nº57 / Septiembre 2020
Detección de la COVID-19 con biosensores basados en
transistores de grafeno
Detection of COVID-19 disease using graphene-based
biosensors
Francisco Gámiz, Carlos Sampedro, Carlos Navarro, Norberto Salazar, Luca Donetti, Carlos Márquez, José Luis
Padilla, Cristina Medina, José Carlos Galdón
Laboratorio Singular de Nanoelectrónica, Grafeno y Materiales Bidimensionales
Centro de Investigación en Tecnologías de la Información y de las Comunicaciones (CITIC), Universidad de Granada
Email: fgamiz@ugr.es
Resumen
El grafeno es un material bidimensional formado
por una lámina de un átomo de espesor de átomos
de carbono unidos mediante enlaces covalentes
y distribuidos siguiendo un patrón hexagonal.
Esta estructura le proporciona unas propiedades
físicas excepcionales, lo que lo hacen un candidato
idóneo para la fabricación de biosensores. El
laboratorio de Nanoelectrónica, Grafeno y Materiales
Bidimensionales de la Universidad de Granada,
trabaja en el desarrollo de un dispositivo basado en
una matriz de sensores de grafeno para la detección
del SARS-COV-2. El sistema de análisis será portátil,
autónomo, de fácil manejo, rápido (segundos desde
la toma de la muestra al resultado) y ultrasensible
para detectar inmunoglobulinas (Igs) frente a la
proteína S del SARS-CoV-2.
Abstract
Graphene is a two-dimensional material made up
of a one-atom-thick sheet of carbon atoms joined
by covalent bonds in a hexagonal pattern. This
structure provides it with exceptional physical
properties, making it an ideal candidate to be used
in the development of biosensors. The Laboratory
of Nanoelectronics, Graphene, and Bidimensional
Materials at the University of Granada is working on
the development of a device based on an array of
graphene sensors for the detection of SARS-COV-2.
The analysis system will be portable, autonomous,
easy to use, fast, and ultrasensitive for the detection
of immunoglobulins (Ig) against the protein S of
SARS-CoV-2 virus.
1. Introducción
La COVID-19 es una enfermedad infecciosa causada
por el virus SARS-CoV-2 [1]. A 1 de Septiembre de
2020, hay más de 25 millones de casos confirmados,
cerca de 850.000 fallecidos, y las economías de
muchos países seriamente afectadas [2]. Ante la
ausencia de tratamientos terapéuticos efectivos,
y vacunas eficientes, las pruebas de diagnóstico
son la única forma eficiente de rastrear y controlar
la propagación del SARS-CoV-2. La Organización
Mundial de la Salud (OMS) recomienda pruebas
diagnósticas masivas a nivel mundial. La demanda
de pruebas COVID-19 se estima en más de 600
millones, 120 millones de pruebas genéticas y más
16 de 500 millones de pruebas rápidas, lo que implica
una necesidad de soluciones tecnológicas que
permitan un acceso rápido y fiable al diagnóstico de
COVID-19 en respuesta a la pandemia global.
La técnica estándar de referencia para el diagnóstico
fiable de COVID-19 es la RT-qPCR (real time
quantitative reverse transcriptase polymerase chain
reaction) [3], que requiere un tiempo de procesado
de 2 a 4 horas y un entorno de laboratorio clínico
con personal altamente especializado. Además
de las pruebas genéticas, las pruebas serológicas
de flujo lateral, llamadas “pruebas rápidas”, se
están convirtiendo en herramientas centrales
en la lucha contra la pandemia. Estas se basan
en el reconocimiento antígeno-anticuerpo: los
anticuerpos del paciente reconocen las proteínas
virales marcadas y proporcionan resultados en
varios minutos. Su principal problema es que son
cualitativas y sólo informan de la presencia de
anticuerpos, lo que indica una infección activa o el
haber pasado dicha infección. Existe por lo tanto
un “gap” en el diagnóstico de la COVID-19 que es
necesario cubrir con sistemas que proporcionen una
sensibilidad y precisión equiparables a las RT-qPCR
y con tiempos de respuesta y sencillez de manejo
de los test rápidos, y que permitan conocer el curso
de la enfermedad incluso en periodos prepatentes,
y todo ello fuera del entorno de un laboratorio
clínico, es decir, en aeropuertos, estaciones de
tren y autobuses, colegios, universidades, oficinas,
residencias de ancianos, etc.. El Laboratorio de
Nanoelectrónica de la Universidad de Granada
participa en varias iniciativas cuyo objetivo es el
desarrollo de un dispositivo preciso de detección
inmunológica para evaluar el estado de la infección de
una persona por SARS-CoV-2 utilizando un sistema
microfluídico integrado en una matriz de sensores
FET de grafeno. El sistema de análisis será portátil,
autónomo, de fácil manejo, rápido (segundos desde
la toma de la muestra al resultado) y ultrasensible
para detectar inmunoglobulinas (Igs) frente a la
proteína S del SARS-CoV-2. Específicamente, el
dispositivo detectará:
1. infección temprana (incluso asintomática)
cuantificando anticuerpos en saliva.
