METODOLOGÍA ANALÍTICA GENERAL

ETAPA DETERMINACIÓN DE TRAZAS DE DETERGENTE CIP-100 POR MÉTODO DE HISOPEO Y ENJUAGUE

DENOMINACIÓN DISTINTIVA NO APLICA
DENOMINACIÓN GENÉRICA NO APLICA
CUMPLE CON TRAMET-CAL-001-17
APLICA PARA DETERMINACIÓN DE TRAZAS DE DETERGENTE CIP-100

OBSERVACIONES:
*Realizar método de acuerdo a FEUM 11. ED. Pág. 148

Tabla 1. Preparación de Soluciones para desarrollo del estándar y la adecuabilidad:

Solución
Ácido sulfúrico 1N*
Ácido sulfúrico 0.003M
Fase Móvil
Solución complejante de cobre
(12.5 mg/mL)
Preparación
Transferir 3.0 mL de ácido sulfúrico a un matraz volumétrico de 100 mL que
contenga 30 mL de agua, mezclar y llevar a volumen con agua purificada.
Transferir 6.0 mL de ácido sulfúrico 1N a un matraz volumétrico de 1000 mL y
llevar a volumen con agua Purificada. Tapar el matraz y agitar.
a) Mezclar 250 mL de metanol y 750 mL de ácido sulfúrico 0.003M en un
contenedor de 1000 mL
b) Agitar y pasar por un filtro de Nylon HNWP 0.45µm toda la solución y
degasificar.
a) Pesar con exactitud 12.5 g de sulfato cúprico pentahidratado y transferirlos
a un matraz volumétrico de 1000 mL.
b) Adicionar 200 mL de fase móvil para disolver el sulfato cúprico y llevar a
volumen con fase móvil.
c) Filtrar a través de una membrana Whatman GF/F de fibra de vidrio o con
filtro de vidrio de poro fino con membrana Whatman de No.1

Material:

 Detergente CIP-100
 Ácido sulfúrico
 Metanol HPLC
 Na2EDTA

Puntos criticos:

 La mezcla de la fase móvil, se debe realizar de forma manual.

1. MÉTODO DE AGUAS DE ENJUAGUE POR CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC)

NOTA: Aplica para superficies de Acero, Vidrio, Silicón, PVDF, Teflón y Nylon.

Solución estándar stock 0.1 mg/mL (100 ppm) Na2EDTA

a) Pesar con exactitud 20 mg de Na2EDTA y transferirlos a un matraz volumétrico de 200 mL

b) Adicionar 50 mL de agua purificada y sonicar durante 10 minutos
c) Llevar a volumen con agua purificada y mezclar bien.

Documento: MAG-010 Revisión: 001

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Solución para Adecuabilidad 50.0 µg/mL (50 ppm) de Na2EDTA

a) Transferir 10 mL de la solución estándar stock y 5 mL de la solución complejante de cobre a un matraz

volumétrico de 20 mL.
b) Aforar con fase móvil y mezclar bien.
c) Filtrar la solución estándar a través de acrodiscos de Nylon 0.45 micras desechando los primeros 3 mL y
colocar en un vial HPLC.

Solución Estándar de Trabajo para aguas de enjuague 5.0 µg/mL (5 ppm) de Na2EDTA

a) Transferir 1 mL de la solución estándar stock y 5 mL de la solución complejante de cobre a un matraz

volumétrico de 20 mL.
b) Aforar con fase móvil y mezclar bien.
c) Filtrar la solución estándar a través de acrodiscos de Nylon 0.45 micras desechando los primeros 3 mL y
colocar en un vial HPLC.

Solución Estándar para recobro (0.1 mg/mL) de Na2EDTA

a) Pesar con exactitud 100.0 mg de Na2EDTA y transferirlos a un matraz volumétrico de 50 mL.

b) Adicionar 10 mL de agua purificada y agitar hasta disolver.
c) Llevar a volumen con agua purificada y mezclar bien.
d) Tomar 1 mL de la solución anterior y 5 mL de la solución complejante de cobre y transferirlos a un
matraz de 20 mL.
e) Aforar con fase móvil y mezclar bien.

