● DOCENTE:

MG. Q.F. MATOS INGA, ANAÍS.

● CURSO:

ANÁLISIS INDUMENSTRAL

● GRUPO:

5B

● INTEGRANTES:
▪ Almendras Zelada Nicolás.
▪ Calderon Fiestas Ángela.
▪ Castillo Castillo Rocío.
▪ López Gigashi Jhanaina.
▪ Ramos Alarcón Armando.
▪ Villanueva Sandoval Ana.
▪ Zevallos Castañeda Grabiela. (Coordinadora)

2021 – II

Página 1
 PRESENTACIÓN

El curso de análisis instrumental es una especie de investigación de sustancias en la que se

utiliza equipo electrónico para medir las propiedades de las partículas, en este examen, se
utilizan técnicas instrumentales distintivas que dependen de la comunicación entre tema y
energía utilizando un instrumento para evaluar la propiedad real del objeto de investigación.

Las técnicas instrumentales no crean información cuantitativa; más bien hacen que la
información sea notablemente más clara, las estrategias instrumentales para el examen tienen
aplicación en la verificación de la calidad del aire, la contaminación del suelo, la calidad de
las aguas superficiales y subterráneas, al igual que durante la medida de tratamiento de aguas
residuales.

El curso de examen instrumental nos dará los aparatos para obtener datos subjetivos y
cuantitativos de un ejemplo de diferentes fuentes utilizando la utilización de hardware de
laboratorio.

El Análisis Instrumental examina las diversas estrategias científicas, a la luz de los métodos
instrumentales, que se han creado con el avance de la innovación, como lo indican los
requerimientos del clima académico y exploratorio y que son en la actualidad fundamentales
para atender la mayor parte de la población asuntos. Las técnicas instrumentales de
investigación tienen aplicación en la observación de la calidad del aire, la contaminación del
suelo, la calidad de las aguas superficiales y subterráneas, al igual que durante la medida de
tratamiento de aguas residuales.

Los autores

Página 2
 ÍNDICE
PRÁCTICA N°1 .................................................................................................................................... 5
INTRODUCCIÓN AL ANÁLISIS INSTRUMENTAL, MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS Y
ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN MOLECULAR ................................................................. 5
I. INTRODUCCIÓN: ................................................................................................................... 5
II. DESARROLLO..................................................................................................................... 6
1. HPLC (Cromatografía líquida de alta resolución): ........................................................... 6
2. BALANZA ANALÍTICA: .................................................................................................... 6
3. ROTAVAPOR: ..................................................................................................................... 6
4. ESPECTROFOTÓMETRO ................................................................................................. 7
5. LIOFILIZADOR: ................................................................................................................. 7
6. POTENCIÓMETRO: ........................................................................................................... 8
7. CENTRÍFUGA: .................................................................................................................... 8
III. DISCUSIONES; .................................................................................................................... 9
IV. CONCLUSIONES: ............................................................................................................... 9
V. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS .................................................................................. 10
PRÁCTICA N°2 .................................................................................................................................. 12
I. INTRODUCCIÓN: ................................................................................................................. 12
II. OBJETIVOS: ...................................................................................................................... 12
Discusión: ..................................................................................................................................... 14
PRÁCTICA N°3 .................................................................................................................................. 16
RELACIÓN ENTRE ABSORBANCIA Y CONCENTRACIÓN ................................................... 16
I. INTRODUCCIÓN: ................................................................................................................. 16
II. OBJETIVOS: ...................................................................................................................... 17
III. MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO: ..................................................... 17
Materiales: ................................................................................................................................... 17
Reactivos: ..................................................................................................................................... 17
Equipos de laboratorio: .............................................................................................................. 17
IV. PROCEDIMIENTO: .......................................................................................................... 18
PASOS: ........................................................................................................................................ 18
V. RESULTADOS: ...................................................................................................................... 19
VI. DISCUSIÓN: ....................................................................................................................... 21
VII. CONCLUSIONES: ............................................................................................................. 22
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS: ......................................................................... 23
PRÁCTICA N°4 .................................................................................................................................. 24
FUNDAMENTO DE UN ENSAYO DE CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS ........................ 24
I. INTRODUCCIÓN: ................................................................................................................. 24
II. OBJETIVOS: ...................................................................................................................... 25
III. MATERIALES: .................................................................................................................. 25
IV. PROCEDIMIENTO: .......................................................................................................... 26

Página 3
 V. RESULTADOS: ...................................................................................................................... 27
VI. DISCUSIÓN: ....................................................................................................................... 30
VII. CONCLUSIONES: ............................................................................................................. 31
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS: ......................................................................... 32
PRÁCTICA N°5 .................................................................................................................................. 33
ESPECTRO DE ABSORCIÓN DE LA HEMOGLOBINA ............................................................ 33
INTRODUCCIÓN: ......................................................................................................................... 33
I. OBJETIVOS: .......................................................................................................................... 34
II. MATERIALES: .................................................................................................................. 34
III. PROCEDIMIENTO: .......................................................................................................... 35
IV. RESULTADOS: .................................................................................................................. 36
V. DISCUSIONES: ...................................................................................................................... 39
VI. CONCLUSIONES: ............................................................................................................. 40
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:............................................................................. 41
PRÁCTICA N°06 ................................................................................................................................ 42
1) EFERCICIO – KMnO4 .......................................................................................................... 42
2) EJERCICO – KMnO4 ............................................................................................................ 42
3) EJERCICIO – KmnO4........................................................................................................... 43

Página 4
 PRÁCTICA N°1

INTRODUCCIÓN AL ANÁLISIS INSTRUMENTAL, MÉTODOS

ESPECTROSCÓPICOS Y ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN MOLECULAR

I. INTRODUCCIÓN:

Los sistemas instrumentales aplicados al análisis y control químicos son ampliamente

aceptados como métodos que ahorran tiempo, requieren menos separaciones químicas
y son seguros y sensibles. El análisis instrumental permite obtener información
cuantitativa y cualitativa de una muestra que procede de diversas fuentes mediante la
utilización de equipos electrónicos, en este análisis se emplean diferentes métodos
(1)
instrumentales que se basan en la interacción entre la materia y la energía.

Los métodos instrumentales son métodos analíticos que se van a basar en la medida
de las propiedades físicas de los analitos como conductividad, potencial de electrodo,
absorción o emisión de luz, una relación carga/masa , fluorescencia., para una
determinación cuantitativa o cualitativa de los analitos: métodos no separativos; y
también para la separación de varios analitos: métodos separativos.Los métodos
instrumentales se diferencian de los métodos analíticos clásicos principalmente en que
no requiere que haya reacción química y que son métodos relativos, es decir se
requiere realizar un calibrado para relacionar la señal medida con la propiedad que se
(2)
requiere obtener.