2. el curso de la infección en la fase aguda y
3. la superación de la infección y la potencial
inmunización del individuo mediante la
determinación de anticuerpos en plasma
sanguíneo.

La determinación del estado pre-sintomático de la
enfermedad es de vital importancia para controlar la
difusión de la misma, ya que en el caso de la COVID-
19 una persona podría estar infectada y propagar el
virus previo a su sintomatología.
Aunque los biosensores modernos ofrecen una
sensibilidad y selectividad notables, el uso de grafeno
reduce significativamente el umbral de detección al
tiempo que proporciona la capacidad de determinar
simultáneamente múltiples biomarcadores.
Es necesario disponer de varios sensores
funcionalizados de manera diferente en la misma
capa de grafeno. Por ello proponemos el desarrollo
de un chip microfluídico integrado sobre una matriz
de sensores FET de grafeno en cuya superficie se
han inmovilizado antígenos recombinantes (aislados
y purificados) sensibles a inmunogobulinas.
2. Biosensores
Según la International Union of Pure and Applied
Chemistry (IUPAC) [4] un biosensor es un dispositivo
de medida formado por la integración de tres
componentes:
1. una molécula bioactiva capaz de reconocer
y reaccionar con la sustancia que se pretende
analizar (analito);
2. un transductor físico-químico íntimamente
conectado con la molécula bioactiva y capaz de
generar una señal susceptible de ser amplificada
cuando se produce la interacción específica con
el analito.
3. un dispositivo electrónico que amplifica y trata la
señal.
La figura 1 esquematiza el funcionamiento de
un biosensor. El receptor bioactivo interacciona
específicamente con las moléculas de analito para
las que está diseñado. Como consecuencia de esta
Bol. Grupo Español Carbón
interacción se produce una señal eléctrica en el
transductor. Las características más destacables de
estos dispositivos, que los convierten en opciones
altamente atractivas como herramientas analíticas,
son: su especificidad, alta sensibilidad, capacidad
de respuesta que conduce a un corto tiempo de
análisis, su capacidad de inclusión en sistemas
integrados, facilidad de automatización, capacidad
de trabajar en tiempo real, su versatilidad y bajo
coste, entre otras. Por tales motivos, los biosensores
han recibido especial atención durante los últimos
años. Actualmente el desarrollo de biosensores
compromete a diferentes campos de investigación
que convergen en tres líneas fundamentales:
1. elementos de reconocimiento molecular,
2. herramientas y técnicas para su construcción y
3. diseño de dispositivos sensores básicos.
Como elementos de reconocimiento se han utilizado
numerosos instrumentos biológicos como las
enzimas, anticuerpos, cadenas de ácidos nucleicos
(ADN) y proteínas. Las cada vez más consolidadas
técnicas de microfabricación, incluidas las de
fabricación a nanoescala, han abierto un panorama
de gran porvenir para el desarrollo y aplicación de
los biosensores, dada la reducción de costes que la
miniaturización conlleva y la posibilidad de producirlos
a gran escala. Si además estos biosensores
se integran en una plataforma microelectrónica
integrada CMOS (Complementary Metal Oxide
Semiconductor) su procesamiento posterior es
mucho más sencillo, lo que incide en bajos costes,
alta fiabilidad y rendimiento en el proceso de
integración y fabricación, alta integración, lo que a
su vez permite su uso lejos de centros hospitalarios
(Laboratory-on-Chip, Point-of-care).
Figura 1. Esquema de funcionamiento de un biosensor.
Figure 1. Functional diagram of a bionsensor.
17
nº57 / Septiembre 2020
3. Grafeno: qué es y cómo se obtiene.
Las propiedades físicas de los materiales dependen
de los átomos que los constituyen y del tipo de enlace
químico que se produce entre esos átomos. De
hecho, existen en la naturaleza diferentes materiales
sólidos cristalinos, con exactamente la misma
composición química, pero en los que los átomos
que los constituyen se unen de forma distinta, lo
que les confiere propiedades distintas. Son los
denominados alótropos. El carbono, que es el cuarto
material en abundancia en el universo y el quinceavo
en la corteza terrestre, presenta diferentes formas
alótropas siendo el diamante y el grafito las más
abundantes. A pesar de ser químicamente la misma
sustancia, carbono puro, las propiedades físicas de
ambos materiales son completamente diferentes. El
diamante que une sus cuatro electrones de valencia
mediante fuertes enlaces covalentes con otros cuatro
átomos de carbono siguiendo una estructura cubica
centrada en las caras y denominada estructura del
diamante, es el material más duro de la corteza
terrestre (10 en la escala de Mohs) es transparente
Figura 2. Estructuras cristalinas del diamante y el grafito.
Figure 2. Crystalline structure of diamond and grafite.
