TÓPICOS

Reacción en Cadena de Polimerasa PCR

Se usa cloruro de magnesio para amplificar el target

PASO 1: desnaturilización inicial

PASO 2: desnaturilización (95°C)

PASO 3: alineación (55°C)

PASO 4: extensión (72°C)

Se usa en la ciencia básica, ingeniería genética, diagnóstico molecular, identificación de especies,

identificación humana y ciencias forenses y genética de poblaciones

MÉTODOS MOLECULARES DE DIAGNÓSTICO MOICROBIOLÓGICO

Limitaciones: tecnologías nuevas, caro, interferencia de componentes de la muestra, muchos

contra un solo microorganismo

Reactivos:

 DNA blanco (extracción)

 Primers u oligonucleótidos
 DNTP’s
 Buffer
 DNA polimerasa (Taq pol) (72°C)
 Agua

Termociclador

Análisis de Microorganismos en Muestras Biológicas

 Problemas
o Matrices complejas
o Microbiota
o Microorganismo blanco en números bajos
o Procesado

Pre-enriquecimiento Detección e

Enriquecimiento selectivo -> Identificación

Post enriquecimiento Rápida

Primeras tecnologías utilizadas comercialmente: pioneros -> compañía dupont – sistema BAX

PCR optimizado: inmunoconcentración

PCR tiempo real:

 Ventajas de los sistemas de tiempo real

o Rapidez
o Sistema cerrado que limita posibilidad de contaminación
o Sistema cuanti y cualitativo
o Permite otras aplicaciones como detección de mutaciones y puede desarrollarse
también PCR múltiple

15/03/2022

Microarreglos

Esta tecnología permite el estudio de moléculas de DNA Y RNA, dterminando la expresión de ellas

Es capaz de determinar los niveles de expresión de factores de virulencia, toxinas, etc.

En un solo chip se van a poder detectar una gran cantidad de patógenos

04/04/2022

Inmunidad: estado de resistencia natural o adquirida que poseen algunos organismos frente a una
determinada enfermedad o al ataque de un agente infeccioso o tóxico

INMUNIDAD NATURAL O INNATA

 Es la resistencia con la que nace un individuo y es de carácter genético

 No requiere de sensibilización previa y su respuesta es rápida
 Es la primera línea de defensa en influye de manera como se comporta el otro tipo de
inmunidad
 Forman parte: barreras anatómicas como la piel y las mucosas; así como la inflamación y la
fagocitosis

INMUNIDAD ESPECÍFICA, ADQUIRIDA O ADAPTATIVA

 Se adquiere de tres formas:

o De manera natural, por exposición a antígenos, tras una infección
o De manera artificial, por exposición a antígenos controlados a través de la
vacunación
o de manera pasiva a través de la placenta y de la leche materna
 además puede ser celular o humoral
CARACTERÍSTICAS DE LA INMUNIDAD INNATA Y ADAPTATIVA

Características Innata Adaptativa

Especificidad Frente a las estructuras Para los antígenos
compartidas por grupos de microbianos o no
microbios afines
Diversidad Limitada: codificada por la Muy amplia; los receptores se
línea germinal producen por la
recombinación somática de
segmentos génicos
Memoria Nula Si
Falta de reactividad frente a si Si
uno mismo

Antígeno: cualquier sustancia, propia o extraña, que desencadena la formación de anticuerpos en

el sistema inmunológico

Anticuerpo: proteínas en forma de Y producidas por el sistema inmunológico para identificar y

neutralizar las sustancias dañinas y extrañas al cuerpo (antígenos). Los sintetizan un tipo de
leucocito o glóbulo blanco llamado linfocito B

05/04/2022

REACCIÓN DE PRECIPITACIÓN

Se utilizan Ag solubles que se difunden frente a los Ac

Unión Ag-Ac forma macrocomplejos moleculares formándose una red tridimensional y debido a su
tamaño precipita

AGLUTINACIÓN DIRECTA (ACTIVA)

Un antígeno celular o de partículas insolubles es aglutinado directamente por el anticuerpo

*hemaglutinación*

AGLUTINACIÓN INDIRECTA (PASIVA)

Aglutinación de las células recubiertas de antígeno o a las partículas inertes que son portadoras
pasivas de antígenos solubles

