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Artículo original
Acta Limnologica Brasiliensia, 2019, vol. 31, e12
https://doi.org/10.1590/S2179-975X8118
ISSN 2179-975X versión on-line

Evaluación de la embriotoxicidad en pez cebra (Danio rerio) de los compuestos

floculantes y coagulantes utilizados para la remediación del agua

Avaliação da embriotoxicidade em pez cebra (Danio rerio) de compostos floculantes e

coagulantes usados em remediação da água

Diego Sousa Moura1  , Rafael Oliveira Duarte da Mota2  , José Francisco Gonçalves Júnior2 *  ,

Newton Flávio de Vasconcelos3  , Marco Aurélio Reis3  , Cesar Koppe Grisolia1  

1 Departamento de Genética e Morfologia, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de Brasília

- UnB, Asa Norte, Campus Universitário Darcy Ribeiro, CEP 70910-900, Brasilia, DF, Brasil
2 Departamento de Ecologia, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de Brasília - UnB, Asa
Norte, Campus Universitário Darcy Ribeiro, CEP 70910-900, Brasília, DF, Brasil
3 WaterFlows Empresa Bioquímica do Brasil, Av. Pedro Botesi, 2636, Jardim Flamboyant, Mogi
Mirim, SP, Brasil
* correo electrónico: jfjunior@unb.br

Citar como: Moura, DS y col. Evaluación de la embriotoxicidad en pez cebra (Danio rerio) de los compuestos
floculantes y coagulantes utilizados para la remediación del agua. Acta Limnologica Brasiliensia,
2019, vol. 31, e12.

Resumen: Objetivo: La lixiviación de las actividades mineras llega a los cuerpos de agua, lo que provoca la
contaminación del agua y la acidificación por metales tóxicos. Como consecuencia, se produce el agotamiento de
oxígeno, con la desaparición de ciertos organismos bentónicos, pérdidas de biomasa de fitoplancton y zooplancton y
mortalidad de peces. La recuperación del agua contaminada de la minería implica el uso de floculantes a base de
monómeros de acrilamida y poliacrilamida y de coagulantes a base de aluminio. Nuestro objetivo fue evaluar la
toxicidad acuática del floculante WF 424 y el coagulante WF 2000 PCA.Métodos: Se probaron un polímero aniónico
floculante (WF 424) y un complejo polinuclear coagulante de iones de hidroaluminio polimerizados (WF2000 PCA) para
determinar la embriotoxicidad para el pez cebra (Danio rerio, Prueba FET - OEDC,
236, 2013). Resultados: Después de 96 h de exposición a WF424, no hubo letalidad significativa ni efectos
subletales como retraso en la eclosión, alteración de los latidos del corazón y malformaciones en el desarrollo
embrionario, en comparación con el grupo de control (p> 0,05). El compuesto coagulante WF2000 PCA no
mostró efectos letales durante 96 h de exposición, y se consideró que la CE50 estaba por encima del nivel de
concentración más alto probado.Conclusiones: Para ambos compuestos, se observó nomalformación, retraso
en el desarrollo embrionario o embriotoxicidad.
Palabras clave: relaves mineros; contaminación; aguas residuales; toxicidad.

Resumen: Objetivo: O carreamento decorrente das atividades de mineração atinge corpos

d'água, causando contaminação da água e acidificação por metais tóxicos. Como conseqüência, a
depleção de oxigênio ocorre, com o desaparecimento de certos organismos bênticos, perdas na
biomassa do fitoplâncton e do zooplâncton, e mortalidade de peixes. Remediação da água
contaminada da mineração envolve o uso de floculantes baseados em monômeros de acrilamida e
poliacrilamida e de coagulantes à base de alumínio. Nosso objetivo foi avaliar a toxicidade aquática do
floculante WF 424 e do coagulante WF 2000 PCA.Métodos: Um polímero aniónico floculante (WF 424) e
um complexo polinuclear coagulante de íons hidro-alumínio polimerizados (WF2000 PCA) foram
testados quanto à embriotoxicidade para o peixe-zebra (Danio rerio, teste FET - OEDC, 236, 2013).

Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia de atribución Creative Commons, que permite el uso, distribución
y reproducción sin restricciones en cualquier medio, siempre que el trabajo original se cite correctamente.
2 Moura, DS y col.

Resultados: Após 96 h de exposição ao WF424, não houve letalidade significativa, nem efeitos
subletais como atraso na eclosão, alteração do batimento cardíaco e malformação no
desenvolvimento embrionário, quando comparados como grupo controle (p> 0,05). O composto
coagulanteWF2000 PCA no apresentou efeitos letais durante 96 h de exposição, e EC50 foi consider
acima do nível de concentração mais alto testado.Conclusões: Para ambos compostos, nenhuma
malformação, atraso no desenvolvimento embrionário ou embriotoxicidade foram observados.
Palavras-chaves: mineração de rejeito; contaminação; águas residuárias; toxicidade.

1. Introducción poliacrilamida. Mediante un proceso de hidrólisis, el

Los impactos antropogénicos en los ecosistemas
acuáticos son un tema actual de gran importancia
debido al uso de los recursos hídricos para procesos
industriales, agrícolas y urbanos (Dudgeon et al.,
2006). Esto puede conducir a una reducción en la
calidad del agua (Allan & Castillo, 2007; Hepp &
Gonçalves Junior, 2015; Callisto et al., 2016), lo que
afecta a la fauna en su diversidad y funcionalidad al
alterar los atributos clave de la integridad del
ecosistema (Albuquerque et al., 2016). al., 2010;
Honda y Durigan, 2017; Dias, 2017).
La extracción y el aprovechamiento de metales han
producido diferentes tipos de residuos, generando graves
riesgos para el medio acuático. La lixiviación de los procesos
mineros llega a los cuerpos de agua, provocando la
contaminación del agua y la acidificación por metales tóxicos
(Wright y Welbourn, 2002). El agotamiento de oxígeno y la
desaparición de ciertos organismos bentónicos, la
disminución de la biomasa de fitoplancton y zooplancton y
los cambios en las comunidades de peces son indicadores de
la degradación del agua causada por los relaves mineros. La
remediación de las aguas residuales de la minería implica
acciones de control de la carga tóxica, reduciendo
significativamente los sedimentos contaminados y
permitiendo la restauración de la biota acuática (Wright &
Welbourn, 2002).
Los floculantes a base de monómeros de acrilamida y
poliacrilamida están indicados para su uso en la
remediación de aguas contaminadas por relaves
mineros. Se utilizan para promover la aglomeración de
partículas en el agua superficial, de modo que este grupo
flote hacia la parte superior. Los coagulantes a base de
aluminio se utilizan para precipitar impurezas en el agua
en un proceso de limpieza. Ambos compuestos se
utilizan comúnmente en la limpieza de agua potable, en
el tratamiento de aguas residuales y en la remediación
de accidentes causados por relaves mineros o fallas de
presas (Susaya et al., 2010; Wang et al., 2015). Por otro
lado, los procesos de tratamiento de coagulación /
floculación han mostrado una mayor toxicidad de las
aguas tratadas (Wang et al., 2015).
WF424 es un polímero aniónico floculante,
obtenido de la copolimerización de acrilamida con
ácido acrílico o por reacciones de hidrólisis de
grupo amida se reemplaza por un grupo carboxílico.
De esta forma, la molécula adquiere carga negativa
en medio neutro o alcalino. La repulsión
electrostática entre los grupos ionizados da como
resultado el estiramiento de la molécula. Como
proceso sintético, esta macromolécula se puede
obtener fácilmente como monómeros hidrolizados.
Además, los procesos de hidrólisis e ionización para
adquirir el compuesto con características deseables
para el propósito previsto están totalmente bajo
control (AWWA, 2015, B453-13 Poliacrilamida).
WF2000 PCA (Alnorte(OH)metroCl3m-n) es un complejo
polinuclear de iones hidro-aluminio polimerizados,
con alta solubilidad en agua. Su hidrólisis proporciona la
neutralización de las cargas eléctricas en el medio y, en
consecuencia, promueve un proceso de coagulación más
efectivo en comparación con los coagulantes derivados
de las sales monoméricas. WF2000 PCA promueve la
formación de coágulos desestabilizando los sistemas
coloidales en el agua, permitiendo la sedimentación y
consecuentemente la clarificación del agua. Las
principales ventajas de su uso en el tratamiento de aguas
y efluentes están relacionadas con un mejor control del
pH del medio, mayor remoción de contaminantes
orgánicos e inorgánicos, reducción de fuentes de sulfato
agregadas al proceso de tratamiento y, especialmente,
bajos niveles de aluminio residual en el agua tratada,
0.01 - 0.05 mg / L (ABNT, 2016).
El protocolo de estudio para la prueba de embrio-
toxicidad aguda (OCDE, 2013), basado en huevos
fertilizados de pez cebra (Danio rerio), ha mostrado una
alta sensibilidad en la evaluación de la toxicidad química.
Por este motivo, fue adoptado por la Unión Europea (UE
2010 /63), como uno de los principales bioensayos para
la evaluación toxicológica de compuestos químicos para
registro (REACH - Registro, Evaluación, Autorización y
Restricción de Sustancias Químicas). Allí
Hay pocos estudios en la literatura científica que
muestren los riesgos para el medio ambiente
acuático de dichos compuestos utilizados con el
propósito de remediar el agua contaminada por
relaves mineros (Lammer et al., 2009; OCDE, 2013).
En este estudio, los embriones de pez cebra se
utilizaron para comprender la toxicidad acuática del
floculante WF 424 y el coagulante WF 2000 PCA.

