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19/10/2017 Laboratorio Microbiologia

Microbiologa General y Bucal


Prctica 1: El laboratorio de Microbiologa
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Descripcin
Un laboratorio de Microbiologa es un lugar habilitado para manejar y estudiar microorganismos.
El trabajo debe realizarse de acuerdo con los estndares tcnicos y de seguridad propios de un laboratorio de Microbiologa Clnica.
Es importante recordar que la finalidad es determinar los microorganismos presentes en la muestra por lo que es preciso extremar las precauciones
para evitar contaminaciones que den lugar a resultados errneos.
Todas las muestras deben ser manejadas con precaucin por su potencial patogenicidad.
Para deshacerse del material contaminado se deben utilizar recipientes adecuados que deben ser esterilizados posteriormente.
Nunca se puede tirar nada contaminado por el fregadero o al cubo de la basura comn sin haber sido esterilizado previamente.
El el laboratorio deben existir unas recomendaciones generales de limpieza y en caso de vertidos:
Procedimientos de limpieza de superficies externas mediante papel humedecido con solucin desinfectante (alcohol 70%, desinfectante
fenlico diluido, etc.). Aclarar con agua los restos de desinfectante.
En caso de usar soluciones de hipoclorito en zonas metlicas, limpiar posteriomente para evitar el efecto corrosivo.
En caso de derramamientos de material peligroso o formacin de aerosoles: evitar inspiraciones de esos aerosoles, esperar 30 minutos hasta
que las partculas se hayan depositado y limpiar con mascarilla, guantes y otros tiles protectores.
En caso de vertido de materiales, cubrir la superficie con desinfectante y posteriormente cubrir con papel humedecido con desinfectante.
Dejar durante 15 minutos y limpiar. En caso necesario aclarar con agua.
En caso de derramamientos menores limpiar el material vertido mediante papel humedecido y posteriormente aclarar, cuando sea necesario.
Los laboratorios debern disponer de los aparatos e instrumental necesario para el correcto desarrollo de su actividad.
Debe existir un procedimiento de control de calidad en el laboratorio de Microbiologa Clnica que implique la monitorizacin de los medios e
instrumentos, con el fin de asegurar la adecuada realizacin de los aislamientos, identificacin y caracterizacin de los patgenos y la realizacin
precisa de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos como referencia teraputica. El sistema de la calidad deber contemplar la existencia de
registros de formacin de personal.
es imprescindible la existencia de un procedimiento sobre medidas de proteccin personal en el manejo de equipos y aparatos.
Los equipos del laboratorio deben funcionar de forma que se asegure la reproducibilidad de los resultados de las pruebas diagnsticas.
El laboratorio deber estar bajo la direccin y responsabilidad de un facultativo con la especialidad correspondiente, legalmente capacitado para
realizar aqullas determinaciones clnicas que el laboratorio tenga autorizadas.
El personal tcnico y sanitario del laboratorio deber disponer la titulacin adecuada para las funciones que desarrolla de conformidad con la
legislacin vigente.

Estructura de un laboratorio de Microbiologa Clnica

rea administrativa
rea de recepcin de muestras
rea de extraccin que deber:

Disponer de material de un solo uso para contacto con muestras biolgicas.


Disponer de un rea de extracciones y toma de muestra, una sala de espera para los pacientes y los servicios de higiene
correspondientes.
Disponer de personal legalmente autorizado para la toma de muestras.
Disponer de un manual de extraccin, toma y transporte de muestras.

El manual antedicho deber ser elaborado por el responsable


rea de trabajo: anlisis y procesado de muestras

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El puesto de trabajo debe debe de estar limpio y ordenado

El material necesario debe prepararse antes de empezar a trabajar y colocarse de forma adecuada para que se facilite su utilizacin asi se evitarn
accidentes y se minimizar el riesgo de contaminacin
Nunca se debe pipetear con la boca. Utilizar siempre elementos manuales o automticos.
Todo el material utilizado debe estar estril.

1. Elementos y materiales ms frecuentes de un laboratorio de Microbiologa Clnica

1.1. Mesas de laboratorio y fregadero

1.2. Vitrinas y armarios

1.3. Mechero Bunsen

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Todas las manipulaciones deben realizarse en un radio de 10-15cm de la llama del mechero (zona asptica).
En caso de utilizar mechero nunca se debe coger material por encima de la llama
Antes de comenzar a trabajar se procurar disponer de todo el material necesario para el procesamiento de la muestra
Tomar las medidas necesarias para evitar la contaminacin de las muestras o/ y cultivo por microorganismos ambientales

1.4. Gradillas

1.5. Estufa de incubacin


Es una cmara de temperatura controlada para cultivo de microorganismos.