Se requiere el uso de instrumentos para el análisis químico, estos instrumentos van a

transformar la información relacionada con las propiedades físicas o químicas del
analito en información que pueda ser manipulada e interpretada s por el ser humano,
donde estos instrumentos tienen componentes como generador de señales, transductor
(3)
de entrada , procesador de señales , transductor de salida.

Página 5
 II. OBJETIVO
 Conocer e identificar a los instrumentos analíticos.

III. DESARROLLO

1. HPLC (Cromatografía líquida de alta resolución):

Es un tipo de cromatografía en columna en el que por acción de una bomba, se hace
pasar una mezcla de compuestos o analitos en un sistema disolvente comúnmente
conocido como fase móvil.
Permiten identificar y cuantificar un gran número de compuestos.

2. BALANZA ANALÍTICA:
Es una clase de balanza utilizada principalmente para
medir pequeñas masas, este tipo de balanzas tienen una
precisión extrema que se les hace posible distinguir
valores inferiores al miligramo.
Tienen un rango de pesaje entre los 100 y los 300 g y
una lectura de 0.1 mg, 0.01mg o de 0.001mg.
(4)
Permiten el análisis cuantitativo de una muestra.

3. ROTAVAPOR:
Su función es conseguir separar líquidos de distinto
punto de ebullición, como en un montaje de
destilación clásica, pero facilitando la evaporación de
los líquidos con el giro del matraz de fondo redondo,
de modo que la superficie de evaporación aumenta.

Página 6
 Permite el análisis químico cualitativo y cuantitativo de extractos de naturaleza
(5)
orgánica e inorgánica.

4. ESPECTROFOTÓMETRO
Se usa para el análisis químico en función de la longitud de onda, la relación entre
valores de una misma magnitud fotométrica a dos haces de radiaciones y la
concentración o reacciones químicas que se miden en muestra. Consigue hacer visible
todo el rango a medir, desde el infrarrojo hasta el ultravioleta midiendo la absorbancia
de la muestra en los espectros de luz ultravioleta y visible.
(5)
Permite un análisis cualitativo y cuantitativo.

5. LIOFILIZADOR:
Es un proceso que tiene como objetivo separar el agua (u otro solvente) de una
disolución mediante congelación y posterior sublimación del hielo. Así como
también es el elemento más suave para secar productos y es el mejor método para
secar compuestos orgánicos o inorgánicos sin alterar su composición cualitativa o
(6)
cuantitativa.

Página 7
6. POTENCIÓMETRO:
Es un instrumento eléctrico de método analítico para medir la concentración de iones
H+ en una solución. Funciona mediante un mecanismo de celda electroquímica,
donde los iones H+ en la reacción química pueden determinar la concentración de
(7)
ellos en la solución. Tiene determinación cuantitativa.

7. CENTRÍFUGA:
Es una máquina que pone en rotación una muestra para por fuerza centrífuga acelerar
la decantación o la sedimentación de sus componentes o fases según su densidad que
contenga dicha muestra.
Permite el análisis cuantitativo. (7)

Página 8
IV. DISCUSIONES;

Oerter, R. (2018). El modelo estándar pertenece a un tipo de teorías conocidas como

teorías de campo cuántico relativista. Imagina el conjunto de partículas que te plazca
y podrás escribir una teoría de campo cuántico relativista que lo describa (en el
capítulo IX te enseñaré cómo). Dichas teorías abarcan la extrañeza de la relatividad
especial, con sus paradojas sobre el tiempo y el movimiento, y de la mecánica
cuántica, con sus campos que no son ni ondas ni partículas. El marco de las teorías de
campo cuántico relativista añade sus propias rarezas: partículas que aparecen de
repente donde sólo había energía y desaparecen nuevamente, literalmente con un
(8)
chispazo.

Un punto primordial en el buen diseño y en la selección del instrumento más

apropiado para un estudio dado es la simplicidad. Ordinariamente, el instrumento más
simple que tiene la sensibilidad, exactitud y características de funcionamiento
deseadas, será la mejor selección. Su operación será menos complicada, se tendrán
menos componentes que acarreen dificultades, las respuestas falsas del instrumento se
notarán más fácilmente y se descubrirá su causa con mayor rapidez, se simplificará el
mantenimiento y con frecuencia el coste será inferior. En el uso y diseño de
instrumentos, así como en investigaciones, la medición se alcanza mejor dando
énfasis a la simplicidad en comparación con lo que dijo el autor Goyanes, M. (2017).
Durante las últimas décadas, la investigación en ciencias sociales ha recorrido un
camino largo a la vez que difícil, y el investigador ha sorteado numerosos desafíos
para que su trabajo no solo tenga el reconocimiento de la comunidad científica, sino
(9)
que resulte útil y contribuya al progreso de la humanidad.

V. CONCLUSIONES:
 Un instrumento para el análisis químico puede considerarse como un dispositivo
de comunicación entre el objeto de estudio y el científico, ya que este va a
transformar la información relacionada de las distintas propiedades físico
químicas del analito en información que puede ser interpretada por el analista.

Página 9
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Rodríguez J. Química y análisis químico [En Línea]. Barcelona: Cano Pina, 2014
[consultado 18 Oct 2021]. Disponible en:
https://elibro.net/es/ereader/uladech/43093?page=193.

2. Reyes J. Walton F. Análisis químico e instrumental moderno [En Línea]. Editorial

Reverté, 2018 [consultado 18 Oct 2021]. Disponible en:
https://elibro.net/es/ereader/uladech/183506?page=171.

3. Marchante C. Análisis químico farmacéutico: métodos clásicos cuantitativos [En

Línea].La Habana: Editorial Universitaria, 2017 [consultado 19 Oct 2021]. Disponible
en: https://elibro.net/es/ereader/uladech/1300?page=57.

4. Kern J. Manual De Balanza Analítica [En Línea]. Version2.2 Barcelona:, 2017

[Consultado 18 Octubre 2021]. Disponible En:Http://Www.Kern-
Sohn.Com/Manuals/Files/Spanish/Alj_Als-Ba-S-0722.Pdf.

5. Gómez C. Y Torres Cartas S. Análisis Instrumental: Manual De Laboratorio [En

Línea]. Valencia: Editorial De La Universidad Politécnica De Valencia, 2017
[Consultado 18 Octubre 2021]. Disponible En:
Https://Elibro.Net/Es/Lc/Uladech/Titulos/54082.

6. Ledesma G. Procesador De La Liofilización [En Linea]. Universitatde Barcelon.

2014. [Cunsultadoel 18 Octubre 2021] Disponible En:
Www.Ub.Ed/Talq/Es/Node/261.

7. West J. Análisis Indumestral. (2a. Ed.) [En Línea]. Barcelona: Wolterskluwerhealth,

2018 [Consultado18 Octubre 2021]. Disponible En:
Https://Elibro.Net/Es/Lc/Uladech/Titulos/125026.
8. Oerter R. Teoría física moderna [En Línea]. México, D.F: FCE - Fondo de Cultura
Económica, 2018 [consultado 18 Octubre 2021]. Disponible en:
https://elibro.net/es/lc/uladech/titulos/10565.

