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“FRANCISCO DE MIRANDA”
AREA CIENCIAS DEL AGRO Y DEL MAR
PROGRAMA DE CIENCIAS VETERINARIAS
TRABAJO ESPECIAL DE GRADO I
Tutora: Autores:
MV Sánchez Hilda Darwin, Maldonado
C.I 25009002
Víctor, Martínez
C:I 24582275
INDICE
Pág.
Resumen…………………………………………………………………………… 3
Objetivos……………………………………………………………………........... 4
Significado……………………………………………………………………..…...5
Fundamentación…………………………………………………………….........… 6
Viabilidad………………………………………………………………….............. 23
Materiales y Métodos………………………………………………………….…... 24
Cronograma de Actividades…………………………………………………….… 34
Resultados Posibles……………………………………………………………...… 35
Referencias Bibliográficas…………….…………………………….……..…..…… 37
3
RESUMEN
Los hemoparásitos que afectan a los caprinos son responsables de cuadros anémicos,
alteraciones micro circulatorias y daños en tejidos que conllevan a pérdidas económicas
como efecto de disminución en la producción de leche, pérdida de peso, infertilidad, aborto,
cuadros nerviosos y muerte de animales en fases aguda y crónica de la enfermedad,
reduciendo considerablemente la productividad y rentabilidad de los sistemas de explotación
caprina. Muchas de las alteraciones causadas por los parásitos pueden evidenciarse a través
de un examen de sangre, ya que estos organismos viven en la circulación sanguínea y se
desarrollan dentro o fuera de los glóbulos rojos. El muestreo de sangre es una herramienta
eficaz de diagnóstico para identificar respuestas fisiológicas de un animal, ya que puede
revelar importante información sobre su salud, bienestar y estado nutricional, se ha observado
alteraciones en los valores hematológicos, como consecuencia de la pérdida de sangre,
insuficiencia de la hematopoyesis, disminución del apetito, carencia de hierro y presencia de
parásitos sanguíneos. El objetivo de este estudio es observar la correlación entre la presencia
de hemoparásitos y su efecto sobre los valores hematológicos en caprinos de diferentes
edades y estados fisiológicos del municipio Petit del estado Falcón..
OBJETIVOS
4
GENERAL:
ESPECÍFICOS:
SIGNIFICADO
5
Las variaciones en el estado fisiológico de los animales repercuten sobre los cuadros
hematológicos: la gestación, periodo de lactancia, edad y sexo; han sido mencionados en
distintas especies animales (bovinos, ovinos, caprinos entre otras), como causantes de
variaciones en los valores hematológicos normales y se considera que la variación puede ser
aún mayor si los animales se ven afectados por hemoparásitos (Guzmán y Callacná, 2013).
Existen además factores físicos y biológicos que alteran los valores hematológicos de manera
fisiológica como la altitud, sobre el nivel del mar, latitud geográfica, la temperatura y la
humedad relativa (Böhmwald et al., 2004).
se agudiza cada día más en Venezuela (Castillo, 1969). Por esta razón es imprescindible
establecer un diagnóstico general de los rebaños caprinos. Adicionalmente los avances
tecnológicos y en el conocimiento en las especialidades de la medicina veterinaria han
permitido desarrollar una gran variedad de análisis de laboratorio complementarias que
permiten llegar a un diagnóstico temprano y más específico de muchas enfermedades (Coppo
y Mussart, 2000).
Con una simple recolección de muestras de sangre, se puede conocer las condiciones
de las células sanguíneas a través de la realización de un Hemograma, que es una prueba de
apoyo diagnóstico, que consiste en la descripción morfológica y la medición absoluta y
relativa de los tres tipos básicos de células que contiene la sangre: serie eritrocitaria,
leucocitaria y plaquetaria (Gracia, 2006). Cada uno de estos grupos celulares tiene funciones
determinadas que se ven perturbadas cuantitativa y/o cualitativamente sus componentes ante
la presentación de alguna alteración como puede ser la presencia de hemoparásitos (Sodikoff,
2001).
FUNDAMENTACION
Uno de los sistemas de producción que predomina en la zona montañosa del estado
Falcón es la cría extensiva de caprinos, la cual constituye la fuente principal de proteínas y
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de ingresos económico de los pobladores (INE, 2014), este se realiza sin manejo de rebaños
y sin control sanitario, al libre pastoreo de la vegetación semi-natural (INCE, 2005). La
producción caprina y ovina es uno de los rubros más importantes para la alimentación de
pequeños y medianos productores en el mundo según cifras de la Organización de las
Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (FAO, 2010).
