Examen final

ANÁLISIS INSTRUMENTAL AVANZADO

Programa

BIOQUÍMICA

FACULTAD DE CIENCIAS

UNIVERSIDAD ANTONIO NARIÑO

 Examen Final

Análisis Instrumental Avanzado/Programa de Bioquímica

Nombre Código

1. En el laboratorio para el cual usted trabaja se le ha encargado la tarea de llevar a cabo la validación de la técnica
analítica para la determinación de trihalometanos en agua potable por cromatografía de gases con un

pretratamiento de la muestra por la técnica de “headspace”.

a) Enumere y defina cada uno de los parámetros que considere deben evaluarse para asegurar que la técnica
analítica se ha validado.

b) Establezca en que caso debería usar el método de calibración de patrón externo y cuando el de adición
estándar. Explicar sus diferencias y como debe proceder experimentalmente para llevarlos a cabo.

2. La siguiente tabla muestra los datos de la curva de calibración por el método de estándar interno para calcular
la concentración del compuesto A en una muestra determinada

Estándar A (mg/L) Área de A (u.a.) EI (mg/L) Área EI (u.a.)

1 0.100 11830 0.100 13320

2 0.200 25532 0.100 12320

3 0.300 37950 0.100 12575

4 0.400 54001 0.100 13301

5 0.500 65987 0.100 12820

Mediante el método de mínimos cuadrados calcular la ecuación de la recta y plantear la ecuación para poder
calcular la concentración de A en la muestra problema. Adicional a esto determine si existe linealidad en esta
curva de calibración en el rango establecido. En cuanto a la muestra, esta fue medida por triplicado

adicionándosele 0.1000 mg/L del estándar interno a cada una de las alícuotas, obteniéndose los datos
presentados en la siguiente tabla. Calcular la concentración de A en mg/L estableciendo si hay reproducibilidad
de éstos datos calculando su límite de confianza.
 Muestra Área de A (u.a.) Área EI (u.a.)

1 31010 11201

2 31315 11500

3 31240 11425

3. Teniendo en cuenta la información que aparece en el siguiente cromatograma calcule:

a) La resolución entre los picos con tiempo de retención de 1.470 min (Wb: 0.225 min) y 1.990 (Wb: 0.448 min).
¿Se puede decir que están completamente resueltos?

b) Sabiendo que para el cromatograma anterior se uso un caudal de 1.0 mL/min, el pico cromatográfico de la
serotonina (tR: 2.927 min) presentó una anchura en la base de 0.415 min, calcule el factor de capacidad, el
número de platos y la altura equivalente de plato teórico si la longitud de la columna es de 20 cm con un
volumen muerto de 0.2 mL.
c) Para medir serotonina (5-hidroxitriptamina) por el método del patrón interno, a una alícuota de 1.0 mL de una
disolución de concentración desconocida se le añade 1 mL de una disolución que contiene N-metil-serotonina
(patrón interno, 30 ng/mL) y se afora a 10 mL. Esta mezcla se trata adecuadamente para eliminar
interferencias y se inyectan 10 μL de esta solución, obteniéndose un área de 2573832 para la serotonina y
de 1719818 para la N-metilserotonina. Cuando se inyectó un volumen equivalente (10 μL) de una mezcla que

contenía 50 ng de serotonina y 54 ng de N-metil-serotonina disueltos en 1.0 mL, se obtuvieron áreas de

30885982 y 30956727 respectivamente. Calcular la cantidad de serotonina en ng en la muestra original.

4. a) Usted empacó una columna de 25 m que al evaluarla encontró que ésta tenía 7000 platos teóricos. Un colega
prefirió empacar una columna de 50 m con un tamaño de partícula menor y al evaluarla obtuvo 9000 platos
teóricos. ¿Cuál columna posee mayor eficiencia? Explique.
 b) Un mismo compuesto polar se analiza por cromatografía de gases con una columna SE-30 (muy poco polar)
y luego con una Carbowax 20M (muy polar). Cómo variará K=CS/CM entre las dos columnas?

c) Explique que es la curva de Van Deemter. Haga un gráfico estimado de esta y explique el por qué de la
forma típica de esta curva.

5. Los siguientes cromatogramas corresponden a una mezcla de compuestos separados por HPLC en diferentes
condiciones de fase móvil (Solvente: A+B; A = buffer; B = acetonitrilo). Plantee una solución para obtener una
separación adecuada de los 8 compuestos en un tiempo prudente de corrida.

6. Los siguientes esquemas corresponden a un equipo de cromatografía de gases y el otro a cromatografía líquida.
Identifique cual corresponde a cada una de las técnicas y marque cada una de sus partes principales.

Discuta cual considera es la parte o partes más importante en cada equipo y por qué.
7. Explique a que hacen referencia en las técnicas cromatográficas los términos: Eficiencia, Resolución y
Selectividad. ¿Cómo pueden determinarse a partir de un cromatograma?

8. Clasifique cada una de las siguientes fases estacionarias de columnas de cromatografía de gases de mayor a
menor polaridad. Explique: a) Polidimetilsiloxano (OV-1, SE-30); b) Polietilenglicol (Carbowax 20 M); c)

Polifenilmetilsiloxano (50%, OV-17); d) polifenilmetilsiloxano (10%, OV-210)

9. Mediante un ejemplo explique en qué consisten las rampas de temperatura para CG y los gradientes de solvente

para HPLC.

