Universidad de Rosario

Escuela de Medicina y Ciencias de la Salud

Unidad de Bioquímica
Programa de Ingeniería Biomédica
Química General y Orgánica

GUÍA PRÁCTICA 8

El poder amortiguador de los aminoácidos

a. Guía inicial

Tome como base la siguiente premisa para afianzar los conceptos fundamentales que ella encierra:

Las propiedades químicas de los aminoácidos están determinadas por las

propiedades de sus grupos R y por su capacidad de interacción con el
agua. Los aminoácidos son moléculas anfóteras, es decir, pueden actuar
como ácido o como base. Debido a que los aminoácidos contienen grupos
ionizables, la forma iónica predominante de estas moléculas en disolución
depende del pH. La titulación de un aminoácido explica el efecto del pH
sobre su estructura y además es una herramienta útil para determinar la
reactividad de sus cadenas laterales; el pH al que el aminoácido no posee
carga neta se denomina su punto isoeléctrico.

b. Taller experimental

Mida 20 ml de solución del aminoácido problema asignado a su grupo y colóquelos en un vaso de

precipitados de 50 ml; agregue cada vez desde una bureta volúmenes de 0.2 ml de NaOH 0.1M;
permita que se mezcle bien utilizando un agitador magnético y tome el pH. Registre todos los datos
hasta lograr un valor de pH=12.
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Química General y Orgánica

Punto V (ml) Punto V (ml) Punto V (ml)

pH pH pH
No. NaOH No. NaOH No. NaOH
0 26 52
1 27 53
2 28 54
3 29 55
4 30 56
5 31 57
6 32 58
7 33 59
8 34 60
9 35 61
10 36 62
11 37 63
12 38 64
13 39 65
14 40 66
15 41 67
16 42 68
17 43 69
18 44 70
19 45 71
20 46 72
21 47 73
22 48 74
23 49 75
24 50 76
25 51 77
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c. Tratamiento de los datos

Represente gráficamente los volúmenes de NaOH (ml) (eje X) contra los valores de pH
obtenidos en cada punto (eje Y).

¿Qué datos puede obtener a partir de la gráfica que le permitan entender cómo se comporta
un sistema amortiguador de pH?

Tome el valor de pKa de su aminoácido como pista para sugerir su posible identidad, de tal
forma que enfoque la discusión del punto anterior con base en esa información.

¿Cómo cuantificaría la relación entre cada par de especies ionizables de su aminoácido a

diferentes pH?

d. Información adicional

Calculo grafico de los pKa de los aminoácidos por medio de su curva de titulación

1. Después de obtener el grafico en Excel o en papel milimetrado, se deben reconocer las zonas
buffer del aminoácido. En esta curva de titulación el aminoácido posee tres zonas buffer, la
primera esta entre un pH de 1,5 a 3,4 aproximadamente o de 0 a 4,6 mL de NaOH
adicionados. La segunda de 7 a 9 unidades de pH aprox, y la última de 10 a 11 unidades de
pH aproximadamente, siento esta la más difícil de identificar. endo en cuenta estas zonas hay
que trazar dos líneas de tendencia que me limiten las zonas buffer, estas líneas de tendencia
se trazan verticales y precisamente siguen la tendencia del grafico en donde termina la zona
buffer (En el grafico son las líneas verticales con inclinación que tienen color negro, el grado
de inclinación depende de la pendiente que forman los puntos en esas zonas no buffer del
gráfico). En la primera zona buffer el eje Y nos sirve como la línea de tendencia en la parte
izquierda, la de la parte derecha se traza siguiendo los puntos del gráfico, tal como muestra la
figura, hay que trazar la línea sobre los puntos del gráfico.
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Química General y Orgánica

13,0
12,5
12,0
11,5
Zona 3
11,0
10,5
10,0
9,5
9,0
Zona 2
8,5
8,0
7,5
7,0
pH

6,5
6,0
5,5
5,0
4,5
4,0
3,5
3,0 Zona 1
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9 9,5 10 10,5 11 11,5 12 12,5 13 13,5 14

Volumen NaOH 0,1 N (mL)

2. Para encerrar la zona buffer luego se trazan dos líneas horizontales, en el grafico se
encuentran en verde, vamos a tomar como ejemplo la segunda zona buffer del grafico para
realizar la explicación. Estas líneas horizontales deben conectar las dos líneas de tendencia
que limitan la zona buffer (negras). Para trazar la horizontal inferior debemos observar el
punto en el cual la parte superior de la línea de tendencia que limita la parte izquierda de la
zona buffer abandona la curva de titulación, en este punto se comienza a trazar la horizontal
de izquierda a derecha.