Solución para muestra por enjuague (3.125 mg/mL)

a) Transferir 10 mL de agua y 50 mL de solución complejante de cobre a un matraz volumétrico de

200 mL, llevar a volumen con fase móvil y agitar la solución.

Muestra para agua de enjuague

a) Introducir pieza dentro de una Bolsa Nasco Whirl-Pak.

b) Agregar en la bolsa 20 mL de la solución para muestra por enjuague, procurando que el solvente entre
en contacto directo con la pieza y sellar herméticamente para evitar la fuga del solvente.
c) Realizar el enjuague agitando vigorosamente de manera manual durante 3 minutos.
d) Filtrar una parte del líquido a través de acrodiscos de Nylon 0.45 micras desechando los primeros 3 mL y
colocar en un vial HPLC.

Cálculos:
ppm de CIP 100 = (Am / As) *Cs

Dónde:
Am = Área del pico de Cu-EDTA en la preparación de la solución de la muestra.
As = Área del pico de Cu-EDTA en la preparación de la solución del estándar de trabajo.
Cs = Concentración del estándar en µg/mL de EDTA considerando la pureza.

Especificación:
No más de 5 ppm de EDTA

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2. MÉTODO DE HISOPEO POR CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC)

NOTA: Aplica para superficies de Acero, Pared, Vidrio, PVDF, Acrílico, Acetal, Silicón y Teflón.

Tabla 2. Preparación de Solución para muestra por hisopo:

Solución Preparación
Solución para muestras por hisopo Transferir 6 mL de agua y 75 mL de solución complejante de cobre a un matraz
(4.688 mg/mL) volumétrico de 200 mL, llevar a volumen con fase móvil y agitar la solución.

Solución estándar stock 0.1 mg/mL (100 ppm) Na2EDTA

a) Pesar con exactitud 20 mg de Na2EDTA y transferirlos a un matraz volumétrico de 200 mL

b) Adicionar 50 mL de agua purificada y sonicar durante 10 minutos.
c) Llevar a volumen con agua purificada y mezclar bien.

Solución para Adecuabilidad 50 µg/mL (50ppm) de Na2EDTA

a) Transferir 10 mL de la solución estándar stock y 5 mL de la solución complejante de cobre a un matraz

volumétrico de 20 mL.
b) Aforar con fase móvil y mezclar bien.
c) Filtrar la solución estándar a través de acrodiscos de Nylon 0.45 micras desechando los primeros 3 mL y
colocar en un vial HPLC.

Nota: Se trabaja una solución de adecuabilidad de concentración mayor a la especificación, para

visualizar los parámetros cromatográficos.

Solución Estándar de Trabajo para hisopo 4 µg/mL (4 ppm) de Na2EDTA

a) Transferir 1 mL de la solución estándar stock y 5 mL de la solución complejante de cobre a un matraz

volumétrico de 25 mL.
b) Aforar con fase móvil y mezclar bien.
c) Filtrar la solución estándar a través de acrodiscos de Nylon 0.45 micras desechando los primeros 3 mL y
colocar en un vial HPLC.

Pretratamiento de los hisopos

a) Tomar los hisopos (TX-761) necesarios para el análisis y transferirlos en un matraz Erlenmeyer con
100 mL de agua purificada y sonicar durante 2 min.
b) Eliminar el agua del matraz Erlenmeyer y remover el exceso de agua de los hisopos, presionando la
cabeza del hisopo en las paredes del matraz, colocar los hisopos pre-tratados en un matraz seco.

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Tratamiento del área a muestrear

a) Tomar un hisopo pre-tratado y recobrar la zona designada con movimientos horizontales, verticales, y
en diagonal sin despegar el hisopo como se indica en la Figura 1.