9. Goyanes M. Desafío a la investigación estándar en comunicación: crítica y

alternativas [En Línea]. Barcelona: Editorial UOC, 2017 [consultado 18 Octubre
2021]. Disponible en: https://elibro.net/es/lc/uladech/titulos/58623.

Página
10
 Evidencia Turnitin:

Página
11
 PRÁCTICA N°2
SELECCIÓN DE UN METODO ANALÍTICO
EVALUACIÓN ESTADÍSTICA DE DATOS EXPERIMENTALES

I. INTRODUCCIÓN:
El proceso analítico es un conjunto de tareas lógicas intercaladas que se realizan entre
la muestra y el resultado, detectamos que en la estrategia analítica su principio
científico adaptado a uno o más instrumentos, lo cual es útil o importante para
(1)
adquirir datos sobre la síntesis del ejemplo (fluorimetría, potenciometría).

La selección de un método analítico exige definir la naturaleza del problema analítico;

estableciendo: Exactitud y precisión requeridas.
1. Muestra y numero disponibles.
2. Intervalo de concentración del analito
3. Componentes de la muestra interferentes en el análisis.
4. Componentes probables y límites porcentuales; propiedades de la matriz.

Los parámetros de calidad son las características numéricas del instrumento y

permiten al químico reducir el nivel de elección del método. El investigador o analista
debe comprender las condiciones acerca del método de medición, diseño y los
componentes instrumentales, y para describir la precisión de un conjunto de datos se
usan principalmente tres parámetros
1. Desviación estándar absoluta
2. Varianza
(1).
3. Coeficiente de variación

II. OBJETIVOS:
 Identificar la desviación estándar, la varianza, el coeficiente de variación de los
datos presentados en el presente informe.

III. RESULTADOS:

Página
12
 Medición de ph =
N° xi xi-M (XI - M)2
1 7.01 -0.043 0.001849
2 7.05 -0.003 0.000009
3 7.09 0.037 0.001369
4 7.12 0.067 0.004489
5 6.98 -0.073 0.005329
6 7.25 0.197 0.038809
7 7 -0.053 0.002809
8 7.02 -0.033 0.001089
9 7 -0.053 0.002809
10 7.01 -0.043 0.001849
sumatoria 70.53 0.06041

Página
13
IV. DISCUSIÓN:

Los errores que influyen en nuestra experimentación son los que pueden ocurrir
con regularidad debido a la probabilidad de desviaciones o cambios de las
cualidades debido a la combinación de maravillas del azar. Asimismo, es
importante presentar nuestros resultados para que cualquier otra persona pueda
conocer su error de prueba. Los instrumentos de conocimiento nos brindan la
forma de abordar estos puntos de vista de una manera normalizada y generalmente
. (2)
reconocida

Los errores en Química Analítica indican las diferencias entre el valor verdadero
(el considerado como verdadero) y un resultado individual o medias de resultados.
Los errores aleatorios son unos de los tipos de errores más frecuentes
encontrados en este laboratorio ya que son, la principal fuente de incertidumbre
en una determinación. Muchas variables no controladas y de no fácil
identificación causan errores aleatorios. El efecto acumulativo de las
incertidumbres, aunque estas sean muy pequeñas, hace que las mediciones por
(3)
duplicado de una serie fluctúen al azar.

Ocurrido en esta práctica es el error debido a los instrumentos. En esta categoría

se incluyen, por ejemplo, los errores debido a la insuficiente precisión de la
balanza o al empleo de recipientes para la medición precisa de volúmenes no
calibrados, presencia de interferentes, filtración incompleta y contaminación.
Afectan a la propiedad analítica exactitud. Debido a su causa, estas desviaciones
son de un signo determinado, por exceso (+) o por defecto (-). Cuando la
magnitud es elevada se denominan errores crasos. Estos errores pueden ser
constantes (no dependen del nivel de concentración del analito) y proporcionales
(cuando dependen de él). Pueden atribuirse a un resultado aislado o a un método.
(3)

Página
14
V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
1. Sergio G. Chesniuk. Curso: elementos para la validación de métodos
analíticos. 2016. [Consultado 18 Octubre 2021]. Disponible en:
http://www.chesniuk.com.ar/php/lab_div/m1a.pdf.

2. Guías de laboratorio número 1 de análisis químico, biología. 2018. [Consultado 18

Octubre 2021]. Disponible en: http://error-ese.blogspot.com/.

3. Gómez C. Análisis Instrumental: Manual De Laboratorio [En Línea]. Valencia:

Editorial De La Universidad Politécnica De Valencia, 2017 [Consultado 18
Octubre 2021]. Disponible En: Https://Elibro.Net/Es/Lc/Uladech/Titulos/54082.

 Evidencia Turnitin:

Página
15
 PRÁCTICA N°3

RELACIÓN ENTRE ABSORBANCIA Y CONCENTRACIÓN

I. INTRODUCCIÓN:
Desde hace muchos años en los análisis químicos, se ha usado el color como ayuda
para reconocer las sustancias químicas presentes en una muestra; al reemplazar el ojo
humano por otros detectores de radiación se puede estudiar la absorción de sustancias,
no solamente en la zona del espectro visible, sino también en ultravioleta e infrarrojo.
Se denomina espectrofotometría a la medición de la cantidad de energía radiante que
absorbe un sistema químico en función de la longitud de onda de la radiación, y a las
mediciones a una determinada longitud de onda El espectrofotómetro es un
instrumento usado en el análisis químico que sirve para medir, en función de la
longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica
relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se
miden en una muestra. También es utilizado en los laboratorios de química para la
(1)
cuantificación de sustancias y microorganismos.

La transmitancia es la fracción de luz que pasa a través de la muestra y se define

como la intensidad de luz que pasa a través de la muestra sobre la intensidad de luz
incidente. Absorbancia es el logaritmo inverso de la transmitancia y la cantidad de que
su espectrofotómetro medirá. De la absorbancia, la concentración de la solución de la
muestra puede determinarse de la ley de Beer-Lambert, que establece existiendo una
relación lineal entre la absorbancia y la concentración de una muestra. Según la ley de
Beer-Lambert, la absorbancia es el producto del coeficiente de extinción, una medida
de cómo fuertemente un soluto absorbe la luz. La absorbancia es directamente
proporcional a la longitud del camino a través de la solución y la concentración de la
especie absorbente. Estas relaciones se dan como Consideremos un bloque de materia
absorbente (sólido, líquido o gas). Un haz de radiación monocromática paralelo con
intensidad llega al bloque perpendicular a la superficie; luego pasa a través de la
longitud del material, que contienen” partículas absorbentes (átomos, iones o
moléculas), la intensidad del haz disminuye como resultado de la absorción. En esta
práctica se utilizará el espectrofotómetro UV visible virtual para determinar la
relación que existe entre la absorbancia y concentración de una disolución de para-
(1)
nitrofenol.

Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, como ya

sabemos es un equipo de laboratorio que mide la cantidad de luz que pasa por medio
de una longitud de onda específica. La cantidad de luz absorbida por un medio es
proporcional a la concentración del soluto presente, es entonces así que la
concentración de un soluto colorido en solución puede ser determinada en el
laboratorio mediante la medición de su absorción de luz a una longitud de onda
específica. Las muestras en estos equipos se utilizan en estado líquido y se

Página
16
 colocan en el compartimiento de las muestras de celdas transparentes de
(2)
diferentes tamaños y materiales.

II. OBJETIVOS:
 Conocer los procesos y técnicas como la espectrometría, analizar resultados y
comprender su aplicabilidad y beneficio.
 Reforzar el aprendizaje práctico sobre del uso correcto del espectrofotómetro.
 Determinar la longitud de onda apropiada para determinación de absorbancia.

III. MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO:

Materiales:
● Pipetas con bulbo de plástico.
● 3 Cubetas.
● Depósito de desechos.

Reactivos:
● Disolucion de Para-nitrofenol(pNF)
● Agua destilada (H2O)

Equipos de laboratorio:
● Espectrofotómetro UV-VIS virtual.
(http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm.)

Página
17
IV. PROCEDIMIENTO:
1. Calibración: Primeramente, se llena una cubeta con 3 mℓ de agua, introdúcela en
el espectrofotómetro, ajustando la longitud de onda a 405 nm para luego pulsar el
botón “A=0”, finalmente sacar la cubeta y vaciarla.
2. Luego utilizar el para-nitrofenol (pNF) + el agua, preparáramos 3 muestras en las
cubetas, que contengan distintos volúmenes de pNF y siempre un volumen total
de 3 mℓ.
3. Para ayudarnos mejor rellenar previamente la tabla con los volúmenes que
pensamos poner en cada cubeta.
4. Una vez preparadas las 3 mezclas en las 3 cubetas, la introducimos en el
espectrofotómetro y anotar sus medidas de absorbancia.
5. Obtener las imágenes.

PASOS:

 Utilizamos la cubeta N°01 mezclando 1 mℓ de para-nitrofenol con 2 mℓ de agua.

 Utilizamos la cubeta N°02 mezclando 1 mℓ de agua con 2 mℓ de para-nitrofenol,
luego lo introducimos en el espectrómetro.
 Utilizamos la cubeta N°03 llenando 3 mℓ de para-nitrofenol.

 Una vez preparadas las 3 mezclas en las 3 cubetas, se introdujo cada una en una al
espectrofotómetro y se anotaron sus medidas de absorbancia asi como sus
respectivos gráficos.

Página
18
V. RESULTADOS:

 Medidas de absorbancia obtenidas:

1. Resultados cubeta 01:

2. Resultados cubeta 02:

3. Resultados cubeta 03:

 Análisis cualitativo de resultados:

Página
19
 Observa la relación entre el color de las cubetas y el valor de absorbancia.
Comparando las 3 medidas, ¿observas alguna dependencia entre el valor de
absorbancia y la mayor o menor concentración de pNF en la cubeta?

Sí, la absorbancia disminuye a medida que el color de la muestra se va

difuminando y el valor de la absorbancia disminuye a medida que la proporción
de pNF disminuye en la dilución, en la primera cubeta habían 3 ml de pNF y en la
tercera había 1 ml de pNF diluidos en 2 ml de agua por lo tanto la primera obtuvo
un mayor valor de absorbancia y la tercera obtuvo un valor inferior. A diferencia
de la cubeta 2 que aún se pudo observar un amarillo claro. Esto quiere decir que
mientras más volumen de pNF, mayor será la absorción de luz.

Se pudo comparar los 3 espectros

 Análisis cuantitativo de resultados:

 Calcula la concentración de pNF en la mezcla final de cada cubeta,
sabiendo que la concentración en la botella es de 80 µM pNF.
 Preparar una tabla con los datos.

Se sabe que la concentración de pNF (3 ml) es de 80 µM. Por lo tanto, para

saber cuál será la concentración de pNF en 2 y 3 ml se hace las siguientes
operaciones con la regla de tres simple.

 A partir de los resultados se obtiene la siguiente gráfica:

Página
20
 ANÁLISIS CUANTITATIVO

1.613

1.053

0.531

 Finalmente, después de observar la gráfica se comprueba que mientras mayor sea

el valor del volumen de la concentración de pNF, mayor será también el valor de
la absorbancia.

VI. DISCUSIÓN:

Según Sierra I, Pérez D, Morante S, existen varios tipos de espectrofotómetros,

puede ser de absorción atómica, de absorción molecular (que comúnmente se conoce
como espectrofotómetro UV VIS), y no debe ser confundido con un espectrómetro de
masa Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a
través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra.
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la
concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas que
absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida
dependen de la forma lineal de la concentración. Además, es usada para identificar
compuestos por su espectro de absorción y conocer la concentración de una sustancia,
esto último permite, seguir el curso de las reacciones químicas y enzimáticas, así
(3)
como determinar enzimas y proteínas incluso ácidos nucleicos.

Según Morales O, los espectros de absorción se miden mediante un instrumento

denominado espectrómetro. Los instrumentos que vamos a usar en esta práctica
constan de una fuente de luz “blanca” caracterizada por un espectro de emisión
continuo en un intervalo amplio de longitudes de onda (en nuestro caso 325 nm-900
nm) y de un monocromador que actúa como filtro óptico transmitiendo un haz de luz

Página
21
 de longitud de onda fija λ e intensidad I0. Este haz de luz penetra en la cubeta de
análisis donde se encuentra la muestra. Un detector sensible a la luz mide la
(4)
intensidad del haz a la salida.

Según Pérez G, El espectrofotómetro es un instrumento usado en el análisis químico

que sirve para medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de
una mismalmagnitud fotométrica relativos a doslhaces de radiaciones y la
concentración o reacciones químicas que se miden en una muestra. También es
utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y
microorganismos Existen varios tipos de espectrofotómetros, puede ser de absorción
atómica, de absorción molecular (que comúnmente se conoce como espectrofotómetro
UVVIS), y no debe ser confundido con un espectrómetro de masa Este instrumento
tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a través de una muestral
(5)
y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra.