Precisamente cada una de estas capas de un solo
átomo de espesor se conocen con el nombre de
grafeno y aunque se conocía teóricamente desde
los años 50 [5], durante muchos años se consideró
que era imposible obtenerlo de forma aislada pues
se creía que como película monoatómica sería
termodinámicamente inestable. Sin embargo, en el
año 2004, en el laboratorio de los profesores Andre
Geim y Konstantin Novoselov en la Universidad de
Manchester en el Reino Unido se consiguió aislar
experimentalmente por primera vez una lámina
monoatómica de grafeno a partir de la exfoliación
mecánica de grafito pirolítico altamente orientado
(2004) [6]. Este descubrimiento les valió a Geim y
Novoselov el premio Nobel de Física en 2010 [7]. En
un experimento poco convencional, Geim y Novoselov
utilizaron una estructura de grafito tridimensional a la
que mediante una cinta adhesiva fueron despegando
láminas de grafeno. Recursivamente aplicaron la
misma técnica a la parte adherida a la cinta adhesiva
18
y aislante eléctrico. Por el contrario, el grafito es un
material opaco, muy blando (de 1 a 2 en la escala
de Mohs) y buen conductor eléctrico. A diferencia
del diamante, en el grafito los átomos de carbono
solo utilizan tres de sus electrones de valencia para
formar enlaces covalentes con otros átomos de
carbono en el mismo plano, disponiéndose éstos
en una estructura plana hexagonal o de “panel de
abeja” en la que cada átomo de carbono ocupa un
vértice del hexágono base. El apilamiento de estos
planos mediante fuerzas de van der Waals, mucho
más débiles que los enlaces atómicos, da lugar a
la estructura del grafito, y a sus propiedades. Las
débiles fuerzas de van der Waals hacen que el grafito
se exfolie fácilmente, es decir, se descomponga
en capas ó láminas, bajo una pequeña presión,
propiedad que se utiliza desde la el siglo XVI para
escribir, y que le ha dado el nombre al material (el
término grafito deriva del griego γραφειν (grafein)
que significa “escribir”). La figura 2 muestra las
estructuras cristalinas del diamante y el grafito:
hasta quedarse únicamente con una capa de un
átomo de espesor que colocaron sobre un substrato
de SiO2/Si. De esta forma no sólo demostraron que
era posible aislar una capa bidimensional de un solo
átomo de espesor, sino que además, aplicando una
tensión al substrato de silicio, demostraron que era
posible modular la conductividad de la lámina de
grafeno por efecto del campo eléctrico transversal
generado.
Precisamente esta estructura hexagonal
bidimensional de un solo átomo de espesor, también
conocida como “honeycomb” o panel de abeja,
le confiere al grafeno unas propiedades físicas
espectaculares, tanto estructurales como eléctricas,
ópticas y térmicas. El grafeno es un material muy
resistente, flexible y transparente con excelentes
propiedades conductoras tanto térmicas cómo
eléctricas. Es alrededor de 200 veces más resistente
que el acero, más duro que el diamante, tan ligero
como las fibras de carbono, pero aún más flexibles

que éstas, tan denso que ni el helio puede penetrarlo
y conduce la electricidad mejor que el cobre. El
grafeno es un material muy ligero: una lámina de
un metro cuadrado pesa tan sólo 0,77 miligramos,
y con un gramo podríamos cubrir completamente la
superficie de un estadio de fútbol. La movilidad de los
portadores de carga en el grafeno es extremadamente
alta lo que lo hace un material con una conductividad
eléctrica excepcional. Es químicamente estable y
sus propiedades eléctricas son muy sensibles a
su entorno, que pueden modificarse mediante la
aplicación de campos eléctricos o con la colocación
de especias cargadas próximas a su superficie.
Precisamente gracias a esta última propiedad, el
grafeno puede emplearse como canal en dispositivos
de efecto campo (Field-Effect transistors, FET) [6]
. Un transistor de efecto campo es un dispositivo
electrónico en el que la conductividad de un trozo
de material llamado canal (en este caso grafeno)
y que contacta a dos zonas de alta concentración
de portadores de carga (drenador (drain), y fuente
(source) generalmente metales como cromo (Cr)
y oro (Au)) puede modificarse significativamente
dependiendo del valor de un campo eléctrico externo
aplicado y que se controla con la tensión aplicada
a un terminal denominado puerta y que se acopla
capacitivamente al grafeno mediante un aislante
(SiO2) o una solución electrolítica (Figura 3) [8], [9].
Figura 3. (a)Transistor de efecto campo de grafeno (GFET) con
puerta posterior. (b) Transistor GFET con puerta de electrolito.
Figure 3. (a) Graphene Filed Effect transistor with back gate. (b)
Graphene FET with liquid gate.
