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Revista de Producción más Limpia 239 (2019) 118087

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La labranza del suelo y la enmienda del compost promueven la biorremediación y la

biofertilidad del área contaminada

Valeria Ventorinoa,b, Alberto Pascuala, Massimo FagnanoC, Paola Adánd, Vicente

Faracob,mi, Claudia Roccod, Nunzio FlorentinoC, Olimpia Pepea,b,*
aDepartamento de Ciencias Agrícolas, División de Microbiología, Universidad de Nápoles Federico II, Via Universita - 100, Portici, 80055, Nápoles, Italia
bTask Force on Microbiome Studies, Universidad de Nápoles Federico II, Nápoles, Italia
CDepartamento de Ciencias Agrícolas, División de Biología Vegetal y Ciencias de Cultivos, Universidad de Nápoles Federico II, Via Universita - 100, Portici, 80055, Nápoles,
Italia
dDepartamento de Ciencias Agrícolas, División de Química Agrícola y Pedología, Universidad de Nápoles Federico II, Via Universita - 100, Portici, 80055,
Nápoles, Italia
miDepartamento de Ciencias Químicas, Universidad de Nápoles Federico II, Complesso Universitario Monte S. Angelo, Nápoles, 80126, Italia

información del artículo resumen

Historial del artículo: El riesgo para la salud humana y el medio ambiente por la presencia en suelos agrícolas de contaminantes orgánicos e
Recibido el 31 de julio de 2018 inorgánicos derivados de la disposición ilegal de desechos, planteó la necesidad de desarrollar una estrategia sustentable
Recibido en forma revisada el 16 de
para la restauración de suelos con alto potencial agrícola. En este estudio se aplicó un método ecocompatible como labranza
agosto de 2019
del suelo y enmienda con compost en dos sitios de un Sitio Prioritario de Interés Nacional de la Región de Campania (Italia)
Aceptado el 17 de agosto de 2019 Disponible
conocido como “Terra dei Fuochi”. Después de un año, la concentración de hidrocarburos pesados (C > 12) se redujo
en línea el 19 de agosto de 2019
significativamente en un rango de 84 a 95%, probablemente debido a la aireación que provocó procesos de fotooxidación y
Editor de manejo: CT Lee una mejora de la actividad microbiana capaz de degradar los contaminantes orgánicos. Aunque se observó una tendencia a la
reducción, la concentración de elementos potencialmente tóxicos (PTEs) en los suelos no se modificó, lo que indica un riesgo
Palabras clave: potencial de absorción por las plantas. El enfoque de secuenciación de alto rendimiento utilizado para explorar la respuesta de
comunidades microbianas las poblaciones microbianas nativas después deen el lugarlos tratamientos mostraron que la dinámica de la microbiota se vio
Tierra afectada de manera diferente en los dos sitios. Por lo tanto, las características de los sitios podrían interactuar de manera
Polución diferente con el compost determinando una respuesta microbiana diferente. Alphaproteobacteria (rango de incidencia de 14
biomarcador
mi18%), actinobacterias (rango de incidencia de 10mi22%) y Sordariomycetes (rango de incidencia de 23mi57%) fueron las
Biofertilidad
poblaciones autóctonas dominantes en todos los suelos indicando su alta adaptabilidad a diferentes ambientes y alta
resistencia al estrés ambiental así como su alto potencial en la degradación de compuestos xenobióticos orgánicos.

Las prácticas de remediación basadas en la labranza del suelo y la enmienda con compost promovieron la restauración de
la biofertilidad microbiana de los suelos afectados por la multicontaminación manchada, para devolverlos al uso agrícola.

©2019 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

1. Introducción vertidos, representando un gran riesgo para la salud humana y el

Gran cantidad de compuestos orgánicos (es decir, hidrocarburos aromáticos policíclicos)
(PAH, petróleo y productos relacionados) e inorgánicos (es decir,
elementos potencialmente tóxicos - PTE) se liberan en el medio
ambiente a través de actividades humanas y desechos ilegales.
* Autor correspondiente. Departamento de Ciencias Agrícolas, División de
Microbiología, Universidad de Nápoles Federico II, Via Universit-
a 100, Portici, 80055, Nápoles,
Italia.
Dirección de correo electrónico:olipepe@unina.it (O.Pepe).
ecosistema natural (Chen et al., 2015). En Italia, entre los Sitios
Prioritarios de Interés Regional (RIPS), el área de Litorale Domitio Agro
Aversano ubicada en la Región de Campania fue seleccionada como
una de las más importantes (Ley n.° 426 de 1998). Desde 2013, esta
zona fue objeto de una campaña mediática sobre el vertido y la quema
ilegal de desechos y sus efectos en la inocuidad de los alimentos y la
salud humana (Naturaleza, 2014).
La alarma social animó a varios investigadores a analizar las
condiciones ambientales de la zona. La aplicación del Análisis de
Decisión MultiCriterio Espacial (S-MCDA) evaluó el potencial

