Hematologia de Peces

Universidad Católica de Temuco.
Facultad de Recursos Naturales.

Escuela de Acuicultura.
“Estudio hematológico
básico del puye
(Galaxias maculatus) (Jenyns, 1842)
en estado postlarval y adulto”
Tesis de grado presentada

como parte de los
requisitos para optar al
grado de Licenciado en
Ciencias de la Acuicultura.
Alumno: Nicolás Jaramillo Schadebrodt.

Profesor guía: Iván Valdebenito Isler.
Temuco, 2005.
INDICE DE MATERIAS.
Página.
Resumen. 1.
Abstract. 2.
1. Introducción. 3.
2. Antecedentes Bibliográficos. 8.
2.1. Plasma 8.
2.2. Eritrocitos 9.
2.3. Trombocitos. 12.
2.4. Leucocitos. 13.
2.4.1. linfocitos. 14.
2.4.2. Monocitos. 16.
2.4.3. Granulocitos. 18.
2.4.3.1. Neutrófilos. 18.
2.4.3.2. Basófilos. 20.
2.4.3.3. Eosinófilos. 21.
2.5. Tejido hematopoyético. 22.
2.5.1. El riñón. 22.
2.5.2. El timo. 23.
2.5.3. El bazo. 24.
3. Objetivos. 26.
4. Planteamiento de hipótesis. 27.
5. Materiales y métodos. 26.
5.1. Toma de muestra. 28.
5.1.1. Ejemplares cristalinos (postlarvas). 28.
5.1.2. Ejemplares adultos. 29
5.2. Tinción de muestras. 29.
5.2.1. Preparación de frotis sanguíneo. 29.
5.2.2. Método de Coloración de May−Grünwald Giemsa. 30.
5.2.3. Método de coloración de peroxidasa de Sato y
i
Sekiya. 31.
5.3. Índices hematológicos. 32.
5.3.1. Determinación de hematocrito. 32.
5.3.2. Recuento de eritrocitos. 32.
5.3.3. Recuento de leucocitos y trombocitos. 33.
5.3.4. Recuento diferencial. 34.
5.3.5. Determinación de hemoglobina. 35.
5.3.6. Índices hematológicos derivados. 35.
5.3.6.1. Volumen corpuscular medio (V.C.M.). 35.
5.3.6.2. Hemoglobina corpuscular media (H.C.M.). 36.
5.3.6.3. Concentración corpuscular media.
de hemoglobina (C.C.M.H.). 36.
5.3.7. Mediciones celulares. 36.
5.4. Análisis estadístico de los datos. 37.
6. Resultados. 38.
6.1. Línea celular Eritrocitaria. 39.
6.1.1. Eritroblastos. 39.
6.1.2. Policromatocitos o eritrocitos inmaduros. 40.
6.1.3. Eritrocitos maduros. 42.
6.1.4. Eritrocitos en plasmólisis. 43.
6.1.5. Distribución celular de la línea eritrocitaria de
postlarvas de G maculatus. 45.
6.1.6. Distribución celular de la línea eritrocitaria en adultos de
G. maculatus. 45.
6.2. Línea celular leucocitaria. 46.
6.2.1. Linfocitos. 46.
6.2.2. Monocitos. 48.
6.2.3. Granulocitos. 50.
6.2.4. Neutrófilos. 50.
6.2.5. Distribución celular de la línea leucocitaria en
postlarvas y adulto de G maculatus. 53.
6.3. Línea celular trombocitaria. 55.
ii
6.3.1. Trombocitos. 55.
6.3.2. Distribución celular de la línea trombocitaria en
postlarvas y adultos de G. maculatus. 57.
6.4. Parámetros hematológicos de G maculatus. 58.
6.4.1. Hemoglobina. 59.
6.4.2. % Hematocrito. 59.
6.4.3. Recuento de eritrocitos. 59.
6.4.4. Recuento de leucocitario y trombocitario. 59.
6.4.5. Índices hematológicos derivados. 59.
6.4.5.1. Volumen corpuscular medio (V.C.M.) 59.
6.4.5.2. Hemoglobina corpuscular
media (H.C.M.). 60.
6.4.5.3. Concentración corpuscular media de
hemoglobina (C.C.M.H.). 60.
6.5. Discrasias eritrocitarias. 61.
6.6. Resumen hematológico. 63.
6.7. Resumen morfológico. 64.
7. Discusión. 68.
Conclusiones. 79.
8. Bibliografía. 81.
iii
Resumen.
El puye (Galaxias maculatus) es un pequeño teleósteo que habita las frías
aguas circun-antárticas. El aspecto anguiliforme y transparente de este pez en su
estado postlarval, lo hace ser un producto muy atractivo del punto de vista
económico, debido a la similitud de este con el estado juvenil de Anguillla anguilla
(angula), la cual presenta un alto valor de mercado. Similar importancia económica
presenta G. maculatus en el mercado chileno y el neo zelandés, en donde el
Whitebait (como es conocido en Nueva Zelanda), alcanza altos precios. Razón por
la cual se ha ejercido una desmedida presión pesquera sobre este recurso, esto ha
causado preocupación y gran interés por estudiar la biología de este pez. Es así,
como un equipo de investigadores de la Universidad Católica de Temuco se
encuentra trabajando hace más de 10 años en el estudio de las bases biológicas y
tecnológicas para el cultivo del puye, esto ha permitido cerrar su ciclo de vida en
cautiverio. Sin embargo, aún quedan incógnitas por resolver, como la pigmentación
temprana de las larvas en cautividad, mejoramiento genético y métodos efectivos de
monitoreos patológicos. En este último caso es adecuado el desarrollo de un
monitoreo permanente de los individuos, situación que se logra a través de un
certero y oportuno diagnóstico hematológico, el cual permite anticiparse a las
manifestaciones clínicas de las enfermedades. En este contexto y frente a la escasa
información publicada en aspectos hematológicos de G. maculatus, esta tesis tiene
como propósito fundamental, dar los primeros antecedentes en el conocimiento de
los aspectos básicos de la hematología de G. maculatus postlarva y adulto.
Para llevar acabo esta investigación se utilizaron 60 postlarvas capturadas en
la Barra del Río Toltén, IX Región Chile y 30 adultos virginales clínicamente sanos
obtenidos de las instalaciones de la Escuela de Acuicultura de la Universidad
Católica de Temuco.
Se logró caracterizar las distintas líneas celulares, (linfocitaria, eritrocitarias y
trombocitarias) presentes en postlarvas y adultos de G. maculatus, siendo
característico la ausencia total de eritrocitos maduros en sangre periférica de
postlarva a diferencia del adulto el cual presenta morfologías celulares equivalentes
a las descritas para teleósteos.
Los resultados obtenidos mostraron que los adultos presentaron una baja
concentración de eritrocitos (1,16 x 106 ± 0,29 eritrocitos/mm3) y hemoglobina (4,5 ±
0,95g Hg/ 100ml), además de un reducido porcentaje de hematocrito (19,04 ±
5,57%), a diferencia de los leucocitos (6,45 x10³ ± 3,54 leucocitos /mm³) y
trombocitos (12,80 x10³ ± 6,45 trombocitos /mm³) los cuales se encontraron dentro
de los parámetros considerados como normales para teleósteos. En el caso de
cristalinos estos parámetros hematológicos no fueron medidos, debido a los exiguos
volúmenes de sangre extraídos.
Los leucocitos de G. maculatus postlarva y adulto no presentaron diferencias
significativas en cuanto a distribución, forma y tamaño. Lo mismo ocurrió entre los
trombocitos de ambos grupos de peces.
-1-
a|vÉÄtá ]tÜtÅ|ÄÄÉ fv{twxuÜÉwà
Abstract.
The puye (Galaxias maculatus) is a small teleost fish who lives in the cold
circun-Antarctic waters. The eel-like and transparent aspect of this fish in his
postlarval condition, makes that it is a very attractive product from the economic point
of view, due to the similarity of this one with the young condition of Anguilla anguilla
(angula), which presents a high value of market. Similar economic importance
presents G. maculatus on the Chilean market and New Zealand, where the Whitebait
(like it is known in this last country) reaches high prices. This is the reason why an
excessive fishing pressure has been exercised on this resource, this has caused
worry and great interest to study the biology of this fish. It is like that, a group of
investigators of Temuco's Catholic University is working since 10 years ago in the
studding of the biological and technological bases for the culture of the puye, and this
has allowed closing its cycle of life in captivity. However, there are still unknown
things for resolving, as the early pigmentation of the larvae in captivity, genetic
improvement and effective methods of pathological monitoring. In the last case there
is adapted the development of a permanent monitoring of the individuals, situation
that is achieved across an accurate and opportune haematological diagnostics, which
allows to anticipate to the clinical manifestations of the diseases. In this context and
as opposed to the null information published in haematological aspects of Galaxias
maculatus, this thesis has as fundamental intention, give the first precedents in the
knowledge of the basic aspects of the haematology of G. maculatus adults and post-
larvae.
In order to carry out this investigation there were in use 60 postlarvae captured
in the Bar of the Toltén River, IXth Region, Chile and 30 virginal adults clinical healthy
obtained from the hatchery of the Aquaculture School, Catholic University of Temuco.
It was achieved characterized the different cellular lines, (lynfocytaries,
erythrocytaries and thrombocytaries) presented in adults and postlarvae of G.
maculatus, being typical the total absence of mature erythrocytes in peripheral blood
of postlarvae unlike the adult witch presents morphologicals cellular equivalent to the
described one for teleost fishes.
The obtained results showed that the adults presented a low concentration of
erythrocytes (1,16 x 106 ± 0,29 eritrocytes/mm3) and haemoglobin (4,5 ± 0,95g
Hg/100 ml), more over a small percentage of hematocrite (19,04 ± 5,57 %), unlike the
leucocytes (6,45 x 103 ± 3,54 leukocytes/mm3) and thrombocytes (12,80 x 103 ± 6,45
trombocytes/mm3) which were into the considered parameters like normal for teleost
fishes. In case of crystalline these haematological parameters were not measured,
due to the exiguous volumes of extracted blood.
The leucocytes of G. maculatus adults and postlarvae did not present
significant differences in relation with the distribution, shape and size. The same thing
happened between the thrombocytes of both groups of fish.
-2-
1. Introducción.
El puye (Galaxias maculatus) es un pequeño pez que presenta poblaciones
diadrómicas y dulceacuícolas, las cuales se diferencian por el número de vértebras
(Vega, 1999). Esta especie posee distribución circun-antártica, encontrándose en
Sudamérica (Chile, Argentina, Islas Malvinas), Australia, Nueva Zelanda, Islas
Chatham y Tasmania (Barile, 1999). En Chile, habita preferentemente sistemas
lacustres y estuariales desde los 32° LS en la zona central, hasta los 53° LS en la
Región Patagónica de Tierra del Fuego (Campos, 1979).
Este Osmeriforme no presenta coloración en sus estructuras externas e
internas en las etapas larval y postlarval (Campos, 1979), además de carecer en la
sangre de un pigmento transportador de oxígeno (Busse & Campos, 1996). Estos
autores plantean como hipótesis que la ausencia general de pigmentación
presentaría una cierta protección ante la depredación. El aspecto anguiliforme y
transparente, lo hace ser un producto muy atractivo del punto de vista comercial,
debido a la similitud que presenta con el estado juvenil de la anguila o angula
(Anguillla anguilla), la cual es considerada en muchos países como una
delicatessen, alcanzando un alto valor de mercado. Similar importancia culinaria y
económica presenta G. maculatus en el mercado chileno y el neozelandés, en donde
el Whitebait (como es conocido en Nueva Zelanda), alcanza valores de 40 y 60 US$
el kilo (Mardones, 1999).
La desmedida presión pesquera sobre las poblaciones naturales y las grandes
proyecciones comerciales de este recurso, han causado preocupación y gran interés
-3-
por estudiar la biología de este pez. Es así, como un equipo de investigadores de la
Universidad Católica de Temuco se encuentra trabajando hace más de 10 años en
el estudio de las bases biológicas y tecnológicas para el cultivo del puye, esto ha
proporcionado el conocimiento sobre; poblaciones de origen fluvial y estuarial de la
IX Región; la alimentación natural y artificial de las larvas, juveniles y reproductores;
parámetros reproductivos; tolerancia a la salinidad; crianza marina de la larva; cultivo
en estanques y enfermedades. Esto ha permitido cerrar el ciclo de vida del puye en
cautiverio. Sin embargo, aún quedan incógnitas por resolver, como la pigmentación
temprana de las larvas en cautividad, mejoramiento genético y métodos efectivos de
monitoreos patológicos, entre otros.
La explotación intensiva de G. maculatus, al igual que otras alternativas de
producción acuícola, dependen de diversos factores para alcanzar su máximo
potencial productivo, entre estos factores se encuentra el manejo sanitario, entendido
como la prevención de las principales enfermedades que afectan a la población
(Mendoza et al., 1999). Estas se manifiestan en los peces con la aparición de
anomalías del comportamiento (síntomas) y/o de la integridad corporal (lesiones), lo
que supone un descenso de los rendimientos y a menudo, la muerte de los
especimenes afectados (Kinkelin, 1991). Para tratar de evitar estas pérdidas, es
necesario pesquisar con la debida anticipación las posibles patologías presentes en
los peces, para esto es adecuado el desarrollo de un monitoreo permanente de los
individuos, situación que se logra a través de un certero y oportuno diagnóstico
hematológico, ya que la sangre es por excelencia el punto de confluencia de las
situaciones anómalas producidas por las distintas patologías, razón por lo cual
permite anticiparse a las manifestaciones clínicas de las enfermedades, mediante el

