlico, que contienenα
-aminofosfonato, quinazolina, acilhidrazona, unidades de sulfonamida, chalcona, eugenol
e isoeugenol con buenas actividades antivirales contra TMV y CMV. Sin embargo, su
solubilidad en agua es pobre y no tiene actividad antiviral de amplio espectro. Por lo
tanto, con el fin de desarrollar fármacos antivirales de amplio espectro, hidrosolubles y
efectivos, la unidad de amida que incluye la tiosemicarbacida, la tiourea y el resto de
éster de aminoácido se introdujeron gradualmente en el esqueleto del ácido ferúlico
para obtener nuevos derivados del ácido ferúlico que contienen el resto de amida (Figura
2). Su anti-CMV

* Autor correspondiente.
Dirección de correo electrónico:gxh200719@163.com (X. Gan).

https://doi.org/10.1016/j.bioorg.2022.106054
Recibido el 11 de abril de 2022; Recibido en forma revisada el 12 de julio de 2022; Aceptado el 20 de julio de 2022
Disponible en línea el 22 de julio de 2022
0045-2068/© 2022 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.
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Figura 1.Estructuras químicas de ningnanmicina y ribavirina.

Figura 2.Diseño de los compuestos objetivo.

Esquema 1.Ruta de síntesis de los compuestos objetivo.W1yW2.

Esquema 2.Ruta de síntesis de los compuestos objetivo.X1−X12.

y actividades anti-TSWV fueron evaluadas por primera vez y compuestoY2
mostró una excelente actividad antiviral. Además, los mecanismos
antivirales de los compuestos diana se llevaron a cabo investigando a fondo
la interacción entre los compuestos diana y la proteína de cubierta de TSWV
(TSWV CP) y el acoplamiento molecular.
2. Resultado y discusión
2.1. Química
Los nuevos derivados del ácido ferúlicoW1,W2,X1-X12,Y1-Y8yZ1- Z7
fueron sintetizados a partir de ácido ferúlico, como se muestra enEsquema 1
a Esquema 3. En primer lugar, intermedio3fueron preparados por reacción
de esterificación, eterificación, hidrólisis e hidrazinólisis en secuencia [27,28].
Luego, los compuestos objetivoW1yW2se obtuvieron a través de la

2
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Esquema 3.Ruta de síntesis de los compuestos objetivo.Y1−Y8yZ1−Z7.

reacción de isotiocianato con intermedio3. Mientras tanto, intermedio2se 249,1 μg/mL, respectivamente) y ribavirina (587,2, 497,5 y 315,7 μg/mL,
trató con cloruro de tionilo seco y se hizo reaccionar con tiocianato de respectivamente). El orden de la actividad anti-TSWV puede deberse a la
potasio para preparar el intermedio5. Y luego, intermedio5se hizo buena lipofilicidad, electronegatividad, permeabilidad y estabilidad
reaccionar con varias aminas para obtener los compuestos objetivoX1−X12. metabólica del átomo de flúor.[29,30].
Además, los compuestos objetivoY1–Y8se prepararon con intermedio2y
varios ésteres metílicos de aminoácidos por reacción de condensación de 2.2.2. Actividad anti-CMV in vivo
amida, y luego se hidrolizan para obtener los compuestos objetivoZ1–Z7. Las Como se muestra enTabla 2, algunos compuestos tuvieron buenos
estructuras de los compuestos se caracterizaron por1H RMN,13C RMN, efectos inhibidores sobre CMV a 500 μg/mL. CompuestosY2,Y4,Z2yZ3tuvo
19Los espectros F NMR y HRMS y los datos se ofrecieron eninformación de mayor actividad curativa de 56,3 %, 56,9 %, 55,7 % y 55,2 %,
soporte. respectivamente, en comparación con ningnanmicina (49,1 %) y ribavirina
(40,8 %). CompuestosX4,Y2,Y4, yZ2presentó una actividad protectora
sobresaliente con una tasa de inhibición de 60,4 %, 65,9 %, 60,4 % y 63,9 %,
2.2. Actividad antiviral
respectivamente, superior a la ningnanmicina (56,9 %) y la ribavirina (42,7
%). CompuestosY1,Y2,Y8,Z1 yZ2mostró una buena actividad inactivante con
2.2.1. Actividad anti-TSWV in vivo
una tasa de inhibición del 89,0 %, 89,5 %, 88,7 %, 88,7 % y 88,9 %,
A partir del ácido ferúlico, se realizaron optimizaciones de la estructura en función
respectivamente, similar a la ningnanmicina (88,6 %), pero mejor que la
del seguimiento de la bioactividad con el método de la mancha de la mitad de la hoja,
ribavirina (72,1 %). Además del TSWV, los compuestosY2yZ2tenía excelentes
que incluye actividades curativas, protectoras e inactivadoras.[23]. Los resultados de la
actividades curativas, protectoras y de inactivación del CMV, con la CE50
actividad anti-TSWV de los compuestos objetivo se representaron entabla 1.
valores de 421,7, 391,7, 307,1 μg/mL y 424,5, 402,2, 310,9 μg/mL,
Como se muestra entabla 1, algunos compuestos demostraron
respectivamente, que fueron mejores que la ningnanmicina y la ribavirina.
excelentes actividades anti-TSWV a 500 μg/mL. De los cuales, los
compuestosY2,Y5,Y7,Y8, yZ2mostró una buena actividad curativa del 63,5 %,
2.2.3. Relaciones estructura-actividad
56,7 %, 56,1 %, 58,9 % y 60,1 %, respectivamente, que fue mejor que la
Se han llevado a cabo las relaciones estructura-actividad preliminares
ningnanmicina (55,4 %) y la ribavirina (42,1 %). los compuestosY2,Y6, yZ2
basadas en la actividad anti-TSWV. CompuestosWcon el grupo de
reveló un excelente efecto protector con valores de 68,1 %, 63,9 % y 65,2 %,
tiocarbazida mostró baja actividad antiviral. Puede mejorar la actividad
respectivamente, superior a la ningnanmicina (60,5 %) y la ribavirina (45,6
antiviral para introducir el grupo tiourea, de los cuales, los compuestos con
%). los compuestosY2,Y6,Z2, yZ5mostró una mejor actividad de inactivación
grupo de anillo aromático deR3tener un mejor efecto curativo, protector e
del 88,1 %, 79,5 %, 85,5 % y 76,1 %, respectivamente, en comparación con la
inactivador del TSWV, comoX4(R3= 4-FC6H4),X6(R3= 2-FC3-C6H4)>X3(R3=
ningnanmicina (75,9 %) y la ribavirina (60,1 %). Vale la pena notar que los
isopropilo),X5(R3= etilo),X7(R3= butilo) yX1(R3= 2-FC3-C6H4), X9(R3= 4-FC6H4)>
compuestosY2yZ2que contiene un átomo de fuoro realizó actividades
X10(R3= butilo). Mientras tanto, el pequeño grupo hidrocarburo de cadena
curativas, protectoras y de inactivación sobresalientes para TSWV con la CE50
estérica en R1favor a la actividad antiviral, por ejemplo X4(R1= alilo),X9(R1=
valores de 398.4, 304.9, 126.1 μg/mL y 421.6, 330.9, 147.3 μg/mL,
butilo)>X2(R1= isopropilo) yX3(R1=
respectivamente, que fueron mejores que la ningnanmicina (480.9, 387.3 y