13,0
12,5
12,0
11,5
11,0
10,5
10,0
9,5
9,0
8,5
8,0
7,5
7,0
pH

6,5
6,0
5,5
5,0
4,5
4,0
3,5
3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9 9,5 10 10,5 11 11,5 12 12,5 13 13,5 14

Volumen NaOH 0,1 N (mL)

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Química General y Orgánica

Para trazar la horizontal superior, tomamos en cuenta el mismo principio, debemos ver en que punto
de la parte inferior de la línea de tendencia que limita la parte derecha de la zona buffer abandona la
curva de titulación, en este punto se debe iniciar el trazo de la horizontal de derecha a izquierda. Al
finalizar la zona buffer debe quedar encerrada en un paralelogramo.

13,0
12,5
12,0
11,5
11,0
10,5
10,0
9,5
9,0
8,5
8,0
7,5
7,0
pH

6,5
6,0
5,5
5,0
4,5
4,0
3,5
3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9 9,5 10 10,5 11 11,5 12 12,5 13 13,5 14

Volumen NaOH 0,1 N (mL)

3. Luego deben trazarse dos diagonales que unan vértices opuestos del paralelogramo (líneas
rojas).

13,0
12,5
12,0
11,5
11,0
10,5
10,0
9,5
9,0
8,5
8,0
7,5
7,0
pH

6,5
6,0
5,5
5,0
4,5
4,0
3,5
3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9 9,5 10 10,5 11 11,5 12 12,5 13 13,5 14

Volumen NaOH 0,1 N (mL)

4. Ahora debemos trazar una perpendicular (Azul) desde el punto de cruce de las líneas
diagonales (rojo), hasta la curva de titulación, esto se realiza si el punto de cruce no cae sobre
la curva, en el caso de este grafico solo se hace para la zona 1 y 2.
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Programa de Ingeniería Biomédica
Química General y Orgánica

13,0
12,5
12,0
11,5
11,0
10,5
10,0
9,5
9,0
8,5
8,0
7,5
7,0
pH

6,5
6,0
5,5
5,0
4,5
4,0
3,5
3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9 9,5 10 10,5 11 11,5 12 12,5 13 13,5 14

Volumen NaOH 0,1 N (mL)

5. Finalmente para poder hallar los valores de pKa interpolamos trazando una línea desde el
punto de corte de la perpendicular (azul) en la curva de titulación hasta el eje Y (pH), esta
línea de interpolación se encuentra en color azul y es discontinua. El valor de pH que señala
la línea es el valor de pKa del grupo funcional ionizable del aminoácido.
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Química General y Orgánica

13,0
12,5
12,0
11,5 pH 10,3 = pKa
11,0
10,5
10,0
9,5
9,0
8,5
8,0
7,5
7,0 pH 8,00 = pKa
pH

6,5
6,0
5,5
5,0
4,5
4,0
3,5
3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
pH 1,95 = pKa
0,0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9 9,5 10 10,5 11 11,5 12 12,5 13 13,5 14

Volumen NaOH 0,1 N (mL)

Bibliografía
1. Nelson y M. M. Cox. (2005) Principios de Bioquímica 4ª Edición, Editorial Omega.
2. J.M. Berg, J.L. Tymoczko y L. Stryer.(2003) Bioquímica. 5ª Edición. Editorial Reverté S.A
3. F. Barceló Mairata. (2003) Técnicas Instrumentales en Bioquímica y Biología. Collecció materials
didàctics. 105. Universitat de Les Illes Balears.