-4-
monitoreo permanente de los estados fisiológicos, nutricionales y sanitarios de los
peces, tanto en aguas continentales como marinas (Conroy & Armas, 1984). Además
de las cualidades antes mencionadas, la hematología es una ciencia que no requiere
de grandes esfuerzos económicos para su realización, lo que la posiciona aún más
como una gran herramienta en la prevención y diagnóstico de enfermedades, en
consecuencia, y al igual que en medicina humana y veterinaria, esta ciencia es una
valiosa herramienta en la determinación de enfermedades de peces (Deufel &
Pöllnitz, 1977).
La hematología puede ser definida en términos generales, como una disciplina
que estudia la sangre (Valenzuela et al., 2003). Esta es un tejido cuya gran
diversidad de componentes, su modo de formación, así como las funciones que
realiza, le dan toda su originalidad e interés. Este tejido líquido, se encuentra dentro
de un conjunto de vasos sanguíneos extremadamente ramificados, cuya variedad de
elementos está relacionado con la especie (Charpentier, 1996). El fluido sanguíneo
se encuentra compuesto por una parte líquida (el plasma) y otra sólida (las células),
los cuales en su conjunto ocupan un volumen que oscila entre 2-4% del peso
corporal del pez, a diferencia de otros vertebrados que presentan un volumen que
varía entre 5-8% (Brown, 1993). El plasma de los peces presenta similares
características a las encontradas en mamíferos, a excepción de la proteíca, la cual
es menor, pero la inmunología y otras funciones son similares (Ellis et al., 1981).
Las células por su parte se dividen en tres grupos: Glóbulos Rojos o
Eritrocitos; encargados del transporte de oxígeno mediante ferroproteínas;
Trombocitos, encargados de la coagulación y Glóbulos Blancos o Leucocitos,
encargados de la respuesta inmune (Yasutaque & Wales, 1983). Este último grupo
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es el más diverso en cuanto a morfología y funciones (Stoskopf, 1993). La
morfología, ausencia o presencia de estas células en el tejido sanguíneo depende de
cada especie, es así como en mamíferos los eritrocitos circulantes no presentan
núcleo, a diferencia de los peces en donde estas células si son nucleadas.
Otra característica de este tejido, es que la formación de éste no ocurre in-
situ, sino en órganos diferentes, los que aseguran la hematopoyesis del individuo a
lo largo de su vida (Charpentier, 1999).
Los órganos en los cuales se genera la producción del tejido sanguíneo
dependerá de cada especie, en mamíferos la encargada de este proceso es la
médula ósea, en el caso de los peces existen tres órganos en donde se produce la
hematopoyesis. El riñón es uno de ellos, por su capacidad hematopoyética y de
producción de células sanguíneas, además de sus características ultraestructurales e
histoenzimáticas, es considerado como un órgano análogo a la médula ósea de los
mamíferos, en el que se produce la eritropoyesis, granulopoyesis y linfopoyesis
(Fernández et al., 2002. citando a Razquin et al., 1990). Otro órgano importante en
la hematopoyesis es el timo, el cual es par y homogéneo, representado por unas
delgadas láminas ovales de tejido linfoide, dispuesto subcutáneamente en la
comisura dorsal del opérculo, revestido por tejido mucoso del epitelio faríngeo (Ellis,
1981). El tercer órgano en donde se generan células sanguíneas es el bazo, éste se
encuentra en la parte abdominal del pez y suele ser único, aunque en ocasiones
pueden encontrarse dos o más bazos menores. Está bien definido por una cápsula
fibrosa, no presenta diferenciación entre pulpa blanca y pulpa roja, característico del
bazo de los mamíferos (Fernández et al., 2002. citando a Ferguson, 1989).
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Para realizar un diagnóstico hematológico certero, se deben determinar en
primer lugar los valores normales de la sangre en las más diversas condiciones
ecológicas con el fin de conocer la variabilidad en condiciones normales (Deufel &
Pöllnitz, 1977).
En este contexto y frente a la nula información publicada en aspectos
hematológicos de G. maculatus, esta tesis tiene como propósito fundamental, dar los
primeros antecedentes en el conocimiento de los aspectos básicos de la hematología
de Galaxias maculatus, los cuales se obtendrán mediante observaciones efectuadas
sobre la morfología, y distribución de los elementos celulares que se encuentren en
la sangre periférica de los ejemplares muestreados (postlarvas y adultos), para así
poder aportar con una valiosa herramienta en el diagnóstico hematológico de G.
maculatus.
-7-
2. Antecedentes Bibliográficos.
La sangre se compone de una parte fluida, el plasma, y de numerosas
células, muy diferentes entre sí, tanto morfológica como funcionalmente (Charpentier,
1996). Estas células se caracterizan por encontrarse libres en el plasma sanguíneo.
Estos elementos celulares se dividen en tres grupos. Los hematíes; encargados de
la oxigenación de los distintos tejidos, los trombocitos; encargados de la coagulación
y los leucocitos; que son los encargados de la defensa del organismo (Ellis et al.,
1981).
2.1. Plasma.
Se sabe que esta sustancia en mamíferos posee funciones de transporte de
nutrientes y desechos metabólicos, e importantes funciones defensivas inespecíficas,
estas actúan en independencia de los mecanismos específicos de defensa, aunque
también existe un sistema de complemento que actúa en colaboración con los
anticuerpos, pero en forma inespecífica (Ham, 1988). Se ha demostrado la
existencia de algunos factores defensivos inespecíficos en el plasma de peces. Sin
embargo, no se sabe prácticamente nada de sus propiedades físicas, mecanismos
de activación o significancia de esta sustancia dentro del sistema defensivo (Ellis,
1981).
Ellis et al. (1981) citando a Wolf (1963), describe la composición del suero de
la trucha fario, el cual principalmente se encuentra compuesto por: sodio
(424mg/100mL) y magnesio (354mg/100mL), y en menor medida por: potasio (2,3
-8-
mg/100mL), calcio (20,1 mg/100mL), fósforo (12,5 mg/100mL), sulfato (9,3
mg/100mL) y glucosa (0,8 mg/100mL).
El punto de congelación es de aproximadamente 0,570C y la concentraciones
de proteína plasmática se encuentra entre 1,68 y 6,19g/L y un 90% de H2O, en
diferentes especies de teleósteos (Ellis et al., 1981).
2.2. Eritrocitos.
Ellis et al. (1981), describe a los eritrocitos de teleósteos como similares en
tamaño, tinción y estructura a los hematíes de los demás vertebrados, pero al igual
que en aves, reptiles y anfibios presenta una forma elíptica con un núcleo central de
cromatina condensada, constituida por heterocromatina, además de un citoplasma
abundante y levemente eosinófilo, lo que coincide con lo descrito por Yasutake &
Wales (1983), Brown (1993), Rodríguez (1999) y Veiga et al. (2000) (figuras 1 y 2).
Sin embargo, en algunas especies el núcleo puede ser casi redondo (Stoskopf,
1993).
Ultraestructuralmente, el citoplasma de los eritrocitos de los peces es
granular, sin inclusiones ni mitocondrias. Se cree que hay vacuolas citoplasmáticas
prominentes que son autofágicas y derivadas de la degeneración de las mitocondrias
(Stoskopf , 1993).
-9-
1 2
Figura 1. Eritrocitos maduros de carpa (Cyprinus carpio) teñidos con Giemsa (flecha). Aumento
1200X (Tomado de Hibiya, 1995).
Figura.2. Eritrocitos de esturión pálido (Scaphirhynchus albus) teñido con Giemsa. Observado con
objetivo 100X (Tomado de Jenkins, 1995).
Las cantidades de hematíes varían según la especie y su concentración está
afectada por el estrés y la temperatura, es así como Ellis (1981), Yasutake & Wales
(1983) e Hibiya (1995), han coincidido en que los teleósteos presentan en promedio
una concentración que va de entre 1,0 a 3,0 X 106células/mm3 en la sangre. El
tamaño varía entre 10 a 15µm en su eje largo y entre 8 a 10µm en su eje corto, así
también, la proporción de eritrocitos maduros, dependerá de cada especie y del
medio ambiente.
Los eritrocitos inmaduros o policromatocitos presentan forma redonda y se
tincionan de color gris azulado en frotis teñido con colorante Giemsa (Conroy, 1972).
La proporción de eritrocitos inmaduros en la sangre es de alrededor del 1% (Ellis et
al., 1981), esta se ve modificada cuando el pez enfrenta disminuciones de oxígeno,
lo que provoca ajustes en los parámetros hematológicos. La respuesta a este
estímulo es el aumento en la producción de eritrocitos, por lo cual, se observa un
incremento en la de eritrocitos inmaduros (Valenzuela et al., 2002).
- 10 -
Como otros vertebrados, la mayoría de los teleósteos presentan hemoglobina
en sus eritrocitos, este es el principal medio de transporte de oxígeno y en menor
grado el de CO2. Esta molécula presenta características variables que van de
acuerdo a los distintos estadios de desarrollo del pez, pudiendo encontrarse hasta
cuatro tipos distintos en un mismo individuo (Ellis et al., 1981). Cada especie puede
adaptarse a las diferentes tensiones de oxígeno ambiental, o modificar los
caracteres de la disociación del oxígeno aclimatándose a las diferentes temperaturas
(Robert, 1981). Es así como especies que habitan aguas extremadamente heladas,
en donde los altos niveles de oxígeno presentes en el medio hacen que la
hemoglobina sea menos vital en el intercambio gaseoso. Esto se manifiesta en las
características hematológicas expresadas por algunas especies antárticas como
Trematomus borchgrevinki y Notothenia larsoni, en las que se presentan
concentraciones de hemoglobina de 3,6 y 3,5 g/100mL, lo cual se encuentra muy por
debajo de lo considerados como normal para teleósteos de ambientes templados, en
los que la hemoglobina fluctúa entre 7 a 12 g/100mL (Malcom, 1970). Un ejemplo
aún más extremo de adaptación a estas condiciones ambientales son los
Channichthydae en los que se presenta una ausencia total de hemoglobina en la
sangre, esta abolición de un pigmento transportador de oxígeno es suplida por la
difusión del oxígeno directamente al plasma, un aumento del volumen sanguíneo, un
aumento del débito cardíaco, y un aumento de 5 veces el tamaño del corazón, en
comparación a un pez normal (Malcom, 1970. y Busse & Campos, 1996).
Las características eritrocitarias son ampliamente utilizadas en peces, siendo
muy efectivas en la determinación de anormalidades hematológicas (Conroy, 1972).
- 11 -
Estas características son comúnmente descritas en término de índices primarios e
índices derivados. Los índices primarios son: contenido de hemoglobina (Hb),
recuento eritrocitario (R.E) y hematocrito (Hct). Estos valores indican la capacidad de
transporte de oxígeno en la sangre, y la habilidad de un organismo para encontrar los
requerimientos de oxígeno metabólico. Los índices derivados son; la hemoglobina
corpuscular media (H.C.M.) que indica la dinámica cardíaca y el estado
osmoregulatorio, el volumen corpuscular medio (V.C.M), que indica la función
respiratoria y la concentración corpuscular media de la hemoglobina (C.C.M.H.) la
que indica el porcentaje que ocupa la hemoglobina en un eritrocito promedio (Huston,
1990 y Conroy, 1998).
2.3. Trombocitos.
Los trombocitos son la contraparte de las plaquetas de los mamíferos, estas
células son las encargadas de la coagulación sanguínea (Hibiya, 1995), segregan
tromboplastina, enzima que polimeriza el fibrinógeno (Roberts, 1981), su principal
función es mantener la hemostasis (Valenzuela et al., 2003). Huston (1990) citando
a Ferguson (1976), afirma que los trombocitos también cumplirían funciones
macrófagas. Estas células tienen una forma que varía desde redonda a elipsoide, la
cual corresponde a elementos maduros e inmaduros, respectivamente (Conroy &
Armas, 1984) (figuras 3 y 4). Bogner & Ellis (1977) y Veiga et al. (2000) observaron
que cuando el pez es sometido a estrés durante la toma de sangre, el trombocito
elimina casi todo su citoplasma, lo que provoca confusión al momento de su
identificación, ya que se tiende a confundir con los leucocitos. Stoskopf (1993)
citando a Ferguson (1976) señala que la cromatina presente en el linfocito es muy
- 12 -
diferente a la del trombocito, puesto que la de éste último presenta cromatina elástica
muy distinta y muchas vesículas citoplasmáticas similares al sistema de superficie-
conectada de las plaquetas de los mamíferos.
El origen de los trombocitos aún no está claro, los primeros investigadores
pensaban que estas células se desarrollaban a partir de los linfocitos pequeños.
Huston (1990) citando a Gardner & Yevich (1969) mencionan que los linfocitos y
trombocitos derivan de una misma célula, pero esto sería improbable de acuerdo a lo
mencionado por Ellis (1977), ya que existirían suficientes evidencias de que el
desarrollo de los trombocitos se realizaría en el bazo.
Ellis et al. (1981) observó que la sangre de solla (Pleuronectes platesa)
presenta una relación trombocito/linfocito de 1,4:1 y una concentracion de 60.000
trombocitos/mm3.
3 4
4
Figura. 3. Trombocitos de carpa (Cyprinus carpio) teñidos con Giemsa. Aumento en 1200X (Tomado
de Hibiya, 1995)
Figura. 4. Trombocito de pintaroja (Schroederichthys chilensis) teñido con Giemsa (flecha). Aumento
en 1000X (Tomado de Valenzuela et al., 2003)
2.4. Leucocitos.
De los tres grupos principales de células observadas en la sangre de los
peces, los leucocitos son el grupo más diverso en cuanto a morfología (Stoskopf,
1993).
- 13 -
Los leucocitos son las células involucradas en el sistema inmune, pueden
encontrarse en la sangre circulante o en tejidos, y en ocasiones pueden formar parte
de complejos celulares, los cuales se denominan centros melanomacrófagos.
La clasificación de los leucocitos de peces, como en todos los vertebrados, se
ha realizado por criterios morfológicos, según los cuales se distinguen varios tipos:
linfocitos, monocitos y granulocitos (Ellis, 1977).
Las concentraciones de leucocitos reportadas para teleósteos son muy
variables, y dependerán de la especie, el medio ambiente y/o de las condiciones
fisiológicas del individuo. Es así como Conroy (1984), Rodríguez (1999) y Fernández
et al. (2002) mencionan concentraciones de 23.000, 2.000, y 44.500 leucocitos/mm³
para Lisa (Mugil curema ), trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss ) y Salmon coho
(Oncorhynchus kisutch) respectivamente. Este grupo celular pueden constituir el 10%
de la población celular sanguínea, siendo los linfocitos los más abundantes (Brown,
1993).
2.4.1 Linfocitos.
En aves y mamíferos existen dos poblaciones de linfocitos que son
funcionalmente distintas (Ellis et al., 1981). Los linfocitos T; responsables de la
respuesta inmune y los linfocitos B; encargados de la producción de anticuerpos
(inmunoglobulinas). La existencia de poblaciones linfocitarias diferenciadas no está
clara en teleósteos (Hibiya, 1995). Ellis (1981) citando a Stolen & Makela (1975),
señala la posibilidad de existencia de dos grupos de linfocitos, que tendrían
funciones similares a los linfocitos de mamíferos, esto coincide con lo descrito por
Fernández et al. (2002) citando a Bernstein (1998) quien asegura la existencia de

