ia 385 TOXICOLOGÍA Y SALUD (1301) 07-11-22 .Tegucigalpa M.D.

UNIVERSIDAD CATOLICA DE HONDURAS

“NUESTRA SEÑORA REINA DE LA PAZ”
CAMPUS SAGRADO CORAZON DE JESUS

BIOENSAYO DE TOXICIDAD AGUDA CON

LARVAS Y JUVENILES DE LOS PECES
POECILIA RETICULATA

DOCENTE:
DRA MIRTHA FERRARY
ALUMNO: :
CARLOS ALBERTO MATAMOROS D'ELIA 0801-2000-18942
 I. Introducción 2

II. Fundamentos o principios de la prueba 2

III. Materiales e insumos necesarios para el montaje de la prueba 3

IV. Organismos de prueba 4

V. Control de Calidad de la prueba 5

VI. Procedimiento detallado de la prueba 8

VII. Expresión de los resultados de la prueba 9

Tabla 1:Valores de CL50, CE50, NOEC y LOEC para los parámetros evaluados ,

Fuente :Universidad Científica del Sur. Facultad de Ciencias Ambientales.

Panamericana Sur km 19.Lima-Perú 9

Tabla 2: Valores de significancia registrados, Fuente: Universidad Científica del

Sur. Facultad de Ciencias Ambientales. Panamericana Sur km 19.Lima-Perú 9

VIII. Conclusiones 10

IX. Reflexión sobre su aplicación en el contexto de la Ingeniería Ambiental y en Honduras 10

X. Referencias 11

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Introducción

Las pruebas ecotoxicológicas con peces son tradicionalmente empleadas en muchas partes
del mundo, ya que éstos juegan un papel importante dentro de la cadena alimenticia
(Iannacone & Alvariño 1998). Los peces consumen y controlan las poblaciones de insectos,
micro crustáceos y algas, y permiten de esta forma la recirculación, remoción y resuspensión
del material orgánico dentro del ecosistema. Debido a su gran importancia, se han
desarrollado una gran variedad de bioensayos que han empleado especies de peces, que son
sensibles a la presencia de determinados agentes tóxicos. Los peces son organismos acuáticos
extremadamente sensibles a la perturbación ambiental, siendo afectados en su crecimiento y
en sus funciones reproductivas (Iannacone et al. 1999), efectos que han sido de perturbación
para los Peces poecilia reticulata la cual se le conoce más comúnmente como "guppy''
(Poeciliidae) es una especie exótica invasora e introducida en Perú para el control biológico
de larvas de Anopheles pseudopunctipennis.

Fundamentos o principios de la prueba

La prueba se basa en la determinación de efectos de intoxicación aguda (inmovilización o

mortalidad), observados en un tiempo de exposición de 96 horas, en peces juveniles de
Poecilia reticulata “guppy” , durante este ensayo se expone al organismo seleccionado a
diferentes concentraciones de muestras problema que pueden ser compuestos (puros o
combinados) o productos formulados, que deben ser solubilizados y estar biodisponibles en el
agua de dilución (Martinez-jerónimo et al. 1991).

Este ensayo también es utilizado para determinar efectos tóxicos agudos ocasionados por
efluentes con o sin tratamiento, así como muestras de aguas de sistemas acuáticos diversos,
que pueden recibir descargas de aguas contaminadas, así como aguas subterráneas que
reciban influencias contaminantes (lixiviados).

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 Fuente: Ensayos toxicológicos para la evaluación de sustancias químicas en agua y suelo La experiencia en México

La prueba es adecuada para la evaluación de los efectos tóxicos agudos (letales) de efluentes
con o sin tratamiento, muestras de agua de cuerpos de agua receptores de descargas,
compuestos puros y en mezclas de composición conocida o desconocida, principios activos y
productos formulados comerciales.

Materiales e insumos necesarios para el montaje de la prueba

Para la ejecución de los análisis

pertenecientes al bioensayo se requiere de
la utilización de materiales básicos de
laboratorio ,los cuales se enlistan de la
siguiente manera .
● Balanza analítica

● Estereomicroscopio

● Potenciómetro

● oxímetro

● Salinômetro o condutivímetro

● cámara bioclimática (con control de temperatura, iluminación y de fotoperíodo)

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 ● Espectrofotómetro

● compresor de aire

● bombas sumergibles.