SEMANA SANTA
25/04/2022
Sistemas inmunológicos de detección por inmunocaptura

 inmunocaptura
 separación inmunomagnética
 inmunomagnetismo
IMS
¿Qué es la inmunocaptura?
 Herramienta de laboratorio que puede aislar células, bacterias, parásitos
 Muestra de alimentos, sangre, heces, agua, ambiente
 Cuentas magnéticas recubiertas con Ac  unirse a Ag presentes en la superficie de las
células
 Ayuda a concentrar
 Molécula aislada puede procesarse según se requiera
Dos parásitos más importantes giardia y cryptosporidium
METODOLOGÍA
1. 25g + 225ml caldo preenriquecimiento
2. 6h/37°C
3. Inmunocaptura
4. Separación inmunomagnética
5. Reconstituir
6. Plaquear agar selectivo
7. Incubar 18h/37°C
PRECIPITACIÓN
o Requiere que Ac y Ag estén en medio fluido
o Precipitación del complejo Ag-Ac

TIPOS DE AGLUTINACIÓN

- Activa
- Pasiva (latex)

26/04/2022
Inmunoensayos comerciales
ELISA: Enzyme Linked Immunosorbent Assay. Se basa en la detección de un antígeno
inmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una
reacción cuyo producto, por ejemplo un colorante, puede ser medido espectrofotométricamente.
Este principio tiene muchas de las propiedades de un inmunoensayo ideal: es versátil, robusto,
simple en su realización y emplea reactivos económicos.
ELFA
Biomerieux
03/05/2022
MÉTODOS PARA DETECCIÓN DE TOXINAS BACTERIANAS
Según la NOM-210-SSA1-2014, productos y servicios. Métodos de prueba microbiológicos.
Determinación de microorganismos indicadores. Determinación de microorganismos patógenos.
1. Inmunocromatografía
2. ELISA en placa
3. Aglutinación
En alimentos, heces y vómito:
 C. botulinum  tox. Bot
 S. aureus  enterotoxina
 B. cereus  enterotoxina
Clostridium difficile
Toxina A: enterotoxina. Produce necrosis hemorrágica, inflamación e hipersecreción después de
penetrar en el enterocito.
Toxina B: citotoxina. Inhibe la síntesis
Shiga toxina 1 y 2
Hay 6 grupos patogénicos de e. coli:
o EPEC
o EHEC
o ETEC
o EAEC
o EIEC
o DAEC

Botulismo: la toxina botulínica bloquea la liberación de A* inhibiendo la contracción  parálisis

flácida
** la Acetilcolina (A) induce la contracción
de las fibras musculares.
Bioensayos en ratones

09/05/2022
SISTEMAS DE DETECCIÓN DE TOXINAS FÚNGICAS
 ¿qué son las micotoxinas?  Las micotoxinas son compuestos tóxicos producidos de
forma natural por algunos tipos de mohos. Los mohos productores de micotoxinas crecen
en numerosos alimentos, tales como cereales, frutas desecadas, frutos secos y especias.
MICOTOXINAS
 Producidas por hongos filamentosos
 Tóxicas para humanos y animales
 Causan reducción de productividad
 Pérdidas económicas
PRINCIPALES MICOTOXINAS
PATULINA AFLATOXINAS FUMONISINA ZARALENONA OCRATOXINAS DEOXINIVALEN TOXINA T2
OL
(DON)
VOMITOXINA
HONGO QUE LO Aspergillus Aspergillus flavus y Fusarium Fusarium Penicillum Fusarium Fusarium
PRODUCE clavatus A. parasiticus moniliforme y F. graminearum, F. verrucosum, graminearum sporotricloides
verticillioides culmorum, F. Aspergillus
equiseti y F. alutaceus, A.
crookwellense Carbonarius y A.
Niger
ALIMENTO Sidra de Maíz, cacahuate, Maíz, cereales Cereales Maíz Maíz, trigo, cebada Maíz, trigo
ASOCIADO manzana algodón, leche,
Jugo de queso, nueces,
manzana almendras, huevos,
productos cárnicos