https://doi.org/10.1016/j.jclepro.2019.118087 0959-6526/©
2019 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
2 V. Ventorino et al. / Revista de Producción más Limpia 239 (2019) 118087
contribución del aire, el suelo, las características hidráulicas del suelo y las aguas
subterráneas sobre el riesgo para la salud humana (Ducci et al., 2017). El uso de
bolsas de musgo indicó que las entradas de contaminación del aire (metales,
metaloides e hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAP)) tenían un patrón de
distribución espacial similar en toda el área de estudio, con el tráfico rodado y las
prácticas agrícolas como las principales fuentes de contaminación difusa (Capozzi
et al., 2016). Zinc, Cu, Cd y Pb fueron las PTE de origen antrópico que
contaminaron severamente del 10 al 16% de los suelos (Agrelli et al., 2017). Sin
embargo, solo en muy pocos casos, los PTE excedieron los valores críticos
fisiológicos o legales de la UE en la parte comestible de las plantas, lo que sugiere
solo un riesgo moderado para la salud humana a través de la ingestión de
vegetales cosechados en dicha área (Espósito et al., 2018). Todas estas actividades
de investigación permitieron excluir cualquier riesgo específico para la salud
humana debido a la contaminación de suelos agrícolas o alimentos locales de esta
área. La contaminación del suelo también podría representar una gran amenaza
para la ecología ambiental que afecta el funcionamiento del suelo, la salud y la
biodiversidad (Pardo et al., 2014) contribuyendo a la mayor parte de la
degradación del suelo en términos de su abundancia y diversidad microbiana (
Singh, 2003). Aunque se ha demostrado que los compuestos xenobióticos
orgánicos reducen la biodiversidad microbiana (Sutton et al., 2013), pueden ser
utilizados como fuente de carbono por algunas cepas bacterianas y fúngicas (
Ventorino et al., 2014) estimulando su crecimiento y por tanto su presencia en
suelos contaminados. A diferencia de los métodos químicos y físicos tradicionales
incompetentes y demasiado costosos, la adición de compost se considera una de
las tecnologías más rentables para la remediación del suelo (Chen et al., 2015). Las
enmiendas orgánicas, como el compost de desechos de alimentos, pueden influir
en la movilidad y bioacumulación de metales pesados, mejorando las propiedades
del suelo y el crecimiento de las plantas (Beiyuan et al., 2018). El compost se puede
utilizar en programas de biorremediación y fitorremediación asistidos (Florentino
et al., 2013) para mejorar la calidad del suelo y como fuente de nutrientes que
estimulan el crecimiento y la actividad de las poblaciones microbianas autóctonas
del suelo capaces de degradar los contaminantes orgánicos (Taiwo et al., 2016). Se
sabe poco sobre la respuesta microbiana a las prácticas de remediación y
contaminación múltiple, debido a la microflora de alta biodiversidad, así como a
las complejas relaciones entre las comunidades microbianas y los procesos
bióticos y abióticos que influyen en sus actividades en el suelo (Bastida et al., 2016
). Investigar y comprender las interacciones entre los microorganismos y los
componentes del suelo ayuda a establecer y aplicar el método más ecocompatible
para la limpieza de suelos contaminados. El uso de enfoques novedosos basados
en la secuenciación de alto rendimiento puede permitir estudios de la ecología
microbiana, la dinámica de la microbiota y la diversidad taxonómica a alta
resolución en ecosistemas complejos (Ventorino et al., 2015), así como podría
usarse y requerirse en este contexto para describir completamente la diversidad
microbiana del suelo y comprender sus perspectivas de uso en acciones climáticas
(Akinsemolu, 2018). La recuperación de suelos agrícolas contaminados mediante
una gestión sostenible se enmarca en el enfoque “One Environmental Health”.
Este enfoque amplía el concepto de salud incluyendo también humanos y
animales además de los ecosistemas naturales (Sabio et al., 2018), para reducir o
eliminar sustancias tóxicas para una producción más limpia. En este contexto, se
prestó especial atención a explorar la respuesta de las poblaciones microbianas
nativas después deen el lugar prácticas de remediación como eliminación de
desechos ilegales, aireación de la capa superior del suelo mediante labranza del
suelo y enmienda de compost.
Los objetivos de este estudio fueron: (1) determinar y describir el
impacto de la biorremediación asistida por compost sobre la diversidad y
riqueza de comunidades bacterianas y fúngicas en dos campos
multicontaminados del área de Litorale Domitio Agro Aversano (Giugliano y
Trentola Ducenta); (2) caracterizar la dinámica de la diversidad microbiana
durante un año; (3) identificar biomarcadores potenciales que varían
constantemente en abundancia según el manejo del suelo, el tiempo de
muestreo, el tipo de suelo y el nivel de contaminación.
2. Material y métodos
2.1. Sitios de estudio
En el marco del proyecto LIFE ECOREMED “Implementación de
protocolos ecocompatibles para la remediación de suelos agrícolas en
Litorale Domizio-Agro Aversano RIPS” (Ecoremed, 2017), se
seleccionaron dos sitios de campo contaminados en los municipios de
Giugliano (NA; 40-5703800norte, 14-0700700E, 41 m snm) y Trentola
Ducenta (CE; 40-5803200norte, 14-0805900E, 44 m snm); en concreto, un
1000 m2zona rural en el municipio de Giugliano (G) y 4500 m2en
Trentola-Ducenta (TD).
Ambos sitios (Figura 1) fueron clasificados como potencialmente
contaminados en la capa superior del suelo (0mi30 cm) por eliminación de
residuos no autorizada (Mónaco et al., 2015). El sitio G se vio afectado
principalmente por desechos de la “fabricación, formulación, suministro y uso de
revestimientos (es decir, pinturas y barnices)” y “vehículos al final de su vida útil y
sus componentes” (es decir, baterías de botes y automóviles). Las huellas de la
quema de desechos también fueron visibles en este sitio. En TD, los desechos
fueron hechos predominantemente por materiales mixtos de “construcción y
demolición”, incluyendo asfalto y plástico (Rocco et al., 2016). La contaminación del
suelo en los sitios G y TD se caracterizó hasta 0,6 m de profundidad. Se observaron
concentraciones más altas de contaminantes orgánicos e inorgánicos en la
superficie que en el subsuelo. En este trabajo, los datos de contaminación están
referidos a la capa superior del suelo (0mi30 centimetros). En toda el área la
profundidad del agua subterránea es de 30 m en promedio y las aguas resultaron
no contaminadas (Corniello y Ducci, 2014).
Los suelos de los dos sitios piloto se caracterizaron por una buena
fertilidad química (tabla 1), mostrando tanto una textura franco-arenosa
(USDA), un contenido moderado de carbono orgánico (CO) (19 g kg-1, en
promedio) y una buena disponibilidad de nutrientes. Su principal diferencia
estuvo representada por el contenido total de caliza que fue muy alto en TD
en comparación con el suelo G (181.4 vs 7.9 g kg-1, para TD y G
respectivamente). El sitio TD ha sido un basurero ilegal por más de 10 años,
por lo que la compactación del suelo al inicio del período de monitoreo fue
más pronunciada debido al peso de los residuos (50 Mg) y al tránsito de
vehículos utilizados para su disposición/remoción. La zona de estudio tiene
un clima mediterráneo, con un ligero déficit hídrico en verano. A partir de la
comparación con los niveles de acción italianos para el uso de la tierra
residencial (IALR) establecidos en virtud de la ley ambiental italiana (D.Lgs.
152/2006), tanto los sitios G como los TD mostraron una mezcla orgánica
(hidrocarburos pesados de hasta 705 y 541 mg kg-1en G y TD
respectivamente; Límite italiano: 50 mg kg-1) y contaminación potencial
inorgánica (G: Cu hasta 1707 mg kg-1- Zn hasta 972 mg kg-1; DT: Cu hasta
107 mg kg-1- Zn hasta 256 mg kg-1; Límite italiano: Cu 120 mg kg-1- Zn 150
mg kg-1).
El sitio TD, presentaba un alto grado de degradación física (compactación y
pérdida de estructura del suelo) debido al paso de camiones, al peso de decenas
de toneladas de residuos y a la consecuente acción del tamizado del suelo para
limpiarlo de residuos (Florentino et al., 2018).
2.2. Diseño experimental
En abril de 2014 se acondicionaron 3 parcelas de 3 m con compost de la
fracción orgánica de los residuos sólidos urbanos (Tabla 2). Las
concentraciones de PTE en dicho compost cumplen con los requisitos legales
de Italia y de la mayoría de los países europeos y americanos, aunque el
contenido relativamente alto de mercurio (1 mg kg-1dw) en algunos casos
(es decir, Austria) limita su uso al paisajismo y la recuperación (Hogg et al.,
2002).
Parcelas modificadas recibieron 20 t ha-1de compost que se aplicó a la
superficie del suelo antes de la rotura profunda del suelo (0,5 m), y luego se
incorporó al suelo mediante azada rotativa (0,2 m) y grada de disco (0,2 m).
Parcelas sin ninguna enmienda se usaron como control. Antes de la adición
de compost, todos los suelos fueron sometidos a la remoción de ilegales
 V. Ventorino et al. / Revista de Producción más Limpia 239 (2019) 118087 3

Figura 1.Localización de los campos experimentales en los NIP de Litorale Domitio (sur de Italia).

tabla 1 Tabla 2
Características físicas y químicas de los suelos (0mi20 cm) de los dos campos Composición química del compost a partir de la fracción orgánica de los residuos sólidos urbanos
experimentales Giugliano (G) y Trentola-Ducenta (TD). utilizados en la planta de fitorremediación asistida.

