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movimiento y saúde • REVISTAINSPIRAR
Volumen 6 • Número 5 • Edición 26 • septiembre/octubre de 2013
ANALIZAR HISTOLÓGICA DOS EFECTOS DA
ELETROPORAÇÃO NA PENETRAÇÃO DE UMA
SUSTANCIA LIPOSOMADA NAS CAMADAS DA PELE:
ESTUDO PILOTO
Análisis Histológico Los Efectos de la Electroporación en la Penetración
de una Sustancia en Liposomas sobre las Capas de la Piel
Rodrigo Marcel Valentim da Silva¹, Patrícia Froes Meyer², Maria Goretti Freire de Carvalho³.
currículum
Contextualización: Una técnica de electroporación es un
proceso tan físico que favorece o aumenta el temporário de la
permeabilidad de la membrana plasmática devido a la
radiofrecuencia de bajo amperaje que facilita la entrada de las
sustancias. Objetivo: O objetivo desse estudo foi verificar os
efeitos da eletroporação na penetração de substâncias nas
camadas da pele. Método: Trata-se de uma pesquisa quasi-
experimental,sendo um estudo piloto, tendo como amostra 3 ratos
pesando entre 250 ge 300 g, de ambos os sexos, linhagem Wistar.
Os animais foram divi didos em três amostras, a primeira recebeu
a aplicação do gel lipossomado misturado ao corante azul de
anilina, na second foi used com o corante violeta genciana and na
terceira foi colocado or corante ink china.Utilizou-se a eletroporação
com ondas electromagnéticas moduladas y pulsadas a 50 Hz y
una dosis de 60 W por cerca de 20 minutos.Resultados: A análise
morfológica e histológica mostrou que não ocorreu a penetração
esperada das substâncias testadas, o corante ink china atingiu a
camada córnea.Conclusão: Sendo assim a electroporação não
promoveu a penetração de uma substância lipossomada na célula
adiposa.
Palavras Chaves: Modalidades de Fisioterapia, Eletro
terapia, Pele.
1 Mestre em Fisioterapia pela Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal/RN.
2 Doutora em Ciências da Saúde pela Universidade Federal do Rio Grande
do Norte,Natal/RN. Docente do Curso de Fisioterapia da Universidade Potiguar,Natal/RN.
3 Doutora em Ciências da Saúde pela Universidade Federal do Rio Grande do Norte,
Natal/RN. Docente do Curso de Medicina da Universidade Potiguar,Natal/RN.
Resumen
Antecedentes: La técnica de electroporación es un proceso
físico que favorece el aumento temporal de la permeabilidad de la
membrana plasmática debido a la radiofrecuencia de bajo
amperaje lo que facilita la penetración de sustancias. Objetivo: El
objetivo de este estudio fue investigar los efectos de la
electroporación en la penetración de sustancias en las capas de la piel.
Método: Esta fue una investigación cuasi-experimental, siendo un
estudio piloto, con una muestra de 3 ratas Wistar con un peso
entre 250 g y 300 g, de ambos sexos. Los animales fueron
divididos en tres muestras, recibieron la primera aplicación del gel
liposomado mezclado con colorante azul de anilina. El segundo
tinte se aplicó con violeta de genciana, en el tercero se colocó
tinta china y el tinte. Se utilizó electroporación con ondas
electromagnéticas pulsadas y moduladas a 50 Hz y una dosis de 60W dur
Resultados: el análisis morfológico e histológico mostró que no
hubo penetración de las sustancias probadas esperadas, la tinta
china alcanzó la capa de la córnea. Conclusión: la electroporación
no promovió la penetración de una sustancia liposomada en la
célula grasa.
Palabras Clave: Modalidades de Fisioterapia, Electroterapia,
piel.
Autor corresponsal:
Rodrigo Marcel Valentim da Silva
Dirección: Rua Nossa Senhora de Fátima, 312 b, Alecrim, Natal/RN.
CEP: 59030080
Correo electrónico: marcelvalentim@hotmail.com
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Introducción
A membrana plasmática das células é formado por una
bicamada de fosfolípidos possuindo molécula de proteínas
interpostas na sua estrutura. Uma feature ímpar das mem branas
biológicas é a propriedade da permeabilidade seletiva, onde há
um mecanismo morfofisiológico responsável pelo fluxo de entrada
y saída de substâncias na célula através da membrana lipoproteica animais com o parecer número 052/2008.
1,2.