- 14 -
dos grupos de linfocitos, los cuales son funcionalmente diferentes entre sí, lo que se
asemejaría a los linfocitos T y B de mamíferos. Stoskopf (1993) y Veiga, et al.
(2000) agrupan a los linfocitos de acuerdo a su tamaño, este parámetro
representaría diferentes poblaciones linfoides, esto contrasta con lo descrito por
Ellis et al. (1981) y Fernández et al. (2002), quienes señalan que este tipo de
clasificación sería irrelevante, ya que los distintos tamaños indicarían diferentes
estadios funcionales y no diferentes poblaciones linfoides.
Los linfocitos son células altamente diferenciadas, con capacidad de
respuesta frente estímulos inmunológicos (Ellis, 1977). Morfológicamente son
descritos por distintos autores como Bogner & Ellis (1977); Ellis et al. (1981);
Stoskopf (1993) y Fernández et al. (2002), quienes coinciden en señalar que en
general, los linfocitos maduros son mayoritarios y son células de borde irregular,
cuyo interior está casi en su totalidad ocupado por un núcleo con la cromatina muy
agrupada y el citoplasma se dispone como un fino anillo basófilo alrededor del
núcleo, en él se encuentran mitocondrias, retículo endoplásmico liso y rugoso,
ribosomas y aparato de Golgi, lo que demuestra que son células de alto potencial
metabólico (figuras 5 y 6).
En los mamíferos el término linfocitos se refiere a los constituyentes celulares
de la linfa, ya que son producidos en gran medida por ganglios linfáticos. En el caso
de los peces teleósteos existen tres órganos linfoides; el timo, el bazo y el riñón,
siendo el timo y el riñón los productores primarios (Ellis 1981). También se pueden
encontrar, dependiendo de la especie, linfocitos alrededor del corazón, en el hígado y
en tejidos relacionado con el tubo digestivo (Bogner & Ellis 1977).
- 15 -
Ellis et al. (1981) observó que el número de linfocitos en la sangre de los
peces es notablemente mayor que en los mamíferos, siendo de 48.000 células/mm3
en la solla (Pleuronectes platesa), mientras que en el hombre es de 2.000
células/mm3. Con respecto al tamaño de los linfocitos se puede inferir que estos
presentan una gran diversidad de tamaños y está en función de cada especie, es así
como Bogner & Ellis (1977) describen linfocitos de platija (Pleuronectes plateas)
entre 3,5 a 10µm y alrededor de 7µm para la trucha marrón (Salmo trutta).
7
5 6
Figura 5. Linfocito de carpa (Cyprinus carpio) teñido con Giemsa (flecha). Aumento en 1200X
(Tomado de Hibiya, 1995)
Figura 6. Linfocito de pintaroja (Schroederichthys chilensis) teñido con May Gründwald-Giemsa.
Aumento en 1000X (Tomado de Valenzuela et al., 2003).
2.4.2 Monocitos.
Los monocitos son aquellas células encargadas de fagocitar agentes
agresivos, material extraño y residuos tisulares (Fernández et al., 2002). Este mismo
autor citando a Cambell (1988) señala que en mamíferos se habla de monocitos
como células diferenciadas y precursoras de macrófagos en los tejidos, en cambio en
peces no está clara la denominación de estos leucocitos.
Ham (1988), se refiere a los monocitos de mamíferos como células fáciles de
identificar, mientras que Stoskopf (1993) señala que en peces la distinción
morfológica entre linfocitos y monocitos no es clara en la mayoría de los casos.
- 16 -
Además, este autor agrega que estas células presentan formas transitorias lo que
por lo general provoca confusiones a la hora de identificarlos (figuras 7 y 8).
Estos macrófagos son grandes leucocitos de citoplasma azul-gris o azul
brillante con tinción Giemsa, y ocasionalmente vacuolados (Stoskopf, 1993). El
núcleo ocupa entre un medio y un tercio del volumen celular y su forma es variable,
redonda u ovalada, a menudo con una ligera invaginación, o con forma de riñón, en
él, la cromatina aparece dispersa (Fernández et al., 2002 citando a Campbell, 1988).
Los monocitos proceden del tejido hematopoyético renal y su presencia en
sangre circulante de peces es muy escasa, representando un 0,1% de los leucocitos,
aunque esta aumenta tras una infección (Ellis et al., 1981). El tamaño de estas
células es variable y depende de cada especie. Huston (1990) menciona que el
tamaño de los monocitos es de 5-10µm de ancho por 14-16µm de largo.
7 8
.
Figura 7. Monocito de dorado (Salminus maxillosus) teñido con Giemsa (flecha). Aumento 1000X
(Tomado de Ranzani-Paiva et al., 2002).
Figura 8. Monocito de carpa (Cyprinus carpio) teñido con Giemsa (flecha). Aumento 1200X (Tomado
de Hibiya, 1995).
- 17 -
2.4.3 Granulocitos.
Estas células, se caracterizan por la presencia de gránulos en su citoplasma y
se dividen en neutrófilos, eosinófilos (acidófilos) y basófilos (Ham, 1988). En peces
teleósteos, se han descrito los tres tipos celulares, pero no siempre están presentes
todos ellos en la misma especie ni con las mismas formas (Will, 1977).
Las distintas formas de granulocitos presentes en los peces, continúa siendo
confusa, sin embargo Stoskopf, (1993); Will, (1977) y Ellis et al. (1981), coinciden en
la introducción del término heterófilo para la identificación de granulocitos con
formas redondas y núcleos multilobulados, de esta manera se facilita enormemente
la identificación de estas células.
2.4.3.1 Neutrófilos.
Estas células, denominadas también heterófilos o leucocitos tipo I (Ellis et al.,
1981), se caracterizan morfológicamente por tener un núcleo excéntrico
multilobulado (dos o tres lóbulos) (figura 9), con cromatina densa y agrupada que se
tiñe púrpura oscuro con tinción de Giemsa, y por la presencia de un gran citoplasma
pálido de aspecto esponjoso, en el que se distinguen gránulos (figura 10) que varían
desde el gris, al rosa pálido (Veiga et al., 2000). Su tamaño es mayor que el de un
linfocito (Fernández et al., 2002 citando a Blaxhall & Daisley, 1973) (figura 11). Los
neutrófilos presentan en el citoplasma mitocondrias y retículo endoplasmático
(Hibiya, 1995).
- 18 -
Conroy (1972) propone agrupar a los neutrófilos según su estado de madurez
en:
• Mielocito: Es el más inmaduro de los neutrófilos, presenta forma esférica con
un núcleo excéntrico.
• Metamielocito: Presenta forma esférica con un núcleo excéntrico y reniforme.
• Neutrófilo juvenil: Se caracteriza por presentar un núcleo elongado con
aspecto de cinta.
• Neutrófilo adulto: El neutrófilo maduro posee un núcleo lobulado, la cantidad
de estos dependerá de cada especie y del estado patológico que presente el
pez.
Los neutrófilos son las primeras células en salir del bazo y son producidas
principalmente por el tejido hematopoyético renal (Ellis, 1981 y Fernández et al.,
2002). Su importancia radica en su contenido de lisosomas, los cuales son vacuolas
que contienen enzimas y actúan destruyendo los organismos fagocitados por la
célula. La importancia de estas células en los peces ha sido menos informada que en
vertebrados superiores (Ellis, 1981), se presentan en gran número en el sistema
linfático (Hibiya, 1995). Huston, (1990) menciona que la concentración de estas
células en peces es del 2 al 25% de los leucocitos. Su tamaño va de 10 a 15µm y
presenta una relación núcleo citoplasma de 1:3 o 1:2.
- 19 -
9 10 11
Fig. 9. Neutrófilo de pinta roja (Schroederichthys chilensis) teñido May Gründwald-Giemsa (flecha).
Aumento 1000X (Tomado de Valenzuela et al., 2003).
Fig. 10. Neutrófilo de dorado (Salminus maxillosus) teñido con Giemsa (flecha). Aumento 1000X
(Tomado de Ranzani-Paiva et al., 2002)
Fig. 11. Neutrófilo de medada (Oryzias latines) teñido con May Gründwald-Giemsa (flecha). Aumento
1000X (Tomado de Nakamura & Shimozawa, 2002).
2.4.3.2. Basófilos.
Los basófilos de teleósteos son descritos por Stoskopf (1993) como células de
8µm de diámetro que constituyen no mas de 0,1% del total de leucocitos,
presentando un citoplasma ligeramente basófilo y grandes gránulos redondeados
que a menudo ocultan el núcleo (figuras 12). Esto coincide con lo descrito por Ham
(1988) para basófilos de mamíferos. Sin embargo, se conoce muy poco de ellos en
peces, hasta ahora esta célula no ha sido implicada en ningún mecanismo defensivo
de los peces. Ellis (1977) los considera ausentes en la circulación de la mayoría de
las especies de salmónidos.
- 20 -
12
Fig. 12. Basófilo de carpa (Cyprinus carpio) teñido con Giemsa (flecha). Aumento 1200X (Tomado
de Hibiya, 1995)
2.4.3.3. Eosinófilos.
Los eosinófilos se encuentran en tejidos como la dermis, branquias, pseudo
branquias, vejiga natatoria, tejido hematopoyético, epitelio nasal, corazón y
principalmente en el tejido intestinal (Ellis et al., 1981; Fernández et al., 2002;
Valenzuela et al., 2003), razón por la cual los eosinófilos son infrecuentes en sangre
periférica de los peces. Reite (1998) menciona que estas células formarían parte de
un conjunto heterogéneo de células llamado mastocitos, los que responden a
estímulos nocivos mediante desgranulaciónes en casos de tejidos dañados y
aumento en el número de reclutamiento celular cuando el daño es de naturaleza
persistente; además este autor menciona que estos grupos celulares representan un
componente central en la defensa contra infecciones bacterianas.
En peces se ha descrito a los eosinófilos como células redondas que por lo
general miden entre 4,5 a 15µm de diámetro, correspondiendo de un 2 a 3% del total
de leucocitos (Huston, 1990 y Stoskopf, 1993), presentando un núcleo a menudo
bilobulado y excéntrico (figuras 13 y 14), y un citoplasma azúl pálido con gránulos de
forma alargada o esférica que se tiñen con eosina (Fernández et al., 2002) (figura
15).
- 21 -
13 14 15
Figura 13. Eosinófilo de dorado (Salminus maxillosus) teñido con Giemsa (flecha). Aumento 1000X
(Tomado de Veiga et al., 2000).
Figura 14. Eosinófilo de pinta roja (Schroederichthys chilensis) teñido con May Gründwald-Giemsa
(flecha) (Tomado de Valenzuela et al., 2003).
Figura 15. Eosinófilo de tilapia teñido con Giemsa (flecha). Aumento 1600X (Tomado de Kotomi et
al., 2001).
2.5. Tejido hematopoyético.
Al carecer los peces teleósteos de ganglios linfaticos y generalmente de
cavidad medular en sus huesos, el tejido hematopoyético se encuentra en el estroma
esplénico, el timo y el intersticio renal, el cual es el órgano linfoide por excelencia
(Ellis et al., 1981). En menor proporción participan en la hematopoyesis los espacios
hepáticos y la submucosa intestinal (Brown, 1993).
2.5.1 El Riñón.
El riñón en teleósteos se encuentra localizado en una posición retroperitoneal
contra la parte ventral de la columna vertebral, está finamente adosado al tejido
esquelético muscular (Domitrovic, 2000). Este órgano es mixto y tiene en su
composición elementos hematopoyéticos, reticuloendoteliales, endocrinos y
excretores (Ellis et al., 1981). Está formado por dos partes, anatómica y
embriológicamente diferentes, el pronefro o riñón anterior y el opistonefro o riñón
- 22 -
posterior (Domitrovic, 2000). La parte media del riñón también presenta tejido
hematopoyético, el cual es abundante entre los túbulos, pero disminuye en la parte
posterior (Domitrovic, 2000).
Este tejido hematopoyético contiene diversos tipos celulares, siendo los
eritroblastos los más abundantes (Quintana et al., 2003), también aparecen aunque
en menor medida, un gran número de macrófagos y células linfoides en todos sus
estados evolutivos (Fernández et al., 2002).
Estructuralmente, el riñón anterior se compone de una red de fibras reticulares
que proporcionan soporte al tejido hematopoyético (Fernández et al., 2002). Las
células endoteliales revisten numerosos senos a través de los cuales pasa la sangre
de la vena aorta renal, para filtración de las células envejecidas y aporte de nuevas
células (Ellis et al., 1981).
2.5.2 El Timo.
La estructura del timo es similar a su homólogo en los mamíferos, pudiéndose
distinguir una corteza y una médula, la corteza está formada principalmente por
linfocitos en distintas fases de diferenciación, junto con un componente de células
epiteliales, éstas últimas predominan en la médula (Bogner & Ellis, 1977).
Ellis et al. (1981) citando a Lele (1932) menciona que la vida activa de este
órgano es variable, comenzando su funcionamiento alrededor de los 14 días post
eclosión en trucha arcoiris (Fernández, 2002), involucionando en la mayoría de las
especies alrededor del momento de la madurez sexual (Bogner & Ellis, 1977).
Ellis et al. (1981) y Fernández et al. (2002), describen al timo como un órgano
par, homogéneo, representado por unas delgadas láminas ovales de tejido linfoide,
- 23 -
dispuesto subcutáneamente en la comisura dorsal del opérculo, revestido por el
tejido mucoso del epitelio faríngeo.
Existen evidencias que implican al timo de los peces, como un órgano linfoide
central, ya que de acuerdo a lo experimentado por Ellis (1977), el timo poseería una
estructura endotelial vascular especializada que supone permeabilidad selectiva, lo
que es necesario para la formación de linfocitos, ya que estos requieren de un
ambiente protegido para su formación.
2.5.3 El Bazo.
El bazo es el único órgano similar a un ganglio linfático que puede encontrarse
en los peces teleósteos (Ellis et al., 1981), presenta un color rojo oscuro y en peces
sanos generalmente tiene bordes bien definidos (Brown, 1993). Se encuentra
localizado muy próximo al estómago, suele ser único, aunque en ocasiones puede
encontrarse dos o más bazos menores (Fernández et al., 2002).
En algunas especies el páncreas está situado como capa subcutánea en el
bazo, pero en la mayoría de los peces los constituyentes principales del bazo son los
elipsoides, la pulpa y los centros melanomacrófagos (Ellis, 1981). Los elipsoides son
capilares de paredes gruesas que se abren en la pulpa y que resultan de la división
de las arteriolas esplénicas, presentan un revestimiento endotelial plano, rodeado por
una vaina de macrófagos que está limitada por una membrana fibrosa. Los elipsoides
pueden alcanzar una longitud de 300 a 400µm y forman una red por todo el bazo
antes de desembocar en los espacios de la pulpa roja (Bogner & Ellis, 1977). Los
centros melanomacrófagos por su parte, son agregados celulares que aparecen en
órganos linfoides de todos los teleósteos, principalmente en el bazo y en menor