Parámetro unidad Sitio Valor Unidad

GRAMO DT pH 6.1
Humedad 14.1 %
Arcilla % 8.3 7.3
C orgánico 21.2 %
Limo % 32.3 22,9
N totales 1.3 %
Arena % 59.4 69.8
relación C/N 16.3
pHH2O 7.3 7.9
CE 6.4 dS·m-1
CE 1:5 dS·m-1 0.1 0.4
Discos compactos 0.1 mg kg-1
CaCO3 g kg-1 7.9 181.4
cr <0.1 mg kg-1
jefe g kg-1 19.1 18.8
cobre 48.2 mg kg-1
EN g kg-1 1.5 1.6
Pb 19.5 mg kg-1
NO3minorte g kg-1 3.9 3.8
Hg 1 mg kg-1
g kg-1 24.5 30
Ni 2.4
NUEVA HAMPSHIRE4minorte
mg kg-1
CCA cmolþkg-1 35 29
zinc 130.2 mg kg-1
k cmolþkg-1 5.2 6.6
N/A cmolþkg-1 1.5 1.9
magnesio cmolþkg-1 1.0 1.2
California cmolþkg-1 11.2 19.4

EC: Conductividad eléctrica, OC: Carbono orgánico, ON: Nitrógeno orgánico, CIC: Capacidad de
intercambio catiónico.
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desechos y labranza con azada rotativa para aireación de la tierra vegetal (0mi20
centímetros).
2.3. Muestreo de suelo
Se recolectaron muestras de suelo (0mi20 cm de profundidad) de parcelas
tratadas con compost y no modificadas (4 repeticiones por parcela). El tiempo de
muestreo fue: i) antes del tratamiento del suelo y enmienda de compost (abril de
2014, T0), ii) después de seis (octubre de 2014, CT1) y iii) doce meses (abril de 2015,
CT2) desde la adición de compost. De cada parcela, se recolectaron,
homogeneizaron y analizaron tres submuestras de 1,0 kg cada una para
determinar la estructura y dinámica de las comunidades microbianas. Se usaron
como controles muestras de suelo sin tratar recolectadas después de seis (octubre
de 2014, NCT1) y doce meses (abril de 2015, NCT2) después del comienzo del
experimento.
2.4. Análisis de suelos
Los análisis de suelo se llevaron a cabo solo en dos de las cuatro
repeticiones recolectadas por parcela. El contenido total de hidrocarburos
pesados (C > 12) y el contenido pseudototal de PTEs en suelos G y TD se
midieron al inicio del experimento (T0) y después de un año de la adición de
compost (CT2). El contenido de hidrocarburos pesados (C > 12) se
determinó según UNI EN ISO 16703, extrayendo durante 1 h 20 g de
muestra de suelo con 80 mL de una mezcla de acetona/nheptano (60:20 v/v).
El extracto se purificó con un Florisil® columna de limpieza y analizada por
GC-FID (Agilent Technologies 7890A) utilizando una rampa de temperatura
del horno de 80-C durante 4 minutos, 260-C durante 5 min y 310-C durante
23 min, con un tiempo de ejecución total, para cada muestra, de 60 min. El
contenido pseudototal de 13 PTE se midió usando digestión ácida asistida
por microondas enagua regia (EPA 3051A). Las concentraciones de los
elementos en las soluciones de digestión se determinaron de acuerdo con
EPA6020A mediante espectrometría de emisión atómica de plasma acoplado
inductivamente (PerkinElmer ICP-AES Optima 7300DV).
En el sitio G, donde se midieron contenidos totales muy altos de Cu y Zn,
también se determinaron las cantidades fácilmente y potencialmente
biodisponibles de Cu y Zn en el suelo por 1 mol L-1nitrato de amonio (ISO 19730,
2008) y 0,05 mol L-1EDTA a pH 7,0 (Rauret et al., 2001) soluciones. En detalles, 1
mol L-1NUEVA HAMPSHIRE4NO3solución (proporción suelo:solución 1:2,5 p/v) se
añadió a los suelos y se agitó de extremo a extremo durante 2 h (DIN 19730,1997).
Las concentraciones de metales extraídos se analizaron mediante Espectroscopía
de Masas de Plasma Acoplado Inductivamente (ICP-MS, PerkinElmer); mientras
que, 0,05 mol L-1La extracción con EDTA pH 7 (proporción suelo:solución 1:10 p/v)
se realizó utilizando el método descrito por la Comisión Europea (EUR, 19774 EN/
2001), en el que se extrajeron muestras de suelo durante 1 hora de forma
continua. agitador por solución de EDTA en una relación suelo/solución de 1:10. La
concentración de metales extraíbles se analizó mediante espectrometría de
emisión atómica de plasma acoplado inductivamente PerkinElmer ICP-AES Optima
7300DV.
Las cantidades biodisponibles de Cu y Zn se midieron dos veces,
antes (T0) y después de un año de la aplicación del compost (CT2).
2.5. Extracción de ADN y secuenciación de alto rendimiento
El ADN genómico total se extrajo utilizando un kit FastDNA SPIN
para suelo (MP Biomedicals, Illkirch Cedex, Francia) de acuerdo con las
instrucciones del fabricante. La diversidad microbiana se evaluó
mediante secuenciación metagenómica basada en amplicón utilizando
los cebadores SD-Bact-0341F50 (50-CCTACGGGNGGCWGCAG-30) y SD-
Bact-0785R50 (50- GACTACHVGGGTATCTAATCC -30) (Klindworth et al.,
2013) y los cebadores NS1 (50- GTAGTCATATGCTTGTCTC -30) y NS2 (50
-GGCTGCTGGCACCAGACTTGC-30) (Blanco et al., 1990) para bacterias y
hongos, respectivamente. La amplificación, purificación de amplicón,
multiplexación y secuenciación se llevaron a cabo por
Genomix4Life srl (Salerno, Italia) como se informa en los manuales de preparación
de la biblioteca de secuenciación metagenómica de Illumina. La secuenciación se
llevó a cabo en una plataforma MiSeq (Illumina Italy srl, Milán, Italia), lo que
condujo a 250 pb o 300 pb, 2 lecturas de extremos emparejados, para bacterias y
hongos, respectivamente.
2.6. Bioinformática y análisis de datos
Se analizó la calidad de las lecturas de filas y se filtraron mediante
PRINSEQ (Schmieder y Edwards, 2011). Las lecturas de baja calidad
(puntuación Phred <20) se recortaron y las lecturas de menos de 60 pb se
descartaron en un modo sensible de extremo a extremo. Las lecturas de
extremos emparejados se fusionaron mediante FLASH (Mago-c y Salzberg,
2011) y luego se analizaron las secuencias con el software QIIME 1.9.1 (
Caporaso et al., 2010). Las unidades de taxonomía operativa (OTU) con una
identidad de secuencia del 97% se seleccionaron a través de unde novo
enfoque y el método uclust y la asignación taxonómica se obtuvo utilizando
el clasificador RDP y el Greengenes (McDonald et al., 2012) o SILVA SSU/LSU (
Quast et al., 2013) base de datos para secuencias de ARNr 16S y 18S,
respectivamente. La contaminación por cloroplastos se eliminó de las tablas
16S OTU, mientras que en las tablas 18S OTU solo se conservaron las
secuencias de hongos y peronosporomicetos. Los singletons también se
descartaron de las tablas OTU filtradas y se volvió a calcular la abundancia
relativa de otros taxones. Para evitar sesgos debido a diferentes
profundidades de secuenciación, las tablas de OTU se enrarecieron con el
número más bajo de secuencias por muestra.
2.7. Estadísticas
Dependencia lineal entre suelo NH4NO3y los metales pesados extraídos
con EDTA se probaron mediante el coeficiente de correlación de Pearson
(Windows Excel 15.12.3). Los datos químicos se sometieron a un análisis de
varianza (ANOVA) usando la prueba de Duncan (P 0.01) como determinado
post-hoc por SPSS versión 16.0 (SPSS Chicago, Illinois).
Los análisis estadísticos y el trazado de datos microbiológicos se llevaron
a cabo en R (http://www.r-proyecto.org). El mapa de calor de agrupamiento
jerárquico se obtuvo a través del paquete made4 utilizando el método de
grupo de pares ponderados con el método de media aritmética (WPGMA).
QIIME calculó el análisis de diversidad alfa (riqueza de Chao1 e índices de
diversidad de Shannon) en tablas OTU enrarecidas y se usó la prueba de
Wilcoxon por pares en R para probar diferencias significativas. El análisis de
componentes principales (PCA) y el mapa de calor de agrupamiento
jerárquico se llevaron a cabo utilizando el paquete made4 en R. Tamaño del
efecto del análisis discriminante lineal (LDA) (LEfSe) (Segata et al., 2011) se
utilizó para comparar las diferencias entre todas las diferentes condiciones
probadas dentro de los sitios, destacando los biomarcadores taxonómicos a
nivel de clase. Las características discriminatorias se identificaron utilizando
los siguientes parámetros: el valor alfa de la prueba factorial de Kruskal-
Wallis entre clases se fijó en 0,05 y el umbral de la puntuación LDA
logarítmica se fijó en 2,0.
2.8. Número de acceso a la secuencia de nucleótidos
Los datos de secuenciación sin procesar de Illumina están disponibles en la
base de datos Sequence Read Archive del Centro Nacional de Información
Biotecnológica (SRP155808).
3. Resultados
3.1. Niveles de contaminación del suelo
La concentración de hidrocarburos pesados (C > 12) y PTEs, en
muestras de suelo recolectadas en el 0mi30 cm de capa de las ocho
parcelas seleccionadas (cuatro por cada sitio) al inicio del experimento
(T0) y después de un año de la aplicación del compost (T2) se dan en
 V. Ventorino et al. / Revista de Producción más Limpia 239 (2019) 118087 5