3
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tabla 1
En vivoactividad antiviral de compuestos objetivo contra TSWVa.

Comp. Efecto curativo (%) Efecto protector (%) Efecto inactivante (%) CE50(mg/mL)

Curativo Protector inactivando

actividad actividad actividad

W1 40.1±6.3 49.6±6.2 49.1±3.6

W2 38.2±5.9 42.6±4.2 43.3±4.1
X1 43.2±6.3 44.8±5.8 63.5±8.5
X2 40.2±5.6 55,6±2.4 63.0±2.0
X3 44.1±1.2 59.8±1.4 65,9±1.6 567.9±8.2 401.9±6.8 290.6±10.2
X4 48.1±2.9 60.1±2.3 66.2±7.4 532.9±5.6 382.8±4.9 282.3±5.3
X5 40.1±3.1 59.2±6.2 62.3±3.1
X6 50.7±5.6 60.4±4.4 69.8±5.4 517.6±10.2 388.3±5.7 250.5±8.8
X7 38,9±3.1 36.2±2.4 52.3±6.1
X8 40.1±2.3 54.4±1.2 54.4±3.5
X9 45,8±4.6 60.3±1.3 68.1±2.9 542.1±6.4 389.3±4.5 265.6±5.4
X10 40.1±2.6 52.0±6.1 60,9±6.9
X11 37.6±2.2 41.3±3.5 49.4±6.4
X12 38.1±6.9 20.6±3.5 50.2±6.3
Y1 55.1±3.6 61.2±1.9 76,9±6.3 501.5±7.1 379.4±6.2 224.9±2.3
Y2 63.5±1.2 68.1±4.7 88.1±2.5 398.4±7.6 304.9±7.2 126.1±5.3
Y3 48.1±5.9 50.2±5.6 72,9±3.8 507.9±5.9 247.5±8.1 280.7±3.5
Y4 41.3±3.9 55,9±3.7 69.7±1.3
Y5 56,7±2.9 54.8±5.6 60,9±2.6
Y6 55.3±6.2 63,9±4.1 79.5±3.4 487.2±9.7 340.8±5.4 186.7±4.8
Y7 56.1±3.2 59,9±5.1 75.2±4.6
Y8 58,9±4.6 61.2±3.5 76.4±4.9 429.2±5.2 378.2±3.4 225.6±7.2
Z1 54.0±6.2 61.5±5.3 76.4±5.6 481.7±8.5 365.7±6.2 216.1±7.6
Z2 60.1±2.6 65.2±2.6 85.5±5.4 421.6±3.8 330.9±6.7 147.3±3.9
Z3 40.6±2.6 45.1±1.5 57.2±1.6
Z4 50,6±3.9 48.1±6.3 54,9±4.1
Z5 51.2±5.4 56,6±2.4 76.1±5.2 446.1±7.6 347.1±5.9 227.2±9.6
Z6 55.1±5.2 56,7±7.3 61.1±4.1
Z7 50,6±4.6 55.7±6.1 70.2±2.9
Controlb 55.4±6.9 60.5±3.8 75,9±6.3 480.9±4.9 387.3±5.2 249.1±6.3
ControlC 42.1±5.6 45.6±4.3 60.1±3.8 587.2±6.3 497.5±8.1 315.7±4.9

aPromedio de tres repeticiones.bel control es ningnanmicina yCel control es ribavirina.