Acta Limnologica Brasiliensia, 2019, vol. 31, e12

 Evaluación de la embriotoxicidad en pez cebra ...
2. Materiales y métodos
2.1. Productos químicos probados
El floculante WF424 se obtuvo de
WaterFlowsBioquímica doBrasil .CAS: 31212-13-2; poli
(ácido acrílico-co-acrilamida). Las poliacrilamidas (PAM)
pertenecen a una gran familia de polielectrolitos
orgánicos sintéticos y, debido a su alto peso molecular,
hacen que las soluciones relativamente diluidas de PAM
sean muy viscosas. Algunas características físicas y
químicas importantes son: alto peso molecular en
relación con la mayoría de los otros tipos de polímeros,
entre 4 y 30 millones, pH en solución 0,5% en peso entre
4,0 y 9,0, y niveles de monómero de acrilamida residual
no superiores al 0,05 por ciento en peso del activo.
contenido de polímero (AWWA,
2015, B453-13 Poliacrilamida).
El coagulante WF 2000 PCA se obtuvo de
WaterFlows Bioquímica do Brasil, CAS: 1327-41-9,
con la fórmula empírica Alnorte(OH)metroCl3Minnesota.
El contenido de cloruro de polialuminio es de
16 a 18 por ciento en peso expresado como Al2O El
porcentaje de basicidad de la muestra se puede calcular
utilizando los valores de alcalinidad (OH%) y
aluminio (Al%), con 38 por ciento como
concentración mínima. Otras características físicas
y químicas importantes son: turbidez (NTU) menor
a 50, pH en solución 1% en peso entre
3,50 y 5,50 y densidad (g.cm-3) Entre
1.33 y 1.40 (AWWA, 2018, B408-18 Cloruro de
polialuminio líquido).
2.2. Prueba de embrio-toxicidad de peces (FET)
Los peces cebra se mantuvieron en tanques con ósmosis
inversa y agua filtrada con carbón activado y se criaron en
una instalación (ZebTec -Tecniplast, Varese, Italia) con un
ciclo de fotoperiodo de 12: 12h (luz: oscuridad) en el
laboratorio de Genética Toxicológica de la Universidad de
Brasilia ( Brasil). Los parámetros del agua se controlaron
estrictamente: la temperatura se mantuvo a
27.0 ± 1ºC, conductividad a 740 ± 100 µS / cm, pH a 7.0 ± 0.5 y
oxígeno disuelto ≥ 95% de saturación. Los embriones de pez
cebra se recolectaron inmediatamente después del
apareamiento natural, se enjuagaron con agua y se revisaron
con un microscopio estereoscópico (Microscopio Zoom
Estereoscópico - Stemi 2000, Zeiss, Alemania). Se descartaron
los óvulos no fertilizados y los que presentaban
irregularidades en la hendidura o lesiones. La prueba de
toxicidad en embriones de peces se basó en la directriz del
Protocolo 236 de la OCDE "Prueba de toxicidad en embriones
de peces" (FET) (OCDE, 2013). Los embriones de pez cebra se
expusieron a siete concentraciones graduadas de WF2000
PCA, después de ajustar el pH a 7.2 con tampón TRIS (Tris-
Hydroxymethyl aminomethane CAS 77-86-1, probado solo a
una concentración de
Acta Limnologica Brasiliensia, 2019, vol. 31, e12