VII. CONCLUSIONES:
 Se conoció y e identificamos que el equipo “Espectrofotómetro UV-VIS virtual”
presenta una adecuada precisión y exactitud, así como sus componentes y su
utilidad, además se reconoció que presenta una adecuada precisión y exactitud
determinando que las mediciones realizadas en este pueden ser confiables.
 Reforzamos el aprendizaje práctico sobre del uso correcto del espectrofotómetro,
realizando una práctica virtual donde verificamos la absorbancia del
paranitrofenol y los resultados mediante el análisis químico y la longitud de onda
en el “espectrofotómetro UV-VIS virtual”.

 Se determinó las longitudes de ondas optima obteniendo tres soluciones de cada

integrante, los resultados varían, ya que el software presenta un margen de error
como en la vida real (al no medir al 100% correctamente la cubeta), por lo tanto,
los resultados se encuentran en los resultados teóricos.

Página
22
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. Pérez L. MÉTODO POR ESPECTROSCOPÍA UV-VIS. Revista Cubana de

Química, Vol. XV, Nº 2, 2018 [En Línea]. Santiago de Cuba: Editorial Universitaria,
2017 [consultado 27 Sep. 2021]. Disponible en:
https://elibro.net/es/lc/uladech/titulos/9223.

2. Silvestre F. “Calibración de un Espectrofotómetro UV-Visible” [Internet]. León-

Nicaragua; 2019 [citado 27 Sep. 2021]. Disponible en:
http://riul.unanleon.edu.ni:8080/jspui/retrieve/2738.

3. Sierra I, Montés D, Morante S. Prácticas de análisis instrumental [En Línea].

Madrid: Dykinson, 2017 [consultado 07 octubre 2021]. Disponible en:
https://elibro.net/es/lc/uladech/titulos/34223.

4. Morales O. “Calibración de un Espectrofotómetro UV-Visible” [Internet]. León-

Nicaragua; 2019 [citado 07 octubre 2021]. Disponible en:
http://riul.unanleon.edu.ni:8080/jspui/retrieve/2738.

5. Pérez G. Espectrometría ultravioleta-visible [Internet]. 2018 [citado 11 Octubre

2021]. Disponible en: https://www.espectrometria.com/espectrometra_ultravioleta-
visible.

Página
23
 PRÁCTICA N°4

FUNDAMENTO DE UN ENSAYO DE CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

I. INTRODUCCIÓN:
El método de Bradford, es un ensayo habitual para medir la concentración de
proteínas en una muestra. Se basa en que la unión del colorante azul de Coomassie
(Coomassie Brilliant Blue G250) a las proteínas modifica el espectro visible de aquél.
(1)

Método de Bradford, se basa en la unión de un colorante. El colorante, en solución

ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma
azul para formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de extinción
mayor que el colorante libre. Este método es sensible (1-15 µg), simple, rápido, barato
y pocas sustancias interfieren en su determinación. Entre las sustancias que interfieren
(1)
están los detergentes y las soluciones básicas.

La cuantificación de proteínas es un paso importante en el control de calidad durante

el flujo de trabajo de la biología molecular, para asegurar que los pasos siguientes
entreguen resultados certeros. La Espectrofotometría con micro volúmenes le permite
a los trabajadores del laboratorio estudiar materiales proteómicos de las muestras en
volúmenes muy pequeños, lo que a su vez, permite preservar aquellas muestras que
(1)
son más valiosas.

La medición de la concentración de una proteína soluble, es un ensayo vital en la

investigación bioquímica en los laboratorios y sus aplicaciones pueden ir desde
estudios de enzimas hasta la entrega de información para la fabricación en lote de
productos farmacéuticos. La cuantificación de proteínas con Espectrofotometría es un
método que usa la luz ultravioleta y la espectroscopía visible para determinar de
(2)
manera rápida la concentración de proteínas.

Un espectrofotómetro es un instrumento que procesa un haz de radiación

electromagnética (REM), que conocemos como luz, que se puede separar para de esta
manera facilitar el reconocimiento, calificación y cuantificación de su energía. Los
espectrofotómetros son útiles debido a la relación de intensidad de color en la muestra
y su relación con el contenido de soluto de la muestra. Porque es capaz de dar un haz
de luz monocromático (longitud de onda específica) a mediante la muestra y realizar
la medición de la cantidad de luz absorbida por la misma. Esto va a permitir que la
persona que hará el experimento logre hacer dos funciones: Nos brinda información
sobre la naturalidad de la sustancia en la muestra. Esto se podemos lograrlo midiendo
la absorbancia (Abs) a diferentes longitudes de onda y trazarlos estos valores en un
gráfico basado en la longitud de onda. Debido a que cada material tiene propiedades
espectrales únicas, diferentes materiales producen espectros diferentes. (2)

Página
24
 II. OBJETIVOS:

 Reforzar el aprendizaje práctico sobre del uso correcto del espectrofotómetro para
obtener los resultados de la práctica.
 Determinar la concentración de proteínas presentes en distintas muestras mediante
el método de Bradford utilizando curvas de calibración adecuadas.
 Conocer el método de Bradford y en que se fundamenta.

III. MATERIALES:
Materiales:
● Pipetas con bulbo de plástico.
● 3 Cubetas.
● Depósito de desechos.

Reactivos:
 Reactivo de Bradford, que contiene azul de
Coomassie, metanol o isopropanol, y ácido fosfórico.
 Proteínas disueltas en el reactivo.

Equipo de laboratorio:

● Espectrofotómetro UV-VIS virtual.

(http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm.)

Página
25
IV. PROCEDIMIENTO:

1. Calibración: Introduce una cubeta (que sólo contenga el reactivo de Bradford) en el

espectrofotómetro, ajusta la longitud de onda a 595 nm y pulsa el botón “A=0”. Esta
muestra se denomina el "tubo blanco" o "blanco de reactivos" y sirve para que el color
propio del reactivo no se considere en la determinación de proteínas.
2. Después de la calibración prepara 3 cubetas con cantidades diferentes de la disolución
de proteína. Añade a todas las cubetas la cantidad de reactivo necesaria para un
volumen total de 3 mℓ en cada una.
3. Para mayor facilidad, rellena previamente una tabla con los volúmenes que piensas
poner en cada cubeta.

4. A continuación, introduce el resto de cubetas, de una en una, en el espectrofotómetro

y anota sus medidas de absorbancia.

PASOS:

1. Calibración del espectrofotómetro, ajusta la longitud de onda a 595 nm y pulsa el

botón “A=0”.
2. Preparación de la cubeta 01 con 1 ml de proteína y 2 ml del reactivo Bradford.
3. Preparación de la cubeta 02 con 2 ml de proteína y 1 ml del reactivo Bradford.
4. Preparación de la cubeta 03 solamente con 3 ml de proteína.

Página
26
  Una vez preparadas las 3 mezclas en las 3 cubetas, se introdujo cada una en una al
espectrofotómetro y se anotaron las medidas de absorbancia y se obtuvieron sus
respectivos gráficos.

