Analista: Flores Arellano Maricruz.

Profesor: Luis Camacho.

Práctica 2: Análisis Cuantitativo de un solo componente, determinación de cafeína

en refresco de cola.

Objetivos: Aprender a determinar la concentración de muestras con la ley de Beer.

Consideraciones teóricas:

La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la

concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas
absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz
absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer este tipo de
medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud
de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz absorbida
por la misma. En esta práctica se darán a conocer las características generales y
conceptos relacionados con la espectrofotometría. A continuación, y tras la
explicación del funcionamiento del espectrofotómetro se harán espectros de
absorción con el fin de determinar la longitud de onda donde la muestra presenta la
máxima absorción, y tras realizar las correspondientes rectas de calibrado se
cuantificarán las concentraciones de distintas biomoléculas.

Diagrama

Encender el Encender la Hacer el ajuste del

Encender el
equipo: computadora equipo en el
equipo.
e impresora. inérvalos y los
Revisar o conectar
parámetros
el regulador.
correspondientes

Preparación de las Preparar solución

40ml de muestra Tomar los mililitros
soluciones: Calculo madre (10ml de
según la bebida necesarios (0.5, 1,1.5
de volúmenes para cafeína y aforar a
energética y y 2ml) de solución
4 estándares. 100mlcon etanol
eliminarle el gas con madre y diluirlos
al 10%) y guardar
agitación por 15 min. agua en vasos de
en frasco ámbar
precipitados.
de vidrio.
Tomar un 1 ml de Preparación de las Preparación del Establecer
muestra y diluir en soluciones: Calculo equipo con el parámetros y
1 matraz aforado de volúmenes para método de numero de muestras
de 10 ml. 4 estándares. escaneo. a analizar.

Sacar celdas, lavar Tomar 3 muestras de Otra celda con Hacer el balance de
y medir las bebidas energéticas: agua destilada y blancos con celdas
absorbancias. vive100(0.1 ml), Pepsi presionar start. limpias, y llenando una
(0.3 ml) y coca (3ml). con etanol al 10%.

Sacar y lavar celdas Revisar las tendencias

y medir las de las gráficas y
absorbancias de los calcular el coeficiente
estándares. de absorción.

Cálculos

Preparación de soluciones:

• V1C1=V2C2
𝑚𝑔
𝑉2𝐶2 (10𝑚𝑙)(5 )
• 5ppm 𝑉1 = = 𝑚𝑔
𝐿
= 𝑜. 5 𝑚𝑙
𝐶1 (100 )
𝐿
𝑚𝑔
𝑉2𝐶2 (10𝑚𝑙)(10 )
• 10ppm 𝑉1 = 𝐶1
= 𝑚𝑔
𝐿
= 1 𝑚𝑙
(100 )
𝐿
𝑚𝑔
𝑉2𝐶2 (10𝑚𝑙)(15 )
• 15ppm 𝑉1 = 𝐶1
= 𝑚𝑔
𝐿
= 1.5 𝑚𝑙
(100 )
𝐿
𝑚𝑔
𝑉2𝐶2 (10𝑚𝑙)(20 )
• 20ppm 𝑉1 = 𝐶1
= 𝑚𝑔
𝐿
= 2 𝑚𝑙
(100 )
𝐿

Coeficiente de absorción:

Muestra Volumen (ml) Absorbancia

Vive100 0.1 0.7565
Pepsi 0.3 0.1844
Coca 0.3 0.4075

Estándar Absorbancia
5ppm o.3081
10ppm 0.5447
 15ppm 0.8453
20ppm 1.086

𝐴5𝑝𝑝𝑚
0.3081𝑝𝑝𝑚 1
• 𝑎5𝑝𝑝𝑚 = =
= 0.06162
𝑏∗ 𝐶5𝑝𝑝𝑚
1𝑐𝑚∗5𝑝𝑝𝑚 𝑐𝑚
𝐴5𝑝𝑝𝑚
0.5447𝑝𝑝𝑚 1
• 𝑎10𝑝𝑝𝑚 = 𝑏∗ 𝐶 = 1𝑐𝑚∗10𝑝𝑝𝑚 = 0.05447 𝑐𝑚
5𝑝𝑝𝑚
𝐴5𝑝𝑝𝑚 0.8453𝑝𝑝𝑚 1
• 𝑎15𝑝𝑝𝑚 = 𝑏∗ 𝐶 = 1𝑐𝑚∗15𝑝𝑝𝑚 = 0.05664 𝑐𝑚
5𝑝𝑝𝑚
𝐴 1.086𝑝𝑝𝑚 1
• 𝑎20𝑝𝑝𝑚 = 𝑏∗ 5𝑝𝑝𝑚
𝐶5𝑝𝑝𝑚
= 1𝑐𝑚∗20𝑝𝑝𝑚 = 0.05423 𝑐𝑚
𝑎 +𝑎 +𝑎 +𝑎 0.06162+0.05447+0.05664+0.05423
• 𝑎𝑝𝑟𝑜𝑚 = 5𝑝𝑝𝑚 10𝑝𝑝𝑚 4 15𝑝𝑝𝑚 20𝑝𝑝𝑚 = 4
= 0.05647
𝐴𝑐𝑜𝑐𝑎 𝑉𝑎𝑓𝑜𝑟𝑜 0.4075 10𝑚𝑙 𝑚𝑔
• 𝐶𝐶𝑜𝑐𝑎 = ∗ = ∗ = 239.3950
𝑏∗𝑎𝑝𝑟𝑜𝑚 𝑉𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎 1∗0.05647 0.3𝑚𝑙 𝑙
𝐴𝑐𝑜𝑐𝑎
• 𝐶𝐶𝑜𝑐𝑎 = = 7.2162
𝑏∗𝑎𝑝𝑟𝑜𝑚
𝐴 𝑉 0.1844 10𝑚𝑙 𝑚𝑔
• 𝐶𝑝𝑒𝑝𝑠𝑖 = 𝑏∗𝑎𝑝𝑒𝑝𝑠𝑖 ∗ 𝑉 𝑎𝑓𝑜𝑟𝑜 = 1∗0.05647 ∗ 0.3𝑚𝑙 = 108.8483 𝑙
𝑝𝑟𝑜𝑚 𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎
𝐴 𝑉 0.7565 10𝑚𝑙 𝑚𝑔
• 𝐶𝑉𝑖𝑣𝑒 100 = 𝑣𝑖𝑣𝑒 100 ∗ 𝑎𝑓𝑜𝑟𝑜 = ∗ = 1339.6494
𝑏∗𝑎𝑝𝑟𝑜𝑚 𝑉𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎 1∗0.05647 0.1𝑚𝑙 𝑙

Curva de calibración de la cafeína

Concentracion vs Absorbancia
1.2
y = 0.0527x + 0.0375
1 R² = 0.9978

0.8
Absorbancia

0.6

0.4

0.2

0
0 5 10 15 20 25
Concentracion

Y=mx+b=0.0527x + 0.0375
Donde:
Y=Concentración
X=Absorbancia
Para la coca utilice un solve
0.4075 = 0.0527𝑥 + 0.0375 ∴ 𝑥 = 7.02087
C ppm curva de calibración C ppm por absortividad
7.02087 7.2162
OBSERVACIONES
Para la realización de esta practica se tomo en cuenta la región de luz ultra
violeta por lo que únicamente se prendió esa lampara ya que estaba hasta
300nm su rango y la lampara de visible estuvo apagada.
En el análisis de la cafeína se requirió de una comparación entre un estándar
de muestra de cafeína y uno de bebidas que contienen cafeína de tal forma
de que con esto podamos lograr una mejor resolución, cabe resaltar que
siempre fue indispensable la limpieza correcta, el ajuste del equipo y la
calibración con ajuste de blancos.

CONCLUSIONES
En la presente practica se analizó la cafeína mediante una curva de
calibración dada por la absortividad de 4 muestras estándar preparadas con
el mismo volumen pero diferentes concentraciones de cafeína y por otra que
fueron tres bebidas energéticas en el mercado pero como base principal la
coca, que como bien se sabe contiene mucha cafeína, fue necesario
retirarles el gas que tenían mediante agitación sin embargo al obtener los
resultados correspondientes los números arrojados de absorción o fueron
exactamente los mismos y esto es debido a esto la presencia de gases o
inclusive la limpieza de la celdas. Es por ello que se debe de calibrar
correctamente el equipo, hacer el ajuste de parámetros dependiendo de la
muestra (en qué región trabajara) y la limpieza y preparación de las muestras
elemental con el disolvente correcto.

BIBLIOGRAFIA:
• Camacho Luis (2021), Determinación de Cafeina en bebidas
refrescantes Parte 1
https://www.youtube.com/watch?v=_DANxfr8xtw
• Camacho Luis (2021), Determinación de Cafeina en bebidas
refrescantes Parte 2
https://www.youtube.com/watch?v=nN7jzzPQWCA
• Helrich K.: (Ed.), “Official Method of Analysis of the Association of
Official Analytical Chemists”. 15th ed. Association of Official
Analytical Chemists, Arlington, VA, 1990.