Tabla 3
Hidrocarburo pesado (C > 12), concentración de cobre y zinc (mg kg-1) en muestras de suelo recogidas a 0mi30 cm de profundidad desde los sitios piloto de Giugliano (G) y Trentola-Ducenta (TD) al
comienzo del experimento (T0) y después de un año desde la aplicación del compost (T2).

Trama T0 T2 Tratamiento

C > 12 cobre zinc C > 12 cobre zinc

G 1-3 533 219 170 26 207 193 Compost

G 8-2 705 91 80 42 94 95 Compost
Significar±Dakota del Sur 619±122 155±91 125±64 34±11* 151±80 144±69
G 8-5 401 96 128 29 127 135 sin compost
G 8-8 590 53 79 39 40 84 sin compost
Significar±Dakota del Sur 495±134 75±30 104±35 34±7* 84±62 110±36
DT 32-4 329 51 114 35 45 122 Compost
DT 32-7 541 42 228 72 43 152 Compost
Significar±Dakota del Sur 435±150 47±6 171±81 54±26* 44±1 137±21
DT 32-8 250 56 98 38 Dakota del Norte Dakota del Norte sin compost
DT 21-9 206 75 125 36 73 146 sin compost
Significar±Dakota del Sur 228±31 66±13 112±19 37±2* mi mi

Umbrales italianos (D.Lgs 152/2006) 50 120 150 50 120 150

* Significativo a P < 0,01.

nd: no determinado porque la muestra de TD 32-8 T2 se dañó durante el envío al laboratorio preparado para analizar PTE.

Tabla 3. 2 mg kg-1. Después de un año desde la aplicación de compost (CT2), una tendencia
En T0, se encontró una alta concentración de C > 12 en los sitios G y TD con general, pero no estadísticamente significativa, de reducción de NH4NO3y se
valores medios generales de 557±126 y 332±149 mg kg-1, respectivamente. Todas observaron cantidades de Cu y Zn biodisponibles en EDTA. A pesar de esta
las concentraciones estaban considerablemente por encima del valor de detección reducción, en las parcelas contaminadas, las cantidades biodisponibles de Cu
italiano de 50 mg kg-1(Decreto Ley 152/2006), indicando una contaminación difusa todavía estaban por encima del valor de activación alemán.
por hidrocarburos pesados de ambos sitios piloto. En ambos sitios se observó
una menor contaminación local por PTEs. Solo una parcela en G y una parcela en
3.2. Riqueza y diversidad de bacterias y hongos
TD tenían concentraciones en el suelo de Cu (G1-3) y Zn (G1-3; TD32-7)
ligeramente por encima de los valores de selección italianos de 120 y 150 mg kg-1,
La diversidad microbiana del suelo de los dos sitios, G y TD, sometidos a
respectivamente.
biorremediación asistida por compost se caracterizó mediante la
Después de un año, la concentración de hidrocarburos pesados en el suelo se
secuenciación parcial del gen 16S y 18S rRNA obtenido a partir del ADN
redujo significativamente en todas las muestras, incluso por debajo del valor de
extraído directamente de muestras de suelo en los tres puntos de tiempo
detección italiano de 50 mg kg-1(Decreto Ley 152/2006) (con la única excepción del
cada seis meses. Se analizaron un total de 4 028 328 y 2 116 271 lecturas de
suelo de la parcela TD32-7, quedando aún por encima del límite legal). Esta
alta calidad para procariotas y eucariotas, respectivamente. La diversidad
reducción osciló entre el 84 y el 95 % independientemente de la adición de
alfa se determinó calculando el índice de diversidad de Shannon y el índice
compost. La concentración de PTE en el suelo no se modificó después de un año
de riqueza de Chao1 basados en OTU de 97% de identidad.
desde la adición del compost.
En el campo G, se encontraron fuertes diferencias de diversidad bacteriana
Como se ve enTabla 4, la extractabilidad de Cu y Zn por el agente
entre los suelos tratados y no tratados en comparación con el mismo punto de
quelante EDTA siempre fue mayor que la de NH4NO3sal no tamponada
tiempo de muestreo. Después de seis (CT1) y doce meses (CT2), los suelos tratados
debido a la naturaleza de los extractantes.
con compost mostraron una biodiversidad significativamente menor (p < 0,001)
Cantidades de Cu y Zn extraídas por 1 M NH4NO3y EDTA 0,05 M se
que los suelos no tratados NCT1 o NCT2 (Figura 2A y B).
correlacionaron positiva y significativamente (P < 0,05) con el contenido
Después de doce meses, la riqueza y diversidad bacteriana disminuyó en
total de Cu y Zn en el suelo.
las muestras de CT2 en comparación con el suelo tratado con CT1, como lo
En T0, las cantidades biodisponibles de Cu, evaluadas por 1 M NH4NO3,
indican los índices Chao1 (p < 0,001) y Shannon (p < 0,05) (Figura 2A y B). El
estaban por encima del valor de activación de 1 mg kg-1definido por DIN alemán
mismo comportamiento mostró la comunidad bacteriana del suelo no
para el NH4NO3procedimiento para la transición contaminante suelo-alimento
tratado NCT2 después de doce meses (p < 0.01) mostrando una riqueza
vegetal en zonas agrícolas. El 1M NH4NO3cantidades biodisponibles de Zn siempre
significativa menor que la observada después de seis meses en NCT1 (p <
estuvieron por debajo del valor de activación DIN alemán de
0.05; Figura 2A).