Las figuras 3-a y 3-b muestran un esquema de un
transistor FET de grafeno: sobre un substrato de
SiO2/Si se depositan los contactos metálicos (Cr/
Au) de drenador y fuente, y entre estos se coloca
la monocapa de grafeno. Si se aplica una diferencia
de tensión entre los contactos de drenador y fuente,
se establece entre ellos una corriente eléctrica,
Bol. Grupo Español Carbón
corriente de drenador, ID, cuyo valor depende de
la tensión aplicada al terminal de control, o puerta
(Gate). Las características eléctricas (curva ID-VG)
del transistor FET de grafeno presentan un claro
comportamiento ambipolar. En equilibrio, es decir, sin
tensión aplicada, se obtiene el mínimo de corriente,
también conocido como punto de Dirac [10].
Figura 4. (a) Características eléctricas del transistor FET de
grafeno (b) Desplazamiento de las características eléctricas del
transistor FET de grafeno al colocar cargas en su superficie.
Figure 4. (a) Electrical characteristic of a GFET. (b) Drift of I-V
curves in a GFET after the deposition of charges in the surface of
the graphene.
Aplicando una tensión positiva a la puerta, aumenta
la concentración de electrones (portadores de carga
negativa) que son los responsables de la conducción,
y aumentando por tanto la corriente. Cuando se
aplica una tensión negativa a la puerta, se produce
un aumento de huecos (carga positiva) en el grafeno,
que son ahora los responsables de la conducción
de corriente. De esta forma, la curva característica
corriente/tensión (I/V) tiene forma de valle, de ahí
el comportamiento ambipolar (Figura 4-a). Además,
la posición del punto de Dirac en un transistor FET
de grafeno puede controlarse mediante la adición
de cargas eléctricas en la superficie del grafeno.
La presencia de cargas positivas en la superficie
desplaza el punto de Dirac hacia tensiones negativas,
mientras que la presencia de cargas negativas en la
superficie del grafeno desplaza el punto de Dirac
hacia tensiones positivas (Figura 4.b). Este último
resultado será clave para la utilización de transistores
de efecto campo de grafeno como biosensores.
19
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Obtención de grafeno
A pesar de sus excelentes propiedades, a día de hoy
existe la problemática de no haber encontrado un
método económico y escalable, que permita obtener
muestras de grafeno de tamaño lo suficientemente
grande como para poder ser usado a nivel industrial.
Figura 5. Métodos de obtención de grafeno.
Figure 5. Methods of growth os graphene.
Por este motivo, en la actualidad existe un amplio
abanico de técnicas para producir grafeno, las cuales
suelen agruparse en técnicas “top-down”, cuando se
obtienen estructuras de espesor nanométrico a partir
de un material de mayores dimensiones (método
de exfoliación mecánica), o “bottom-up”, en los que
se parte de los átomos de carbono, generalmente
en forma gaseosa, generados mediante la
descomposición de moléculas orgánicas, para formar
la estructura del grafeno (métodos de crecimiento
epitaxial, deposición química de vapor o síntesis
química).
a) Exfoliación mecánica
La exfoliación mecánica se refiere al proceso en el
que se utiliza la fuerza mecánica para separar las
capas de grafeno del grafito. Esto implica bien utilizar
una cinta adhesiva para fijar la superficie del grafito
y el uso de la fuerza para despegar la cinta junto a
las capas de grafeno que se han quedado adheridas
a la misma, o frotar la superficie del grafito contra
otro material para desprender las láminas de grafeno
del volumen. Este método es posible gracias al débil
acoplamiento de tipo van der Waals entre las capas
de grafeno que constituyen el grafito. La facilidad
de producción y el bajo coste en el instrumental
requerido, hacen que la exfoliación del grafito sea la
técnica más generalizada para preparar el grafeno
[11]. La exfoliación micromecánica con cinta adhesiva
es fácil y rápida, y proporciona grandes láminas de
grafeno (varias micras) de alta calidad que son útiles
para diversos estudios a nivel de laboratorio (usando
esta técnica, Geim y Novoselov consiguieron
obtener, de forma fiable y reproducible, películas de
grafeno de pocas capas con tamaños de hasta 10
μm y espesores de menos de 10 nm). El principal
inconveniente de esta técnica es que no proporciona
20
el suficiente rendimiento de producción para su
uso en aplicaciones que no sean exclusivamente
experimentales. Además, la pureza del material a
menudo se ve afectada, ya que pueden aparecer
restos de agentes exfoliantes y se pueden introducir
varios tipos de defectos, como defectos atómicos,
arrugas, u ondulaciones microscópicas, debido a las
tensiones inducidas en la capa de grafeno durante la
deposición sobre el sustrato final.
b) Crecimiento epitaxial
La epitaxia utiliza la estructura atómica de un
sustrato cristalino para sustentar el crecimiento de
un material depositado sobre éste. En el caso del
crecimiento epitaxial de grafeno se utiliza carburo
de silicio (SiC) como substrato. Tras un proceso
de calentamiento a temperaturas muy elevadas,
alrededor de los 1200ºC, y en condiciones de
ultra alto vacío (UHV), se produce la sublimación
de los átomos de silicio de las capas superiores,
dejando atrás los átomos de carbono del SiC que
se reordenan para formar algunas capas de grafeno
sobre la superficie [12]. El número de capas puede
controlarse limitando el tiempo o la temperatura en
la etapa de calentamiento. La calidad y el número de
capas en las muestras también dependen de la cara
de SiC utilizada para su crecimiento: la superficie
terminada en carbono produce pocas capas, pero
estas tienen una baja conductividad, mientras que
la superficie terminada en silicio produce varias
capas de grafeno pero con conductividad movilidad.