3
183 mg / L) a niveles de 0.0; 7,81; 15,62; 31,25;
62,50; 125,0; 250.0 y 500.0 mg / L, preparado mediante
sucesivas diluciones de solución madre. WF424 se probó
a niveles de concentración de 0,0; 1,0; 10,0;
100,0 y 1000,0 mg / L, también preparado mediante
sucesivas diluciones de solución madre a pH 7,2. La prueba
se realizó utilizando 60 huevos por tratamiento, divididos en
3 réplicas, seleccionados y distribuidos en microplacas de 24
pozos en cámara climática (SL-24 Solab Científica, Brasil), se
llenaron 20 pozos con 2mL de la solución de prueba y cuatro
pozos con agua (control interno de la placa, como se requiere
en la directriz de la OCDE). La prueba se inició
inmediatamente después de la fertilización y continuó
durante 96 h. Los embriones se observaron diariamente bajo
un microscopio estereoscópico. Los parámetros de desarrollo
se evaluaron en embriones durante el período de prueba
utilizando un aumento de × 70 para huevos y × 40 para
embriones eclosionados. Antes de la eclosión, se evaluaron
los siguientes parámetros: coagulación del huevo, formación
de otolitos, retraso general en el desarrollo, pigmentación
ocular y corporal, formación de somitas, latidos del corazón,
3.
edemas, desprendimiento de la yema de la cola del saco
vitelino, absorción del saco vitelino y eclosión. Todos los
parámetros se evaluaron y cuantificaron según se
observaron o no. La prueba FET con embriones de pez cebra
fue aprobada por el Comité de Ética Animal de la Universidad
de Brasilia, protocolo n. 100226/2014.
2.3. Análisis estadístico
Se utilizó un ANOVA de una vía para detectar las
diferencias entre los grupos para conjuntos de datos
distribuidos normalmente. Cuando los datos no pasaron la
prueba de normalidad de Kolmogorov-Smirnov y la prueba
de homogeneidad de varianza de Levene, se realizó una
prueba de Kruskal-Wallis. Si se encontraron resultados
significativos, se utilizó la prueba de Dunnett o la de Dunn
(para datos paramétricos o no paramétricos,
respectivamente) para detectar diferencias significativas
entre las concentraciones probadas y el control (p <0.05).
Todos los análisis se realizaron utilizando Sigma Stat
3.5 paquete estadístico.
3. Resultados
Durante las 96 h de prueba, no se observó mortalidad
significativa para los grupos de control considerando ambos
grupos de tratamiento. Además, los grupos de control
mostraron un desarrollo normal donde la tasa de eclosión y
las tasas de supervivencia estaban por encima del 90%, como
describen Kimmel et al. (1995) y recomendado por el
protocolo 236 de la OCDE.
Después de 96 h de exposición a WF424, no hubo efectos
letales (mortalidad) o subletales significativos como retraso
en la eclosión, alteración de los latidos del corazón
4 Moura, DS y col.