alilo)>X11(R1= isopropilo). Además, la introducción del éster de aminoácido
obviamente puede mejorar la actividad antiviral del compuesto objetivo. Sin
embargo, la actividad antiviral del hidrolizado correspondiente disminuyó,
comoZ1<Y1,Z2<Y2,Z3<Y4,Z4<Y5,Z5<Y6,Z6< Y7, yZ7<Y8. Los resultados
indicaron que los derivados del ácido ferúlico que contenían restos de éster
metílico de aminoácidos mostraron una excelente actividad antiviral.
2.3. Purificación de TSWV CP
El TSWV está compuesto por subunidades de ARN y proteína de cubierta
(CP) y la CP viral juega un papel importante en la replicación y transcripción
del virus. [3,27,28,31]. En nuestros estudios anteriores, TSWV CP se utilizó
como proteína diana para desarrollar agentes anti-TSWV[32,33]y algunos
compuestos poseen una notable actividad antiviral. Por lo tanto, para
revelar el mecanismo de la actividad antiviral, se obtuvo TSWV CP mediante
inducción, purificación, desalinización y digestión enzimática según nuestro
método informado. Como se demuestra enFig. 3, dos bandas distintas de los
carriles 1 y 2 se ubicaron entre 43 y 55 kDa, que era el mismo tamaño
teórico de 48 kDa. Luego, se obtuvo la proteína diana parcialmente digerida
que mostró dos bandas claras ubicadas entre 25 y 33 kDa en los carriles 3 y
4. Finalmente, se purificó el TSWV CP completamente digerido, que se
muestra en los carriles 5 y 6.
2.4. Interacción del compuesto con TSWV CP
La afinidad de unión del compuesto con CP se puede utilizar para evaluar
su poder de interacción con el valor dekd. En vista de la excelente actividad
inactivanteendel compuesto objetivo, elkdentre el compuesto y TSWV CP fue
detectado por el método MST. Como se muestra en Figura 4yTabla 3,
compuestoY2(kd= 2,14 μM) tenía una capacidad de unión más fuerte a TSWV
CP que la ningnanmicina (kd= 9,87 μM) y ribavirina
(kd= 111,4 μM). Mientras tanto, compuestoX4(kd= 71,28 μM) yX6 (kd=
51,62 μM) exhibió afinidades de unión moderadas con TSWV CP. Sin
embargo, compuestoW1(kd= 287,94 μM) yX11(kd= 204,13 μM) mostró
una fuerza de unión más débil a TSWV CP. Los resultados de MST
experimental coincidieron completamente con la actividad inactivante
de los compuestos objetivo, comoY2(CE50= 126,1 μg/mL,kd= 2,14 μM)>
Z2 (CE50= 147,3 μg/mL,kd= 5,35 μM)>X6(CE50= 250,5 μg/mL,kd= 51,62
μM)>X4(CE50= 282,3 μg/mL,kd= 71,28 μM)>ribavirina (CE50
=315,7 μg/mL,kd= 111,4 μM). Los resultados indicaron que el compuesto Y2
Poseen una excelente actividad inactivadora, que debido a su fuerte afinidad
de unión a TSWV CP. Este trabajo demostró además que TSWV CP se puede
utilizar como proteína diana para descubrir el nuevo agente antiviral.
2.5. acoplamiento molecular
El trabajo anterior reveló que los aminoácidos ARG94, ARG95, LYS183 y TYR184
de TSWV CP juegan un papel importante en la unión de la proteína al ARN.[32,34].
Con el fin de explorar el modo de acción de los compuestos para TSWV CP, los
compuestosY2,X6, yX11fueron elegidos para acoplamiento molecular con TSWV
CP. Como se muestra enFigura 5A, el oxígeno del carbonilo del compuestoY2
forma dos enlaces de hidrógeno con ARG94 (3,1 Å y 2,9 Å) y un enlace de
hidrógeno con Ser149 (2,6 Å). Mientras tanto, dos anillos aromáticos de
compuestosY2forman interacciones de cationes π y aniones π en LYS192 (3,2 Å) y
ASP185 (4,9 Å). De acuerdo aFigura 5B, X6 forma dos enlaces de hidrógeno con
ARG94 (3,3 Å) y Glu188 (2,6 Å) a través de su enlace éter oxígeno y nitrógeno
enlace amida, respectivamente. Al mismo tiempo, también forma interacciones de
cationes π y aniones π con LYS192 (3,8 Å) y TYR184 (3,7 Å). DeFigura 5C,
compuestoX11forma dos enlaces de hidrógeno con Glu188 (2,6 Å), y forma
interacciones de catión π y anión π con Tyr184 (3,7 Å) y Lys192 (3,9 Å). Era obvio
que el compuesto X11se une al aminoácido clave Arg94 (3,6 Å) a través de una
interacción de anión π. Como se muestra enFigura 5compuestoZ2forma dos
enlaces de hidrógeno para

4
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Tabla 2
En vivoactividad antiviral de compuestos diana contra CMVa.
Comp. Efecto curativo (%) Efecto protector (%) Efecto inactivante (%) CE50(mg/mL)