Los valores de conductividad medidos en el grafeno
epitaxial son inferiores a los medidos en el grafeno
exfoliado [13]. Se ha comprobado que las películas de
grafeno preparadas en UHV exhiben una morfología
rugosa y muestran áreas de diferentes grosores,
que potencialmente podrían ser responsables de la
disminución de la movilidad registrada para estas
películas.
c) Deposición química en fase de vapor (CVD)
Una de las técnicas más populares para la síntesis a
gran escala de películas de grafeno es la deposición
química de vapor (CVD) sobre superficies de
metal, debido a su bajo coste, reproductibilidad
y razonablemente alta calidad de producción
[14]. A diferencia de las láminas disgregadas
aleatoriamente que se obtienen en los métodos de
exfoliación, el crecimiento por CVD produce grandes
superficies de grafeno continuas y uniformes,
aunque no necesariamente monocristalina. Aunque
históricamente, la formación de las capas de grafito
a partir del procesado de metales de transición
y la exposición a fuentes de carbono en forma de
hidrocarburos o de carbono evaporado se conoce
desde hace más de 50 años [15], el actual interés
sobre este material ha llevado a una renovada
tendencia por obtener láminas de grafeno con un
número de capas controlado, sobre varios tipos de
sustratos de metal (Ni, Co, Ru, Ir, Re, Pt, Pa y Cu
entre otros) mediante esta técnica de deposición.
 Bol. Grupo Español Carbón

Figura 6. Esquema de crecimiento de grafeno por el método CVD. 1 y 2) Horno CVD en el laboratorio de Nanoelectrónica de la UGR;
3) Sustrato de cobre; 4) Introducción del sustrato de cobre en el tubo de cuarzo; 5) Reducción de la superficie del cobre y crecimiento
de grafeno; 6) Eliminación del substrato de cobre mediante ataque químico con cloruro férrico; 7) Enjuague de la lámina de grafeno
en agua desionizada; 8) Transferencia sobre substrato PET (tereftalano de polietileno); 9) Resultado final.
Figure 6. Growth of Graphene by CVD method. 1 and 2) CVD furnace at Nanoelectronics Laboratory at UGR; 3) copper foil; 4)
Introduction of copper foil inside the quartz tube; 5) Reduction of copper surface and graphene growth; 6) Etching of copper foil by
chemical attack; 7) Rinse of graphene in de-ionized water 8) Transfer of graphene to PET (polyethylene terephthalate); 9) Final result.

Para el crecimiento CVD se introduce en un horno de “peeling” electroquímico ó mecánico [16].

cuarzo una delgada lámina policristalina de un metal
(generalmente Cu o Ni) y se calienta a una temperatura
en el rango de 950 a 1050ºC generalmente a baja
presión y en un ambiente rico en hidrógeno y argón
para producir la reducción de la superficie del metal
y eliminar el posible óxido que pudiese encontrarse
en la misma. Una vez alcanzada la temperatura
y realizado el “annealing” se introduce la fuente
gaseosa de carbono, habitualmente metano, CH4 o
acetileno C2H2.
El crecimiento del grafeno es consecuencia de la
descomposición catalítica y la posterior segregación
o adsorción de átomos de carbono, durante las
etapas de calentamiento y enfriamiento del substrato
metaestable catalizador como es el caso del
substrato de cobre empleado. El potencial catalítico
de los metales de transición, surge de que estos
proporcionan fases de baja energía para llevar a
cabo las reacciones, cambiando los estados de
oxidación fácilmente o mediante la formación de
compuestos intermedios que pueden absorber y
activar el medio de reacción. Una vez que el carbono
se ha descompuesto, este puede ser absorbido por
el metal y luego precipitar para formar grafeno en su
superficie.
Una vez obtenido el grafeno sobre el substrato
metálico, el paso siguiente es la separación del
grafeno del substrato, operación que puede
realizarse mediante diferentes métodos desde el
ataque químico y disolución del metal, hasta el
Después de la separación del grafeno del substrato
metálico, éste se transferiere a otros sustratos,
proporcionando capas de grafeno de alta calidad sin
tratamientos mecánicos o químicos complicados, y
sobre el que puede fabricar dispositivos electrónicos
utilizando técnicas de fabricación de la industria
microelectrónica.
d) Reducción de óxido de grafeno
El término “óxido de grafeno”, es el nombre que se da
al grafeno que ha sido tratado por un fuerte oxidante
para alterar la naturaleza cristalina de su red atómica
incorporando grupos funcionales epóxido e hidróxilo.