Tabla 4
Cantidades biodisponibles (mg kg-1) de Cu y Zn extraídos por 1 mol L-1NUEVA HAMPSHIRE4NO3y 0,05 mol L-1EDTA de muestras de suelo recolectadas en el sitio piloto de Giugliano (G) al comienzo del
experimento (T0) y después de un año de la aplicación de compost (T2).

Elemento Muestra T0 T2 Tratamiento

NUEVA HAMPSHIRE4NO3 EDTA NUEVA HAMPSHIRE4NO3 EDTA

cobre G 1-3 8.11±0,2 (3,7%) 140±1,5 (64%) 5.90±0,1 (2,9%) 123±6,7 (59%) Compost
G 8-2 1.23±0,0 (1,3%) 46.3±1,4 (51%) 1.27±0,1 (1,4%) 51.8±0.3 (55%) Compost
G 8-5 0,09±0,0 (0,1%) 47.6±0.7 (50%) 2.30±0,5 (1,8%) 60.2±2,4 (47%) sin compost
G 8-8 1,31±0,1 (2,5 %) 24.7±0.7 (31%) 0,69±0.0 (1.7%) 19.4±0,6 (49%) sin compost

zinc G 1-3 1.33±0,0 (0,8%) 100±2,8 (58,8%) 0.72±0,0 (0,4%) 90.3±3,9 (46,8%) Compost
G 8-2 0,77±0,0 (0,96%) 10,8±0,1 (14%) 36± 0,35±0,0 (0,4%) 14.6±0.1 (15%) Compost
G 8-5 0,05±0,0 (0,04%) 0,8 (28%) 0,39±0,0 (0,3%) 32.4±4,7 (24%) sin compost
G 8-8 0,48±0,0 (0,6%) 17.8±0.1 (22%) 0,27±0,0 (0,3%) 11.3±0.1 (14%) sin compost

Entre paréntesis la cantidad biodisponible expresada como porcentaje del contenido total de Cu y Zn en el suelo.
6 V. Ventorino et al. / Revista de Producción más Limpia 239 (2019) 118087

Figura 2.Diagramas de caja que muestran la riqueza de Chao1 y los índices de diversidad de Shannon basados en comunidades procarióticas (A y B) y eucarióticas (C y D) en Giugliano. Los recuadros
representan el rango intercuartílico (RIC) entre el primer y el tercer cuartil, y la línea interior representa la mediana (segundo cuartil). Los bigotes denotan los valores más bajos y más altos dentro de 1.5
IQR desde el primer y tercer cuartil, respectivamente. Los asteriscos indican una diferencia significativa obtenida mediante la prueba de Wilcoxon por pares (*P < 0,05; **P < 0,01; ***P < 0,001). NS
denota diferencia no significativa.

Por comparación de suelos tratados y no tratados (CT1contraNCT1, p <
0,05; CT2contraNCT2, p < 0,001) se observó un aumento significativo de la
riqueza de hongos y oomicetos después de la adición de compost al suelo G
(Figura 2C). Este efecto también se observó a lo largo del tiempo en suelos
tratados con CT1 y CT2 en los que se observó un aumento progresivo
significativo de la diversidad eucariótica después de seis y doce meses (
Figura 2C). El efecto del tiempo de muestreo se detectó también
comparando muestras control, aunque la mayor biodiversidad en términos
de riqueza se detectó en NCT1 (p < 0,001;Figura 2D).
Se detectó un efecto diferente de la adición de compost sobre la
comunidad microbiana en el campo TD (Fig. 3). La adición de compost afectó
la riqueza bacteriana solo después de seis meses (CT1contraNCT1, p < 0,01),
mientras que no se observó diferencia significativa después de doce meses
comparando CT2 y NCT2 (Fig. 3A). Por el contrario, se encontró diferencia
altamente significativa (p < 0.001) en el índice de diversidad de Shannon en
el suelo tratado (CT2) con respecto al suelo no tratado (NCT2) después de
doce meses (Fig. 3B). Este efecto también se observó a lo largo del tiempo
en suelos tratados con CT1 y CT2 en los que se observó un aumento
significativo de la diversidad bacteriana después de doce meses (Fig. 3B). El
efecto del tiempo sobre la biodiversidad también se notó en las muestras de
control. Se observó una tendencia general de aumento de la diversidad a lo
largo del tiempo en comparación con los suelos no perturbados (T0), aunque
la mayor biodiversidad en términos de riqueza se detectó en NCT1 (p <
0,001; Fig. 3A).
En cuanto a las poblaciones bacterianas, se observó un aumento significativo
(p < 0,001) de la riqueza de hongos y oomicetos después de seis meses
comparando suelo tratado y no tratado (CT1contraNCT1;Fig. 3C). La riqueza de
eucariotas disminuyó significativamente (p < 0,001) con el tiempo en el suelo
tratado con compost después de doce meses (CT1contraCT2;Fig. 3C). Se observó
un aumento significativo de la diversidad de hongos y oomicetos después de seis
y doce meses con respecto a T0 (p < 0.001) como lo indica el índice de diversidad
de Shannon (Fig. 3D).
 V. Ventorino et al. / Revista de Producción más Limpia 239 (2019) 118087 7

Fig. 3.Diagramas de caja que muestran los índices de diversidad de Chao1 y Shannon basados en comunidades procarióticas (A y B) y eucarióticas (C y D) en Trentola Ducenta. Los recuadros
representan el rango intercuartílico (RIC) entre el primer y el tercer cuartil, y la línea interior representa la mediana (segundo cuartil). Los bigotes denotan los valores más bajos y más altos dentro de 1.5
IQR desde el primer y tercer cuartil, respectivamente. Los asteriscos indican una diferencia significativa obtenida mediante la prueba de Wilcoxon por pares (*P < 0,05; **P < 0,01; ***P < 0,001). NS
denota diferencia no significativa.