Actividad curativa Actividad protectora inactivando

actividad

W1 33.7±7.5 49.1±4.6 58.3±5.6

W2 39.7±5.9 47.6±1.1 58,9±5.1
X1 35.8±1.5 38.5±1.8 49.3±2.6
X2 40.8±9.8 53.6±4.5 69.7±5.2
X3 43.7±2.6 58.2±2.7 74.1±3.1 659.3±5.9 406.4±6.7 408.6±4.8
X4 44.6±6.6 60.4±1.7 75.7±3.4 622.6±10.2 408.5±5.1 397.9±8.1
X5 44.1±1.2 54.4±4.7 63.5±3.8
X6 46.3±2.6 61,9±2.9 79.2±5.3 595.2±5.1 398.2±1.9 381.6±5.1
X7 40.1±5.2 46.2±1.5 60.3±5.5
X8 40,0±1.2 43.0±5.6 58.6±6.7
X9 40.4±1.9 50.1±5.3 61.3±9.5
X10 39.9±3.5 45.2±1.4 56.3±9.4
X11 48.4±1.9 50.1±5.3 77.3±9.5 549.2±9.2 499.6±8.4 399.1±7.7
X12 35.7±2.7 42.6±1.3 51.3±6.8
Y1 50,6±4.9 58.5±4.2 89.0±3.1 476.5±6.4 406.1±9.8 310.5±8.7
Y2 56.3±4.5 65,9±1.2 89.5±3.6 421.7±8.9 391.7±10.6 307.1±6.5
Y3 48.3±2.5 52.7±3.6 50.3±2.5
Y4 56,9±3.6 60.4±2.2 78.4±1.8 412.9±4.2 408.6±8.6 361.7±7.2
Y5 45.3±8.3 55,6±6.3 53,9±2.7
Y6 46.5±3.6 52.1±4.9 60.1±3.4
Y7 45.6±7.9 54.5±4.5 50.7±3.4
Y8 51,9±3.9 55.4±5.1 88.7±2.6 457.6±8.9 410.7±10.2 312.7±5.3
Z1 49.5±8.1 57.6±2.6 88.7±1.5 527.4±3.4 419.3±5.7 314.2±4.9
Z2 55.7±5.6 63,9±3.7 88,9±2.9 424.5±8.7 402.2±2.3 310.9±5.6
Z3 55.2±2.9 54.2±5.6 73.1±3.4 430.1±7.3 473.2±8.4 416.4±7.3
Z4 43.2±5.2 48.5±1.6 74.8±2.1 609.2±1.3 603.4±4.2 401.2±4.2
Z5 28.1±6.1 33.2±5.7 58.5±3.9
Z6 43,9±2.4 46,8±2.3 50,6±3.1
Z7 50.7±6.1 48,9±3.4 74.8±2.4 473.5±8.6 596.5±4.1 403.2±7.2
Controlb 49.1±2.1 56,9±3.9 88.6±1.3 531.4±8.9 448.7±6.9 318.7±4.2
ControlC 40.8±2.9 42.7±2.6 72.1±1.2 731.6±10.2 659.1±5.6 427.4±9.5

aPromedio de tres repeticiones.bel control es ningnanmicina yCel control es ribavirina.

Fig. 3.La CP de TSWV se determinó mediante SDS al 12 % - PAGE. Los carriles 1 y 2 representaban la proteína sin etiqueta. Los carriles 3 y 4 representaban proteína parcialmente digerida. Los carriles 5 y
6 representaban la proteína diana purificada.

ARG94 (2,8 Å) y Ser149 (2,7 Å), y forman interacciones de un catión π y un SER149, LYS192 y ASP185 de TSWV CP con diferentes longitudes de enlace, (Figura
anión π con LYS192 (4,3 Å) y ASP185 (4,4 Å). El análisis de superposición 5MI). Comparó un enlace de hidrógeno del compuestoZ2, compuestoY2 puede
molecular adicional indicó que el compuestoY2yZ2puede superponerse muy formar dos enlaces de hidrógeno con ARG94 de TSWV CP, que es la razón principal
bien y actuar en el mismo bolsillo activo formado por ARG94, del compuestoY2poseen una fuerte capacidad de unión a TSWV CP.

5
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Figura 4.Resultados MST de los compuestos objetivoY2,X6,X11y ningnanmicina.

4. Materiales y métodos
Tabla 3
loskdde compuestos a TSWV CPa.
4.1. Química
Comp. kdvalor (mMETRO)

W1 287.94±100.12 4.1.1. productos químicos e instrumentos

X4 71.28±24.56 Todos los productos químicos se adquirieron de los canales comerciales
X6 51.62±21.68
habituales y no se purificaron justo antes de su uso. La cromatografía en capa fina
X11 204.13±98.77
Y2 2.14±0,94 sobre sílice GF254Se controló el proceso de reacción bajo detección ultravioleta. El
Z2 5.35±3.98 punto de fusión del compuesto objetivo se registró en un microscopio binocular
ningnanmicina 9.87±4.25 X-4B (Shanghai INESA Optical Instrument Co., ltd., China) utilizando capilares
ribavirina 111.40±50.23 abiertos. Los espectros de RMN de los compuestos se registraron en un
aPromedio de tres repeticiones. espectrómetro de RMN Bruker Ascend 400 (Bruker, Alemania) y un espectrómetro
de RMN ECX-500 (JEOL, Japón) en ppm campo abajo de TMS. El espectro se calibró
Los resultados indicaron que el compuesto podría restringir la transmisión y en base al desplazamiento químico del protón residual y el carbono del solvente.
la replicación del virus al impedir la unión de la CP del TSWV y el ARN viral, Se usó el aparato de espectros de masas de alta resolución (HRMS) (Thermo
exhibiendo así una excelente actividad inactivadora. Scientific Q Exactive) para registrar todos los HRMS de los compuestos.