En la actualidad, la síntesis química del óxido de
grafeno a partir del grafito, ha surgido como una ruta
viable para producir láminas de grafeno a gran escala
[17]. Por lo general, el óxido de grafito se sintetiza
a través de la oxidación del grafito, basándose en
el método de Hummers [18], en el que se utilizan
oxidantes como el ácido sulfúrico concentrado
(H2SO4), el ácido nítrico concentrado (HNO3) y el
permanganato potásico (KMnO4). La reacción sólo
tarda 2 horas en completarse y la temperatura no
sobrepasa los 45ºC, minimizando la posibilidad de
explosión durante el proceso. Comparado con el
grafito prístino, el óxido de grafeno está fuertemente
oxigenado, portando grupos funcionales hidroxilo
(-OH) y epóxido (C-O-C) en el plano basal de los
átomos de carbono de hibridación sp3, además
21
nº57 / Septiembre 2020

de los grupos carboxilo (COOH) situados en los
bordes de la lámina de hibridación sp2 del carbono.
Estos grupos funcionales proporcionan una amplia
variedad de reacciones de modificación de superficie
para desarrollar materiales basados en óxido de
grafeno funcionalizado, lo que abre nuevas vías
para la combinación del grafeno con otros materiales
y superficies para mejorar su aplicabilidad. Sin
embargo, debido a la alteración de la estructura
electrónica provocada por estos grupos funcionales,
el óxido de grafeno contiene defectos y desordenes
irreversibles que degradan sus propiedades eléctricas
haciéndolo eléctricamente aislante, aunque su
posterior reducción, puede restaurar parcialmente
la conductividad, pero a valores siempre por debajo
de los del grafeno prístino [19]. Esto hace que este
método sea menos atractivo, en comparación con la
exfoliación mecánica, para aplicaciones que sean
muy estrictas en cuanto a los requisitos de calidad
del cristal. Una vez que el grafito ha sido oxidado,
este puede exfoliarse ya sea por sonicación o por
una agitación prolongada en agua, produciendo una
dispersión homogénea e indefinidamente estable
que consiste principalmente en láminas de una sola
capa (óxido de grafeno). La naturaleza hidrófila
del óxido de grafeno implica que las moléculas de
agua se pueden intercalar fácilmente en el óxido
de grafito, provocando la separación interlaminar.
Además, las cargas superficiales en el óxido de
grafeno son altamente negativas cuando se dispersa
en agua, debido a la ionización del ácido carboxílico
y los grupos hidroxilo fenólicos [20], provocando una
repulsión electrostática que evita que los coloides
de óxido de grafeno se re-agreguen. Finalmente,
el óxido de grafeno puede ser depositado como
una película fina sobre casi cualquier superficie, y
convertirse a grafeno (u óxido de grafeno reducido)
por métodos químicos que suponen el uso de
agentes reductores como la hidracina (N2H4) [19] o el
borohidruro de sodio (NaBH4) [21], ácido L-ascórbico
[22], o por tratamientos térmicos o fototérmicos
mediante láser [23]. Este método presenta cuatro
ventajas fundamentales frente a los procedimientos
de reducción química:
1. Permite controlar la eficiencia de reducción a
través de la potencia fototérmica aplicada con el
láser. Las variables de control son la potencia del
láser, la longitud de onda del láser y la velocidad
de excursión del haz sobre la superficie de la
muestra.
2. El láser controlado por una unidad de control
numérico (CNC) permite realizar patrones
litográficos directamente, sin necesidad de
un proceso litográfico posterior o el uso de
máscaras. La resolución viene determinada por
el sistema de posicionamiento del láser.
3. Es un procedimiento económico (sólo es
necesario invertir inicialmente en la adquisición
de los equipos láser).
4. Es un procedimiento ecológico (frente a otras
aproximaciones que requieren del uso de
reactivos que provocan reacciones altamente
exotérmicas como la hidrazina).
En la Figura 7.b se muestra una fotografía de un
equipo de reducción láser de baja potencia. La
Figura 7.c presenta un ejemplo de muestra de
óxido de grafeno, con motivos litográficos en forma
de cuadrado de 1cm x1cm de óxido de grafeno
reducido a potencias de láser crecientes. A medida
que la potencia del láser aumenta, el óxido de
grafeno va perdiendo su transparencia tornándose
oscuro, consecuencia de la recuperación de las
estructuras grafíticas. El procedimiento de reducción
láser permite modular la conductividad de la muestra
directamente a través de la potencia fototérmica de
forma muy precisa.

Figura 7. (a) Esquema del proceso de reducción laser; de izquierda a derecha: lámina de óxido de grafeno presentando grupos
funcionales; proceso de reducción fototérmico láser; óxido de grafeno reducido una vez eliminados los grupos funcionales. (b) Detalle
de unas de las unidades de control numérico (CNC) con una cabeza láser. (c) Detalle de una muestra de óxido de grafeno con motivos
cuadrados de 1cm2 de óxido de grafeno reducido obtenidos a potencias láser crecientes.