y malformación en el desarrollo embrionario, en aproximadamente el 10% de los organismos expuestos a

comparación con el grupo control (p> 0,05). La
mortalidad máxima fue del 2% durante todo el
período de prueba (Figura 1). Además, el grupo de
control (agua) presentó un desarrollo normal como
describen Kimmel et al. (1995). La CL50 se estimó por
encima de la concentración más alta probada (1000
mg / L). En el último día de exposición, se observó que
la concentración de 1000 mg / L presentaron alteración
en el equilibrio (cambio de comportamiento). Sin
embargo, no hubo diferencias estadísticas en
comparación con el grupo de control (p> 0,05).
Una descripción general de la prueba de embriotoxicidad con
el compuesto coagulante WF2000 PCA no mostró efectos letales
durante 96 h de exposición (Figura 2).

Figura 1. Descripción general de la prueba de toxicidad en embriones de pez cebra después de 96 h de exposición a WF424. La proporción de huevos y embriones

no eclosionados que murieron está representada por barras negras; la proporción de embriones que permanecieron vivos pero no eclosionaron se presenta

como barras grises; los que nacieron como barras blancas y la proporción de embriones que murieron después de la eclosión como barras grises punteadas

oscuras y manchadas.

Figura 2. que muestra una descripción general de la prueba de toxicidad del embrión de pez cebra después de 96 h de exposición a WF 2000 PCA. La proporción

de huevos y embriones no eclosionados que murieron está representada por barras negras; la proporción de embriones que permanecieron vivos pero no

eclosionaron se presenta como barras grises; los que nacieron como barras blancas y la proporción de embriones que murieron después de la eclosión como

barras grises punteadas oscuras y manchadas.