En países del trópico y sub-trópico los caprinos y ovinos se ven afectados por
hemoparásitos de los géneros Anaplasma, Trypanosoma, Babesia, y Theileria, lo que
representa un factor de riesgo para la salud y productividad de cabras en zonas endémicas
donde se práctica la cría, industria láctea y cárnica de pequeños rumiantes (Reece, 2004).
Estos hemoparásitos son responsables de cuadros anémicos, alteraciones micro circulatorias,
disminución de la resistencia orgánica y daños en tejidos que conllevan a cuantiosas pérdidas
económicas como efecto de disminución en la producción de leche, pérdida de peso o baja
ganancia de peso, disminución en calidad y cantidad de carne, infertilidad, aborto, cuadros
nerviosos y muerte de animales en fases aguda y crónica de la enfermedad (López y Falcón,
1993).
9
Cerca del día 21 post infección ocurre un incremento constante de los cuerpos marginales,
además de transferencia de cuerpos iniciales a eritrocitos no infectados. los signos clínicos
de Anaplasmosis son aquellos atribuibles a una anemia severa; incluyen depresión, debilidad,
hipertermia, inapetencia, deshidratación e ictericia. La remoción de los parásitos de la
circulación tiene lugar por la fagocitosis de los eritrocitos infectados (Quiroz, 2011).
Parámetros hematológicos
- Valor hematocrito: es el porcentaje de volumen de sangre que ocupan los glóbulos rojos al
sedimentar por centrifugación.
Los eritrocitos, glóbulos rojos o hematíes, son las células más numerosas en la sangre, la
membrana permeable que contiene los eritrocitos está compuesta por lípidos, proteínas y
carbohidratos; anomalías en la composición de lípidos de membrana, esencialmente
fosfolípidos y colesterol, pueden suponer alteración en la forma. La morfología normal de
los hematíes es variable entre las diferentes especies, como es el caso de los caprinos, el cual
posee el mayor número de glóbulos rojos por unidad del volumen, y las células son de menor
diámetro y volumen cúbico, se nota menor grado de concavidad y poca palidez central
(Thrall, 2006).
Según Couto (2010), su vida media es de 60 a 120 días en las diversas especies,
aunque la vida media del eritrocito de los caprinos va de 125 a 150 días y su volumen
corpuscular medio (VCM), varía entre 16μ³ (cabra y oveja), la hemoglobina corpuscular
madia (MCH) es de 8 pg y la concentración de hemoglobina corpuscular madia (MCHC) 32
g/dl. En condiciones normales, los eritrocitos corresponden aproximadamente al 40% de todo
el volumen sanguíneo; este índice llamado hematocrito es más o menos constante para todas
las especies, independiente del tamaño del eritrocito. Así las especies que tienen eritrocitos
menores, como la caprina y la ovina, tienen un volumen eritrocitarios entre 16 y 40 μ³,
llegando a poseer más del doble de eritrocitos circulantes, que otros animales (Aird, y
William, 2003).
gas carbónico en el sentido inverso. En caprinos el número de eritrocitos se puede situar entre
8 y 18,63 millones/μl. La hematimetría aumenta cerca de 7,5 millones/μl en la primera
semana de vida, para alcanzar más de 14 millones/μl en la octava semana (Couto, 2010).
Según Coles (1989) entre los caprinos los contajes de eritrocitos cambian con la edad
y siguen el mismo padrón descrito para los bovinos. El eritrocito del recién nacido es mayor
que el de los animales adultos. Se ha indicado la aparición de valores más bajos, en el anestro,
al final de la gestación y parto, por lo que se produce un descenso paulatino a lo largo de la
gestación (González, 1992).
- Índices eritrocitarios:
● Volumen celular medio (VCM): expresa el tamaño promedio de los glóbulos rojos.
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A su vez, los índices eritrocitarios permiten clasificar las anemias dependiendo las
características morfológicas de los eritrocitos. El volumen celular medio (VCM) permite
clasificar las anemias en función del tamaño de los hematíes en: normocíticas (tamaño
normal), microcíticas (tamaño inferior al normal) y macrocíticas (tamaño superior al
normal). La concentración media de hemoglobina celular (CMHC) permite clasificar las
anemias en función de la cantidad de hemoglobina en: normocrómicas, si los niveles de
hemoglobina son normales, e hipocrómicas si son menores (Gómez et al., 1992).