3. Conclusión
4.1.2. Procedimientos sintéticos para la preparación de productos intermedios y los

En resumen, se diseñaron y sintetizaron gradualmente tres series de compuestos objetivo.W1yW2.

derivados del ácido ferúlico que portan un resto amida basándose en la
evaluación de las actividades antivirales para el TSWV y el CMV. Se encontró que el
compuestoY2poseía destacadas actividades anti-TSWV y anti-CMV. especialmente,
compuestoY2mostró un excelente efecto de inactivación de TSWV con la EC50
valores de 126,1 μg/mL. Fue una correlación con la fuerte capacidad de unión del
compuesto.Y2a TSWV CP resultante de dos fuertes enlaces de hidrógeno con los
aminoácidos clave ARG94. El presente estudio demostró que los derivados del
ácido ferúlico que tienen un resto amida pueden usarse como nuevos agentes
antivirales.
intermedios3(0,20 g, 1 mmol), se añadieron varios isotiocianatos
sustituidos (0,14 g, 1 mmol) y 10 ml de etanol al matraz de reacción
seco equipado con un condensador. Luego, la mezcla se agitó con el
calentamiento (75℃)durante 8 h. Una vez finalizada la reacción, la
solución resultante se diluyó con agua y se extrajo con 30 ml de
diclorometano (DCM) tres veces. Posteriormente, el disolvente se
eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en
columna eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (1:1/v:v) para
proporcionar los compuestos objetivo.W1yW2y el rendimiento fue de
49.5 y 52.2 %, respectivamente. Los datos espectrales de los
compuestos se listaron en información de soporte.