- 24 -
medida en el riñón, su formación es producto de acumulaciones celulares fagocíticas
que contienen material foráneo y grandes cantidades de productos de desecho
celular. Entre sus funciones se encuentra la de procesar los productos de residuos
celulares provenientes principalmente de la destrucción de eritrocitos y del
metabolismo de hierro, así como de tejidos dañados en procesos patológicos
(Fernández et al., 2002).
- 25 -
3. Objetivos.
Objetivo general
9 Realizar un estudio hematológico básico del puye (Galaxias maculatus).
Objetivo especifico
9 Realizar un análisis hematológico comparativo entre la etapa postlarval
(cristalina) y adulta del puye (Galaxias maculatus).
9 Describir la morfología de las diferentes células sanguíneas presentes en el
estado postlarval y adulto de Galaxias maculatus.
9 Determinar los índices hematológicos de Galaxias maculatus adulto.
- 26 -
4. Planteamiento de hipótesis.
Para determinar si existen diferencias entre los parámetros hematológicos de G.
maculatus y otros teleósteos se planteo la siguiente hipótesis.
H0: Los parámetros hematológicos de G. maculatus no difieren de las parámetros
hematológicos presentes en teleósteos.
H1: Los parámetros hematológicos de G. maculatus difieren de las parámetros
hematológicos presentes en teleósteos.
- 27 -
5. Materiales y Métodos.
Se trabajó con 60 postlarvas y 30 adultos de Galaxias manculatus
clínicamente sanos, los cuales presentaron pesos de 0,2-0,4g y 7,8-13,0g
respectivamente. Estos dos grupos de peces fueron obtenidos de lugares distintos,
los adultos fueron obtenidos de las instalaciones de la Escuela de Acuicultura de la
Universidad Católica de Temuco, y las postlarvas fueron capturadas en la Barra del
Río Toltén, IX Región Chile.
Los ejemplares adultos virginales de G. maculatus, se encontraban en
estanques de 0,5m³ a una densidad de 13kg/m³. El agua de pozo presentó una
temperatura promedio de 12 ± 4ºC y una concentración de oxígeno promedio de 8 ±
0,5ppm.
Los elementos celulares encontrados en la sangre periférica de Galaxias
maculatus (eritrocitos, trombocitos, linfocitos, monocitos y neutrófilos), fueron
identificados utilizando criterios citológicos, los cuales se fundamentan en la
nomenclatura propuesta por Conroy (1972) para salmón del Atlántico (Salmo salar).
5.1. Toma de muestra.
5.1.1. Ejemplares cristalinos (postlarvas).
Debido a que los cristalinos presentan un reducido tamaño, resultó difícil
obtener la suficiente cantidad de muestra como para realizar todos los exámenes
hematológicos requeridos. Por tal motivo, sólo se realizaron extendidos sanguíneos
para estos ejemplares. Para lograr la extracción de sangre se preparó una aguja de
- 28 -
vidrio, la cual fue creada fundiendo con un mechero un microhematócrito en la región
media, luego se separaron ambos extremos hasta romper el fino material.
Con el microhematocrito modificado, se realizó la extracción de la muestra
sanguínea mediante punción cardíaca. Los peces fueron previamente anestesiados
y luego secados cuidadosamente con una toalla de papel.
5.1.2. Ejemplares adultos (Virginales).
Se utilizaron ejemplares adultos en estado virginal debido a que peces en
estado madurativo habitualmente presentan variaciones de sus parámetros
hematológicos normales, según estudios realizados por Conroy (1972), en Salmo
salar.
Para los ejemplares adultos se ocupó la técnica de extracción de sangre
desde el pedúnculo caudal, la cual no implicó la muerte de los individuos. El pez fue
colocado de cubito dorsal (previamente anestesiado y secado) y se introdujo la aguja
de una jeringa de insulina en un ángulo de 450, justo detrás de la aleta anal. Una
vez lograda la canulación, se aspiró la sangre a fin de obtener la cantidad de muestra
requerida.
5.2. Tinción de muestras.
5.2.1 Preparación de frotis sanguíneo delgado.
Se colocó una gota de sangre fresca en el extremo de un porta objeto libre de
grasa. Un segundo porta objeto con el borde en un ángulo de 450 con respecto a la
superficie del primer porta objeto, se deslizó con un movimiento rápido hacia el
- 29 -
extremo opuesto del primer porta objeto, tratando de arrastrar la sangre de manera
uniforme para conseguir una película fina de sangre y homogéneamente distribuida
5.2.2 Método de Coloración de May−Grünwald Giemsa.
Los colorantes de tipo Romanwsky actúan mediante la oxidación rápida del
azul de metileno (azul de metileno policromo), el cual es básico y por ende es atraído
por los ácidos nucleicos de la célula, en cambio la eosina es un colorante ácido y es
atraído por el alcalino citoplasma celular (Conroy, 1998).
Esta técnica fue modificada en sus tiempos y concentraciones, por lo cual, a
continuación se describe el protocolo ajustado de acuerdo a los requerimientos de G.
maculatus.
Protocolo:
1). 10 gotas de metanol por 2 minutos (este procedimiento no se realizó para el

extendido de sangre de cristalino ya que produjo la desnaturalización del tejido)
2). Se retiró del metanol, y cubrió la muestra con 12 gotas de colorante May-
Grünwald, por espacio de 3 minutos.
3). Se colocó sobre el frotis 12 gotas de agua destilada a pH 6,8 y se homogenizó
con el colorante, posteriormente se dejó reaccionar por 1min.
4). se agregaron 12 gotas de una dilución de Giemsa, preparada con 15 gotas de
la solución stock en 10 mL de agua estabilizada a pH 6,8, y se dejo reaccionar
por 10 minutos, para el caso de los cristalinos y 15 minutos para adultos.
5) se lavó el frotis con abundante agua destilada a pH 6,8 y luego que la
muestra se encontraba seca, fue puesta en Xilol por un tiempo mínimo de 60
minutos
- 30 -
Una vez que el medio de montaje se encontró seco, se procedió a observar la
muestra con un microscopio Nikon Eclipse E400 bajo objetivos planacromáticos de
hasta 100X.
5.2.3 Método de coloración de peroxidasa de Sato y Sekiya.
Se utilizó el método de coloración de peroxidasa para diferenciar a los
granulocitos del resto de las células, este método se fundamenta en la oxidación de
la benzidina por agua oxigenada en presencia de peroxidasas, por la acción del
sulfato de cobre con la benzidina oxidada, lo que permite la visualización de granos
peroxidasa positivos presentes en el citoplasma de los granulocitos, los cuales se
tiñen de un color azul negrusco, a diferencia de los linfocitos, trombocitos y eritrocitos
los cuales presentan una reacción negativa ante esta tinción (Conroy, 1998).
Esta técnica fue modificada en sus tiempos, por lo cual a continuación se
describe el protocolo ajustado de acuerdo a los requerimientos de G. maculatus.
Protocolo:
1) Se cubrió un frotis delgado (el que debe de ser fresco con máximo una hora
de preparación) con 0,5g de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4.5H2O)
diluido en 100mL de agua destilada por 30 segundos
2) se eliminó el excedente y se agregó 0,02g de diclorhidrato de benzidina
(C12H12N12. 2HCl) diluido en 0,25mL de agua oxigenada (H2O2) al 3% y 200mL de
agua destilada por 4 minutos.
3) se eliminó el excedente y se agregó 1,0g de safranina diluida en 100 mL de
agua destilada por 4 minutos
- 31 -
5.3. Índices hematológicos.
5.3.1. Determinación de hematocrito.
Este valor describe el porcentaje de células transportadoras de oxígeno con
respecto al volumen total de la sangre.
La determinación del hematocrito se realizó con sangre heparinizada, ésta se
colocó en un microhematócrito que fue sellado con arcilla en uno de sus extremos,
luego se colocó el tubo en una microcentrífuga por un tiempo de 5min a 14.000G
(Stoskopf, 1993).
5.3.2. Recuento de eritrocitos.
Este recuento consiste en determinar el número de glóbulos rojos por
milímetro cúbico de sangre.
Mediante una pipeta de Thoma se aspiró sangre hasta la marca 0,5. A
continuación se rellenó la pipeta hasta la marca 101 con suero fisiológico (solución
acuosa de cloruro de sodio al 0,85%), logrando una dilución de 1:200. Luego se
taparon los extremos de la pipeta con los dedos y se agitó para asegurar una mezcla
homogénea. Posterior a esto, se introdujo esta mezcla en una cámara de recuento
celular (Neubauer).
Después de cargar adecuadamente la cámara, se dejó sedimentar las células
durante 2 minutos, luego se procedió a contar el número de eritrocitos presentes en
un total de 80 pequeños cuadros; estos se encuentran agrupados en grupos de 16
cada uno; por este motivo cinco de estos cuadros equivalen a 80 cuadrados
pequeños (Fig. 16). Al ser efectuado el recuento no se consideró los eritrocitos
encontrados en las líneas superior y derecha (Stoskopf, 1993).

- 32 -
El número de eritrocitos se determinó utilizando la siguiente fórmula:
N0 de eritrocitos contados x 4000 x dilución = Número de eritrocitos / mm3

80
5.3.3. Recuento de leucocitos y trombocitos.
Para la realización de este procedimiento se utilizó de una pipeta de Thoma
para glóbulos blanco aspirando hasta la marca 0,5, de sangre y luego se aspiró
solución Natt- Henrry hasta la marca 101 a una dilución 1: 100 donde se mezcló
y agitó por 2 a 3 minutos, eliminado las 3 primeras gotas y se cargó la cámara de
Neubauer, luego se espero unos segundos la decantación de las células (Huston,
1990).
El diluyente de Natt y Herrick, incorpora violeta de metileno, lo cual permite
diferenciaciones celulares (Conroy, 1998).
El lugar de la cámara en donde se realizó el recuento de leucocitos y
trombocitos, se encuentra las cuatro esquinas de la cámara de Neubauer, como lo
muestra la fig. 16.
El número de leucocitos se determinó utilizando la siguiente fórmula:
N0 de células contadas x 10 x dilución = Número de leucocitos / mm3

4
- 33 -
Figura 16. Cuadrícula de la cámara de Neubauer utilizada para el recuento celular.
Los círculos rojos indican el lugar donde se realizó el recuento de
eritrocitos. Las L marcan el lugar donde se realizó el recuento de
leucocitos y trombocitos.
5.3.4. Recuento diferencial.
El recuento diferencial se realizó con el fin de obtener información de los
diferentes grupos celulares que conforman los leucocitos, ya que diferentes
patologías provocan la disminución de estas células.
Se realizó el recuento diferencial en 10 frotis sanguíneos, tanto de adultos
como de cristalinos. Este consistió en el conteo y diferenciación de 100 leucocitos
por frotis sanguíneo. Este resultado se expresa en forma porcentual.
Este mismo método se utilizó para diferenciar estados madurativos de
trombocitos y eritrocitos.
- 34 -
5.3.5. Determinación de hemoglobina.
Se determinó hemoglobina para 5 peces adultos mediante el método de la
cianmetahemoglobina. Este se fundamenta en la oxidación de la carboxihemoglobina
y la oxihemoglobina por medio del ferricianuro de potasio. Esta solución mediante
diferentes reacciones químicas trasforma estos pigmentos en cianmetahemoglobina,
la cual es cuantificable por medio de la colorimetría (Conroy, 1998).
Por medio de una micropipeta se agregaron 20µL de sangre en un tubo de
vidrio con 5ml de solución Drabkin como diluyente. Esta solución se dejó reaccionar
por 15 minutos, posterior a esto se determinó la densidad óptica de la solución en un
espectrofotómetro a una longitud de onda de 540nm (Å), así como también la
densidad óptica de un patrón artificial a la misma longitud de onda, según
metodología descrita por Conroy (1998) y utilizando la siguiente fórmula.
Densidad óptica de la muestra (Å) x mg /dL del patrón) = mg /dL Hg.

Densidad óptica del patrón (Å)
5.3.6. Índices hematológicos derivados:
5.3.6.1. Volumen corpuscular medio (V.C.M.).
Este índice mide el volumen ocupado por un eritrocito medio en la sangre
periférica y se determinó mediante la siguiente fórmula.
% Hematocrito x 10 = V.C.M. (µ³)

Recuento eritrocitario (106 x mm3)
5.3.6.2. Hemoglobina corpuscular media (H.C.M.).
Este índice determina la masa de la hemoglobina en un eritrocito y se
determinó mediante la siguiente fórmula.
- 35 -
Hg g/100mL x 10 = H.C.M. (µµg)
Recuento eritrocitario (106 x mm3)
5.3.6.3. Concentración corpuscular media de hemoglobina (C.C.M.H.).
Es un indicador del porcentaje del eritrocito ocupado por la hemoglobina y se
determinó utilizando la siguiente fórmula
Hg g/100mL x 100 = C.C.M.H. (%)

