UNIDAD DIDÁCTICA 1.

LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y

CITOGENÉTICA.

TEMA 2. EL LABORATORIO DE CITOGENÉTICA

Se va a estudiar conjuntamente el laboratorio de citogenética y el de cultivos celulares ya que poseen

muchas similitudes, como diferencias fundamentales se destaca:

 Laboratorio de cultivos celulares: tiene como objetivo el crecimiento de las células eucariotas
en medios de cultivo artificiales en condiciones controladas.
 Laboratorio de citogenética: tiene como objetico el estudio de los cromosomas de especies
eucariotas, tanto en perspectiva morfológica (cariotipo) como molecular (citogenética
molecular).

Comparten ambos su principal problema, la contaminación por microorganismos (bacterias, hongos,

virus). Así el laboratorio de citogenética es una ampliación especializada de un laboratorio genérico de
cultivo con un área de cultivo celular para obtener células en mitosis, y un área de genética para
estudiar los cromosomas metafásicos.

2.1 EQUIPAMIENTO

Este laboratorio posee un equipamiento específico para realizar los cultivos celulares, otro para las
técnicas de citogenética y, por último, el equipamiento común a otros laboratorios.

 Equipamiento específico para cultivos celulares: válido para cualquier tipo de cultivo, consta
de:

 Cabina de flujo laminar (tipo II): es una infraestructura en el interior de la cual se

realizan todos los procesos y manipulaciones de cultivos celulares, es una cabina de
seguridad biológica de clase II, que previene la contaminación del cultivo y protege al
trabajador y al medio ambiente. Tiene una estructura muy definida:

 Un panel frontal transparente para mantener la estabilidad del flujo laminar

en su interior
 Una rejilla frontal que genera una corriente entrante de aire e impide que
escapen posibles contaminantes.
 Un sistema mecánico que hace recircular el aire
 Un filtro HEPA de gran superficie que forma el techo de la cabina que libera el
aire de partículas y microorganismos. Parte del aire impulsado por el sistema
mecánico se fuerza a pasar a través de este filtro (70% en las cabinas tipo IIA
y 30% en las cabinas IIB).
 Un segundo filtro HEPA más pequeño que el anterior situado encima de este,
por el que se elimina al exterior el resto del aire.
  Incubador de CO2: es el aparato que proporciona las
condiciones ambientales óptimas para el crecimiento de las
células en el medio de cultivo. Consta de:
 Control de temperatura
 Recirculación de aire
 Control de CO2 (4-7%)
 Control de humedad (para que el medio no se
evapore)

 Microscopio invertido: el control del crecimiento de un cultivo se

realiza por observación microscópica, pero el tamaño de los
frascos de cultivo impide el uso de un microscopio óptico
convencional y se recurre al invertido, donde está invertida la
fuente de luz y el revólver

 Equipo de criogenia: permite conservar a largo plazo y en forma

viable muestras de células y líneas celulares (un tanque con nitrógeno líquido).

 Equipamiento específico para citogenética: son imprescindibles los siguientes aparatos:

 Equipo de análisis de imagen: para documentar y analizar metafases, son microscopios

ópticos convencionales y de fluorescencia, además de cámaras y software específicos.

 Equipamiento común: es común a laboratorios de citogenética y cultivo celular, consta de:

 Equipo de esterilización: con un autoclave y sistema de filtración para esterilizar

soluciones.
 Sistema de purificación de agua: para preparar reactivos y medios de cultivo
 Nevera y congeladores: necesario el sistema de frío
 Otros equipos: básicos como centrífugas, pHmetro, pipetas…
2.2 ESTRUCTURA DEL LABORATORIO

La prevención de la contaminación condiciona la estructura del laboratorio, con separación de áreas

“limpias” y “sucias”. Así un laboratorio de citogenética constará mínimo de tres salas:

 Sala de cultivos: es la sala “limpia” (libre de microorganismos), en la que se realizan los

procedimientos relacionados con los cultivos celulares, con ligera presión positiva. Aquí se
encuentran las cabinas de flujo laminar, incubadores y microscopio invertido.
 Sala de laboratorio convencional: es una sala “sucia” con el resto de equipamiento, excepto el
equipo de criogenia. Puede contener la zona oscura con el microscopio de fluorescencia.
 Sala de frío: con los congeladores y equipo de criogenia.

Sala de frío (-)

Sala de cultivos
(+)

Sala de laboratorio (-) Zona oscura

2.3 TÉCNICA ASÉPTICA

El principal objetivo es evitar la contaminación por microorganismos que destruyen el cultivo, por ello se
trabaja en la cabina de flujo laminar, aún así se deben seguir las siguientes precauciones:

 Lavado frecuente de manos

 Uso de EPI
 Puertas cerradas
 Uso de material estéril
 No introducir mecheros bunsen en la cabina ya que crean turbulencias
 Colocar en la cabina exclusivamente el material que se vaya a usar
 No sacar el material estéril de su embalaje hasta el momento de su uso
 El material fungible depositarlo en los contenedores adecuados
 Restringir el acceso a la sala de cultivos
 Limpieza de la cabina de flujo laminar con etanol 70% o desinfectante comercial al finalizar cada
sesión de trabajo
 Usar lámpara germicida si la cabina la posee
 Realizar el mantenimiento a los filtros HEPA
 Limpieza y desinfección de superficies