4.1.3. Procedimiento sintético para la preparación de los compuestos objetivo.X1− X12

intermedios5(0,20 g, 1,0 mmol) y varias aminas sustituidas

6
T. Yuan et al.
Figura 5.Los resultados del acoplamiento molecular. Un compuestoY2. B: compuestoX6. C: compuestoX11. D: compuestoZ2. E: análisis de superposición de compuestosY2yZ2.
(0,09 g, 1,0 mmol) a la solución de acetonitrilo y se calentó a 70ºC.℃durante
30 min. Una vez completada la reacción, la solución se concentró al vacío
para obtener productos brutos. Posteriormente, se purificó por
cromatografía en columna para obtener los compuestos objetivo.X1
− X12y el rendimiento fue de 48,1–63,5 %. Los datos espectrales de los
compuestos. X1−X12se mostró eninformación de soporte.
4.1.4. Procedimiento sintético para la preparación de los compuestos objetivo.Y1
− Y8yZ1−Z7
1,1′-carbonildiimidazol (0,16 g, 1,0 mmol) se añadió a una solución
de intermedios2(0,20 g, 1,0 mmol) en 10 ml de DCM y se agitó durante 20 min. Se
añadió a la mezcla una solución de diversos ésteres metílicos de aminoácidos
sustituidos de la materia prima correspondiente (0,08 g, 1,0 mmol) y se agitó
durante 5 h. Posteriormente, la mezcla de reacción se lavó con agua y luego se
extrajo con 30 ml de DCM. Posteriormente, el solvente orgánico se concentró al
vacío para obtener los compuestos objetivo.Y1−Y8 y el rendimiento fue de 48,1–
65,7 %. A continuación, se añadió una solución de NaOH al 40 % (0,10 g, 2,0 mmol)
a los compuestos objetivo.Y1−Y8disuelto en 30 ml de metanol, y la mezcla se
calentó a reflujo durante 3 horas a 75ºC.℃.Una vez finalizada la reacción, el
disolvente orgánico se eliminó al vacío. Se usó un total de 10 ml de agua destilada
para diluir el residuo y luego se aciduló con ácido clorhídrico diluido a pH 3–4 para
obtener una suspensión blanca. Finalmente, los compuestos objetivoZ1−Z7se
obtuvieron por filtración al vacío y el rendimiento fue del 47,0 al 64,7 %. Los datos
espectrales de los compuestos.Y1−Y8yZ1−Z7se mostró eninformación de soporte.
7
Química Bioorgánica 128 (2022) 106054
4.2. Ensayo de actividad antiviral
4.2.1. Extracción de TSWV
Según el método anterior[33,35], las hojas superiores de Nicotiana
benthamianalas plantas inoculadas con TSWV durante más de 7 días se
molieron en tampón fosfato (20,67 g Na2HPO4⋅12H2O, 6,60 g NaH2
correos4⋅12H2O y 1,26 g de Na2ASI QUE3disuelto en 1000 mL ddH2O, pH
= 7,0), y se filtra con una gasa. Además, todo el procedimiento se
realizó a las 4℃.
4.2.2. Extracción de CMV
Según los métodos informados[19], las hojas superiores deNicotiana
tabacum cv. Las plantas K326 inoculadas con CMV durante más de tres
semanas se trituraron en solución amortiguadora de fosfato, se filtraron a
través de una gasa doble de nailon y se centrifugaron a 8000 rpm. Además,
todo el proceso se llevó a cabo a las 4℃.
4.2.3. Actividad curativa del compuesto contra TSWV y CMV in vivo. Nicotiana
tabacumTierraChenopodium amaranticolorSe usaron plantas como plantas
modelo para evaluar las actividades anti-TSWV y anti-CMV. Las hojas de las plantas
en el estado de seis hojas fueron vacunadas con virus (6×10−3mg/mL), y el carburo
de silicio se roció uniformemente por adelantado. Las hojas se enjuagaron con
agua y luego se secaron. A continuación, la solución compuesta se untó
uniformemente con el lado derecho de las hojas, mientras que el solvente se usó
para embadurnar el otro lado. En última instancia, la tasa de inhibición del
compuesto objetivo se registró mediante el número de lesiones locales durante 2
a 3 días después de la inoculación. Todos los experimentos fueron realizados por
triplicado.
T. Yuan et al.
4.2.4. Actividad protectora de compuestos contra TSWV y CMV in vivo. La solución
de compuestos se untó con las hojas en la etapa de seis hojas. Mientras tanto,
el disolvente, como control, se aplicó uniformemente en el lado izquierdo. solución
de virus (6×10−3mg/mL) fue vacunado en toda la hoja después de 12 h. Se
calcularon los números de manchas locales enfermas en las hojas y todos los
experimentos se repitieron por triplicado.
4.2.5. Actividad inactivante de compuestos contra TSWV y CMV in vivo. Después de
esparcir uniformemente el carburo de silicio sobre la planta, se untó el lado
derecho de las hojas con una solución mixta de virus e interacción con el fármaco
durante 0,5 h. Poco después, una mezcla de solvente y virus (6 ×10−3mg/mL) se
aplicó suavemente en otro lado de las hojas. Después de 2-3 días, se registró el
número de lesiones locales. Todos los experimentos fueron realizados por
triplicado.
4.3. Expresión y purificación de TSWV CP
El plásmido recombinante (pET-32a-TSWV CP) se introdujo con éxito en
Escherichia coliBL21 (DE3). Se preparó 1 L de medio de cultivo líquido
esterilizado y se le añadieron 15 mL de la cepa de expresión BL21 (DE3) y 1
mL de ampicilina (50 μg/mL). La solución mixta se incubó (37◦C, 180 rpm)
hasta que la densidad óptica a 600 nm alcanzó 0,6. Posteriormente, para
inducir la expresión de la proteína, se administró 1 mL de isopropilβSe
añadió -D-1-tiogalactopiranósido (1 mol/l, 0,8 mM) a la solución mixta.
Cuando se completó la inducción (28◦C, 180 rpm, 8 h), el precipitado se
recogió por centrifugación y se resuspendió en 45 ml de tampón de lisis.
Además, el precipitado resuspendido se sonicó durante 40 min (potencia 35
%, 4 s encendido/6 s apagado) y se aclaró mediante ultracentrifugación
durante 25 min a 12000 rpm y 4℃para obtener la solución de proteína
cruda. Luego, se purificó y desalinizó utilizando una columna HisTrap HP (GE
Healthcare, EE. UU.) a través de un sistema de purificación de proteínas