Hematocrito
Hemoglobina:
La hemoglobina (Hb) es una proteína de estructura cuaternaria, Está compuesta por cuatro
cadenas poli peptídicas denominadas globinas, estando cada una de ellas conectada con
enlace covalente a un grupo hemo, que contiene una molécula de hierro divalente (ferroso).
Está especializada para fijar el oxígeno de forma reversible, la cual transporta desde los
órganos respiratorios hasta los tejidos, el dióxido de carbono desde los tejidos hasta los
pulmones. En la membrana del eritrocito se encuentra una solución concentrada de
hemoglobina, siendo la unidad funcional de transporte de O² y CO². (Alves et al., 2003).
mencionada, siempre que la concentración de cobalto en el líquido ruminal sea superior a 0,5
mg/ml, si no queda inhibida la síntesis de B12 en el rumen, y disminuye el aporte a la sangre
y a otros tejidos (Underwood, 1981).
Glóbulos Blancos
Leucocitos
González (1992), señala que a medida que el animal envejece hay una ligera tendencia
a la disminución, lo cual se atribuye al descenso de linfocitos, pero sin cambios significativos
en los monocitos, eosinófilos y basófilos, y se diferencia el número total de leucocitos según
distintos estados fisiológicos.
En conjunto, los granulocitos por su vez, comprenden los neutrófilos, los eosinófilos
y los basófilos; ellos son llamados también polinucleares, porque tienen un núcleo poli
segmentado cuando son adultos. En contrapartida, los monocitos y los linfocitos son
llamados mononucleares o agranulocitos, porque tienen un núcleo único y no presentan
gránulos en lo citoplasma (Couto, 2010).
Linfocitos
Son células generalmente redondas u ovaladas, con un citoplasma basófilo y un
núcleo que acompaña la forma de la célula cuyo diámetro tiene entre 60% y casi 100% del
diámetro del citoplasma (Bush, 2000). El tamaño de los linfocitos es variable, los menores
son un poco mayores que los eritrocitos y los mayores llegan a si igualar a los monocitos,
con los cuales son frecuentemente confundidos. Algunos linfocitos pueden aún tener una
forma irregular poliédrica, esto, se cree que ocurre por la acción de la presión de las células
al su redor. Existen dos poblaciones de linfocitos: los T (tímicos) y los B (búrsicos) (Meyer
y Harvey, 2004).
Las células producidas en la médula ósea pueden dar origen a dos tipos de células
hijas. Una de estas células migra hasta o timo, sufre una diferenciación en este órgano y
después se dirige a los órganos linfáticos donde origina una población de linfocitos T o Timo
dependientes. La otra célula deja la medula ósea, migra hasta la bolsa de Fabricio (en las
aves), sufre una diferenciación en este órgano y después se va a instalar en los órganos
linfáticos, donde da origen a población de linfocitos B o burso dependientes (Meyer y
Harvey, 2004).
Las cantidades de linfocitos en sangre varían con la edad, dependiendo de la especie.
Normalmente la linfocitosis está asociada a presencia de virus, sea por infección o por
vacuna. A menudo los linfocitos granulosos pueden incrementar en respuesta a los agentes
infecciosos o en asociación con procesos neoplásicos de estas células (Meyer y Harvey,
2004).
Monocitos
El monocito es una célula grande, con núcleo voluminoso de forma variable
(reniforme o escotado), citoplasma irregular que contiene numerosas granulaciones
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débilmente azurófilas, aparato de Golgi bien desarrollado con múltiples lisosomas (Guyton
y Arthur, 2006).
Antiguamente los monocitos eran clasificados juntamente con los linfocitos, en un
grupo llamado de mononucleares de la sangre. Hoy, se sabe que ellos dividen la Unidad
Formadora de Colonia (UFC) con los granulocitos, a pesar que después sigan una
ramificación separada. Son células mayores que los granulocitos, con núcleo que siendo
segmentado, puede presentar considerable polimorfismo. La UFC da origen al monoblasto,
que se divide y origina el promonocito, que madura y se torna monocito (García y Pachaly,
1994).
Thrall (2006), cita que los monocitos también participan de la respuesta inflamatoria
y son considerados células intermediarias de un proceso de maduración continuo; ellos
migran para los tejidos donde continúan en su desarrollo, llegando hasta la forma de
macrófagos, pueden fagocitar bacterias, grandes microorganismos complejos como hongos
y protozoarios, células dañificadas, restos celulares y residuos de partículas extrañas. Estas
células aún desempeñan importante función inmuno-reguladora por presentar el antígeno
procesado a los linfocitos T.