V. RESULTADOS:
 Medidas de absorbancia obtenidas en la práctica:

 Resultados de cubetas:

RESULTADO CUBETA 01
A595 0.178

RESULTADO CUBETA 02
A595 0.356

Página
27
 RESULTADO CUBETA 03
A595 0.536

 Análisis cualitativo de resultados:

Observa la relación entre el color de las cubetas y el valor de absorbancia.
Comparando entre sí las medidas, ¿observas alguna dependencia entre la
absorbancia y la mayor o menor concentración de proteínas en la cubeta?

Se pudo comparar los 3 espectros:

 Sí, se pudo apreciar que la absorbancia disminuye a

medida que el color de la muestra se va difuminando y el valor de la absorbancia
disminuye a medida que la proporción de la proteína disminuye en la dilución.

 Por eso se puede apreciar que en la primera cubeta había 1 ml de cc de la proteína

diluido con 2 ml de reactivo por eso se aprecia un color más claro que los demás y
en la tercera había 3 ml de cc total de la proteína lo cual se puedo apreciar un
color mucho más concentrado. Se puedo observar también la cubeta número 2 que
tiene un color diferente a los demás pero más claro en comparación con la cubeta
3, por lo tanto la tercera obtuvo un mayor valor de absorbancia y la primera
obtuvo un valor inferior. Esto quiere decir que mientras más volumen de
concentración de la proteína, mayor será la absorción de luz.

 Análisis cuantitativo de resultados:

Página
28
Calcula la concentración de proteínas en la mezcla final de cada cubeta, sabiendo
que la concentración en la botella es de 800 mg/ℓ. Prepara una tabla con los datos
y traza una gráfica representando A frente a C.

Se sabe que la concentración de proteína (3 ml) es de 800 mg/ℓ. Por lo tanto,

para saber cuál será la concentración en 1 y 2 ml se hace las siguientes
operaciones con la regla de tres simple.

 A partir de los resultados se obtiene la siguiente gráfica:

CURVA DE CALIBRACIÓN

A
B
S
O
R
C
I
Ó
N

 Se logra observar en la gráfica y se comprueba que mientras mayor sea el valor

del volumen de la concentración de la proteína, mayor será también el valor de la
absorbancia.

Página
29
VI. DISCUSIÓN:

Según lo apreciado en la práctica pudimos constatar la teoría Bradford en

comparación a lo indicado por Gómez C, Torres S. (2017), nos indican que la
reacción que se lleva a cabo entre la proteína y el azul Brillante de Croomassie G-250,
esto nos da a conocer un difícil y colorido que se lee a 595nm es el tiempo en que se
da el enlace entre la proteína y el colorante sea más veloz y se dé el desarrollo de
color sea más estable. Para los dos métodos se realiza una curva de calibración, la
cual es una representación gráfica en la cual podemos observar la gráfica en la cual se
observó que la concentración de proteínas es directa proporción con la intensidad del
(3)
color obtenido (absorbancia).

Según la elección de identificación de la proteína mediante el método del

espectrofotómetro UV-VIS realizado en práctica podemos constatar que según Zárate
D, Leyva E, Martínez F. (2016), nos dicen que debemos tener en cuenta el principio
para elegir un método de cuantificación de proteínas está centrado frecuentemente en
la coexistencia, la categoría de sensibilidad, la porción de la muestra es necesaria para
realizar las pruebas y la especificación del procedimiento. La determinación de las
proteínas es de gran interés en la bioquímica, la clínica médica y la medicina. En las
prácticas de laboratorio para la purificación de proteínas, los métodos rápidos y
sensibles a menudo son necesarios para la cuantificación. Los métodos más habituales
para su determinación de proteínas: reactivo de biuret, reactivo de Fenol Folin-
cilcalteus para Lowry, azul brillante para Bradford y ácido bicincrónico (BCA,
(4)
patentado).

Según el objetivo de la practica 2 de la cual se basó en el fundamento de un ensayo de

cuantificación de proteínas, se puede también comparar con los resultados de la
práctica realizada por Lemus M, Cortez L. (2019), nos indican que para poder
cuantificar las proteínas utilizaron el método de Bradford que se basa en el
acoplamiento del colorante azul de Coomasie con la proteína y se determina
colorimétricamente, si existe una relación directa entre el desarrollo del color en el
espectrofotómetro y la concentración de proteínas; para realizarlo se descongeló la
saliva, se tomó con una micropipeta de 1 ml y se colocó en una microcentrífuga marca
BIORAD modelo 14 a 12,000 rpm x 30 minutos. Después se tomaron 5 μL de

Página
30
 sobrenadante y se colocaron en un tubo eppendorf colocándoles 95 μL de 0.15N NaCl
y 1 ml Bradford. Se llevó al vortex y se dejó reposar 2 minutos (esto fue aplicado a
todas las muestras). Acto seguido se pasaron a una cubeta de plástico para determinar
a 595nm 1 ml de esta solución en el espectrofotómetro, donde se generó una curva
estándar por medio de absorbancia a 595 nm y se observó contra la concentración de
(5)
proteínas.

VII. CONCLUSIONES:

 Con el software http://biomodel.uah.es/, se logró con éxito verificar las

características de funcionamiento de un espectrofotómetro de absorción
ultravioleta visible en la práctica.
 Pudimos registrar la medida y el espectro de una muestra para lograr crear un
método de concentración aplicando una curva de calibración interna en un
espectrofotómetro UV Visible.
 Se concluye finalmente que en la práctica cuantificación de proteínas, se utilizó el
método de Bradford, el cual es un ensayo habitual para medir la concentración de
proteínas en una muestra y se basa en la unión del colorante azul del reactivo la
cual se une a las proteínas y modifica así el espectro visible de aquél.

Página
31
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. Abril D, Pérez F. ESPECTOFOTÓMETROS UV-VIS [Internet]. Cromtek. 2020

[citado 02 Octubre 2021]. Disponible en:
https://www.cromtek.cl/espectrofotometria-uv-vis/.

2. Días E. Método de Bradford para cuantificación de proteínas. Revista Cubana

.Vol. XV, Nº 2. 2017 [En Línea]. Santiago de Cuba: Editorial Universitaria, 2019
[consultado 02 Octubre 2021]. Disponible en:
https://elibro.net/es/lc/uladech/titulos/9223.

3. Gómez C, Torres S. Análisis instrumental: manual de laboratorio. Valencia:

Editorial de la Universidad Politécnica de Valencia; 2017. [Consultado 02
Octubre 2021]. Disponible en:
https://ebookcentral.proquest.com/lib/bibliocauladechsp/detail.action?docID=534
9757.