10. A qué técnica (sistema) de espectrometría de masas corresponden los siguientes esquemas. Nombre cada una
de las partes y explique la función de cada una de ellas. ¿Para qué tipo de analitos son empleados?
11. A través de un esquema, mostrar los diversos modos o reacciones típicas que le ocurren a un analito durante la

ionización por impacto electrónico. Puede tomar como ejemplo la molécula hipotética ABDC.

12. Los espectros mostrados a continuación corresponden al mismo compuesto, pero fueron tomados por técnicas
de ionización diferentes. Identifique la posible técnica de ionización para cada caso. Explique su respuesta

13. En proteómica, metabolómica y lipidómica una de las técnicas más empleadas son los sistemas en tándem Q-
TOF; QqQ y MALDI-TOF. Explique a qué hacen referencia estas siglas y en que consiste cada una de estas
técnicas. Muestre con ejemplos en qué caso son utilizadas y que tipo de información puede obtenerse con cada
una de ellas.

14. En los métodos cromatográficos (GC o LC) acoplados a espectrometría de masas, ¿Cuál es el principal problema
para considerar para desarrollar el acople entre estos sistemas? Describa utilizando un diagrama las principales

técnicas de ionización empleadas en los acoples con CG-MS y HPLC-MS.

15. El siguiente esquema corresponde a los procesos que se llevan a cabo un una de las modalidades de
espectrometria de masas en tandem. A qué modalidad en tandem corresponde? Explique brevemente la función
de cada uno de los analizadores del esquema anterior
16. Construya un diagrama de bloques donde especifique los principales componentes de un espectrómetro de
masas y su función.

17.Complete la siguiente tabla relacionando la información encontrada en ella con las palabras listadas en la parte
inferior de la tabla.

Tipo de ionización Agente ionizante

Impacto de electrones (IE)

Ionización química (IQ)

Ionización por campo (IC)

Desorción por campo (DC)

Ionización por electronebulización (ESI)

Desorción-ionización asistida por una matriz (MALDI)

Bombardeo con átomos rápidos (BAR)

Espectrometría de masas de iones secundarios (EMIS)

Ionización por termonebulización (IT)

Electrones energéticos, Iones gaseosos reactivos, Electrodo de potencial elevado, Electrodo de potencial

elevado, Campo eléctrico elevado, Haz de láser, Haz de átomos energéticos, Haz de iones energéticos, Alta
temperatura.
18.A cada uno de los siguientes espectros asigne el método de ionización correspondiente. Explique el por qué de
la asignación. Teniendo en cuenta el espectro y la relación m/z maxima de cada uno de los espectros de masas

de la lista qué tipo de analizador emplearía (cuál es el más adecuado) en cada caso? Explique.

19. Los siguiente espetros corresponden a un mismo compuesto (biológicamente importante) pero fueron obtenidos

uno por ionización por impacto de electrones y el otro por ionización química.
 a) El espectro de la izquierda corresponde a una ioinización______________; y el espectro de la derecha
corresponde a una ionización__________________.
b) El espectro de masas que podría ser mejor para determinar la masas molecular del compuesto es el que se
obtuvo por ______________________.

c) El espectro de masas que podría ser mejor para determinar la estructura química del compuesto es el que
se obtuvo por __________________________.

20. Explique el fundamento de la técnica de Resonancia Magnética Nuclear y realice un esquema de las partes del
equipo. A que hacen referencia los términos: Apantallamiento, Desplazamiento químico, precesión de un núcleo.

21. Según los conceptos de RMN complete la siguiente tabla y explique:

22. Haga la representación del posible espectro obtenido para los siguientes compuestos

A) CH3-CH2-CH2-OH

B) CH2=CH-CH3

C) Cl-CH2-CH2-OH
 D) C6H5-CH2-CH2-Br

23. Cuando un instrumento de sector magnético opera con un potencial de aceleración de 3x103 V, se requiere de
un campo de 0.126 T para enfocar una molécula de CH4+ hacia el detector
a) ¿Qué intervalo de campo sería necesario para realizar un barrido en el rango de masas de 16 a 250 uma,
para iones de una sola carga (z = 1), si el potencial de aceleración se mantiene constante?

b) ¿Qué rango de potencial de aceleración será necesario para realizar un barrido en el mismo rango de masas
pero si ahora se mantiene la fuerza del capo constante

24. Determinar la estructural del compuestos C8H10O, sabiendo que se trata de un alcohol cuyo espectro de 1 H-
RMN es el que se adjunta.
25. Indicar cual sería la estructura de un alcohol de fórmula molecular C8H10O2, a partir del espectro de 1 H-RMN
que se indica.

26. Ingresar a la pagina https://webspectra.chem.ucla.edu/

Ingresar a los ejercicios Begining, específicamente compuestos 5, 14, 19 y 30. Estos ejercicios tienen la

respuesta. Asignar entonces las bandas del espectro IR, y de RMN según loformula estructural presentada.
Explique.