Neutrófilos
Los neutrófilos Son leucocitos polimorfos nucleares, son células grandes,
redondeadas, se forman en la medula ósea a partir de los mielocitos neutrófilos
extravasculares tienen abundante citoplasma, con gránulos finos, se tiñen con colorante
neutros y el núcleo está dividido en lóbulos conectados entre sí por filamentos finos.(Dukes
y Swenson, 2000). Solo representan del 20 al 30 % del conteo diferencial de los caprinos.
Son muy activos desde un punto de vista metabólico. Los gránulos que tienen en su
18
citoplasma contienen enzimas capaces de destruir muchos tipos de bacterias. Son encargados
de la lucha contra las bacterias en una infección (Dinauer y Coates, 2008).
Eosinofilos.
Los eosinófilos son también células con núcleo menos segmentado que el de los
neutrófilos (generalmente bilobulado), y gránulos en lo citoplasma .formadas en el aparato
de Golgi, de tamaño considerable y con gran afinidad por los colorantes ácidos, como la
eosina, observándose al microscopio óptico de color rojo anaranjado, Según Thrall (2006).
Los eosinófilos son abundantes en pulmones, tracto digestivo y piel, poseen capacidad
fagocítica débil y aunque pueden incorporar diversas partículas fagociticas, resultan menos
eficientes que los neutrófilos o eficaces que los neutrófilos y representan el 10% en
condiciones normales del contaje diferencial de los rumiantes (Dukes y Swenson, 2000). Las
funciones de los eosinófilos no son bien comprendidas, aunque haya una cantidad
considerable de estudios y observaciones. Los eosinófilos contienen proteínas que se ligan y
lesionan las membranas de los parásitos, siendo responsables por el mecanismo de defensa
contra los estadios larvarios de los parásitos, estando también envueltos en la modulación de
reacciones alérgicas inflamatorias y de inmunocomplejos (Bush, 2000). Meyer y Harvey
(2004), citan que los eosinófilos tienen limitada capacidad fagocítica y representan una
mínima defensa contra las bacterias o agentes virales, pero son activos en la destrucción de
parásitos metazoarios (trematodos y estadios tisulares de helmintos) que tienen anticuerpos
y/o complemento unidos a sus superficies.
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Basófilos
Son los leucocitos que se encuentran en la proporción más baja en la sangre de los animales
domésticos, donde representan menos del 0,5%, se forman en la médula ósea. No se conoce
con precisión sobre su mecanismo de producción, distribución, vida media y la misión de
estas células, aparte de que intervienen en las reacciones alérgicas (sus gránulos contienen
histamina y heparina) (Dinauer y Coates, 2008). Su morfología se caracteriza por la presencia
de gránulos voluminosos rodeados de membrana, que se tiñen intensamente con colorantes
basófilos como la hematoxilina, el color de los gránulos es violeta oscuro y es debido al
contenido en mucopolisacáridos, los basófilos actúan como células secretoras, puesto que
son poco móviles y de fagocitosis escasa, (Dukes y Swenson, 2000).
VIABILIDAD
Previamente antes de la toma de las muestras se realizará una visita al fundo para la
realización de un diagnóstico sobre la población de caprinos existentes para el momento de
la fase experimental del estudio, obtención de la anamnesis, revisión clínica para llevar a
cabo este trabajo de investigación.
También se contará con la tutoría de la Profesora MV. MSc- Hilda Sánchez profesora
asistente de la unidad curricular Fisiología Animal, quien estará encargada de la revisión y
ejecución del proyecto de la investigación y del procesamiento de las muestras para la
obtención de las variables hematológicas.
Además se cuenta con la colaboración en campo del profesor instructor M.V. Pedro
Falcón, profesor adscrito a la unidad curricular de producción de caprinos y que prestara su
asesoría para la realización correcta de la toma de muestras de sangre de los caprinos.
El procesamiento y análisis de las muestras de sangre será llevado a cabo en el
laboratorio de análisis y patología clínica por las M.V. Hilda Sánchez y Luz Sarmiento,
coordinadora y profesora instructora de la UC Fisiología, este laboratorio pertenece a la
unidad de servicios veterinarios (UDS) del complejo académico Ingeniero José Rodolfo
Bastidas de la Universidad Nacional Experimental Francisco de Miranda (UNEFM).
El presente proyecto será financiado por el autor de dicha investigación, además por
donaciones de parte de los estudiantes de Veterinaria y colaboración de entes públicos del
Estado Falcón.