De igual forma son necesarios una serie de reactivos los cuales deben de ser grado analítico y
libres de trazas de metales pesados , para poder obtener los resultados que se desean
proyectar , de las marcas recomendadas para los reactivos necesarios para la preparación del
agua de dilución y de los medios de cultivo, tanto para los peces como para la producción de
alimento para los reproductores son las siguientes.
● J. T. Baker®
● Aldrich®
● Sigma Chemical®.
Independientemente de la marca empleada se deberá tener un control sobre los
procedimientos para la preparación de soluciones concentradas y medios de cultivo, y poner
especial atención en la conservación de los compuestos que pudieran degradarse o
contaminarse.

Organismos de prueba

Sin importar el organismo a estudiar , sin excepción de los peces poecilia reticulata “Guppy”
es importante que los cultivos deben ser iniciados con hembras y machos sanos, con
alimentación controlada. Los organismos de prueba para los bioensayos deberán proceder de
lotes estabilizados y controlados de laboratorios por lo que no está permitido y por lo tanto
debe evitarse es el uso de organismos comprados en tiendas de mascotas, ya que en este caso
se desconoce el origen, el linaje o la historia química y estos factores pueden alterar
significativamente la respuesta biológica durante la exposición de la muestra de prueba.

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Anatomía de un pez típico: (1) - Opérculo, (2) - Línea lateral, (3) - Aleta dorsal, (4) - Aleta
adiposa, (5) - Pedúnculo caudal, (6) - Aleta caudal, (7) - Aleta anal, (8) - Fotóforo, (9) - Aleta
pélvica, (10) - Aleta pectoral.

Reino Animalia

Filo Chordata

orden Actinopterygii

Familia Cyprinodontiformes

Género Poeciliidae

Especie P. reticulata

Control de Calidad de la prueba

Para poseer un mecanismo analitico óptimo del bioensayo es indispensable garantizar la

calidad del material de prueba, teniendo control sobre el linaje y la forma de producción de
los organismos de ensayo, siendo importante indicar el origen del lote utilizado.

para el caso del cultivo organismo de Peces poecilia reticulata es necesaria llevar a cabo
ciertos mantenimientos básicos de alcanzar para estabilizar y mantener su calidad ya que por
su condición de pez vivíparo, que además presenta un marcado dimorfismo sexual, facilita
considerablemente el mantenimiento de los reproductores y la producción de crías como

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organismos de prueba. Con esta especie es factible tener buenos resultados alimentando
exclusivamente con alimento balanceado en hojuelas, aunque un complemento periódico de
alimento vivo como lo es el cladócero Moina macrocopa, contribuye a tener mejores
resultados reproductivos.

Para crear condiciones generales de calidad de agua para el crecimiento y reproducción de

Poecilia reticulata es importante llevar a cabo lo siguiente descrito.

● Alimentos suministrados. Para los adultos, alimento balanceado en hojuelas,

complementado, durante el proceso reproductivo, con cladóceros obtenidos mediante
cultivo, para P. reticulata se ahorra el mantenimiento de la fase larvaria, pues como es
una especie vivípara, de las hembras avivan las crías en la fase de juveniles, que son
de talla mayor y pueden consumir directamente alimento balanceado en hojuelas.
● Procedimientos para la preparación/obtención del alimento.
● Obtención de los reproductores

De manera más específica sobre el caso de P. reticulata, se aplican en general estas

condiciones, aunque se obvia todo el proceso de colecta de huevecillos, incubación y
alevinaje. El marcado dimorfismo sexual ayuda a que sea muy sencillo colocar en los
contenedores de reproducción una proporción 1:1 de machos y hembras. Las hembras
fecundadas, que son de mayor talla y cuyo abdomen empieza a crecer marcadamente
conforme transcurre la gestación, son cuidadosamente separadas y colocadas en redes
incubadoras, que tienen una malla de la abertura adecuada para permitir la salida de las crías,
cuando son liberadas, reteniendo a las hembras adultas para evitar la posible depredación de
los juveniles.