4. Zárate D, Leyva E, Martínez F. Determinación de pH y proteínas (estudio piloto).

[Internet]. México; 2016 [citado el 20 de Abril del 2021]. Disponible en:
http://revistas.unam.mx/index.php/rom/article/view/16097/15267

5. Lemus M, Cortez L. Bioquímica General: Fundamentos y Análisis de Laboratorio

para la determinación de proteínas. [Internet]. Machala; 2019 [citado el 20 de
Abril del 2021]. Disponible en:
http://file:///C:/Users/Angely/Downloads/59%20BIOQUIMICA%20GENERAL.p
df

 Evidencia turnitin:

Página
32
 PRÁCTICA N°5

ESPECTRO DE ABSORCIÓN DE LA HEMOGLOBINA

I. INTRODUCCIÓN:
El estudio a nivel bioquímico de cualquier biomolécula requiere la utilización de
técnicas analíticas que permitan su determinación cualitativa y cuantitativa, así
como su caracterización físico-química y biológica. Uno de los métodos es la
espectroscopía, en general, y la espectroscopía ultravioleta-visible, en particular.
Se pueden identificar y cuantificar biomoléculas en solución y en muestras
biológicas, con el empleo de reactivos específicos que reaccionan con el
compuesto a analizar y forman un producto coloreado que permite detectarlo en
muestras complejas. El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad de
las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del
espectro UV visible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula
puede absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura
atómica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante
dieléctrica), por lo que dicha técnica constituye un valioso instrumento para la
(1)
determinación y caracterización de biomoléculas.

Uno de los ejemplos más llamativos de la relevancia del proceso evolutivo y la

eficiencia de los sistemas biológicos se encuentra en los eritrocitos. Una de sus
funciones vitales es su participación en el intercambio gaseoso de oxígeno y
dióxido de carbono entre los pulmones y los tejidos. La hemoglobina, es el
componente fundamental de este proceso, las hemoglobinas son proteínas
globulares, presentes en los hematíes en altas concentraciones, que fijan oxígeno
en los pulmones y lo transportan por la sangre hacia los tejidos y células que
rodean el lecho capilar del sistema vascular. Al volver a los pulmones, desde la
red de capilares, la hemoglobina actúa como transportador de CO2 y de protones.
(2)

Las distintas hemoglobinas tienen espectros de absorción características que se

determina en un espectrofotómetro, la identificación de las diferentes formas de
la hemoglobina con la determinación de sus espectros de absorción puede hacerse
de manera muy sencilla colocando en un tubo de ensayo la hemoglobina y se
diluye con agua bidestilada, luego se examina la muestra en un espectrofotómetro
empleando agua como blanco y se lee la absorción. Teniendo como espectro de
absorción de la hemoglobina, el color rojo de la hemoglobina se debe a que
absorbe radiación visible, aunque también presenta picos de absorción en y cerca
(3)
de la región ultravioleta.

Página
33
 II. OBJETIVOS:
 Obtener y analizar espectros de absorción de biomoléculas de la hemoglobina en
un rango de luz visible.
 Aplicar las técnicas de espectrofotometría para el estudio funcional de las
biomoléculas.

III. MATERIALES:

Materiales:
● Pipetas con bulbo de plástico.
● 3 Cubetas.
● Depósito de desechos.

Reactivos:
 Agua
 Hemoglobina

Equipo de laboratorio:

● Espectrofotómetro UV-VIS virtual.

(http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm.)

Página
34
IV. PROCEDIMIENTO:
Diseño del experimento:
1. Utilizando agua y la disolución de hemoglobina, preparar distintas diluciones y
analizar su espectro UV-VIS completo.
2. Para ello, llenamos las cubetas con hemoglobina y en las otras dos cubetas prepara
sendas mezclas diferentes de hemoglobina con agua.
3. Todas las cubetas deben tener un volumen total de 3 mℓ.
4. Para ayudarnos rellenar previamente esta tabla con los volúmenes que
utilizaremos y poner en cada cubeta:

5. Medida: A continuación, introducir al espectrofotómetro las cubetas, de una en una, y

pulsar el botón para registrar el espectro entre 200 y 800 nm.

PASOS:
1. Primeramente calibrar llenando 3 ml de agua a una cubeta y ajustamos la
primera longitud de onda a 200 nm.
2. Llenamos la cubeta 01 con 3 ml de hemoglobina, para luego introducir al
espectrofotómetro. Medimos su absorbancia.
3. Llenamos la cubeta 02 con 2 ml de hemoglobina y 1 ml de agua, para luego
introducir al espectrofotómetro. Medimos su absorbancia.
4. Llenamos la cubeta 03 con 1 ml de hemoglobina y 2 ml de agua, para luego
introducir al espectrofotómetro. Medimos su absorbancia

Posteriormente:

5. Calibramos con la longitud de onda a 800 nm.

6. Luego llenamos las 3 cubetas con las medidas presentadas en el recuadro y
medimos su absorbancia.
7. Luego se compara los resultados a 200 nm frente a 800 nm.

Página
35
V. RESULTADOS:

 Análisis cualitativo de resultados:

Se compara los 3 espectros. ¿Qué efecto se observa al diluir la hemoglobina de
partida? ¿Cambia la posición (λ) de los picos de absorción máxima? Describe lo que
observas.

 Representa tus resultados en una gráfica, considerando que la concentración de

partida de hemoglobina (en la botella) es de 200 mg/ℓ.

Se sabe que la concentración de hemoglobina (3 ml) es de 200 mg/l Por lo tanto, para
saber cuál será la concentración en 2 y 3 ml se hace las siguientes operaciones con la
regla de tres simple.

Página
36
 Comparación de las longitudes de onda a 200 nm a 800 nm:

A200 nm A800 nm

 Cubeta N° 01: 0.123 Cubeta N° 01: 0.005

 Cubeta N° 02: 0.115 Cubeta N° 02: 0.002

Página
37
 Cubeta N° 03: 0.118 Cubeta N° 03: 0.004

 Después de obtener las longitudes de onda a 200 y 800 nm, hacemos la comparación y
se puede apreciar que son las mismas gráficas, se puede apreciar también que en la
cubeta N°01 hay un pico más elevado en ambas longitudes porque hay mayor cc de la
hemoglobina, en comparación de la cubeta N° 3 que solo hay 1 ml de cc y se puede
apreciar los picos mucho más bajos.

 Las longitudes de la cubeta N° 02: se puede apreciar los picos de manera intermedia.

 Se diferencian las longitudes de onda de acuerdo a la concentración de la muestra,

esto quiere decir que mientras más volumen de concentración de la hemoglobina,
mayor será la absorción de luz.

 A partir de los resultados y comparación de las longitudes a 200 y 800 nm se obtiene

la siguiente gráfica de concentración y absorbancia de la hemoglobina:

Página
38
VI. DISCUSIONES:

La medición de absorbancia de la luz de la hemoglobina realizada en la práctica fue

realizada por el espectrofotómetro según lo indicado por, Tavares N, Ruiz A, Reyes
E. (2020), La Espectrofotometría con microvolúmenes le permite a los trabajadores
del laboratorio estudiar materiales proteómicos de las muestras en volúmenes muy
pequeños, lo que a su vez, permite preservar aquellas muestras que son más valiosas.
La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración –a
mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas-también depende de
la distancia que recorre la luz por la solución –a igual concentración, cuanto mayor
distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrará y por último,
depende de ε, una constante de proporcionalidad -denominada coeficiente de
(4)
extinción- que es específica de cada cromóforo.