% Hematocrito
5.3.7. Mediciones celulares.
Los tamaños celulares marcan importantes tendencias a la hora de realizar un
análisis ictiohematológico, por lo tanto, es necesario tener referencias dimensionales
de estos elementos.
Para determinar el tamaño de las células, se procedió a medir las diferentes
líneas celulares presentes en la sangre periférica de Galaxias maculatus, tanto en su
estado adulto como postlarval. Esto mediante un microocular graduado de marca
Wolfe (10X).
El número de células medidas en cada grupo celular dependió de la
habitualidad de esta en la sangre periférica.
5.4. Análisis estadístico de los datos.
Para el análisis estadístico de los datos, se utilizó el programa StatMost
(Statistical Analysis and Graphics versión 3.0). Para determinar diferencias
significativas, los datos se sometieron a análisis de T-Student (T-test) con un
intervalo de confianza del 95% (P ≤ 0.05). La normalidad de los datos se comprobó
- 36 -
mediante la prueba Kolmogorov-Smirnov. Se aplicó la transformación arcoseno en
los datos expresados porcentualmente para lograr homocedasticidad de estos.
- 37 -
6. Resultados.
Las postlarvas y adultos de G. maculatus (fig.18 y 19), presentaron diferencias
significativas (p ≤ 0.05) en cuanto a peso total y longitud total (fig. 19). Los adultos
tuvieron un peso promedio de 11,7 ± 1,94g y una longitud promedio de 11,3 ±3,4cm
(n=40), en las postlarvas el peso promedio fue 0,33 ±0,08g con una longitud
promedio de 5,75 ±0,43cm (n=30).
Figura 17. Ejemplar postlarva de G. maculatus Figura 18. Ejemplar adulto de G. maculatus
utilizado para el estudio hematológico, capturada utilizado para el estudio hematológico, cultivado
en la Barra del Río Toltén, IX Región-Chile. en el hatchery de la Universidad Católica de
Temuco-Chile.
16 16
14 A 14 B
b
12 12 b
10
Longitud (cm)
10
Peso (g)
8
8
6
6
a
4
4
2
a 2
0
0
3 4 5 6
Postlarva Adulto Postlarva Adulto
Figura 19. Peso (A) y Longitud (B) promedio (±D.E) de 30 ejemplares adultos y 60
postlarvas de Galaxias maculatus, utilizadas para el análisis
hematológico. Las letras diferentes indican diferencias significativas
(p<0.05) en cuanto a peso y longitud.
- 38 -
6.1. Línea celular Eritrocitaria.
6.1.1. Eritroblastos.
Los eritroblastos encontrados en ambos grupos de peces, se caracterizaron
por su forma circular, además de un gran núcleo redondo de color rosado, orientado
de manera excéntrica, formado por cromatina laxa heterogéneamente distribuida. El
citoplasma es intensamente basófilo y heterogéneo (figs. 20 y 21).
Los eritroblastos medidos en ambos grupos de peces, no presentaron
diferencias significativas (p>0,05), tanto en su núcleo como en el citoplasma. En
postlarvas exhibieron un diámetro celular de 7,61 ± 1,00µm con un diámetro nuclear
de 6,09 ± 0,94µm (n = 50) (fig. 22). En adultos presentaron un diámetro celular
promedio de 6,99 ± 1,06µm y un diámetro nuclear de 5,48 ± 1,10µm (n = 20).
Figura 20. Microfotografía de un Figura 21. Microfotografía de un eritroblasto

eritroblasto (flecha) de postlarva de puye, (flecha) de puye adulto, teñido con May-
teñido con May- Gründwald Giemsa. Gründwald Giemsa. Observado con un
Observado con un aumento de 1000X aumento de 1000X
- 39 -
10
8 a
a
a a
Longitud (µm)
0
Total Núcleo
Figura 22. Diámetro celular y nuclear promedio (±D.E) registrados en eritroblastos

presentes en adulto y postlarva de G. maculatus. Letras iguales indica
que no se encontraron diferencias significativas (p>0.05).
6.1.2. Policromatocitos o eritrocitos inmaduros.
Estas células presentaron forma circular con un citoplasma azul-grisáceo,
además de un núcleo central formado por cromatina compacta y basófila (fig. 23).
Esta característica tintórea del núcleo se presenta sólo en adultos. En postlarvas se
encontraron células de similares características, las cuales se encontraban en
agregados celulares, estos posibles policromatocitos, se caracterizan por un núcleo
rojizo de aspecto heterogéneo (fig. 24).
Los policromatocitos medidos en ambos grupos de peces no presentaron
diferencias significativas (p>0.05). En postlarva, estas células exhibieron un diámetro
- 40 -
total de 7,24 ±1,36µm y un diámetro nuclear de 4,42 ± 1,05µm (n = 50), con una
relación núcleo/citoplasma de 1:1,82. En adultos, presentaron un diámetro total
promedio de 6,22 ±1,17µm y un diámetro nuclear de 3,41 ±1,02µm (n=50) con una
relación núcleo/citoplasma de 1:1,62 (fig. 25).
Figura 23. Microfotografía de un Figura 24. Microfotografía de un

Policromatocito de G. maculatus cúmulo de policromatocitos de
adulto (flecha), teñido con May- postlarva de G. maculatus (flecha),
Gründwald Giemsa. Observado con teñido con May- Gründwald Giemsa.
un aumento de 100X Observado con un aumento de 100X
10
8 a
a
Longitud (µm)
6
a
4
a
0
Total Núcleo
Figura 25. Diámetro celular y nuclear promedio (±D.E) registrados en
policromatocitos presentes en adulto y postlarva de G. maculatus. Letras
iguales indica que no se encontraron diferencias significativas (p>0.05).
- 41 -
6.1.3 Eritrocitos maduros.
Los eritrocitos maduros fueron las células predominantes en G. maculatus
adultos. Estas presentan una forma elíptica, al igual que el núcleo, el cual se
encuentra en el centro de la célula y está conformado por una masa compacta de
cromatina intensamente basófila. El citoplasma es levemente eosinófilo y de aspecto
homogéneo (fig. 26).
De un total de 100 eritrocitos maduros medidos, el eje largo midió en promedio
9,47 ±1,09µm y su eje corto midió en promedio 6,88 ±1,00µm. El eje largo del núcleo
midió 4,00 ± 0,69µm y el eje corto 2,88 ± 0,59µm.
La sangre periférica de postlarvas de G. maculatus no presentó eritrocitos
maduros, no obstante, se encontraron, aunque en pequeña cantidad, posibles
eritrocitos iniciales en proceso de plasmólisis, estas células presentaron forma
circular y bordes irregulares. El diámetro total fue de 12,13 ± 2,11µm, además de un
pequeño núcleo central rosado, el cual presentó un diámetro promedio de 2,99 ±
0,93µm. El núcleo se encuentra rodeado por un citoplasma levemente eosinófilo (fig.
27).
- 42 -
Figura 26. Microfotografiá de un Figura 27. Microfotografía de un
eritrocito maduro de G. maculatus eritrocito inicial de G. maculatus
adulto (fecha), teñido con May- postlarva (fecha), teñido con May-
Gründwald Giemsa. Observado Gründwald Giemsa. Observado
con un aumento de 1000X con un aumento de 1000X
6.1.4. Eritrocitos en plasmólisis.
Una vez que el eritrocito ha terminado su vida útil, comienza el proceso de
destrucción de la célula. En G. maculatus adulto este proceso comienza con el
aumento de volumen del núcleo, acompañado de un cambio en el color de la
cromatina, la cual pasa de un basófilo intenso a un color rosado-rojizo (fig. 28).
Posterior a esto, el núcleo adquiere forma irregular y ubicación excéntrica, al mismo
tiempo que comienza la lisis del citoplasma (fig. 29). Al final del proceso de
plasmólisis sólo queda un núcleo cariolisado, el cual adquiere el nombre de célula
fantasma (fig. 30). En ocasiones el citoplasma de la célula no se destruye por
completo, este resto citoplasmático recibe el nombre de eritroplastido (fig. 35). Este
mismo proceso degenerativo fue observado en policromatocitos presentes en
postlarvas de G. maculatus (figs. 31, 32, 33 y 34).
- 43 -
Figura 28. Microfotografía de un Figura 29. Microfotografía de un Figura 30. Microfotografía de una
eritrocito en plasmólisis inicial de G. eritrocito en plasmólisis avanzada de célula fantasma de G. maculatus
maculatus adulto (flecha). Teñido G. maculatus adulto (flecha). Teñido adulto (flecha). Teñido con May-
con May-Gründwald Giemsa. con May-Gründwald Giemsa. Gründwald Giemsa. Observado con un
Observado con un aumento de Observado con un aumento de 1000X. aumento de 1000X.
1000X.
Figura 31. Microfotografía de un Figura 32. Microfotografía de un Figura 33. Microfotografía de una
policromatocito en plasmólisis inicial policromatocito en plasmólisis célula fantasma de postlarva G.
de postlarva G. maculatus (flecha). avanzada de postlarva G. maculatus maculatus (flecha). Teñido con May-
Teñido con May-Gründwald Giemsa. (flecha). Teñido con May- Gründwald Giemsa. Observado con
Observado con un aumento de 1000X. Gründwald Giemsa. Observado con aumento de 1000X.
un aumento de 1000X.
Figura 34. Microfotografía de un Figura 35. Microfotografía de un eritroplastido

eritroplastido de G. maculatus de G. maculatus adulto (flecha), teñido con
postlarva (flecha). Teñido con May- May-Gründwald Giemsa. Observado con un
Gründwald Giemsa. Observado con un aumento de 1000X.
aumento de 1000X.
- 44 -
6.1.5. Distribución celular de la línea eritrocitaria de postlarvas de G maculatus.
El recuento diferencial de la línea eritrocitaria en postlarvas de G maculatus
arrojó los siguientes resultados promedio: eritroblasto 21,66 ± 0,63%;
policromatocitos 69,96 ± 1,11%; eritrocito iniciales 5,12 ± 1,85%; policromatocitos en
plasmolisis 2,23 ± 1,11% y célula fantasma 1,03 ± 1,30% (n=500) (fig. 36).
80
60
Porcentaje (%)
40
20
0
0 1
Eritroblastos 2
Policromatocitos 3
Eritrocitos 4
Policromatocitos 5 fantasmas.
Células 6
iniciales en plasmólisis.
Figura 36. Distribución porcentual de los diferentes estados madurativos de la línea

celular eritrocitaria presente en postlarvas de Galaxias maculatus.
6.1.6. Distribución celular de la línea eritrocitaria en adultos de G. maculatus.
De un total de 1000 eritrocitos evaluados, correspondientes a 10 ejemplares
adultos de G. maculatus, se diferenciaron los distintos niveles madurativos de la línea
celular eritrocitaria, la cual se encuentra distribuida de la siguiente manera:
- 45 -
eritroblasto 0,05 ± 0,01%; policromatocitos 0,48 ± 0,05%; eritrocitos maduros 96,34 ±
1,65%; eritrocitos en plasmólisis 0,76 ± 0,04%; células fantasmas 2,20 ± 0,25% y
eritroplastidos 0,16 ± 0,02% (n=1000) (fig 37).
120
100
80
Porcentaje (%)
60
40
20
0
0 Eritroblastos1 2 .
policromato 3
Eritrocitos 4
Eritrocitos 5Célula Eritroplastidos
6 7
maduro. en plasmolisis. fantasma.
Figura 37. Distribución porcentual de los diferentes estados madurativos de la línea

celular eritrocitaria presente en adultos de Galaxias maculatus.
6.2. Línea celular leucocitaria.
6.2.1. Linfocitos.
Los linfocitos encontrados en Galaxias maculatus adulto y postlarva muestran
diversas morfologías, desde irregulares hasta redondas, siendo esta última la
predominante. Estas variaciones morfológicas generalmente son producto de la
presencia de pseudópodos, los cuales son extensiones de la misma célula.
- 46 -
Los linfocitos exhibieron un escaso citoplasma levemente basófilo, en el que
ocasionalmente se observaron granos de color basófilo intenso, los cuales fueron
peroxidasa negativo. El núcleo es de color rosado, compuesto por cromatina laxa
heterogéneamente distribuida, (fig. 38 y 39).
Los linfocitos de ambos estados madurativos, no presentaron diferencias
significativas (p>0.05) en cuanto a tamaño y distribución (debido a lo escaso del
citoplasma sólo se midió el largo total de la célula). En el caso de los adultos el
diámetro total promedio fue 4,31 ± 0,84µm (n=100) y en postlarvas el diámetro total
promedio fue 5,8 ± 1,11µm (n=50) (fig. 40).

linfocito de G. maculatus postlarva linfocito de G. maculatus adulto
(flecha), teñido con May- (flecha), teñido con May-
Gründwald Giemsa. Observado Gründwald Giemsa. Observado
con un aumento de 1000X con un aumento de 1000X
- 47 -
8
Longitud (µm)(µm)
6
Longitud a
4
0
Postlarva Adulto
Figura 40. Diámetro celular promedio (±D.E) registrado en linfocitos de adultos y

postlarvas de G. maculatus. Letras iguales indican que no se encontraron
diferencias significativas (p>0.05).
6.2.2. Monocitos.
Los monocitos encontrados en postlarvas y adultos de G. maculatus, fueron el
leucocitos mas grande. Su forma es irregular, a menudo presentan un gran
citoplasma de coloración ligeramente basófilo, en el cual se observan vacuolas. El
núcleo, generalmente excéntrico y de color rosado, presenta formas irregulares y
ocasionalmente reniforme (fig. 41 y 42).
Los monocitos medidos en postlarva presentaron un diámetro celular
promedio de 10,30 ± 2,17µm y un diámetro nuclear promedio de 6,76 ± 2,17µm (n =
50). En adultos se encontró un diámetro celular de 10,59 ± 2,34µm y un diámetro
nuclear promedio de 5,68 ± 1,61µm (n = 50) (fig. 43), no encontrándose diferencias
de tamaño ni distributivas significativas (p>0.05) entre los grupos de peces.
- 48 -
monocito de postlarva G. maculatus monocito de G. maculatus adulto
(flecha), teñido con May-Gründwald (flecha), teñido con May-
Giemsa. Observado con un aumento Gründwald Giemsa. Observado
de 1000X con un aumento de 1000X
14
12
a a
10
Longitud (µm)
8
a
a
6
0
Total Núcleo
Figura 43. Diámetro celular y nuclear promedio (±D.E) registrados en monocitos

presentes en adulto y postlarva de G. maculatus. Letras iguales indican
- 49 -
6.2.3 Granulocitos.
El total de los granulocitos encontrados en G maculatus fueron de granos finos
o neutrófilos, los cuales presentaron una reacción peroxidasa positivo frente a la
tinción de Sato & Sekiya (fig 44 y 45).
Figura 44. Microfotografía de granulocitos Figura 45. Microfotografía de

peroxidasa positivo de postlarva de G. granulocitos peroxidasa positivo de G.
maculatus (flecha), teñido con Safranina. maculatus adulto (flecha), teñido con
Observado con un aumento de 1000X Safranina. Observado con un aumento
de 1000X.
6.2.4. Neutrófilos.
Los neutrófilos presentaron en ambos grupos de peces, formas variadas
desde irregulares a redondas con un citoplasma finamente granular de aspecto
basófilo. El núcleo rosado se presenta de manera excéntrica y su forma indica
diferentes estados madurativos: núcleo redondeado (mielocito) (figs. 46 y 47),
reniforme (metamielocito) (figs. 48 y 49), en cinta (neutrófilo juvenil) (figs. 50 y 51) y
lobulado (neutrófilo adulto) (figs. 52 y 53).
Para medir los neutrófilos se agruparon en: neutrófilos adultos y neutrófilos
inmaduros (mielocito, metamielocito y juvenil). Los neutrófilos adultos de postlarvas
presentaron un diámetro celular 8,22 ± 0,67µm y un diámetro nuclear de 6,44 ±

- 50 -
1,22µm (n=6). Los neutrófilos maduros de adultos, presentaron un diámetro total
8,46 ± 0,51µm y un diámetro celular de 6,35 ± 1,08µm (n=20). En postlarvas los
neutrófilos juveniles presentaron un diámetro celular 8,77 ± 1,56µm y un diámetro
nuclear de 5,67 ± 1,20µm (n=30). Los neutrófilos juveniles en adulto de G maculatus
presentaron un diámetro total 8,37 ± 1,89µm y un diámetro nuclear de 4,74 ± 1,97µm
(n=30) (fig. 54). No encontrándose diferencias morfologías y distributivas
significativas (p>0.05) entre los dos grupos de peces.
Figura 46. Microfotografía de un Figura 47. Microfotografía de un mielocito

mielocito de G. maculatus postlarva de G. maculatus adulto (flecha), teñido con
(flecha), teñido con May-Gründwald May-Gründwald Giemsa. Observado con
Giemsa. Observado con un aumento de un aumento de 1000X.
1000X.