Figura 1. Técnica de muestro con hisopo

b) Colocar el hisopo en un tubo de vidrio, repetir la técnica de muestreo con un segundo hisopo pre-tratado y
colocar en el mismo tubo

Muestra de hisopo

a) Al tubo de vidrio que contiene las cabezas del hisopo (TX-761), agregar 20 mL de solución para
muestras por hisopeo.
b) Agitar durante 1 min con agitación moderada (aproximadamente 500 rpm) en vortex.

Nota: De no contar con vortex realizar de manera manual usando fuerza de agitación constante y
vigorosa por el mismo tiempo.

c) Sonicar durante 15 minutos.

d) Antes de retirar el hisopo, remover el exceso del líquido presionando el hisopo contra las paredes del
tubo.
e) Filtrar la solución por acrodiscos de Nylon 0.45 micras desechando los primeros 3 mL y colocar en un
vial HPLC

Cálculos:
ppm de CIP 100 = (Am / As) *Cs* 7 *FC

Dónde:
Am = Área del pico de Cu-EDTA en la preparación de la solución de la muestra.
As = Área del pico de Cu-EDTA en la preparación de la solución del estándar de trabajo.
Cs = Concentración del estándar en µg/mL de EDTA considerando la pureza.
7 = Relación porcentual de detergente 30% w/w solidos totales y 5 % w/w de EDTA
FC = Factor de Corrección

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Factor de
Superficie
corrección
Acero 1.0
Pared 1.0
Vidrio 1.0
PVDF 1.0
Acrílico 1.6
Silicón 1.5
Teflón 1.8
Acetal 1.7

Especificación:
No más de 28ppm de CIP 100, equivalente a 4 ppm de EDTA

CONDICIONES CROMATOGRAFICAS
Tipo UV/VIS
DETECTOR
Longitud de onda 254 nm
Modelo/marca Hamilton PRP-X100
Tipo empaque Columna de intercambio iónico
COLUMNA
Dimensiones 4.1 mm x 250 mm, 10µm
Horno 30°C
Volumen de Inyección 80 µL
Tiempo de corrida 4 min
AUTOMUESTREADOR
Temperatura 15°C
Velocidad en la toma de muestra/ Automática Normal
Ácido sulfúrico 0.003M : Metanol
Fase móvil
FASE MOVIL 75:25
Sistema Isocrático
Pistones/Sellos (SEAL WASH IN) Agua: Metanol 75:25
SOLUCION LAVADO Inyector (SAMPLE MANAGER WASH) Agua: Metanol 75:25
Aguja (SAMPLE MANAGER PURGE) Agua: Metanol 75:25
BOMBA Flujo 3.0 mL/min
PROPORCIÓN Fase Móvil 100 %

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ADECUABILIDAD DEL SISTEMA:

a) Realizar 6 inyecciones de 80 µL Solución de 50 ppm de Na2EDTA (SET).

Parámetro Especificación
% CV de áreas de entre inyecciones ≤ 2.0%
Factor de coleo ≤ 2.0

SECUENCIA DE INYECCIÓN:
Número de
Nombre Solución
inyecciones
Blanco Fase Móvil 1
Adecuabilidad Solución estándar de Adecuabilidad 6
SET 1 Solución estándar de trabajo 1 3
SET 2 Solución estándar de trabajo 2 3
Muestra 1 Muestra de trabajo 1
Muestra 2 Muestra de trabajo 1
Muestra # Muestra de trabajo 1
SET 1 Solución estándar de trabajo 1 3

Nota: Se deberá colocar como mínimo un SET cada 20 inyecciones y se deberá asegurar tener un SET de
cierre con el fin de cuantificar por bloques o con todas las inyecciones de estándar en la secuencia.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

DETERMINACION REFERENCIA
CIP-100 HISOPEO TRAMET-CAL-001-17
DETERMINACIÓN DE TRAZAS
DE DETERGENTE CIP-100 POR
CIP-100 ENJUAGUE EL MÉTODO DE HISOPEO Y
AGUAS DE ENJUAGUE

HISTÓRICO DE CAMBIOS

REVISIÓN CONTROL DE CAMBIOS

000 CC17-VAL-007

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