Figure 7. (a) (a) Illustration of GO reduction with laser diode irradiation; from left to right: layer of graphene oxide with a large amount
of functional groups; the functional groups are broken during the reduction process for obtaining the partial restoration of the graphene
layers, although some defects remain in the structure (right). (b) Image of the experimental setup based on a numerical control unit with
interchangeable laser head. (c) An example of 1 cmx1cm rGO samples on a PET substrate reduced at increasing laser power intensities.
22

La modulación de la conductividad permitirá crear
zonas aislantes que constituyan la pasivación
de los circuitos (óxido de grafeno sin reducir), y
zonas conductoras que pueden formar las líneas
de conducción o los electrodos (óxido de grafeno
completamente reducido). Todo ello bajo un
mismo proceso litográfico cuya resolución viene
determinada por el sistema de control numérico
del láser. Este procedimiento ya se ha mostrado
efectivo para la fabricación de circuitos eléctricos
pasivos básicos como estructuras condensadores
y filtros (Figura 7.c). Al realizarse el proceso de
reducción y la fotolitrografía en el sustrato final
que soporta el circuito, no son necesarios los
procesos de transferencia que pueden degradar las
características eléctricas. Además, el sustrato final
puede ser flexible como el ejemplo de la Figura 7.c
en el que se ha empleado un sustrato de tereftalano
de polietileno (PET).
4. Biosensores basados en transistores de
grafeno
Como se mencionó anteriormente, la posición del
punto de Dirac en un transistor FET de grafeno
puede controlarse mediante la adición de cargas
eléctricas en la superficie del grafeno. La presencia
de cargas positivas en la superficie desplaza el punto
de Dirac hacia tensiones negativas, mientras que la
presencia de cargas negativas en la superficie del
grafeno desplaza el punto de Dirac hacia tensiones
positivas (Figura 4.b). Las biomoléculas (DNA,
microRNA, proteínas, antígenos, anticuerpos, etc.)
cuando se fijan a la superficie del grafeno quedan
cargadas positiva o negativamente [24], resultando
en el desplazamiento del punto de Dirac. Por lo
tanto, se pueden detectar proteínas e iones mediante
desplazamientos del punto de Dirac en transistores
FET de grafeno [25].
De esta forma, se han desarrollado biosensores
basados en GFETs mediante la fijación de
biomoléculas diana sobre la superficie del grafeno.
Por ejemplo, Chen et al. [26] han desarrollado un
método rápido para la detección de la Escherichia
Coli usando un FET de óxido de grafeno reducido.
Kim et al. [27] han desarrollado un GFET para
detectar un biomarcador de cáncer de próstata a
nivel femtomolar. Ohno et al. [28] usaron un GFET
con puerta de electrolito para la detección de la
adsorción de proteínas sobre la superficie del
grafeno sin ninguna funcionalización de grafeno. Li
et al. [29] construyeron un GFET con puerta líquida
sobre grafeno CVD para detección de DNA sin
etiquetas (label-free DNA). La superficie de grafeno
se funcionalizó con sondas de DNA para la detección
del DNA diana complementario con un límite muy
bajo de detección (1pM).
Recientemente, Cai et al. [30] han desarrollado un
biosensor GFET a partir de óxido de grafeno reducido
que permite la detección de DNA en concentraciones
tan bajas como100fM, un orden de magnitud
inferior a los límites reportados en biosensores
Bol. Grupo Español Carbón
GFET de DNA previos. La reducción en el límite
de detección se consigue gracias a la utilización
de PNA (ácido peptidonucleico) como sonda de
captura para funcionalizar la superficie del grafeno,
en vez de utilizar DNA. La detección se realiza a
través de la hibridación PNA-DNA que resulta en
un efecto dopante tipo p sobre el grafeno. Además,
estos autores han demostrado que la respuesta
del biosensor es altamente especifica ya que la
hibridación del PNA con DNA no complementario, o
DNA con un error en una base, no produce respuesta
alguna del sensor. Estos mismos autores, han
conseguido reducir el límite de detección a 10fM, en
este caso de microRNAs, usando grafeno decorado
con nanopartículas de oro sobre las que fijan las
sondas de PNA. Las partículas de oro actúan como
amplificadoras de la respuesta biológica [31].
Hay muchas ventajas al usar FETs de grafeno como
biosensores frente a los biosensores basados en
semiconductores convencionales, nanotubos de
carbono o nanohilos de silicio. La sensibilidad a
cambios de carga del FET de grafeno es grande
debido a que la razón área superficial/volumen del
grafeno es mayor que en dispositivos de volumen.
Para detectar las moléculas en una solución,
los biosensores tienen que estar sumergidos en
ellas. En el caso de materiales semiconductores
convencionales como Si y GaAs, es necesario
depositar una película de pasivación para evitar
la oxidación, puesto que estos materiales se
oxidan fácilmente en una solución sometidos a
una tensión pequeña. Por otro lado, el grafeno no
se oxida fácilmente, y por lo tanto los transistores
FET de grafeno pueden usarse en una solución
sin pasivación alguna. Los niveles de corriente que
pueden medirse en un FET de grafeno pueden ser
más de 1000 veces mayor que la corriente de un
nanotubo de carbono (CNT). En consecuencia, la
relación señal ruido en un GFET es mucho mayor
que la que se puede obtener en CNT-FETs.