Observamos en la práctica que el análisis espectroscópico de la sangre, puede, en

principio, determinar la concentración de la forma oxigenada y desoxigenada de la
hemoglobina, según lo dicho por Maguey D, Iribarren P. (2017). Los métodos
ópticos no sólo responden a aspectos vasculares (cambios en la oxihemoglobina u
desoxihemoglobina) sino también a eventos intracelulares (estado redox,
esparcimiento). El esparcimiento y la absorción son propiedades ópticas de los
materiales que dependen de la longitud de onda incidente, que en algunos casos
favorece la transmisión de la radiación infrarroja. La absorción ocurre a longitudes de
onda específicas, determinadas por las propiedades moleculares de los materiales. La
transmisión efectiva presenta variaciones a través de los tejidos en el rango entre el
ultravioleta (UV) y el infrarrojo (IR). El agua empieza a absorber fuertemente a
longitudes de onda por arriba de los 1000 nm en trayectorias de algunos milímetros.
En la parte visible del espectro, por debajo de los 700 nm, las intensas bandas de
absorción de la hemoglobina (HB) y el incremento del esparcimiento de la luz
impiden la transmisión de ésta a lo largo de trayectorias de unos cuantos centímetros.
Sin embargo, como lo hemos mencionado, en el rango entre 700 nm y 1000 nm una
cantidad significativa de radiación puede ser transmitida con eficacia a través de los
(5)
materiales biológicos, utilizada en nuestra práctica de hemoglobina.

La importancia del espectro de absorción de la hemoglobina, depende directamente de

la concentración de oxígeno en la sangre, según lo indicado por Castillo P, Figueroa
E (2019), nos indican que las primeras aplicaciones clínicas de la espectroscopia en
infrarrojo cercano fueron en el campo de la oximetría, es decir, mediciones
espectroscópicas de la saturación de oxígeno en la hemoglobina. Esto se basa en
comparar la absorción de la hemoglobina en varias longitudes de onda para
determinar la saturación de oxígeno en la sangre. El espectrofotómetro es un
dispositivo que logra un análisis espectral rápido de una muestra sanguínea de un

Página
39
 paciente y mide las concentraciones absolutas de desoxihemoglobina, Hb y
(6)
oxihemoglobina, HbO2 .

VII. CONCLUSIONES:

 Se logró obtener y analizar los espectros de absorbancia de la hemoglobina en donde

se puedo observar la relación directamente a la concentración de la muestra en la
solución, en este caso la hemoglobina es una proteína cuaternaria cuya principal
función es el transporte de oxígeno en la sangre.

 Se logró utilizar la técnica de espectrofotometría y es el método de análisis óptico más

usado en las investigaciones químicas y bioquímicas, es un instrumento que permite
comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que puede presentar
biomoléculas de gran relevancia para su estudio.

Página
40
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. López T. Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de

biomoléculas. [Internet]. Biología Molecular. 2015. [consultado 16 Octubre 2021].
Disponible en: https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf.

2. Peñuela A. Hemoglobina: una molécula modelo para el investigador [En Línea]. Cali
(Colombia): Red Colombia Médica, 2016 [consultado 09 Octubre 2021]. Disponible
en: https://elibro.net/es/ereader/uladech/23243?page=3

3. Brunatti C, Martín A. Introducción a la Espectroscopía de Absorción Molecular

Ultravioleta, Visible e Infrarrojo Cercano [Internet]. materias.fi. 2018 [citado 12
Octubre 2021]. Disponible en:
http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf
4. Tavares N, Ruiz A, Reyes E. Espectrofometría: Espectros de absorción y
cuantificación colorimétrica de biomoléculas [Internet]. Córdoba; 2020 [citado el 15
Octubre 2021]. Disponible en: https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf

5. Maguey D, Iribarren P. Determinación de hemoglobina. [Internet]. Pg. 9; 217 [Citado

el 08 de octubre del 2021] Disponible en:
https://cio.repositorioinstitucional.mx/jspui/bitstream/1002/605/1/10962.pdf.

6. Castillo P, Figueroa E. Análisis y cuantificación de la sangre, importancia clínica [En

Línea]. Madrid: Dykinson, 2019. [consultado 13 Octubre 2021]. Disponible en:
https://elibro.net/es/lc/uladech/titulos/34223.

 Evidencia de Turnitin:

Página
41
 PRÁCTICA N°06

 Realización de ejercicios:
1) EFERCICIO – KMnO4
Una solución que es 7.25 x 10-5 M en KMnO4 tiene transmitancia de 44.1% cuando se
mide en una celda de 2.10 cm a una de 525 nm. Calcule:
a) La absorbancia de esta solución.
b) La absortividad molar del KMnO4

A= 2-log 44.1%
A= Log
A= 2-log%(Absorbancia) A= 0.356
A= Ebc (Absorbancia por x E= A/bc = 0.3/ (2.19)
y) (7.25x10-5)
E= 2338.26

2) EJERCICO – KMnO4
Una disolución de KMnO4 es 1.38 x 10-4 M y presenta una transmitancia de 50% a
525nm utilizando una celda de 1cm de paso óptico.
a) Calcular la absorbancia de lo disolución.
b) A Partir de los datos anteriores iniciales podemos calcular el valor de la
absorbancia molar.

A= Log A= 2-log 50%

A= 2-log%(Absorbancia) A= 0.301
A= Ebc (Absorbancia por x E= A/bc = 0.301/ (1)
y) (1.38x10-4)
E= 2181.16

Página
42
3) EJERCICIO – KmnO4
Una disolución de KMnO4 que contiene 3.00mg de Mn por 100ml, presenta una
transmitancia de 12.9% cuando se mide con celdas de 2cm de paso óptico de una
determinada longitud de onda.
a) Hallar la absorbancia de la disolución
b) Calcular la concentración de la especie. Sabiendo que el %Mn en un acero ha
sido sometido al siguiente procedimiento experimental. Una muestra de 0.3 gr
del mismo se oxida a MnO4 y se enrasa a 500ml con agua destilada. La
absorbancia de la disolución resultante medida con celda de 1.5cm de paso
óptico es de 0.600.

A= 2-log 50%
A= Log A= 0.89
A= 2-log%(Absorbancia) C=0600/(2)(5.48 x 10-4)=4.9x10-4
A= Ebc (Absorbancia por x y) E= A/bc = 0.600/(1.5)( 4.9x10-4)
E= 812.04

Página
43