metamielocito de G. maculatus postlarva metamielocito de G. maculatus
(flecha), teñido con May-Gründwald Giemsa. adulto (flecha), teñido con May-
Observado con un aumento de 1000X. Gründwald Giemsa. Observado con un
- 51 - aumento de 1000X.
neutrófilo en cinta de G. maculatus neutrófilo en cinta de G.
postlarva (flecha), teñido con May- maculatus adulto, teñido con May-
Gründwald Giemsa. Observado con un Gründwald Giemsa. Observado
aumento de 1000X. con un aumento de 1000X.

neutrófilo adulto de G. maculatus neutrófilo adulto de G. maculatus adulto
postlarva (flecha), teñido con May- (flecha), teñido con May-Gründwald
Gründwald Giemsa. Observado con un Giemsa. Observado con un aumento de
aumento de 1000X. 1000X.
- 52 -
12
10
a
a a a
8
Longitud (µm)
a
6 a a
a
0
Postlarva Adulto Post.larva Adulto Postlarva Adulto Postlarva Adulto
Neutrófilo adulto Neutrófilo adulto Neutrófilo juvenil Neutrófilo Juvenil

Total Núcleo Total Núcleo
Figura 54. Diámetro celular y nuclear promedio (±D.E) registrados en neutrófilos
presentes en adulto y postlarva de G. maculatus. Letras iguales indican
6.2.5. Distribución celular de la línea leucocitaria en postlarvas y adulto de G
maculatus.
El recuento diferencial de la línea leucocitaria presente en postlarvas de G
maculatus, arrojó el siguiente resultado: linfocitos 69,64 ± 0,61%; monocitos 8,91 ±
0,84%; neutrófilos juveniles 18,42 ± 0,39% y neutrófilos maduros 3,04 ± 0,40%.
El recuento diferencial de la línea leucocitaria presente en adultos de G
maculatus, arrojó el siguiente resultado: linfocitos 71,20 ± 0,98%; monocitos 8,60 ±
0,74%; neutrófilos juveniles 17,50 ± 0,54% y neutrófilos maduros 2,70 ± 0,07% (fig.
55).
- 53 -
No se encontraron diferencias significativas (p>0.05) entre las distribuciones
porcentuales leucocitarias de ambos grupos de peces.
80
a a
60
Porcentaje (%)
40
20 a a
a a
a a
0
P.larva Adulto P.larva Adulto P.larva Adulto P.larva Adulto
Linfocito Monocito Neutrófilo Neutrófilo maduro
juvenil
Figura 55. Distribución porcentual promedio (±D.E) de la línea leucocitaria
registrada en adulto y postlarva de G. maculatus. Letras iguales indica que
no se encontraron diferencias significativas (p>0.05) entre ambos grupos
de peces.
- 54 -
6.3. Línea celular trombocitaria.
6.3.1. Trombocitos.
Los trombocitos presentes en G maculatus, muestran formas que varían de
redonda, en el caso de trombocitos maduros, a elíptica, en trombocitos inmaduros.
Estos últimos presentan un núcleo central elíptico de cromatina basófila densa en el
centro de la célula, el cual está rodeado por un citoplasma escasamente basófilo
(figs.56 y 58). Los trombocitos maduros presentan un núcleo generalmente
excéntrico, redondo, de cromatina densa, intensamente basófila y homogéneamente
distribuida. Este núcleo se encuentra rodeado por un escaso citoplasma basófilo
(fig.57 y 59).
Los trombocitos inmaduros medidos en postlarvas de G maculatus, exhibieron
un eje largo de 6,91 ± 1,58µm y un eje corto de 2,35 ± 0,93µm. En el caso del núcleo
los resultados fueron los siguientes: eje largo 5,22 ± 1,59µm y eje corto 1,55 ±
0,22µm (n=10).
Los trombocitos maduros medidos en adultos presentaron un diámetro total
de 3,90 ± 0,51µm (n =20). Los trombocitos inmaduros medidos en adultos de G
maculatus, presentaron un eje largo celular de 7,83 ± 2,35µm, eje corto celular 2,53
± 0,62µm, el núcleo presentó un eje largo de 6,02 ± 1,59µm, y un eje corto de 1,74 ±
0,42µm (n = 20). Los trombocitos maduros presentaron un diámetro total de 3,20 ±
0,73µm (n = 20).
No se encontraron diferencias significativas (p ≤ 0.05) entre los trombocitos de
postlarva y adulto de G maculatus (fig. 60).
- 55 -
Figura 56. Microfotografía de un Figura 57. Microfotografía de un Grupo de
trombocito inmaduro de G. maculatus trombocito maduro de G. maculatus
postlarva (flecha), teñido con May- postlarva (flecha), teñido con May-
Gründwald Giemsa. Observado con un Gründwald Giemsa. Observado con un
aumento de 1000X. aumento de 1000X
Figura 58. Microfotografía de un Figura 59. Microfotografía de un Grupo de

trombocito inmaduro de G. maculatus trombocito maduro de G. maculatus adulto
adulto (flecha), teñido con May (flecha), teñido con May-Gründwald
Gründwald-Giemsa. Observado con un Giemsa. Observado con un aumento de
aumento de 1000X.
- 56 -
12
10
a
8 a
Longitud (µm)
a
a
6
4 a a
a a
a a
2
0
Postlarva Adulto Postlarva Adulto Postlarva Adulto Postlarva Adulto Postlarva Adulto
Diámetro mayor Diámetro menor Diámetro mayorDiámetro mayor Diámetro
Total Total Núcleo Núcleo Total
T. inmaduro T. inmaduro T. inmaduro T. inmaduro T. maduro
Figura 60. Diámetro celular y nuclear promedio (±D.E) registrados en trombocitos

presentes en adulto y postlarva de G. maculatus. Letras iguales indican que
no se encontraron diferencias significativas (p>0.05).
6.3.2. Distribución celular de la línea trombocitaria en postlarvas y adultos de
G. maculatus.
El recuento diferencial de la línea trombocitaria en postlarvas de G. maculatus,
arrojó el siguiente resultado: trombocitos maduros 98,40 ± 3,03% y trombocitos
inmaduro 1,70 ± 0,37% (n = 500). En adulto, en cambio, se registraron: trombocitos
maduros 94.00 ± 0,56% y trombocitos inmaduro 6,00 ± 0,56% (n = 1000) (fig. 61).
No se encontraron diferencias significativas (p ≤ 0.05) entre la distribución
porcentual trombocitaria de ambos grupos de peces.
- 57 -
120
100 a
a
80
Porcentaje (%)
60
40
20
a a
0
Trombocitos maduros Trombocitos inmaduros
Figura 61. Distribución porcentual promedio (±D.E) de la línea trombocitaria

registrada en adulto y postlarva de G. maculatus. Letras iguales indican
que no se encontraron diferencias significativas (p>0,05) entre ambos
grupos de peces.
6.4. Parámetros hematológicos de G. maculatus.
Los parámetros hematológicos fueron medidos sólo en adultos de G.
maculatus, esto debido a que el volumen de sangre extraído de postlarvas no
permitió la medición de estos parámetros. No obstante, en una ocasión se logró
medir los posibles policromatocitos de postlarvas, el resultado de esto dió 0,01 x106
policromatocitos/mm³.
Asimismo se observó una ausencia total de pigmento en la escasa sangre periférica
extraída.
- 58 -
6.4.1. Hemoglobina.
El promedio de hemoglobina en adultos de G. maculatus fue de 4,5 ± 0,95g
Hg/ 100mL (n=5).
6.4.2. % Hematocrito.
En promedio el porcentaje de hematocrito para G. maculatus adulto fue de
19,04 ± 5,79% (n=10)
6.4.3. Recuento de eritrocitos.
En promedio la concentración de eritrocitos en G. maculatus adulto fue de
1,16 x106 ± 0,29eritrocitos /mm³ (n=10).
6.4.4. Recuento leucocitario y trombocitario.
En promedio los adultos de G. maculatus presentaron una concentración de
16,45 x10³ ± 3,54 leucocitos /mm³ (n=5), y una de 12,80 x10³ ± 6,45 trombocitos
/mm³ (n=5).
6.4.5. Índices hematológicos derivados.
6.4.5.1 Volumen corpuscular medio (V.C.M.).
El volumen ocupado por un eritrocito promedio, en la sangre periférica de G.
maculatus adulto, fue de 169,91 ± 54,81µm³.
6.4.5.2. Hemoglobina corpuscular media (H.C.M.).

- 59 -
La masa de la hemoglobina en un eritrocito promedio de G. maculatus fue de
41,02 ±9,74µµg.
6.4.5.3. Concentración corpuscular media de hemoglobina (C.C.M.H.).
El porcentaje ocupado por la hemoglobina en un eritrocito promedio de G.
maculatus adulto fue de 25,89 ± 8,65%.
- 60 -
6.5. Discrasias eritrocitarias.
Si bien no era objetivo de esta tesis identificar discrasias eritrocitarias
(variaciones dimensionales, morfológicas y tintóreas), es interesante mencionar
algunas identificadas en puye. Estas anormalidades sanguíneas fueron encontradas
puntualmente, en uno de los extendidos sanguíneos, el cual no fue considerado para
la medición de los parámetros hematológicos normales de G. maculatus (figs 62, 63,
64, 65, 66 y 77). Estas identificaciones morfológicas referenciales servirán como
material de apoyo para identificar anormalidades nutricionales, fisiológicas y
ambientales en futuras investigaciones que requieran de características
hematológicas del G. maculatus adulto.
Fig. 62. Microfotografía de un eritroblasto de Fig. 63. Microfotografía de un eritrocito de G.

G. maculatus adulto en división nuclear maculatus con hipocromacia (flecha), teñido
(flecha), teñido con May-Gründwald Giemsa. con May-Gründwald Giemsa. Observado con
Observado con un aumento de 1000X. un aumento de 1000X.
- 61 -
Fig. 64. Microfotografía de un eritrocito de G. Fig. 65. Microfotografía de un eritrocito de
maculatus adulto, con núcleo cariorrexico G. maculatus adulto (flecha), con ruptura
(flecha roja), y de un microcito (flecha del núcleo, teñido con May-Gründwald
blanca), teñidos con May-Gründwald Giemsa, Observado con un aumento de
Giemsa, Observado con un aumento de 1000X.
1000X.
Fig. 66. Microfotografía de un eritrocito Fig. 67. Microfotografía de un eritrocito con

poiquilocito de G. maculatus adulto núcleo excéntrico de G. maculatus adulto
5.6. Resumen
(flecha), teñido hematológico
con May-Gründwald (flecha), teñido con May-Gründwald Giemsa,
Giemsa, Observado con un aumento de Observado con un aumento de 1000X.
1000X.
- 62 -
6.6. Resumen hematológico.
Los resultados obtenidos en el presente estudio hematológico, se expresan a
modo de resumen, en las tablas N0 1 y 2, en donde se observa los diferentes
parámetros sanguíneos del cuadro hemático normal del puye y las características
morfológicas de las distintas células encontradas en la sangre periférica de adultos y
postlarvas.
Tabla N° 1. Valores promedios obtenidos del cuadro hemático normal del puye
(Galaxias maculatus), tanto para adultos como para postlarvas.
Postlarvas Adultos
Parámetros hematológicos Promedios Desv. Promedios Desv.
6
Recuento eritrocitario (x 10 /mm³) - - 1,156 ± 0,290
Recuento policromatocitos (x 106/mm³) 0,010 ± 0,0001 - -
Recuento leucocitario (x 10³/mm³) - - 16,450 ± 3,547
Recuento trombocitario (x 10³/mm³) - - 12,800 ± 6,459
Hemoglobina (g de Hg/100ml) 0,000 0,000 4,546 ± 0,950
% Hematocrito - - 19,040 ± 5,57
V.C.M. (µm³) - - 169,610 ± 54,81
H.C.M. (µµg) - - 41,020 ± 9,74
C.C.M.H. (%) - - 25,89 ± 8,65
Distribución de eritrocitos
Eritroblastos % 22,689 ± 3,027 0,051 ± 0,005
Policromatocitos % 68,908 ± 5,308 0,477 ± 0,046
Eritrocitos iniciales % 4,009 ± 8,819 - -
Eritrocitos maduros % - - 96,346 ± 1,657
Eritrocitos en plasmólisis % 3,090 ± 0,040 0,761 ± 0,043
Células fantasma % 1,103 ± 0,250 2,202 ± 0,245
Distribución de leucocitos
Neutrófilos maduros % 3,036 ± 0,032 2,70 ± 0,007
Neutrófilos inmaduros % 18,421 ± 0,043 17,50 ± 0,054
Linfocitos % 69,636 ± 0,060 71,20 ± 0,099
Monocitos % 8,907 ± 0,084 8,60 ± 0,074
Distribución de trombocitos
Maduros % 98 ± 0,606 94 ± 0,562
Inmaduros % 2 ± 0,377 6 ± 0,562
- 63 -
6.7. Resumen morfológico.
Mediante el examen microscópico (100X) de frotis sanguíneo coloreado con el
método de May Gründwald Giemsa, se puede afirmar que las células encontradas en
la sangre periférica de Galaxias maculatus adulto y postlarva, constan de los
siguientes elementos celulares (tabla Nº2), en conformidad a la nomenclatura
propuesta por Conroy (1972) para el salmón del Atlántico (Salmo salar).
Tabla N° 2. Resumen gráfico de las distintas morfologías celulares presente en la

sangre periférica de Galaxias maculatus, tanto para adultos como para
postlarvas.
Célula precursora de eritrocitos;