Acta Limnologica Brasiliensia, 2019, vol. 31, e12

 Evaluación de la embriotoxicidad en pez cebra ...
Se determinó que la LC50 estaba por encima de los
niveles de concentración más altos probados de 500
mg / L. No fue posible determinar la concentración
efectiva (CE50) para ningún parámetro subletal
analizado, como cambios en el equilibrio, eclosión,
latidos cardíacos y desarrollo embrionario. Por lo
tanto, la CE50 también se consideró por encima del
nivel de concentración más alto probado.
4. Discusión
La literatura ha demostrado que existen algunos
efectos subletales y letales del aluminio en diferentes
rangos de concentración. García-Medina et al. (2010)
estudiaron el estrés oxidativo inducido por el aluminio en
linfocitos de carpa común (Cyprinus carpio),
y encontraron efectos significativos a concentraciones de
120-239 mg / L. Griffitt (2018) estudió los efectos
toxicológicos de las nanopartículas metálicas de aluminio
en adultos y juveniles de pez cebra, y estimaron una CL50
superior a 10 mg / L. Lee (2014), al evaluar un linaje
transgénico de pez cebra (huORFZ), determinó una LC90
de 34,53 mg / L para el aluminio. Dave (1985) evaluó la
influencia del pH en la toxicidad del aluminio y determinó
una CL50 de 80-106 mg / L para el pez cebra. En nuestros
resultados con WF 2000 PCA, la CL50 se estimó en más
de 500 mg / L, lo que demostró bajos riesgos
toxicológicos para el medio acuático. Además, no se
produjeron malformaciones o retrasos en el desarrollo
en los embriones de pez cebra.
En una búsqueda en la base de datos de la Agencia
de Protección Ambiental de EE. UU. Utilizando la palabra
clave poliacrilamida, no encontramos estudios que
muestren efectos letales y subletales en organismos
acuáticos. Acharya y col. (2010) estudiaron las respuestas
fisiológicas enDaphnia magna expuestos a poliacrilamida
aniónica lineal, en la que determinaron la CL50 aguda en
152 mg / L. Con el fin de evaluar la toxicidad aguda de la
acrilamida en organismos no objetivo
(macroinvertebrados y peces), mediante la
determinación de valores de CL50, Krautter et al. (1986)
encontró:Daphnia magna = 160 mg / L; Paratanytarsus
parthenogenetica = 410 mg / L; Salmo gairdneri
= 110 mg / L; Pimephales promelas = 120 mg / L;
Lepomis macrochirus = 100 mg / L. Finalmente, Hall y
Mirenda (1991), evaluando la toxicidad aguda de 34
polímeros de acrilamida paraDaphnia pulex y el
pescado Pimephales promela, Observó que la
composición química de los polímeros es el principal
factor que controla la toxicidad.
Además, el peso molecular de los polímeros
no debe correlacionarse con la toxicidad.
Acta Limnologica Brasiliensia, 2019, vol. 31, e12
5
Esto dificulta establecer un patrón de toxicidad. Por
tanto, se requieren estudios específicos para cada
molécula de interés. No se encontraron estudios con pez
cebra (Danio rerio) con fines comparativos. La
determinación de la CE50 para los parámetros medidos
subletales, como cambios en el equilibrio, eclosión,
latidos del corazón y desarrollo embrionario, no fue
posible debido a la baja toxicidad del compuesto
probado. De hecho, EC50 también está por encima de la
concentración más alta probada. En conclusión, los
resultados de la prueba de embriotoxicidad mostraron
que el compuesto floculante WF 424 presentaba una baja
toxicidad aguda para los embriones de pez cebra (Danio
rerio). Por lo tanto, debido a que la CL50 (mortalidad) y la
CE50 estaban por encima de 1000 mg / L, este
compuesto de hecho representa un riesgo bajo para los
organismos acuáticos.Cuando se compara con los rangos
de concentración en la literatura, el floculante WF424 se
probó a niveles de concentración más altos que los
observados en otros estudios. , y algo de toxicidad
ocurrió solo en el nivel de exposición más alto de 1000
mg / L, lo que no ocurre en los procesos de remediación.
El compuesto coagulante WF2000 PCA, con una CL50
superior a 500 mg / L, también mostró bajos riesgos para
el medio ambiente. Si se usa de acuerdo con las
recomendaciones del fabricante, ninguno de los
compuestos daña el medio ambiente acuático.
En conclusión, estos compuestos químicos podrían tener
una toxicidad ocasional en concentraciones más altas, a
diferencia de cuando se usan en la remediación de la
lixiviación de la minería. Estos productos pueden
considerarse de baja toxicidad para los embriones de pez
cebra. Una vez que puedan tener usos comerciales múltiples,
se deben realizar estudios con especies de diferentes niveles
tróficos. Por lo tanto, la gestión de los procesos de
remediación debe estar bajo el control del usuario,
especialmente cuando el receptor del cuerpo de agua recibe
este efluente, y principalmente cuando esta agua se utiliza
para el suministro humano. El usuario debe ser siempre
consciente de los parámetros establecidos por las agencias
reguladoras. Al trabajar con remediadores, debemos tener
siempre presente la relación costo-beneficio para comparar
los riesgos, exposición humana e impactos en los
ecosistemas acuáticos.
Agradecimientos
Este estudio fue apoyado por la Universidad de
Brasilia, el Consejo Brasileño de Investigaciones
(CNPq, beca n. 305741 / 2015-2 y n. 310641 / 2017-9) y
WaterFlows Bioquímica do Brasil. Los autores
declaran no tener ningún conflicto de intereses.
6 Moura, DS y col.
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Recibido: 09 de diciembre de 2018
Aceptado: 08 de marzo de 2019

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