Se utiliza para facilitar el desarrollo de los microorganismos a su temperatura ptima de crecimiento (generalmente 35-37).

1.6. Frigorfico o cmaras refrigeradas

Se utilizan para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como microorganismos.
Generalmente estn a una temperatura fija de 4C.

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1.7. Congeladores
Se utilizan para la conservacin de reactivos y microorganismos a temperaturas inferiores a 0C, llegando a -80C (los ms frecuentes
son -20, -40 y -80).

1.8. Microscopio ptico

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1.9. Centrfuga
Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza centrfuga lo que permite la separacin de los distintos componentes de la muestra
mediante la precipitacin en el fondo del tubo de las partculas en suspensin.

1.10. Cmaras de seguridad biolgica (ver practica 2)

1.11. Desionizador de agua.

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La mayor parte de los trabajos que se realizan en un laboratorio de Microbiologa Clnica necesitan la utilizacin de agua pura con el
fin de evitar cualquier tipo de interferencia. Entre otra caractersticas debe: estar exenta de materiales en suspensin o un pH
comprendido entre 5,0 y 7,5. Durante aos se ha utilizado agua destilada, en la actualidad los destiladores se han ido abandonando
para dar paso a desionizadores que funcionan con resinas de intercambio inico. Tambin se pueden utilizar otras tcnicas como la
smosis inversa.

1.12. Contador de colonias: Es un aparato que mediante la iluminacin de la placa y una lupa, nos permite observar con mayor
nitidez las colonias y por tanto facilita su recuento.

1.13. Balanzas

1.14. Baos termostticos: son recipientes que contienen agua y un sistema de regulacin de la temperatura. Se utilizan para
atemperar medios de cultivo o incluso para incubar cultivos de microorganismos.

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1.15. Agitador/ mezclador

vortex agitador horizontal

1.16. Jarras de anaerobios:


Recipientes que se usan para conseguir una atmsfera libre de oxgeno para el cultivo de microorganismos anaerobios.

1.17. Asas de siembra:


Se utilizan para sembrar. Pueden ser metlicas o de plstico, curvas o rectas (para la siembra por picadura).

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1.18. Ph-metros:

1.19. Material fungible

Placas de Petri: recipientes para la preparacin de medios de cultivo slidos

Placas de Petri con medio slido

Tubos con medio lquido

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Tubos con medio slido

Pipetas de vidrio, de plstico y pipeteadores.

Pipetas

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Pipeteador automtico Pipeteador manual

Pipetas automticas (micropipetas) y puntas de pipeta:


Se utilizan para pipetear pequeas cantidades de lquidos.
Se utilizan con puntas desechables de distinto tamao y color segn la micropipeta. Existen cuatro tamaos: de 0,5-2m; de 2-20 m;
de 20-200 m y de 200-1000 m.

Asas acodadas o Asas de Digralsky:


Se utilizan para la extensin de microorganismos sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri.

Portas y cubres
Para realizar las observaciones al microscopio.

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Vasos de precipitados y matraces

Cucharas y esptulas:
Se utilizan para pesar muestras o medios de cultivo.

rea de limpieza de material y eliminacin de residuos

Zona donde se procede a la esterilizacin mediante autoclave del material utilizado. El material desechable se elimina y con el material reciclave se
procede a la eliminacin de residuos y lavado. De esta manera el material queda dispuesto para ser utilizado.

rea de esterilizacin
Procedimiento por el que se consigue la muerte de todos los organismos vivos y formas de resistencia en un objeto o producto tratado.

Autoclave
Es el equipo ms utilizado.
Es un procedimiento de esterilizacin mediante calor hmedo. Se realiza en al autoclave durante 15 20 min, segn el volumen, a 115C
121C, segn la naturaleza del material que se desee esterilizar.

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Autoclavado: es un procedimiento en el que se emplea vapor a presin (a 1 atmsfera). Como tiene gran poder de penetracin la temperatura y el
tiempo utilizados son menores que los que se emplean con el horno Pasteur (121 C, 15-20 minutos).

Se utiliza para esterilizar: Medios de cultivo, ropa, material de plstico resistente al calor hmedo, objetos de metal que no se alteren con la
humedad y sobre todo material de vidrio.

Horno de Pasteur: emplea altas temperaturas (160-180 C) durante un tiempo prolongado (1.5 a 3 horas). Debido a su poca capacidad de
penetracin se usa para esterilizar vidrio y metales. Acta principalmente desnaturalizando las protenas y secundariamente oxidando los
compuestos celulares.

rea de preparacin de medios


Almacn de reactivos
rea de seguridad microbiolgica
Debe ser una zona diferenciada y aislada para la manipulacin de microorganismos susceptibles de formar aerosoles potencialmente infecciosos.

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