Las condiciones de calidad del agua que se deben mantener son las que se muestran

Fuente: Ensayos toxicológicos para la evaluación de sustancias químicas en agua y suelo La experiencia en México

Con las condiciones antes descritas, es posible garantizar la calidad del material biológico y
reducir significativamente la variabilidad en los resultados.

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Procedimiento detallado de la prueba

Fuente: Protocolo experimental para los medios de Poecilia reticulata

● Se utilizó la prueba de normalidad y homocedasticidad para evaluar el

comportamiento de los datos. Al haber parámetros que no responden al
comportamiento normal de los datos, se procedió a emplear la prueba no paramétrica
de Kruskall Wallis para determinar si existían diferencias significativas entre los
tratamientos y el control.

● Se deben seguir pautas mínimas básicas para garantizar la calidad de manera de

testear la respuesta del organismo para evitar posibles interacciones o alteraciones con
posibles residuos de compuestos tóxicos remanentes o persistir en el material
utilizado para la fabricación de bioensayos.

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● Los 120 organismos se distribuyeron aleatoriamente en 20 envases plásticos.
● Los organismos se distribuyeron aleatoriamente en 20 envases plásticos, de acuerdo al
protocolo experimental. Durante la fase de experimentación, los peces no fueron
alimentados. Se empleó sulfato de cobre (CuSO4),en 6 concentraciones diferentes
-incluyendo el control- con 4 repeticiones cada una.

Imagen:: Distribución en envases plásticos de Poecilia reticulata Fuente : Toxicidad aguda en Poecilia reticulata (Peters, 1859)

● Este bioensayo es de tipo estático, sin renovación de la solución de prueba, con una
duración total de 96 horas. Dependiendo del tipo de compuestos o muestras de agua
problema que se estén analizando, en algunos casos podría ser necesario hacer
recambio total de la solución de prueba a las 48 horas,de cualquier forma se deberán
hacer registros de mortalidad o de efectos visibles a las 1, 3, 6, 24, 48, 72 y 96 horas.
● La muestra debe de estar con una intensidad luminosa 600-1,000 luxes por al menos
un fotoperiodo de 16 horas de luz y 8 de oscuridad.
● Se llevó a cabo la aclimatación de los organismo de prueba para alcanzar los 24 [+/-
2] °C de temperatura ambiental.

Imagen:poecilia reticulata durante la aclimatación , Fuente : Toxicidad aguda en Poecilia reticulata (Peters, 1859)

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 ● se deberán evaluar la concentración de oxígeno disuelto, el pH, la conductividad y la
salinidad del agua, al inicio y al término de la prueba definitiva; se sugiere también
registrar la concentración de amonio al inicio y término del bioensayo
● se registraron 120 datos de peso y longitud, para evaluar si existían diferencias
significativas entre las repeticiones y entre tratamientos

Expresión de los resultados de la prueba

Poecilia reticulata, presentó una alta sensibilidad al sulfato de cobre. se podrá aprecia los
valores de CL50( Determinación de la concentración letal media (CL50), CE50(
concentración efectiva media), NOEC( No Observed Effect Concentration):
Concentración sin efecto observado ) y LOEC(Concentración más baja de efectos
observables) tras la exposición de Poecilia Reticulata frente a sulfato de cobre a las 24, 49,
72 y 96h de exposición.Asimismo, se muestran los límites superiores e inferiores de
confianza para los valores de CL(E)50.

Según el diseño por bloques al azar se halló que,tanto para el peso como la longitud, no se
presentaron diferencias significativas entre bloques (repeticiones) y entre
tratamientos.Ambos, tanto para longitud como para peso,mostraron un p>0,05. Los valores
de OD se mantuvieron por encima del 85%.

● De acuerdo a los resultados obtenido la CE50 de cromo usando poecilia reticulata fue
de 0.9461 mg. L-1 a 24h.,0.58134 mg L-1 a 48h, 0.4134 mg L-1 a 72 h,0.07259 mg
L-1 a 96 h. h respectivamente.
● Se obtuvo una concentración a la cual no se observa efecto de 1mg L-1 a 24h,
0.0625mg L-1a 48h, 72h y 96h respectivamente; así mismo se obtuvo la mínima
concentración de efecto observada de 1 mgL-1 a 24h, 0.0625mg L-1 a 48 h, 72h y
96h.
● Cabe resaltar que no se suministró en las 96 horas alimento alguno por lo que
estuvieron expuestos a la contaminación netamente.