3.3. Descripción de la microbiota y principales actores microbianos
Se examinaron las abundancias relativas de taxones bacterianos y
fúngicos a nivel de clase para determinar si hubo cambios significativos
en la composición de las comunidades microbianas según el
tratamiento de compost y el tiempo de muestreo.
En todas las muestras, se identificaron 153 (pertenecientes a 54
phyla) y 158 (pertenecientes a 55 phyla) clases de procariotas en suelos
G y TD, respectivamente (Figura 4A), aunque solo doce taxones
(Actinobacteria, Alphaproteobacteria, Acidobacteria,
Betaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Sphingobacteria,
Gemmatimonadetes, Deltaproteobacteria, Bacilli, Planctomycea,
Phycisphaerae y otros) comprendían en promedio > 80% de cada sitio.
En cuanto a las poblaciones eucariotas, se detectaron un total de 38
clases, pertenecientes a 11 phyla diferentes, en ambos sitios (Figura 4
B). Seis (Sordariomycetes, Dothideomycetes, Agaricomycetes,
Peronosporomycetes, Eurotiomycetes, Other) y cinco taxones
(Sordariomycetes, Dothideomycetes, Agaricomycetes, Pezizomycetes,
Other) representaron en promedio > 80% del total de clases de hongos
y oomicetos identificados en suelos G y TD, respectivamente.
Dados los claros efectos diferentes tanto del compost como del tiempo de
muestreo en las comunidades microbianas del suelo en los dos campos, LEfSe
determinó los grupos taxonómicos que diferían significativamente en abundancia
de acuerdo con estas variables para buscar biomarcadores potenciales. De
acuerdo con este análisis, se pudieron identificar 20 OTU bacterianas y 3 fúngicas
como responsables de discriminar entre las diferentes muestras de suelo en G (
Figura 5). Los biomarcadores bacterianos comprendieron diferentes taxones
pertenecientes principalmente a Proteobacteria, Firmicutes, Chloroflexi,
Planctomycets phyla (Figura 5A); mientras que solo se identificaron 2
biomarcadores fúngicos a nivel de clase (Mucorales y Peronosporomycetes;Figura
5B). En TD, los resultados revelaron que hasta 42 biomarcadores bacterianos y 11
fúngicos explicaban las diferencias
8 V. Ventorino et al. / Revista de Producción más Limpia 239 (2019) 118087

Figura 4.Mapa de calor que representa taxones procarióticos (A) y eucarióticos (B) identificados en muestras de suelo de Giugliano y Trentola Ducenta. La escala de colores indica la abundancia relativa de cada OTU dentro
de las muestras. El dendrograma representa patrones de agrupamiento basados en el análisis de agrupamiento jerárquico de taxones y muestras mediante el método de grupo de pares ponderados con método de media
aritmética (WPGMA). (Para la interpretación de las referencias al color en la leyenda de esta figura, se remite al lector a la versión web de este artículo).

entre muestras tratadas y no tratadas a lo largo del tiempo. Además de los
taxones comunes recuperados también en G, en TD las principales
diferencias entre las muestras estuvieron representadas por UTO
bacterianas identificadas como microorganismos no cultivados
pertenecientes a los filos Candidate, cuya abundancia fue mayor en los
suelos tratados muestreados doce meses después de la adición del compost
(CT2,Figura 5C). Ascomycota (Sordariomycetes y Taphrinomycetes),
Cryptomycota (Rozellidea), Chytridiomycota (Chytridiomycetes),
Mucoromycota (Glomeromycetes) y Basidiomycota (Exobasidiomycetes y
Agaricostibolomycetes) son los biomarcadores detectados en suelos no
tratados; Zoopagomycota (Entomophthoromycetes y
Kickxellales) y Ascomycota (Pezizomycotina) son biomarcadores
representativos de suelos tratados seis meses después del tratamiento con
compost (Figura 5D).
3.4. Análisis de componentes principales (PCA)
Análisis de componentes principales en registro2Se realizó una
transformación de las tablas OTU para explorar la biodiversidad bacteriana y
fúngica dentro y entre las muestras de suelo en los sitios G y TD (Figura 6).
Las muestras se agruparon en grupos por 0,7 elipses de confianza.
En G, PCA basado en la composición bacteriana a nivel de clase mostró un
 V. Ventorino et al. / Revista de Producción más Limpia 239 (2019) 118087 9

Figura 5.Análisis discriminante lineal Tamaño del efecto (LEfSe) de OTU procarióticas (A) y eucarióticas (B) en Giugliano, OTU procarióticas (C) y eucarióticas (D) en suelos de Trentola Ducenta, que muy
probablemente explican las diferencias entre muestras (valores LDA > 2,0) . Las diferencias están representadas por el color de la clase más abundante. (Para la interpretación de las referencias al color
en la leyenda de esta figura, se remite al lector a la versión web de este artículo).

Figura 6.Estructura de la microbiota representada con PCA, comparando suelos no tratados y tratados a lo largo del tiempo. Los cuatro gráficos muestran PCA de OTU a nivel de clase de OTU procariotas
(A) y eucariotas (B) en Giugliano, OTU procariotas (C) y eucariotas (D) en suelos de Trentola Ducenta.