Existenm duas formas básicas de transportes de
substâncias através da membrana plasmática, o primeiro trata-
-se de um transporte ativo, que exige um gasto energético do
metabolismo da célula para a transposição de substâncias através
da membrana. Contudo, a forma de transporte ocorre de maneira
passiva, portanto sem gasto energético pela celular, podendo
ocorrer pelo mecanismo de difusão simple, difusão facilitada (com
ação de transportadores protéicos e específicos na segunda
membrana de célula) ou por osmose 2,3.
Una técnica de electroporación es un proceso físico que
favorece o aumenta el temporário de la permeabilidad de la
membrana plasmática, permitiendo o trânsito de substâncias do
meio extra celular para o intracelular, ou no sentido inverso. É
uma terapia transdérmica de crescente importância no campo de
estudo das ciências da saúde e biológica, onde inúmeras
pesquisas têm sido desenvolvidas to melhor conhecer as its as
potencialities and limitações 4,5.
Una electroporación o corre pela pasaje de corriente
eléctrica ao longo da membrana, promovendo o surgimento de
poros y permitiendo o fluxo de moléculas maiores para dentro ou
fora da celular. Un análise por microscópio eletrônico tem
demostró que a través de dos pulsos eletromagnéticos ocorre a
abertura eo fechamento de poros na célula. Desse modo, há uma
veiculação transdérmica de diversos principios activos, iónicos o
no, de diversos tamaños o pesos moleculares, hidrossolúvel ou
lipossolúvel. Nesta técnica, una exposición de las células a pulsos una confecção das lâminas, as mesmas foram examinadas por
de corrientes de alta tensión torna una membrana plasmática 400
veces más permeable, una vez que los poros temporários se
hacen más fuertes, aumentando, en consecuencia, o el flujo de
sustancias a través de las células 6,7.
A electroporação seria um método eficiente para
potencializar una entrada de RNA, proteínas, corantes, hormônios
y drogas tanto em células animais quanto em vegetais por via
transdérmicas. Como las aplicaciones prácticas varían desde la
transferencia genética para plantas, bacterias, leveduras y
transporte de quimioterápicos. Existen varias ventajas na utilização
da eletroporação, entre elas a ação localizada da droga, com
conseqüente ausência de efeitos colaterais decorrentes de ações
sistêmicas. Como ondas electromagnéticas são ionizantes y
atérmicas, não há contato eléctrico com o paciente, o que evita la
posibilidad de queimaduras, fasciculações musculares, dor e
processo inflamatório 5,6.
Assim surgiu o interesse de experiment a application da
técnica of eletroporação usando um gel lipossomada de
photodilsilcolina com um aparelho national com o target of ob
servar a possível penetração destas substâncias na pele. Portanto,
este estudio busca investigar los efectos de la transdermoterapia
por electroporação na administração de substâncias na pele,
através da penetração dos corantes nas camadas da epiderme,
derme e hipoderme ao use uma sustancial lipossomada.
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Métodos
Trata-se de uma pesquisa quasi-experimental, sendo um
estudo piloto. A população pesquisada for i constituída de ratos
Wistar (Rattos norvegicos albinus) de ambos sexos. A mostra do
proposto estudo foi composta di 03 ratos pesando entre 250 ge
300 g proviniendo do bioteria da Universidade Potiguar.
A pesquisa foi aprovada pelo comitê de ética e pesquisa com
Foram utilizados os siguientes instrumentos para coleta:
aparato de electroporación (Dermoporation KS 5000 da marca
Kroman), gel lipossomado (Farmácia Lidherma, Argentina),
microscópio óptico y cámara digital (marca Olympus).
O procedimento foi iniciado com a limpeza da aérea a ser
tratado e utilização de álcool etílico, después de tricotomía dos
pêlos dessa região. Em seguidamente se aplicó una sustancia
liposomada con o cabeçote estacionário en el dorso del animal,
con emisión de onda electromagnética de alta frecuencia durante vinte minutos.
Os animais foram divididos em três grupos, o primeiro
recebeu a aplicação do gel lipossomado misturado ao corante azul
de anilina, no segundo foi aplicado o mesmo gel lipossoma do com
o corante violeta genciana eo terceiro recebeu corante ink china
misturado ao gel lipossomado. Foram realizó 5 aplicaciones de
ondas moduladas y pulsadas a 50 Hz, con una dosis de 60W.
Após a série de aplicações, os animais foram sacrificados e
foi coletado, by bisturi, um fragmento dos tecidos of all os animais
na area corresponden a application. Em se guida, os fragmentos
foram colocados em frascos apropriados e devidamente
identificados, contendo 20 ml de solução de formol al 10%.