(AKTA purifier, EE. UU.). Finalmente, se utilizó la electroforesis en gel de
poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio al 12 % para autenticar la proteína
purificada.
4.4. Ensayo de termoforesis a microescala (MST)
Según el método en la literatura.[32,34], se usó un monolito NR 115
(Alemania) para medir la afinidad de unión entre el compuesto objetivo
y TSWV CP por MST. Mientras tanto, los datos se analizaron realizando
el procedimiento de análisis NT 1.4.23. Las constantes de enlace (kd) de
ningnanmicina y ribavirina como agentes de control.
4.5. acoplamiento molecular
El acoplamiento molecular se realizó utilizando el procedimiento Discovery
Studio 4.5. Los compuestos objetivo se crearon con ChemOffice 2019 y se
optimizaron mediante mecánica molecular MM2 (seleccione Cálculos/MM2/
Minimizar energía). La estructura 3D de TSWV CP (PDB ID: 5IP1) se obtuvo a través
del banco de datos de proteínas RCSB[6]. Los resultados del acoplamiento se
visualizaron con Pymol soft.
Declaración de interés en competencia
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia ni
relaciones personales conocidas que pudieran haber influido en el trabajo
informado en este documento.
Disponibilidad de datos
No se utilizaron datos para la investigación descrita en el artículo.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales
8
Química Bioorgánica 128 (2022) 106054
de China (21867006), la Fundación de Ciencias Naturales de la Provincia de
Guizhou (QKHJC[2019]1435) y el Proyecto de Construcción de Laboratorios
Clave del Departamento de Educación de la Provincia de Guizhou
(QJHKY[2018]001).
Apéndice A. Datos complementarios
Los datos complementarios a este artículo se pueden encontrar en línea enhttps://
doi. org/10.1016/j.bioorg.2022.106054.
Referencias
[1] RAC Jones, Pandemias y epidemias mundiales de enfermedades virales de plantas,
Plants 10 (2021) 233,https://doi.org/10.3390/plants10020233.
[2] KBG Scholthof, S. Adkins, H. Czosnek, P. Palukaitis, E. Jacquot, T. Hohn,
B. Hohn, K. Saunders, T. Candresse, P. Ahlquist, C. Hemenway, GD Foster, Los 10
principales virus de plantas en patología vegetal molecular, Mol. Patol de plantas. 12
(2011) 938–954, https://doi.org/10.1111/j.1364-3703.2011.00752.x.
[3] J. Li, Z. Feng, JK Wu, Y. Huang, G. Lu, M. Zhu, B. Wang, X. Mao, XR Tao, Análisis de estructura
y función de la proteína de la nucleocápside del virus del marchitamiento del tomate
interactuando con ARN utilizando modelos de homología, J. Biol. química 290 (7) (2015)
3950–3961,https://doi.org/10.1074/jbc.M114.604678.
[4] K. Komoda, M. Narita, I. Tanaka, M. Yao, Expresión, purificación, cristalización y estudio
cristalográfico de rayos X preliminar de la proteína de la nucleocápside del virus del
marchitamiento del tomate, Acta Crystallogr, Sect. F: Estructura. Biol. cristal. común 69
(2013) 700–703,https://doi.org/10.1107/S174430911301302X.
[5] R. Gupta, S.-Y. Kwon, ST Kim, Una visión del virus del marchitamiento del tomate
(TSWV), la interacción del tomate y los trips, Plant Biotechnol. Rep. 12 (3) (2018) 157–
163,https://doi.org/10.1007/s11816-018-0483-x.
[6] K. Komoda, M. Narita, K. Yamashita, I. Tanaka, M. Yao, AE Simon, Estructura de anillo
trimérico asimétrico de la proteína de la nucleocápside del tospovirus, J. Virol. 91 (20)
(2017),https://doi.org/10.1128/JVI.01002-17.
[7] JF Uhrig, T.-R. Soellick, CJ Minke, C. Philipp, J.-W. Kellmann, PH Schreier, Interacción homotípica y
multimerización de la proteína de la nucleocápside del tospovirus del marchitamiento manchado
del tomate: identificación y caracterización de dos dominios que interactúan, Proc. nacional
Academia ciencia EE. UU. 96 (1) (1999) 55–60,https://doi.org/10.1073/pnas.96.1.55.
[8] N. Li, CY Yu, YX Yin, SG Gao, F. Wang, CH Jiao, MG Yao, Mejora de cultivos de pimiento contra
el virus del mosaico del pepino (CMV): una revisión, Front. ciencia de las plantas 11 (2020),
598798,https://doi.org/10.3389/fpls.2020.598798.
[9] L. Dong, Y. Ou, QL Meng, Ocurrencia y control de la enfermedad del virus del marchitamiento del
tomate, Hortic. Semilla 40 (2020) 12–13.https://doi.org/10.16530/j.cnki.cn21
- 1574/s.2020.07.005.
[10] ZW Wang, L. Wang, S. Ma, YX Liu, LZ Wang, QM Wang, Diseño, síntesis, actividad
antiviral y SAR de 14-aminofenantroindolizidinas, J. Agric. Química alimentaria 60
(23) (2012) 5825–5831,https://doi.org/10.1021/jf3013376.
[11] HQ Wang, HJ Song, Síntesis de cuatro isómeros ópticos del agente antiviral NK0209 y
determinación de sus configuraciones y actividades contra un virus vegetal,
J. Agric. Química alimentaria 68 (9) (2020) 2631–2638,https://doi.org/10.1021/acs.
jafc.9b0769410.1021/acs.jafc.9b07694.s001.
[12] D. Li, Y.-X. Rui, S.-D. Guo, F. Luan, R. Liu, N. Zeng, Ácido ferúlico: una revisión de su
farmacología, farmacocinética y derivados, Life Sci. 284 (2021) 119921, https://
doi.org/10.1016/j.lfs.2021.119921.
[13] M. Wu, ZW Wang, CS Meng, KL Wang, YN Hu, LZ Wang, QM Wang, Discovery and
SARs of trans-3-aryl acrylic acids and their analogs as novel antitabacco mosaic
virus (TMV), PLoS Uno 8 (2) (2013) e56475,https://doi. org/10.1371/
journal.pone.0056475.
[14] X. Tang, C. Zhang, M. Chen, YN Xue, TT Liu, W. Xue, Síntesis y actividad antiviral de nuevos
derivados de miricetina que contienen andamios de amida de ácido ferúlico, Nuevo
J. Chem. 44 (6) (2020) 2374–2379,https://doi.org/10.1039/C9NJ05867B.
[15] OB Ibitoye, TO Ajiboye, El ácido ferúlico potencia la actividad antibacteriana de los
antibióticos a base de quinolonas contraAcinetobacter baumannii, Microbio. Pato. 126
(2019) 393–398,https://doi.org/10.1016/j.micpath.2018.11.033.
[16] L. Orcaray, M. Igal, A. Zabalza, M. Royuela, Rol de los ácidos ferúlico y p-cumárico