clara separación del grupo CT1 con una superposición en el grupo NCT1, lo diferencias entre grupos (Figura 6A). Después de doce meses, el grupo
que indica que después de seis meses el suelo tratado con compost se vio CT2 se agrupó en un área estrecha del grupo NCT2 destacando una
afectado por variables específicas de OTU que influyeron reducción del efecto del compost sobre el peso de las variables OTU
10 V. Ventorino et al. / Revista de Producción más Limpia 239 (2019) 118087
(Figura 6A). El PCA basado en la composición eucariótica a nivel de clase
mostró una reducción de las variaciones entre las muestras tratadas y no
tratadas (CT1contraNCT1 y CT2contraNCT2) dando como resultado grupos
más estrechos (Figura 6B). El PCA basado en la composición bacteriana del
sitio TD mostró que el tratamiento con compost redujo la variación entre las
muestras dentro del grupo CT1 o CT2, lo que resultó en una distribución
más estrecha de las muestras que se incluyeron dentro del grupo de suelo
no tratado en el mismo punto de tiempo de muestreo (NCT1 o NCT2,Figura 6
C). Se observó una clara separación de los grupos CT1 y NCT1 con el grupo
CT2 y NCT2. Se observó un efecto de compost a largo plazo en PCA basado
en la composición eucariótica ya que a los doce meses se detectó una
marcada separación entre suelo tratado (CT2) y no tratado (NCT2) (Figura 6
D). La distribución de muestras del grupo T0 estuvo fuertemente separada
de los otros grupos independientemente de los tratamientos (Figura 6D).
4. Discusión
Los suelos del área de estudio, conocidos comocampania felixya que se trata
de una zona muy fértil caracterizada por la presencia tanto de sedimentos
detrítico-aluviales del río Volturno como de materiales piroclásticos de complejos
volcánicos cercanos (Campos Flégreos y Somma-Vesubio). Tanto los sitios G como
los TD están ubicados en un área anteriormente clasificada como Sitios Prioritarios
de Interés Nacional (NIPS) y en realidad están identificados por el Estado italiano
como RIPS (DL N° 36 bis del 08/07/2012) por su alto nivel de contaminación
localizada debido al vertido y la quema ilegales de desechos. El riesgo para la
salud humana y el medio ambiente planteó la necesidad de desarrollar una
estrategia de biorremediación sostenible basada en la labranza del suelo y
enmienda orgánica de suelos agrícolas contaminados y definir indicadores para
monitorear la calidad ambiental. Se adoptaron métodos ecocompatibles para
remediar suelos contaminados por una amplia gama de contaminantes orgánicos
e inorgánicos como las tecnologías más rentables (Chen et al., 2015). Entre estas
tecnologías, la enmienda de compost se eligió en el presente trabajo como un
enfoque sostenible para la remediación del suelo y para mejorar la calidad del
suelo. La incorporación de enmiendas orgánicas podría potenciar la actividad
microbiana involucrada en la degradación de compuestos xenobióticos orgánicos
a través de los sustratos y nutrientes disponibles (Bastida et al., 2016) y la
aireación del suelo indispensable para la mezcla del compost (Ros et al., 2014) así
como previene la dispersión de PTE y mejora las propiedades físicas del suelo (
Florentino et al., 2017). Antes de las prácticas agrícolas, se encontró una
contaminación difusa por hidrocarburos pesados tanto en el sitio G como en el
TD. Es de destacar que los valores de contaminantes de las parcelas seleccionadas
para este experimento resultaron muy diferentes a los de caracterizaciones
anteriores, destacando la importancia de analizar la variabilidad espacial de la
contaminación en una perspectiva de una remediación efectiva de precisión (
Langella et al., 2018). Después de un año, la concentración de C > 12 en el suelo se
redujo significativamente en todas las muestras, independientemente de la
adición de compost. Este resultado podría deberse a la aireación aplicada tanto a
los suelos modificados con compost como a los no modificados. La aireación del
suelo podría haber promovido reacciones de fotooxidación transformando los
hidrocarburos expuestos a la luz solar. El proceso implica la absorción de fotones
por parte de las moléculas, que luego inician reacciones de oxidación,
aumentando la presencia de hidrocarburos oxigenados, más susceptibles a la
biodegradación (Marrón et al., 2017). La aireación del suelo también podría haber
mejorado la actividad microbiana capaz de degradar los contaminantes orgánicos.
Por lo tanto, la reducción de hidrocarburos pesados en los sitios G y TD parece
depender de la aireación de la superficie del suelo que activa las reacciones de
fotooxidación y estimula las poblaciones microbianas autóctonas que promueven
la degradación de compuestos orgánicos tóxicos.
Aunque se observó una tendencia a la reducción, la concentración de PTE en
los suelos no se modificó después de un año desde la adición del compost, lo que
indica un riesgo potencial de transferencia del suelo a la planta. En el sitio G,
cantidades de Cu y Zn extraídas por NH 1 M4NO3y EDTA 0,05 M
se correlacionaron positivamente con el contenido total en el suelo, lo que indica
un aumento de las cantidades biodisponibles con el contenido total de metales,
como también se observó porRocco et al. (2018). Es de destacar que la
extractabilidad de los metales por el agente quelante EDTA siempre fue mayor
que la del NH4NO3sal sin tamponar. Este comportamiento estuvo relacionado con
la naturaleza de los extractantes. El EDTA es un agente quelante, definido como un
extractante no específico que puede eliminar tanto fracciones lábiles como no
lábiles (Bermond et al., 1998). Mientras que el nitrato de amonio 1 M elimina las
formas metálicas fácilmente solubles e intercambiables (Gryschko et al., 2005).
Se necesitaban enfoques multidisciplinarios y novedosos para describir las
relaciones que ocurrían en un suelo real que contenía una matriz compleja que
incluía constituyentes orgánicos, inorgánicos y minerales junto con un alto nivel
de biodiversidad (Bastida et al., 2016). Las poblaciones microbianas juegan un
papel esencial en el mantenimiento de la fertilidad de los suelos agrícolas y
afectan la función y productividad del ecosistema (Labud et al., 2006). Las
poblaciones microbianas nativas pueden responder de manera diferente aen el
lugarprácticas de remediación como eliminación de desechos ilegales, labranza
del suelo y enmienda de compost. La información relacionada con las respuestas
de la microbiota autóctona a la contaminación y al tratamiento de remediación
podría ayudar a evaluar el impacto de la perturbación ambiental (Ventorino et al.,
2018a). Aunque se realizaron muchos estudios sobre los cambios de las
comunidades microbianas durante la biorremediación, son pocas las
comunidades microbianas que cambian después de la adición de compost al suelo
en ambientes naturales (Ros et al., 2014). Dado que la enmienda del compost
podría determinar cambios en el ecosistema del suelo agrícola contaminado, se
investigó la dinámica de la composición de la microbiota. En este estudio se
observaron observaciones contrastantes del impacto de la enmienda de compost
en las poblaciones microbianas del suelo. El tratamiento con compost afectó la
diversidad microbiana de manera diferente en los dos sitios, lo que resultó en una
reducción de la biodiversidad bacteriana y un aumento de la biodiversidad de
hongos y oomicetos en G. Independientemente del tipo de biorremediación
aplicada y la degradación de los contaminantes,Rosa et al. (2014)informaron que
se observó un aumento en la abundancia de bacterias en el suelo junto con una
disminución en la diversidad microbiana y cambios en la comunidad bacteriana en
suelos contaminados con hidrocarburos tratados con aireación y tratamientos
orgánicos. De acuerdo aSaison et al. (2006), TD reveló poca o ninguna influencia
de los microorganismos del compost en la estructura de la comunidad microbiana
del suelo con respecto a los suelos de control, lo que indica que la microbiota
parecía menos afectada por las enmiendas orgánicas. La baja incidencia de la
enmienda orgánica sobre las poblaciones bacterianas podría deberse a la escasa
comunidad microbiana autóctona presente en estos suelos (Gandolfi et al., 2010)
así como a las características del sitio que podrían interactuar con el compost
determinando una respuesta microbiana diferente.
En el presente trabajo también se encontró una comunidad procariótica
de alta complejidad en los dos sitios, en la que entre las bacterias más
frecuentes se encontraban las pertenecientes a Alphaproteobacteria con