Se caracteriza
por un núcleo proporcionalmente grande y
excéntrico, el que se rodea por un citoplasma
intensamente basófilo.
Tamaño
Postlarva(n = 50) Adulto(n = 20)
Célula: 7,61 ±1,00µm Célula: 6,99 ±1,06µm
Núcleo: 6,09 ± 0,94µm Núcleo: 5,48 ± 1,10µm
Eritrocito inmaduro; presentaran un diámetro

total promedio de 6,22 ±1,17µm y un diámetro
nuclear de 3,41 ± 1,02µm (n = 50) Se
caracteriza por un núcleo en el centro de la
célula y un citoplasma azul-plomizo.
Tamaño
Postlarva (n = 50) Adulto(n = 50)
Célula: 8,09 ±1,62µm Célula: 6,22 ±1,17µm
Núcleo: 4,99 ± 1,07µm Núcleo: 3,41 ±1,02µm
Presenta forma elíptica al igual que el núcleo, el

cual se encuentra en el centro de la célula,
rodeado por un citoplasma levemente eosinófilo,
este color es homogéneo en todo el citoplasma.
Tamaño
Adulto (n = 20)
Célula: largo 9,47 ±1,08µm.
Célula: ancho 6,88 ±1,01µm.
Núcleo: largo 4,00 ± 0,68µm.
Núcleo: ancho 2,88 ± 0,58µm.
- 64 -
Comienzo de la plasmólisis. Este
eritrocito se caracteriza por el aumento
del tamaño nuclear producto de la
cariólisis.
Eritrocito en plasmólisis avanzada. Este

eritrocito se caracteriza por su núcleo
cariolisado, el cual se orienta de manera
excéntrica.
Estos restos celulares, son los desechos

nucleares de los eritrocitos
Cuando la plasmólisis no se ha
completado adecuadamente, se
observan eritroplastidos, los cuales son
restos citoplasmáticos.
- 65 -
Esta célula es el primer estado madurativo
de los neutrófilos, se caracteriza por su
núcleo redondo excéntrico, rodeado por un
citoplasma basófilo repleto de granos finos
del mismo color.
Esta célula es el segundo estado

madurativo de los neutrófilos, se
caracteriza por su núcleo reniforme
excéntrico, rodeado por un citoplasma
basófilo repleto de granos finos del
mismo color.
Esta célula es el tercer estado madurativo de

los neutrófilos, se caracteriza por su núcleo en
forma de cinta, rodeado por un citoplasma
basófilo repleto de granos finos del mismo
color.
Tamaño
Célula: 8,77 ± 1,56µm. Célula: 8,37 ± 1,89µm.
Núcleo: 5,67 ± 1,20µm. Núcleo: 4,47 ±
1,97µm.
Neutrófilo maduro, se caracteriza por su núcleo

lobulado, rodeado por un citoplasma basófilo
repleto de granos finos del mismo color. En G.
maculatus los lóbulos del neutrófilo maduro,
van de 2-3.
Tamaño
Postlarva Adulto(n = 2)
Célula: 8,22 ± 0,67µm. Célula:8,46 ±
0,51µm.
Núcleo: 6,44 ± 1,22µm. Núcleo: 6,35 ±
1,08µm.
- 66 -
Esta célula es de forma variada, siendo la
redonda la predominante, su núcleo abarca gran
parte de la célula y se encuentra rodeado por un
escaso citoplasma de color basófilo. A menudo
se observan pseudopodos.
Tamaño
Célula: 5,80 ± 0,11µm. Célula:3,41 ± 8,84µm.
Esta célula es de forma irregular, se caracteriza

por su gran tamaño. Su núcleo es excéntrico y se
encuentra rodeado por un citoplasma levemente
basófilo, en el cual ocasionalmente se encuentran
vacuolas.
Tamaño
Célula:10,30 ± 2,17µm. Célula: 10,59 ± 2,34µm.
Núcleo: 6,76 ± 2,17µm. Núcleo: 5,68 ± 1,61µm.
Esta célula se caracteriza por su forma alargada

o elíptica. Su núcleo es alargado, ocupando gran
parte de la célula y se encuentra rodeado por
un citoplasma levemente basófilo.
Tamaño
Postlarva (n = 20) Adulto (n = 20)
Célula: largo 6,91 ± 1,58µm. Célula: largo 7,83 ± 2,35µm.
Célula: ancho 2,35 ± 0,93µm. Célula: ancho 2,53 ± 0,62µm.
Núcleo: largo 5,22 ± 1,59µm. Núcleo: largo 6,02 ± 1,59µm.
Núcleo: ancho 1,55 ± 0,73µm. Núcleo: ancho 3,20 ± 0,73µm.
Estas células se caracterizan por encontrarse

generalmente en grupos celulares. Su núcleo,
redondo, ocupa gran parte de la célula, el cual
se encuentra rodeado por un escaso
citoplasma levemente basófilo. Su diámetro
total promedio es de 3,20 ±0,73µm (n = 20).
Tamaño
Postlarva (n=20) Adulto(n = 50)
Célula: 3,90 ± 0,51µm. Célula:3,20 ± 0,73µm.
- 67 -
7. Discusión.
Los parámetros hematológicos de los teleósteos dependen del medio en el
que viven, además de sus características conductuales. Esto provoca que cada
especie tenga sus propios parámetros hematológicos (Roberts, 1981). Ejemplo de
esto son las diferencias sanguíneas presentes entre especies de distintos medios
osmóticos, en donde ejemplares de agua dulce presentan parámetros hematológicos
más bajos en comparación a peces de medios hipertónicos, esto se explica por la
mayor afinidad de la hemoglobina por el oxígeno en agua dulce (Conroy, 1972 y
1983). La temperatura, es otro parámetro que afecta los índices hematológicos. Es
así como especies de un mismo medio osmótico, pero de diferente preferéndum
térmico, presentan grandes diferencias sanguíneas, producto del efecto
inversamente proporcional entre la temperatura y el oxígeno del agua (Brown, 1993).
Debido a lo anteriormente mencionado y a la inexistencia de trabajos
publicados referentes a la hematología de G. maculatus, los resultados obtenidos en
el presente estudio serán comparados con especies de teleósteos que comparten
preferencias térmicas y osmóticas.
Al contrastar los resultados hematológicos obtenidos de G. maculatus adulto,
con salmón coho (Oncorhynchus kisutch), salmón Atlántico (Salmo salar) y Trucha
Arcoiris (Oncorhynchus mykiss) (tabla 3), se puede observar que G. maculatus se
caracteriza por presentar parámetros hematológicos comparativamente más bajos
que las especies ya mencionadas: menor concentración de eritrocitos/mm3 (R.E),
menor cantidad de hemoglobina (Hg), eritrocitos de menor volumen (V.C.M) y una
- 68 -
menor masa de hemoglobina por eritrocito (H.C.M). Esto indicaría que G. maculatus
presentaría una conducta más sedentaria que los peces mencionados, ya que los
parámetros hematológicos, son directamente proporcionales a la actividad del pez
(Eisler, 1964 citado por Conroy, 1972).
Tabla Nº3. Comparación de los parámetros hematológicos de G. maculatus adulto

con otras especies de teleósteos.
G. maculatus O. kisutch ¹ S. salar ² O. mykiss ³

Parámetros Promedios Desv. Promedios Desv. Promedios Desv. Promedios Desv.
6
R.E (x 10 /mm³) 1,156 ± 0,290 1,320 ± 0,370 1,290 ± 0,07 1,415 ± 0,25
Hg. (g de Hg./100mL) 4,546 ± 0,950 8,200 ± 0,4 7,900 ± 0,14 6,990 ± 2,99
% Hematocrito 19,040 ± 5,57 44,500 ± 17 41,800 ± 2,5 40,700 ± 8,66
VCM (µm³) 169,610 ± 54,81 339,000 ± 82 324,000 ± 19 294,200 ± 75,52
H.C.M (µµg) 41,020 ± 9,74 61,900 ± 14,7 83,980 ± 5,81 50,050 ± 21,43
C.C.M.H (%) 25,89 ± 8,65 18,30 ± 4,1 4,01 ± 0,16 17,23 ± 8,69
peso individuos (g) 5,75 ± 0,43 30,50 ± 3,8 41,03 ± 8,1 430,00 -
¹(Lester & Budd, 1979), ²(Härding & Höglund, 1982), ³(Rodriguez, 1999)
La morfología de los eritrocitos maduros de G. maculatus adulto coinciden con
las descripciones morfológicas y tintóreas descritas para teleósteos por Conroy
(1972); Roberts (1981); Stoskopf (1993); Brown (1993) e Hibiya (1995).
Los hematíes maduros de G. maculatus adulto se caracterizan por presentar
un tamaño menor que los descritos para salmón Atlántico, salmónidos y teleósteos
(tabla 4), además de presentar una relación largo-ancho menor, lo que indica una
forma más redondeada. Esto reforzaría la idea que G. maculatus adulto presentaría
una conducta menos activa que los peces analizados en tabla 3, ya que además de
tener eritrocitos, en menor cantidad y tamaño, su forma es menos eficaz en el
trasporte de oxígeno, ya que células mas redondas presentan una menor superficie
de contacto que células mas elípticas (Conroy, 1972).
- 69 -
Tabla Nº 4. Comparación de los tamaños celulares (µm) de G. maculatius con otras
especies de teleósteos.
Puye (adulto) Salmon A.¹ Salmónidos² Teleósteos³
Promedios Desv. Promedios Desv. Promedios Desv. Promedios Desv.
Largo total 9,474 ± 1,089 14,700 ± 0,34 13 a 16 - 10 a 15 -
Ancho total 6,883 ± 1,001 8,700 ± 0,22 7 a 10 - 8 a 12 -
Largo núcleo 4,001 ± 0,686 6,600 ± 0,1 - - - -
Ancho núcleo 2,885 ± 0,590 3,600 ± 0,1 - - - -
¹( Lester & Budd, 1979), ²(Yasutake & Walles, 1983), ³(Hibiya, 1995)
Los eritroblastos en G. maculatus se encontraron en un 0,05% del total de las
células eritrocitarias. Las concentraciones normales de esta célula inmadura, se ven
modificadas por diversas patologías (Roberts 1981).
Los policromatocitos se encontraron en un 0,48%, lo que sería considerado
como normal para teleósteos por Ellis et al. (1973), quien señala que estas células se
encuentran hasta en un 1% en un pez sano. El aumento en la concentración de
policromatocitos ha sido descrito como síntoma en diversas anormalidades:
ambientales, nutricionales y sanitarias (Roberts, 1981; Ellis et al., 1981; Conroy,
2000), un ejemplo de esto es el aumento en la concentración de eritrocitos producto
de un estrés por hipoxia (Stoskopf, 1993 y Valenzuela, 2002).
La células fantasmas se presentaron en un 2,20% de las células evaluadas,
estos desechos celulares, indican destrucción de los hematíes, proceso normal que
ocurre al final del ciclo de vida de un eritrocito (Conroy, 1972). La literatura revisada
no hace referencia de valores normales para este resto eritrocitario, sólo menciona
su existencia como normal dentro del fluido sanguíneo. El aumento de la frecuencia
en la sangre periférica de este desecho celular, ha sido mencionado como un
indicador de anormalidades sanguíneas (Conroy 2000), un ejemplo de ello, son las
- 70 -
anemias hemolíticas, donde se acentúa notablemente la aparición de células
fantasmas, producto de la hemólisis de los hematíes maduros (Roberts, 1981).
Los eritroplastidos se encontraron en 0,16% del total de las células
analizadas. La literatura revisada, al igual que en el caso anterior, no menciona un
valor referencial en peces sanos, sólo es indicada su escasa aparición en la sangre
periférica en peces saludables (Conroy, 1972). El aumento de su habitualidad está
relacionado con anormalidades en los hematíes y contaminación (Conroy, 1983;
Stoskff, 1993 y Conroy, 2000).
G. maculatus presentó 16,45 x 103 leucocitos/mm3 (±3,54). En peces la
concentración de este grupo celular es muy variable, dependiendo de la especie y de
las condiciones fisiológicas (Fernández et al., 2002). En salmónidos Yasutake &
Walles (1983) menciona 20,9 x 103 leucocitos/mm3 y Rodríguez (1999) menciona 2 x
103 leucocitos/mm3 en trucha. Estas concentraciones reportadas como normales se
ven modificadas al momento de enfrentar una enfermedad. Lester & Budd (1979)
reportan una leucopenia en peces infectados con BKD y Vibriosis.
Los linfocitos al igual que en el resto de los leucocitos encontrados en G.
maculatus, fueron morfológicamente similares a los descritos por Conroy (1972); Ellis
(1977); Roberts (1981); Yasutake & Walles (1983) y Stoskopf (1993) en diferentes
especies de peces, y se encontraron en mayor abundancia que el resto de los
leucocitos (77,20 ±0,98 %). Situación coincidente con las descripciones hechas por
Conroy (1972); Yasutake & Walles (1983) y Stoskopf (1993) para teleósteos.
La disminución linfocitaria en la sangre periférica o linfopenia, es producto de
diversas anormalidades, como estrés producto del déficit de oxígeno, septicemias
bacteriales e infecciones por hongos (Conroy, 1972; Satchell 1991 y Stoskopf, 1993).
- 71 -
Los monocitos fueron los leucocitos menos frecuentes (8,6%) en adultos de G.
maculatus. Este macrófago se caracterizó por ser la célula sanguínea de mayor
tamaño, (10,59 ± 2,34µm). Su concentracion en el tejido sanguíneo es disminuida
por enfermedades bacterianas como BKD y Vibriosis (Lester & Budd, 1979) y su
presencia es abundante en tejidos inflamados (Fernández et al., 2002 citando a
Campbell & Murri, 1990).
En G. maculatus adulto, los neutrófilos fueron el segundo grupo de leucocitos
en abundancia, con un 14,1% (±0,63), porcentaje dentro de los rangos mencionados
como normales por Olabuenaga (2000) y Fernández et al. (2002) para teleósteos.
Su morfología es semejante a la descrita por Conroy (1972) para Salmo salar. Estos
leucocitos de grano fino, se presentaron principalmente en estados inmaduros. Los
escasos neutrófilos adultos mostraron un núcleo bilobulado en la mayoría de las
ocasiones. Stoskoff (1993) señala que la hipersegmentaciones del núcleo de estas
células es síntoma en inflamaciones severas o crónicas.
. La neutrofilia es habitual en diversas patologías, y se observa en
inflamaciones, situaciones de estrés, infecciones bacterianas y protozoarias
(Stoskopf, 1993; Olabuenaga, 2000 y Fernández et al., 2002).
De los cinco grupos de leucocitos mencionados en la literatura, en G.
maculatus adulto sólo se presentaron: leucocitos, monocitos y neutrófilos. Esta
ausencia de leucocitos de grano grueso (basófilos y eosinófilos), es coincidente con
la literatura, la cual señala que los eosinófilos y basófilos, se presentan escasamente
en la sangre periférica, e incluso la ausencia de estas, es habitual en la mayoría de
los teleósteos (Olabuenaga, 2000 y Fernández et al., 2002), esto al parecer es
debido a que estos granulocitos, se encontrarían en otros tejidos, como la dermis,