Después de 24 horas de fijación, como mostras foram encaminhadas
ao laboratório de pathologia para processamento histológico de
rotina e análise visual morfológica. O material foi emblocado en
parafina, cortado en micrótomo rotativo, con 4 micrometros y
corado pela técnica de Hematoxilina e Eosina (HE)11. Finalizada
uma patologista de maneira cega, em microscópio óptico.
Microfotografías realizadas con cámara digital Olympus acoplada
al microscópio.
Resultados
Una figura 01 representa una lámina de primer animal, que
recibe una aplicación de corante azul de anilina. Observa-se que
não houve a penetração da substância ao nível de derme, de modo
que o corante azul de anilina permaneceu restrito a parte external
da pele. Na análise morfológica foi possível visualizar uma alteração
da coloração da pele do animal para azul, mas meramente
externamente.
A figura 02 representa a lâmina da pele do second rat
submetido a application do corante violeta genciana associada ao
gel lipossomado. Foi observó que não houve penetração da
sustancial nas camadas da pele quando analisado pela mi
croscopia óptica, o mesmo aconteceu na análise morfológica que
demonstrou a substância retida na part external da pele (figura 03).
Na figura 03 foi observada a lâmina referencia ao animal
submetido à aplicação com o corante tinta china associado ao gel
lipossomado. A análise morfológica do tecido coletado dos animais
mostrou que apenas a sustancial lipossomada associada
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ao corante tinta china penetrou na parte interna do fragmento de pele,
não ficando apenas restrita a parte externa. Na análise histológica
percebe-se a presença do corante ao nível da camada córnea, melhor
visualizado do that na análise do corante azul de anilina.
Figura 1: Aplicação do corante azul de anilina associado ao
gel lipossomado usando una técnica da eletroporação.
Figura 02: Aplicação do corante violeta genciana associado
ao gel lipossomado usando una técnica da eletroporação.
Figura 03: Aplicação do corante ink china associado ao gel
lipos somado usando a técnica da eletroporação. Presença
do corante tinta china na camada córnea.
Discusión
Un análisis morfológico muestra apenas una penetración de
liposomas sustancial asociada a tinta china. Nos resultados histológicos
de los que se constató que la utilización de dos corantes no permitió la
visualización de la penetración de la sustancia liposomada en el nivel de
la piel, apenas en la epidermis. De acordo com os re sultados divulgados
pela análise histológica, provavelmente não ocorreu uma união suficiente
between a substância lipossomada eo corante violeta genciana, fato this
that impediu a visualização da penetração desta sustancial of maneira
mais profunda na pele.
Verificou-se também que a utilização do corante azul de anilina
com o gel lipossomado provocou o acúmulo da mistura no estrato
córneo. Existe la posibilidad de hacer peso molecular en azul de anilina,
más alto que o dos demais corantes utilizados (319,85 unidades
atómicas) 7 tenha sido responsável por esta dificultad de penetração
destas substancias, pois mesmo uti lizando-se a técnica de eletroporação
não foi possível observar a chegada do corante na epiderme abaixo da
camada córnea.
Na utilização do corante ink china associado ao gel lipossomado
foi observado à penetração deste composto em maior quantidade no
estrato córneo. Ese resultado corrobora con outros estudos8
, que perceberam que a penetração deste
corante no estrato córneo da epiderme. Esta pesquisa difere do estudo
citado porque não foi utilizado o microscópio eletrôni co na análise
histológica, recurso que permitiu a visualização histológica de
concentrações de substância também na derme, folículo piloso e
principalmente ao redor de vasos sanguíneos.
Apesar da promissora eficácia disposta sobre a aplica ção da
técnica de eletroporação, poucos estudos demonstram a eficiência da
penetração de substâncias através da pele, devido a dificuldades na
realização de experimentos, bem as pro priedade de semi-permeabilidade
da membrana plasmática, que restringe a entrada de sustancias no meio
intracelular. A pene tração de tinta china nas porções do estrato córneo
e epiderme localizado ao redor dos vasos sanguíneos, quando utilizado
à microscopia óptica, no entanto ao utilizar microscopia eletrônica foi
verificada a presença do corante na camada da derme, de ma
individualizada e também em fibras colágenas y músculos8 .
Una técnica de eletroporação é um processo físico promis sor
que favorece o aumenta temporário da permeabilidade da membrana
plasmática, permitindo o trânsito de substâncias, conforme mostram
muitos estudos. É uma terapia transdérmica de crescent importância no
campo de estudo das ciências da saúde e biológica 9,10. Desde el
modo, esta pesquisa ficou limitada a análise da microscopia óptica,
sugerindo-se a realização de novos estudos com uma amostra maior de
animais e com a análise através da microscopia óptica.
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