ENFERMEDAD Tumores de Cáncer hepático Cáncer de esófago Infertilidad Daño a riñón Menos consumo Enfermedades
ASOCIADA ratas Hepatotoxicidad (animal, humano) Daño hígado alimentos, por lo hemorrágicas
Tóxicas para Teratogénicos Sist. tanto, menos peso
humanos Inmunológico
Teratógeno,
carcinogénico
CARÁCTERÍSTICA B1 B2  blue B1 B2 Estructura similar al
IMPORTANTE G1 G2  green SI HAY estradiol
M1 M2  milk NORMATIVA (anticonceptivo oral)
SI HAY POR LA FDA
REGULACIÓN Impide
NOM-188 asimilación de
Consumo animal y ácido fólico
consume humano

Equivalencia ppm y ppb

10/05/2022
MÉTODOS DISPONIBLES ACTUALMENTE PARA DETECCIÓN Y/O
CUANTIFICACIÓN DE MICOTOXINAS SON:
 - La cromatografía en Capa Fina (TLC) ha sido la técnica de separación de elección
para la mayoría de las micotoxinas
- Los métodos inmunológicos son los sistemas más útiles
PASOS DE EXTRACCIÓN DE MICOTOXINAS
Sampling  grinding  extraction  purification  análisis

16/05/2022
Antibiotics in food production
SISTEMAS PARA DETECCIÓN DE ANTIBIÓTICOS EN ALIMENTOS
1946: algunos antibióticos incorporados a los alimentos en muy pequeñas porciones
estimulaban el desarrollo de los pollos. Permitía obtener un crecimiento acelerado de los
animales domésticos con el correspondiente beneficio para los criadores.
ELISA COMPETITIVA
Resistencia de antibióticos
Presencia de antibiótico en Crecimiento microbiano
la muestra
+ - Morado
- + Amarillo

Tarea: COMO SE DETERMINA UNA CMI Y CMB

La determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI) se realizó mediante el
método de dilución en caldo y la concentración mínima bactericida (CMB) sembrando las
diluciones sin turbidez para observar la presencia de colonias bacterianas.
CMI  concentración mínima de antibiótico capaz de inhibir el crecimiento visible de un
microorganismo. Indica la mínima concentración de antibiótico que debe ser alcanzada en
el sitio de la infección para lograr inhibir el crecimiento del agente
CMB  concentración mínima de un antibiótico capaz de matar el 99.9% de las células de
un inóculo inicial

17/05/2022
Mecanismos de resistencia de antibióticos
Antibiótico  sustancia química producida por un microorganismo capaz de inhibir el
desarrollo de otros microorganismos
 Antibióticos bactericas: ejercen una acción letal
Antibióticos bacteriostáticos: impiden el desarrollo y multiplicación bacteriana pero
sin llegar a destruir las células.
ANTIBIOGRAMA
**bacterias resistentes a los antibióticos
1x106 o 0.5
Epsilometro de inhibición
**colistina
Terapia de fago
23/05/2022
Detección de alérgenos
Alérgeno: al ser introducidos en el organismo, inducen la formación de anticuerpos. Tienen
una estructura química variada y naturaleza diversa, aunque con frecuencia son proteínas en
estado coloidal o polisacáridos de alto peso molecular.
Alergia: respuesta inmune que lleva a la producción de anticuerpos IgE.
Características de las alergias:
- Requieren de una sensibilización inicial, que suele ocurrir durante la infancia
- Una vez sensibilizado, la exposición repetida causa el estallido de la reacción
alérgica
- La repetición de exposiciones suele darse porque las personas no están totalmente
alertas ante su alergia a una sustancia en particular, o por la falta de advertencia de
la presencia de un alérgeno conocido.
IMPORTANTE
La respuesta alérgica se dispara en segundos, desde niveles tan bajos como partes por
millón y varían desde una leve sensación de molestia
Alergia alimentaria: respuesta inmune a un alimento

Principales alérgenos alimentarios:

Según la FDA-
1. Leche
2. Huevos
3. Pescado
 4. Crustáceos
5. Frutos secos
6. Maní/cacahuate
7. Trigo
8. Soya
¿Por qué se requieren pruebas rápidas para determinar alérgenos?
Estar seguros de que sus productos no estuvieron sujetos a una contaminación cruzada
durante su procesamiento.
24/05/2022
Organismos genéticamente modificados – OGM
BENEFICIOS DE LA BIOTECNOLOGÍA PARA MÉXICO
 Producción de alimentos de mejor calidad
Toxina Cry