suministrados exógenamente para imitar el modo de acción de los herbicidas inhibidores
de la acetolactato sintasa, J. Agric. Química alimentaria 59 (18) (2011) 10162–10168,https://
doi.org/10.1021/jf2025538.
[17] ZZ Wang, DD Xie, XH Gan, S. Zeng, AW Zhang, LM Yin, BA Song, LH Jin,
DY Hu, Síntesis, actividad antiviral y estudio de acoplamiento molecular de derivados del
ácido transferúlico que contienen un resto de acilhidrazona, Bioorg. Medicina. química
Letón. 27 (17) (2017) 4096–4100,https://doi.org/10.1016/j.bmcl.2017.07.038.
[18] XM Lan, DD Xie, LM Yin, ZZ Wang, J. Chen, AW Zhang, BA Song, DY Hu, novelaα,β
-derivados de amida insaturada que llevanα-resto amino fosfonato como agentes
antivirales potenciales, Bioorg. Medicina. química Letón. 27 (2017) 4270–4273,
https://doi.org/10.1016/j.bmcl.2017.08.048.
[19] ZX Wu, J. Zhang, J. Chen, JK Pan, L. Zhao, DY Liu, AW Zhang, J. Chen, D.
Y. Hu, BA Song, diseño, síntesis, bioactividad antiviral y estudio de la relación
estructura-actividad cuantitativa tridimensional de nuevos derivados de éster de ácido
ferúlico que contienen un resto de quinazolina, Pest Manag. ciencia 73 (10) (2017) 2079–
2089,https://doi.org/10.1002/ps.4579.
[20] XL Ren, XY Li, LM Yin, DH Jiang, DY Hu, Diseño, síntesis, bioactividad antiviral y
mecanismo de la sulfonamida que contiene éster de ácido ferúlico
T. Yuan et al.
fracción, ACS Omega 5 (31) (2020) 19721–19726,https://doi.org/10.1021/
acsomega.0c0242110.1021/acsomega.0c02421.s001.
[21] XH Gan, DY Hu, YJ Wang, L. Yu, BA Song, Nuevos derivados del ácido transferúlico que contienen un
resto de chalcona como activador potencial para la inducción de resistencia de las plantas,
J. Agric. Química alimentaria 65 (2017) 4367–4377,https://doi.org/10.1021/acs.jaf
c.7b00958.
[22] XH Gan, ZX Wang, DY Hu, Síntesis de nuevos híbridos antivirales de ácido ferúlico-eugenol e
isoeugenol utilizando varias reacciones de enlace, J. Agric. Química alimentaria 69 (46)
(2021) 13724–13733,https://doi.org/10.1021/acs.jafc.1c0552110.1021/acs.
jafc.1c05521.s001.
[23] DY Hu, QQ Wan, S. Yang, BA Song, PS Bhadury, LH Jin, K. Yan, F. Liu,
Z. Chen, W. Xue, Síntesis y actividades antivirales de derivados de amida que contienen elα
-fracción aminofosfonato, J. Agric. Química alimentaria 56 (3) (2008) 998–1001, https://
doi.org/10.1021/jf072394k.
[24] ZB Wu, J. Shi, JX Chen, DY Hu, BA Song, Diseño, síntesis, actividad antibacteriana y
mecanismos de nuevos derivados de 1,3,4-tiadiazol que contienen un resto amida,
J. Agric. Química alimentaria 69 (31) (2021) 8660–8670,https://doi.org/10.1021/
acs.jafc.1c0162610.1021/acs.jafc.1c01626.s00110.1021/acs. jafc.1c01626.s002.
[25] HL Mou, J. Shi, JX Chen, DY Hu, Síntesis, actividad antibacteriana y mecanismo de
nuevos derivados de butenólidos que contienen un resto amida, Pestic.
Bioquímica Fisiol. 178 (2021) 104913,https://doi.org/10.1016/j.
pestbp.2021.104913.
[26] J. Zhang, J. Liu, YM Ma, DC Ren, P. Cheng, JW Zhao, F. Zhang, Y. Yao, Síntesis en un solo
recipiente y actividad antifúngica contra patógenos vegetales de derivados de
quinazolinona que contienen un resto amida, Bioorg. Medicina. química Letón. 26 (9)
(2016) 2273–2277,https://doi.org/10.1016/j.bmcl.2016.03.052.
[27] NC Konakalla, S. Bag, AS Deraniyagala, AK Culbreath, HR Pappu, Inducción de la resistencia de las
plantas en el tabaco (Nicotiana tabacum) contra la marchitez manchada del tomate
Química Bioorgánica 128 (2022) 106054
orthotospovirus a través de la aplicación foliar de dsRNA, Viruses 13 (2021) 662,
https://doi.org/10.3390/v13040662.
[28] M. Kainz, P. Hilson, L. Sweeney, E. DeRose, TL German, La interacción entre los
monómeros de la proteína N del virus del marchitamiento del tomate involucra fuerzas
no electrostáticas gobernadas por múltiples regiones distintas en la estructura
primaria, Virology 94 (7) ( 2004) 759–765,https://doi.org/10.1094/PHYTO.2004.94.7.759.
[29] P. Maienffsch, RG Hall, La importancia del flúor en la industria de las ciencias biológicas,
Chimia. 58 (2004) 93–99,https://doi.org/10.2533/000942904777678091.
[30] G. Theodoridis, Capítulo 4 Agroquímicos que contienen flúor: una descripción general
de los desarrollos recientes, Adv. Flúor Sci. 2 (2006) 121–175, https://doi.org/10.1016/
S1872-0358(06)02004-5.
[31] JP Zhao, X. Zhang, YG Hong, YL Liu, Cloroplasto en la interacción planta-virus,
Frente. Microbiol. 7 (2016) 1565,https://doi.org/10.3389/fmicb.2016.01565.
[32] YW Liu, JX Chen, DD Xie, BA Song, DY Hu, Primer informe sobre las actividades anti-TSWV de
derivados de quinazolinona que contienen un resto de ditioacetal, J. Agric. Química
alimentaria 69 (2021) 12135–12142,https://doi.org/10.1021/acs.jafc.1c03171.
[33] GC Zu, JX Chen, BA Song, DY Hu, Synthesis, actividades contra el virus del marchitamiento manchado
del tomate y mecanismos de interacción de nuevos derivados de ditioacetal que contienen un 4(3H
Anillo de pirimidina de )-quinazolinona, J. Agric. Química alimentaria 69 (48) (2021) 14459–14466,
https://doi.org/10.1021/acs.jafc.1c0355510.1021/acs. jafc.1c03555.s001.
[34] C. Olaya, B. Adhikari, G. Raikhy, J. Cheng, HR Pappu, Identificación y localización de residuos
conservados en todo el género Tospovirus en modelos 3D de la nucleocápside y las
proteínas supresoras de silenciamiento, Virol. J. 16 (2019) 7,https://doi.org/10.1186/
s12985-018-1106-4.
[35] NN Zan, J. Li, HF He, DY Hu, BA Song, Descubrimiento de nuevos derivados de cromona
como posibles agentes anti-TSWV, J. Agric. Química alimentaria 69 (37) (2021) 10819–
10829,https://doi.org/10.1021/acs.jafc.1c0362610.1021/acs. jafc.1c03626.s001.