- 72 -
tejido intestinal, branquias, pseudo branquias, vejiga natatoria, tejido hematopoyético,
epitelio nasal, corazón y en general en tejidos inflamados (Ellis et al., 1981;
Olabuenaga, 2000; Fernández et al., 2002; Valenzuela et al., 2003). Reite (1998),
menciona que los granulocitos de grano grueso formarían parte de un grupo
heterogéneo de células llamado mastocitos, los cuales se encontrarían en distintos
tejidos del organismo y cumplirían una función defensiva.
No se encontraron diferencias significativas entre los leucocitos de cristalino y
adulto, por lo cual el análisis leucocitario realizado para el adulto de G. maculatus,
seria igualmente aplicable al cristalino, esto con la excepción del R.L., el cual no fue
realizado en cristalino.
La identificación de trombocitos es confusa debido al parecido de estas célula
en su estado maduro (TM) con los linfocitos, situación que se menciona en la
literatura como causa de error en los recuentos celulares y diferenciales (Stoskopf,
1993). Estas dificultades no fueron ajenas a esta investigación, por lo cual se
mencionarán algunas de las principales características morfológicas tomadas en
cuenta para la diferenciación de estas células: generalmente los TM se encuentran
en agregados celulares o coágulos, su núcleo se tiñe de color más intenso que el de
los linfocitos, los TM carecen de pseudópodos y su citoplasma es menos basófilo en
comparación al de un linfocito.
Los trombocitos se encontraron en una concentracion de 12,80 x 103
trombocitos/mm3, de los cuales el 94 ± 0,56%, fueron TM. La literatura citada no
hace referencia a recuentos diferenciales de esta línea celular, por lo cual no se tuvo
un punto de comparación al respecto. En tilapia Conroy (1984), menciona 22,3 x 103
trombocitos/mm3 y Lester & Budd, 1979 menciona 26 x 103 trombocitos/mm3 en

- 73 -
salmon coho. La concentración de estas células se ve disminuida producto de
enfermedades como BKD, Vibriosis y contaminaciones crónicas por cadmio (Lester &
Budd, 1979 y Stoskopf, 1993).
No se encontraron diferencias significativas entre los trombocitos de cristalino
y adulto, por lo cual el análisis trombocitario realizado para el adulto de G. maculatus,
es igualmente aplicable al cristalino, esto con la excepción del R.T., el cual no fue
realizado en cristalino.
Las postlarvas de G. maculatus se caracterizaron por una ausencia total de
eritrocitos maduros y una escasa concentración de células en la sangre periférica
(0,01 x 106 celulas/mm3), estas últimas correspondieron principalmente a
policromatocitos, los que se caracterizaron por presentar su núcleo en estado de
cariólisis. Podría pensarse que esta células participan en el transporte de oxígeno,
ya que algunos autores mencionan que estos eritrocitos inmaduros podrían trasportar
oxígeno, aunque de manera menos eficiente, debido al proceso madurativo de la
hemoglobina en ellos. Hardig (1977) menciona que la síntesis de la hemoglobina
sucede durante la maduración de la célula eritrocitaria y esta se encuentra madura
sólo cuando el eritrocito alcanza su estado adulto. Esto respondería el por qué de la
plasmólisis temprana de estas células eritrocitarias inmaduras, ya que al no poder
concluir el proceso madurativo de la hemoglobina, llegan hasta una etapa anterior al
termino de este proceso, momento en el cual son eliminadas, producto de la
estrategia de despigmentación. Esto haría presumir la ausencia de ferroproteínas
maduras, situación coincidente con las investigaciones de Busse & Campos (1996),
quienes no detectaron la presencia de metales en la sangre periférica de G.
maculatus en estado postlarval. Otra característica de la sangre de las postlarvas, es

- 74 -
su viscosidad sanguínea, este parámetro aunque no fue medido, pudo ser deducido
debido a que se identificaron claramente, tanto en los frotis sanguíneo como en
ejemplares vivos, cúmulos celulares característicos de plasmas viscosos. Ham
(1988) menciona que esto es una anormalidad en humanos producto de un exceso
de lípido en la dieta.
Estas características sanguíneas son comparables a la descritas por Malcolm
(1970), para Chaenocephalus aceratus, en el cual también se presenta una
ausencia de elementos transportadores de oxígeno, esto se explica, por las
condiciones térmicas extremadamente bajas a la que se encuentra expuesto este
teleósteo, esto posiblemente provocó, que en alguna etapa de su ciclo evolutivo, el
Ice fish generara un anticoagulante en la sangre (gliceropeptido), esto produjo un
aumento en la viscosidad de la sangre, razón por la cual eliminó los eritrocitos, para
así poder obtener una fluidez aceptable en la sangre, generando la problemática de
cómo transportar el oxígeno, lo que se solucionó disolviendo físicamente el oxígeno
en el plasma (Malcolm, 1970 y Busse & Campos ,1996). Otro pez de similares
características hematológicas es Anguilla sp en estado larval, este a diferencia del
Ice fish vive en aguas más cálidas (Haro & Krueger, 1987), por lo que este
fenómeno hematológico no sería exclusivo de los peces presentes en medios
extremadamente fríos.
Al parecer habrían suficientes evidencias para inferir que las postlarvas de G.
maculatus realizarían el intercambio gaseoso mediante la difusión del oxígeno en el
plasma, la causa por la que G. maculatus elegiría esta estrategia de transporte
gaseoso, con seguridad no está asociada a las bajas temperaturas, sino a una
estrategia defensiva ante la depredación. Esta cualidad, también sería responsable

- 75 -
de la morfología del pez, Busse & Campos (1996) mencionan que la forma
anguiliforme del cristalino, proporcionaría una mayor superficie de contacto, además
agregan que el corazón de las postlarvas es 6 a 7 veces más grande que un corazón
normal, con respecto a la masa corporal. Esta hipertrofia cardíaca seria mayor que
la descrita para otros peces carentes de hemoglobina como los Channichthyidae,
esto provoca un aumento en el caudal sanguíneo, lo cual ayudaría a que el
transporte de oxígeno sea más efectivo.
El preferendum térmico de las postlarva de G. maculatus fluctúa entre 7 a 15º
C (Campos, 1970), según esto, las postlarvas, vivirían al límite de sus necesidades
fisiológicas de oxígeno, ya que la estrategia de transportar el oxígeno en el plasma
se hace menos eficiente al aumentar la temperatura.
Lo aquí mencionado podría responder en parte a la problemática de la
pigmentación precoz de las larvas de G. maculatus cultivadas experimentalmente en
el “hatchery” de la Universidad Católica de Temuco, en donde aparentemente estos
peces serían forzados a cambiar la estrategia de transporte gaseoso, producto de
una temperatura o de oxígeno inadecuada, la que impediría la difusión del oxígeno
en el plasma, entre otros factores por determinar. La pigmentación está
estrechamente ligada al transporte de oxígeno y por ende a la temperatura, ya que el
proceso de síntesis de un pigmento transportador de oxígeno parte de los eritrocitos,
desencadena la pigmentación total del individuo, pues este entiende que si sólo
pigmenta su sistema circulatorio es un fácil blanco para sus depredadores.
Se encontraron algunas anormalidades eritrocitarias en la sangre periférica de
G. maculatus, particularmente en uno de los frotis de adulto, la caracterización
morfológica de estas discrasias, mencionadas a continuación, servirán como material

- 76 -
de apoyo principalmente en la identificación de enfermedades nutricionales en
futuras investigaciones que incluyan como medio de diagnóstico la ictiohematología.
La presencia de eritroblastos en proceso de división nuclear (fig. 60), anemia
microcítica (fig. 62) e hipocrómica (fig 61), además de un aumento de la
concentración de policromatocitos, son síntomas que han sido reportados para
Salmo salar por Conroy (1983), quien señala que estas discrasias eritrocitarias, se
deben a una deficiencia de Vitamina B1 (tiamina) en la dieta. Este mismo autor
menciona que las causas de este déficit nutricional, muy a menudo, se debe al
empleo de pienso húmedo preparado con harinas de pescado que contienen
tiaminasa.
Eritrocitos cariorrexicos (fig. 62), con núcleo fragmentado (fig. 63), núcleo
excéntrico (fig. 65) e hipocromacias, son síntomas descritos por Stoskopf (1993) y
Conroy (2004, comunicación personal) en casos de deficiencia dietarias de vitamina
B12 (cianocobalamina).
Las micotoxinas en el alimento, producto de la rancidez de este, fueron
estudiadas en tilapia por Conroy (2000), este autor menciona que estas toxinas,
provocan un aumento de la concentración de policromatocitos y eritroplastidos,
además de observarse poiquilocitos (fig. 64) y anemia microcítica e hipocrómica en
extendidos de sangre periférica, esta última anormalidad, también se asocia a déficit
de hierro en la dieta (Roberts, 1981).
Son interesantes de mencionar las discrasias producidas por deficiencia de
ácido fólico en la dieta, caracterizada por la presencia de eritrocitos maduros con
aspecto de clepsidra (contrición tanto nuclear como citoplasmática), una disminución
- 77 -
del porcentaje de hematocrito y del RE, lo cual ha sido reportado por Smith (1968) y
Smith & Halver (1969) en salmón coho.
Es importante sugerir que para evaluar y clasificar tempranamente una
anemia, es necesario contar además de las identificaciones morfológicas, con los
parámetros hematológicos del individuo. La identificación temprana de las anemias
es de vital importancia en peces, ya que los signos clínicos de estas enfermedades
se ocultan hasta muy tarde en la patogénesis (Stoskopf, 1993).
En la actualidad no se disponen de estudios hematológicos en Galaxias
maculatus, por lo cual es imprescindible que continúen realizándose investigaciones
como esta, sólo así, se alcanzará un nivel adecuado de conocimientos hematológico
de esta especie, lo que permitirá a galaxicultores e ictiopatólogos, diagnosticar
certera y oportunamente, cualquier anormalidad patológica, fisiológica y/o nutricional
en el puye. A modo de comentario, se puede agregar que sería muy interesante que
futuras investigaciones, determinaran el punto de inflación térmico, que provoca el
cambio en la estrategia del transporte de oxígeno en postlarvas de G. maculatus.
- 78 -
8. Conclusiones.
1. La principal desigualdad hematológica entre adultos y postlarvas de G.
maculatus, se encuentra en la línea celular eritrocitaria, debido a que en
cristalinos se presenta una ausencia total de eritrocitos maduros en la sangre
periférica.
2. No se encontraron diferencias entre las líneas celulares leucocitaria de
postlarvas y adultos de G. maculatus. Lo mismo ocurrió con la línea celular
trombocitaría.
3. Las morfologías celulares presentes en la sangre periférica de G. maculatus
adulto son equivalentes a las características celulares descritas para
teleósteos.
4. G. maculatus adulto presenta índices hematológicos comparativamente más
bajos que otras especies de teleósteos de similar preferéndum térmico y
osmótico, lo que indicaría una conducta más sedentaria por parte del puye.
5. El aspecto transparente de la sangre periférica de G. maculatus postlarva
sumado a la nula evidencia de eritrocitos maduros en su sangre, indicarían
posiblemente que este pez realizaría el transporte de oxígeno disuelto en el
plasma.
- 79 -
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Universidad Católica de Temuco.

Facultad de Recursos Naturales.

básico del puye

(Galaxias maculatus) (Jenyns, 1842)

en estado postlarval y adulto”

Tesis de grado presentada

Alumno: Nicolás Jaramillo Schadebrodt.

El puye (Galaxias maculatus) es un pequeño pez que presenta poblaciones

diadrómicas y dulceacuícolas, las cuales se diferencian por el número de vértebras

(Vega, 1999). Esta especie posee distribución circun-antártica, encontrándose en

Sudamérica (Chile, Argentina, Islas Malvinas), Australia, Nueva Zelanda, Islas

Chatham y Tasmania (Barile, 1999). En Chile, habita preferentemente sistemas

Región Patagónica de Tierra del Fuego (Campos, 1979).

Este Osmeriforme no presenta coloración en sus estructuras externas e

internas en las etapas larval y postlarval (Campos, 1979), además de carecer en la

sangre de un pigmento transportador de oxígeno (Busse & Campos, 1996). Estos

autores plantean como hipótesis que la ausencia general de pigmentación

presentaría una cierta protección ante la depredación. El aspecto anguiliforme y

debido a la similitud que presenta con el estado juvenil de la anguila o angula

(Anguillla anguilla), la cual es considerada en muchos países como una

delicatessen, alcanzando un alto valor de mercado. Similar importancia culinaria y

económica presenta G. maculatus en el mercado chileno y el neozelandés, en donde

el Whitebait (como es conocido en Nueva Zelanda), alcanza valores de 40 y 60 US$

el kilo (Mardones, 1999).

La desmedida presión pesquera sobre las poblaciones naturales y las grandes

proyecciones comerciales de este recurso, han causado preocupación y gran interés

Universidad Católica de Temuco se encuentra trabajando hace más de 10 años en

proporcionado el conocimiento sobre; poblaciones de origen fluvial y estuarial de la

IX Región; la alimentación natural y artificial de las larvas, juveniles y reproductores;

parámetros reproductivos; tolerancia a la salinidad; crianza marina de la larva; cultivo

en estanques y enfermedades. Esto ha permitido cerrar el ciclo de vida del puye en

temprana de las larvas en cautividad, mejoramiento genético y métodos efectivos de

monitoreos patológicos, entre otros.

La explotación intensiva de G. maculatus, al igual que otras alternativas de

producción acuícola, dependen de diversos factores para alcanzar su máximo

potencial productivo, entre estos factores se encuentra el manejo sanitario, entendido

como la prevención de las principales enfermedades que afectan a la población

(Mendoza et al., 1999). Estas se manifiestan en los peces con la aparición de

anomalías del comportamiento (síntomas) y/o de la integridad corporal (lesiones), lo

que supone un descenso de los rendimientos y a menudo, la muerte de los

especimenes afectados (Kinkelin, 1991). Para tratar de evitar estas pérdidas, es

necesario pesquisar con la debida anticipación las posibles patologías presentes en

los peces, para esto es adecuado el desarrollo de un monitoreo permanente de los

individuos, situación que se logra a través de un certero y oportuno diagnóstico

hematológico, ya que la sangre es por excelencia el punto de confluencia de las

permite anticiparse a las manifestaciones clínicas de las enfermedades, mediante el

de las cualidades antes mencionadas, la hematología es una ciencia que no requiere

de grandes esfuerzos económicos para su realización, lo que la posiciona aún más

como una gran herramienta en la prevención y diagnóstico de enfermedades, en

consecuencia, y al igual que en medicina humana y veterinaria, esta ciencia es una

valiosa herramienta en la determinación de enfermedades de peces (Deufel &

La hematología puede ser definida en términos generales, como una disciplina

diversidad de componentes, su modo de formación, así como las funciones que

de un conjunto de vasos sanguíneos extremadamente ramificados, cuya variedad de

elementos está relacionado con la especie (Charpentier, 1996). El fluido sanguíneo

características a las encontradas en mamíferos, a excepción de la proteíca, la cual

Las células por su parte se dividen en tres grupos: Glóbulos Rojos o

Eritrocitos; encargados del transporte de oxígeno mediante ferroproteínas;

Trombocitos, encargados de la coagulación y Glóbulos Blancos o Leucocitos,

morfología, ausencia o presencia de estas células en el tejido sanguíneo depende de

cada especie, es así como en mamíferos los eritrocitos circulantes no presentan

núcleo, a diferencia de los peces en donde estas células si son nucleadas.