Usando transistores FET de grafeno fabricados
en el Laboratorio de Nanoelectrónica, Grafeno y
Materiales Bidimensionales de la Universidad de
Granada, se está desarrollando un sistema de
diagnóstico de COVID-19, con la financiación de la
Junta de Andalucía y el Fondo Supera COVID de
la CRUE y el Banco de Santander. Este proyecto
es fruto de una colaboración con el grupo de
Bioquímica y Parasitología Molecular, del Instituto
de Biotecnología de la UGR, dirigido por el Prof.
Antonio Osuna, y con el grupo de Glicoquímica
y Biocojugación del Departamento de Química
Orgánica de la Universidad de Granada dirigido por
el Prof. Francisco Santoyo.
El dispositivo consiste en una matriz de sensores de
grafeno (varios sensores fabricados simultáneamente
sobre el mismo substrato y actuando sobre la misma
muestra a analizar) con un sistema microfluídico que
distribuye la muestra sobre los distintos sensores.
El sistema consta de un pequeño chip donde se
fabrican los sensores, y donde se depositará la
muestra del paciente a analizar. Este chip, que es
23
nº57 / Septiembre 2020
desechable y de bajo coste, se inserta en un equipo
electrónico portátil y autónomo que realiza la medida
eléctrica de los sensores y proporciona el valor de
Figura 8. Esquema de funcionamiento de un biosensor de grafeno para detección de anticuerpos de COVID-19
Figure 8. Functional diagram of a graphene biosensor for detection of COVID-19 antibodies
El esquema de funcionamiento del sistema de
detección se resume en la Figura 8. El primer
paso consiste en la fabricación del transistor FET
de grafeno usando técnicas microelectrónicas.
Se deposita la lámina de grafeno obtenido bien
por CVD, bien por reducción de óxido de grafeno,
sobre un substrato que puede ser SiO2/Si, cuarzo,
o incluso un substrato flexible como algún polímero.
A continuación, se depositan los contactos
metálicos de drenador y fuente sobre el grafeno.
Una vez fabricado el transistor el siguiente paso
es la modificación de la superficie del grafeno con
los bio-receptores, en nuestro caso, proteínas del
virus, sintetizadas y aisladas en los laboratorios de
la UGR y que son reconocibles por los anticuerpos
que queremos detectar. Este proceso se conoce
con el nombre de funcionalización de la superficie
del grafeno. Una vez funcionalizado el transistor se
recubre la superficie del grafeno con una solución
líquida electrolítica y un electrodo metálico (Ag/AgCl)
que constituirán el electrodo de control del GFET.
La medida de la corriente en el dispositivo entre
drenador y fuente cuando se aplica una pequeña
tensión constante al drenador, mientras se varia la
tensión del electrodo de control nos proporciona la
característica curva I-V en forma de “V” de donde se
obtiene el punto de mínima conductividad o punto de
Dirac (curva de control). A continuación, se añade
a la solución electrolítica la muestra del paciente a
analizar. En este momento pueden ocurrir dos casos:
a. La muestra del paciente contiene los anticuerpos
frente al virus SARS-COV-2 (representados por
las esferas en la figura). En este caso, se produce
la reacción antígeno-anticuerpo ya que los
bioreceptores inmovilizados en la superficie del
24 grafeno son específicos para estos anticuerpos.
la concentración de anticuerpos en saliva o plasma
del paciente, de forma muy rápida a partir de la
determinación de la corriente del transistor GFET.
Como consecuencia de esta reacción antígeno-
anticuerpo, se modifica la carga eléctrica en la
superficie de grafeno, y en consecuencia se
produce un desplazamiento del punto de Dirac,
∆V, que además es proporcional a la cantidad de
anticuerpos de la muestra analizada.
b. Por el contrario, si la muestra analizada no
contiene anticuerpos específicos frente al virus
SARS-COV-2 (puede contener otros anticuerpos,
representados con triángulos en la figura) no se
produce la reacción antígeno-anticuerpo, y por lo
tanto no se modifica la carga en la superficie de
grafeno, por lo que, al medir el sensor, obtenemos
una curva I-V similar a la curva de control, y sin
ningún desplazamiento apreciable del punto
de Dirac. De esta forma, y con una simple
medida eléctrica en un dispositivo portátil puede
cuantificarse la concentración de anticuerpos
frente al SARS-COV-2 de la muestra analizada.
5. Agradecimientos
Este trabajo ha sido financiado por la Junta de
Andalucía (proyecto CV20-36685) y el Fondo Supera
COVID19 de la CRUE-Banco Santander (Proyecto
DRAINCOV).
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