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 ● Se obtuvo el valor de CE50 de 0.6498mg L-1 a 48 h, 0.4177 mg L-1 a72h, 0.09762
mg L-1 a 96 h, no se pudo determinar a las 24h ya que la CE no llegó al 50% de la
población, evidenciándose a las 96 h una concentración efectiva más significativa
respecto a las demás concentraciones.
● Los porcentajes de mortalidad de la concentración 1 y 2 correspondientes a 0.0156 y
0.0039 respectivamente, no muestran diferencias entre sí, alcanzando una mortalidad
máxima del 10%

Tabla 1:Valores de CL50, CE50, NOEC y LOEC para los parámetros evaluados , Fuente :Universidad Científica
del Sur. Facultad de Ciencias Ambientales. Panamericana Sur km 19.Lima-Perú

Tabla 2: Valores de significancia registrados, Fuente: Universidad Científica del Sur. Facultad de Ciencias
Ambientales. Panamericana Sur km 19.Lima-Perú

Conclusiones
● La especie Guppy (Poecilia reticulata) usada en la Acuariofilia, es una especie bastante
pequeña de diversos colores y patrones genéticos, lo cual les permite que se diferencien entre
ellos, son peces de un desarrollo y reproducibilidad alta, son usados para acuarios
ornamentales por su diferentes características y su diversidad.
● Los guppy es un buen organismo bioindicador para la evaluación ecotoxicológica debido a su
alta sensibilidad al sulfato de cobre. Se concluye pues que a las concentraciones elegidas y en

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 los tiempos de evaluación determinados para la presente investigación se observan tanto
efectos letales como subletales marcados en poecilia reticulata mitocondrial y funciones
respiratorias, las cuales pierden efecto en la conversión de energía y se pierde la generación
de oxidación, lo cual causa daño celular.

Reflexión sobre su aplicación en el contexto de la Ingeniería Ambiental y en

Honduras

● Como Ingeniero ambiental con los conocimientos amplios que abarcan temas tanto
biológicos como de cuestión de calidades el tipo de este bioensayo es de gran ayuda
para poder saber como ejecutar planes de acción para su remediación o como poder
planear una gestiones óptimas para tu tratamiento y de igual manera es importante
para el conocimiento general y generar conciencia sobre cómo las sustancias pueden
afectar a los organismo.
● Gracias a su fácil acceso del organismo a través de laboratorios con la
biodisponibilidad de estudio en Honduras podría ser gran promotor de estos tipos de
estudios ,por lo que la inclusión de desarrollar estudios científicos de un organismos
tan común incluso en nuestro hogar debería de ser prioridad para entidades veladoras
en su campo para promocionar remediaciones a sus ecosistemas en dada situación en
manera de gestion de riesgo .

Referencias

● Romero, P. R. (Enero de 2008). Ensayos Toxicológicos para la Evaluación de

Sustancias Químicas en Agua y Suelo. Obtenido de Secretaría de Medio Ambiente y
Recursos Naturales de Mexico:
http://centro.paot.org.mx/documentos/semarnat/ensayo_toxicologico.pdf
● Martinez , M ( 2017).Evaluación de la toxicidad aguda y subletal del sulfato de cobre
(CuSO4) sobre Poecilia Reticulata :
https://www.academia.edu/33799051/Evaluaci%C3%B3n_de_la_toxicidad_aguda_y_
subletal_del_sulfato_de_cobre_CuSO4_sobre_Poecilia_Reticulata

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● (UNSD ,2022) Toxicidad aguda en poecilia reticulata obtenido de :
https://www.researchgate.net/profile/Ydsell-Bonilla/publication/364837063_Toxicida
d_aguda_del_plaguicida_propamocarb_722_en_Poecilia_reticulata_Peters_1859/links
/635d28558d4484154a45643b/Toxicidad-aguda-del-plaguicida-propamocarb-722-en-
Poecilia-reticulata-Peters-1859.pdf
●

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