MATERIALES Y METODOS
1. TIPO DE INVESTIGACIÓN
21
4. FASE DE CAMPO.
Posteriormente se debe palpar e identificarla bien la vena para asegurar el sitio exacto
de la punción, la piel es blanda y la aguja vacutainer calibre 21mm entra con facilidad, esta
debe ser dirigida en un ángulo de 45° y tener en cuenta que el bisel (punta) quede contra la
piel de la caprino (Sodikoff, 2001).
5. FASE DE LABORATORIO
5.1. Exámenes hematológicos:
5.2.1. Hematocrito
5.2.2. Hemoglobina
Después de ese tiempo se observara una coloración roja transparente, se llena las
cubetas hasta la marca que se encuentra y se procede la lectura, leer en absorbancia con filtro
verde a 540 nm llevando a cero el fotómetro con agua destilada / Drabkin. En algunos casos
cuando no se cuenta con el reactivo se obtiene el valor de hemoglobina mediante tabla de
correlación de hematocrito disponible en el laboratorio, si y solo si, se trabaja con animales
sanos (Mckenzie, 2000).
El frotis sanguíneo o la extensión de la sangre deben hacerse tan pronto como sea
posible después de la obtención de la muestra, puesta que puede haber alteraciones de los
elementos celulares.
Para la realización de un frotis sanguíneo, lo primero que hay que hacer es limpiar el
Portaobjeto, una vez limpio se coloca una gota de sangre en el extremo del portaobjeto y se
coloca otro portaobjeto frente a la sangre, formando un ángulo de 30 grados, de esa forma se
extiende la sangre, dos tercios del ancho del portaobjeto por acción capilar, luego se mueve
hacia delante con un movimiento firme uniforme. Una vez seco el frotis, se procede a realiza
la fijación y coloración del frotis, que en este caso se realizara con el kit de teñido con
Hemacolor® del laboratorio Merck KGaA, Darmstadt, Alemania, 2019 (Mckenzie, 2000).
Para la coloración del frotis se sumerge cinco veces, en el envase con la Solución 1
(alcohol metílico) durante 1 segundo cada vez. Luego se sumerge en la Solución 2 (Eosina),
tres veces por 1 segundo, después en la Solución 3 (Hematoxilina) de Hemacolor®, cinco
veces por 1 segundo, se lava el excedente y luego el extendido se deja secar al aire libre, para
luego llevar a cabo la observación morfológica de células, para realizar el recuento
diferencial, que servirá para discriminar los distintos tipos de glóbulos blancos, podremos
ver los siguientes tipos de leucocitos: Neutrófilos, Linfocitos (Células B y T), Monocitos,
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Cuando los extendidos de sangre completa son negativos o se sospecha de una enfermedad
causada por hemoparásitos o se desea hacer un diagnóstico de los mismos, el extendido de
capa blanca es el método recomendado. Para realizar el frotis de capa blanca se hará un
extendido a partir del concentrado de leucocitos, que se obtiene en la porción superior de la
capa roja, una vez que la sangre ha sido centrifugada (Mckenzie, 2000).
La técnica se hace con el uso de un capilar para micro hematocrito. Se llenará con sangre el
tubo capilar, con anticoagulante hasta los dos tercios, se sellará uno de los extremos del tubo
con plastilina para evitar el vaciado de los tubos, una vez sellados se centrifugaron por 10
minutos a 1.500 rpm. Ya una vez centrifugado se podrá observar la separación del plasma,
capa blanca, y porción de células rojas, luego usando un bisturí se romperá el capilar en dos
y se tomará la capa blanca para la realización del frotis. Una vez realizado el extendido se
procederá a la coloración del mismo (Mckenzie, 2000).
7. Análisis estadístico
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
E f M J M J J A S
n e a A a u u g e
e b r b y n l o p
r r z r o i i s t
o e o i o o t i
ACTIVIDADES r l o e
o . m
b
r
e
X X X X X
1 Revisión bibliográfica
X X
2 Entrega de anteproyecto
X X
4 Fase de campo
X X
5 Fase de laboratorio
X
6 Análisis de los resultados
X
7 Elaboración de la versión final escrita
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RESULTADO POSIBLES
Los resultados del estudio, podrían ser de utilidad para los Médicos Veterinarios, ya
que si se identifican casos positivos durante esta investigación, se podrán establecerse
medidas de prevención y control adecuadas para cada diagnóstico y para el tratamiento de
las secuelas de dicha infección.
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