una incidencia de 14mi18%. Este resultado está de acuerdo con trabajos
previos en los que las poblaciones de proteobacterias eran dominantes y
persistentes en hidrocarburos de petróleo (TPH) (Cheema et al., 2015), HAP (
Jeanbille et al., 2016), uranio (Dal et al., 2011), cromo y arsénico (Jeque et al.,
2012) suelos contaminados, así como en ambientes contaminados con una
presencia simultánea de metales y HAP (Sol et al., 2013). Aunque la
abundancia de Alpha-, Beta y Gammaproteobacteria varió entre diferentes
ambientes contaminados (Bourceret et al., 2016), los miembros
pertenecientes a estas clases podrían estar involucrados en la
biodegradación efectiva (Sannino et al., 2016) o biotransformación de
numerosos compuestos orgánicos (Guan et al., 2015). De todos modos, se
sabe que algunas especies de proteobacterias degradan fácilmente los PAH (
Gaur et al., 2018). Estos taxones también fueron propuestos como posibles
objetivos para el biomonitoreo del impacto del petróleo en el ecosistema de
manglar (Dos Santos et al., 2011).
Actinobacteria representó el otro taxón bacteriano dominante
 V. Ventorino et al. / Revista de Producción más Limpia 239 (2019) 118087
en suelos G y TD, detectado en un rango de 10mi22%. Aunque se sabe que
las poblaciones de actinobacterias sintetizan una amplia variedad de
enzimas, como la enzima activa de carbohidratos (Montella et al., 2017), para
degradar diversos materiales orgánicos recalcitrantes, es decir, biomasa
lignocelulósica (Ventorino et al., 2016a) y crudo pesado (Acosta González et
al., 2015), esta clase fue propuesta como biomarcador para suelos no
contaminados (Ventorino et al., 2018b). En un suelo real altos niveles de
hidrocarburos (Días et al., 2015) o metales pesados (Yin et al., 2015), puede
afectar su crecimiento debido a su baja capacidad de adaptación. El
predominio de taxones de proteobacterias y actinobacterias en todas las
parcelas de los dos sitios destacó que estas poblaciones son autóctonas y
están bien adaptadas a estos ecosistemas multicontaminados específicos.Liu
et al. (2017)reveló una asociación entre la dominancia de Alpha-, Beta- y
Gammaproteobacteria y Actinobacteria con la degradación de hidrocarburos
de petróleo en suelos/sedimentos de diferentes ubicaciones geográficas.
Estas poblaciones microbianas incluían especies conocidas por sintetizar
sustancias que promueven el crecimiento de las plantas (es decir, hormonas
como los ácidos indolacéticos, etileno y giberelinas) y aumentan la
disponibilidad de nutrientes (es decir, N, P, Fe) en el suelo y su absorción (
Kim et al., 2011). También se reconoció que las actinobacterias ejercen un
efecto supresor con respecto a un amplio espectro de patógenos
transmitidos por el suelo de las plantas porque estas bacterias producen
una amplia gama de diferentes antibióticos.Franke-Whittle et al., 2009). La
abundancia de estas poblaciones bacterianas indicó el alto potencial de
fertilidad biológica de estos suelos debido a que mejoran la aptitud y el
crecimiento de las plantas agrícolas y funcionan como antagonistas de
fitopatógenos.
Otros taxones revelados con menor incidencia estuvieron representados
por miembros de Acidobacteria, Betaproteobacteria, Gammaproteobacteria,
Sphingobacteria, Gemmatimonadetes, Deltaproteobacteria, Bacilli,
Planctomycea, Phycisphaerae, que representaron aproximadamente el 40%
de la diversidad bacteriana total. Se sabe que algunos miembros de estas
clases de bacterias pueden crecer en una amplia variedad de condiciones del
suelo (Bourceret et al., 2016) y ecosistemas naturales (Amor et al., 2013) así
como para sintetizar enzimas involucradas en la descomposición de
materiales orgánicos (Piveteau et al., 2001).
En todas las muestras de suelo, la comunidad eucariótica estuvo
dominada principalmente por una población fúngica perteneciente a la clase
Sordariomycetes, independientemente del tratamiento de biorremediación y
el nivel de contaminación. Este resultado está en concordancia con los
estudios previos en los que se recuperó la dominancia de este taxón en
ambos contaminados (Thion et al., 2012) y no contaminados (Ventorino et
al., 2016b) ecosistemas probablemente debido a su alta adaptabilidad a
diferentes ambientes así como a su alta resistencia al estrés ambiental.
Entre los taxones revelados en este estudio, LEfSe sugirió que se identificaron
20 OTU bacterianas y 3 fúngicas en suelos G y 42 OTU bacterianas y 11 fúngicas en
TD como biomarcadores potenciales que explican las diferencias entre muestras
tratadas y no tratadas a lo largo del tiempo.
Los biomarcadores bacterianos comprendían diferentes taxones
pertenecientes principalmente a Proteobacteria, Firmicutes, Chloroflexi,
Planctomycetes, Bacteroidetes y Cyanobacteria phyla, algunos de los cuales se
reportaron previamente como asociados con la degradación de compuestos
xenobióticos orgánicos (Sol et al., 2017) así como sus actividades parecen ser
críticas para el éxito del proceso de biorremediación (Shahi et al., 2016). En los
suelos TD, también se identificaron microorganismos no cultivados pertenecientes
a filos Candidatos como biomarcadores potenciales en suelos tratados con
compost.Bastida et al. (2016)indican bacterias no cultivables entre los principales
impulsores de la biorremediación en suelos naturales, destacando su alta
adaptabilidad a ambientes contaminados.
La enmienda del compost afectó la biodiversidad fúngica especialmente
en los suelos TD, donde los miembros pertenecientes a Zoopagomycota y
Ascomycota fueron biomarcadores representativos de los suelos tratados.
Esta diferencia significativa podría deberse a la adaptación de las
comunidades microbianas a las condiciones ecológicas locales distintas a las
11
diferencias específicas en la presencia de contaminantes (Hostal y
Bouzat, 2016).
El análisis PCA también reveló el efecto diferente del tratamiento con
compost sobre la microbiota del suelo en los dos sitios. Aunque tanto en los
suelos G como en los TD se observó una clara separación de los grupos CT1
y NCT1 en las comunidades bacterianas, destacando que la variable tiempo
fue el principal impulsor del cambio espacial de la variación general entre los
grupos, solo se observó un efecto de compost a largo plazo en TD . En este
sitio a los doce meses también se detectó una marcada separación entre
suelo tratado (CT2) y no tratado (NCT2) en PCA en base a la composición
eucariótica y procariótica. La distribución de las muestras del grupo T0 de
poblaciones eucariotas estuvo fuertemente separada de los otros grupos
independientemente de los tratamientos, lo que denota que la variable
tiempo ahoga también la distribución espacial de los grupos eucariotas
aunque este efecto se redujo a los doce meses después del tratamiento con
compost.
5. Conclusiones
La estructura de la comunidad microbiana se vio afectada por una interacción
entre la estrategia sostenible ecocompatible, como la aireación de la capa superior
del suelo debido a la labranza del suelo y la enmienda del compost, el tipo de
suelo y las condiciones estacionales. Las características de los sitios podrían
interactuar de manera diferente con el compost determinando una respuesta
microbiana diferente. Aunque el tratamiento con composta afectó la diversidad
microbiana de manera diferente en los dos sitios, Alphaproteobacteria,
Actinobacteria y Sordariomycetes fueron poblaciones dominantes en todos los
suelos, lo que indica su alta adaptabilidad a diferentes ambientes y alta resistencia
al estrés ambiental, así como su alto potencial en la degradación de compuestos
xenobióticos orgánicos. Después de un año de prácticas de biorremediación solo
hidrocarburos pesados (C > 12) las concentraciones se redujeron drásticamente
en la superficie del suelo independientemente de la adición de compost, pero
probablemente como resultado de los procesos de fotooxidación inducidos por la
aireación del suelo y la subsiguiente degradación microbiana mejorada. La adición
de compost no pareció afectar significativamente ni la biodisponibilidad de las PTE
ni el contenido total, lo que indica un riesgo potencial de absorción por la planta.
Probablemente, a medida que el período experimental se alarga, es más probable
que se notifiquen algunos cambios.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado financieramente por el Proyecto de
Investigación Europeo Lifeþ “Implementación de Protocolos Ecocompatibles
para la Remediación de Suelos Agrícolas en Litorale Domizio-Agro Aversano
NIPS - ECOREMED” (LIFE11/ENV/IT/275).
Referencias
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