IMPLEMENTACIÓN DE UNA TÉCNICA DE COLORACIÓN PARA EL DIAGNÓSTICO

SIMULTÁNEO DE COCCIDIOS Y MICROSPORIDIOS

Combol, A.; Fernández, N.; Figueredo, E.; Acuña, A.M; Zanetta,

E.

Sección Enteroparasitosis. Dpto. de Parasitología y Micología. Instituto de

Higiene
Facultad de Medicina. Universidad de la República.Montevideo. Uruguay

Firmado
digitalmente por Dra.
Nora Fernandez
INTRODUCCIÓN OBJETIVO

Los coccidios y microsporidios son protozoarios emergentes, agentes de una gran variedad
de entidades clínico-patológicas; por frecuencia las alteraciones del tubo digestivo son las Implementar una técnica de
mas importantes, siendo la diarrea el síntoma principal y el hilo conductor del coloración para el diagnóstico
diagnóstico. s i m u lt á n e o d e c o c c i d i o s
La diarrea se presenta fundamentalmente en individuos inmunocomprometidos por lo que Cryptosporidium parvum (Cp) e Isospora belli
son considerados agentes oportunistas. Por otro lado, en inmunocompetentes son agentes
de diarrea del viajero. Cryptosporidium parvum es causa de diarrea aguda infantil y para los
microsporidios se establecido la portación asintomática.
Los elementos infectantes se eliminan con las heces: ooquistes en el caso de los coccidios
Cryptosporidium parvum e Isospora belli y esporas en el caso de los microsporidios Enterocytozoon
bieneusi y Encephalitozoon intestinalis.
La técnica de coloración Ziehl Neelsen modificado en frío o Kinyoun es la utilizada
habitualmente para el diagnóstico confirmatorio de coccidios; en tanto para el
diagnóstico de microsporidios en heces se recomienda la Tricrómica modificada.

METODOLOGÍA CUADRO 1: REACTIVOS CUADRO 2 : TÉCNICA

Se procesaron un total de 50 muestras de heces Solución de carbol-fucsina

seleccionadas de nuestro laboratorio, las 25 ml de solución saturada de fucsina
cuales estaban preservadas en formol al 10% a alcohólica (2.0 g de fucsina básica en 25 1-Sumergir en carbol-fucsina 1 0
razón de 1: 3. ml de etanol 96º) minutos
De ellas, 25 eran negativas para enteroparásitos
25 gr. de fenol, 500 ml de agua destilada 2-Lavar con agua de la canilla
Decolorante 3-Decolorar con alcohol-ácido
y 25 positivas correspondiendo: 18 a M, 3 a Cp y 1 acido clorhídrico al 0.5 % clorhídrico 30 segundos
a Ib. En 2 muestras se efectuó una mezcla de heces Tricrómica modificada por Didier
4-Lavar con agua de la canilla
1:1con M + Cp y en 1 se mezcló Cp + M + Ib. 6.0 g Chromotrope 2R (Sigma)
0.5 g de azul de anilina 5-Sumergir en Tricrómica a 37ºC 3 0
Se confeccionaron frotis finos y se fijaron en
0.7 g de ácido fosfotúngstico minutos
metanol.
3 ml de ácido acético 6-Lavar con agua de la canilla
Se colorearon en dos pasos, en primer lugar se Dejar a temperatura ambiente durante 30 7-Decolorar con alcohol-ácido
utilizó carbol fucsina para teñir los ooquistes minutos
acético 10 segundos
de coccidios y en segundo lugar la coloración Agregar 100 ml de agua destilada y
ajustar el pH a 2.5 con HCl 2N 8-Lavar con etanol 95º 3 0
Tricrómica modificada por Didier para teñir
Decolorante segundos
esporas de microsporidios.
4.5 ml de ácido acético en 995.5 ml de
Las láminas se observaron al MO con 1000
aumentos, durante 10 minutos . Cuadros 1 y 2

Con esta técnica se han confirmado las muestras negativas y las muestras positivas de nuestro laboratorio.
Esta técnica permitió el diagnóstico simultáneo de Cryptosporidium parvum, Isospora belli y esporas de
microsporidios. Figura 1
RESULTADOS Los ooquistes de Isospora belli así como los de Cryptosporidium parvum se observaron de color fucsia brillante, en
tanto, las levaduras nunca presentan esa apariencia brillante.
Al igual que en el Ziehl Neelsen algunos ooquistes de Cryptosporidium parvum se tiñen parcialmente. Figura 2
Las esporas de microsporidios se observaron de color rosado, con una vacuola y una raya pálida diagonal o

FIGURA 1 FIGURA 2 FIGURA 3

Ooquistes de Isospora Ooquistes de Cryptosporidium parvum Esporas de microsporidios
belli MO x 1000 MO x 1000

La técnica combinada de Fucsina y Tricrómica modificada por Didier, permite detectar

CONCLUSIONES coccidios y microsporidios en forma simultánea, insume 45 minutos, es de bajo costo y fácil
realización.
Se puede realizar en cualquier laboratorio que tenga una estufa a 37º y requiere de

1. Acuña, A.M; Combol, A.; González, M.; Fernández, N.; Perera, P.; Zanetta, E. Enteroparásitos oportunistas en población VIH-SIDA en Uruguay. Libro
de Resúmenes del XVII Congreso Latinoamericano de Parasitología. 2005. Tomo II. 189
2. Fernández N, Combol A, Zanetta E, Acuña A, Gezuele E. Primer diagnóstico de microsporidiosis humana en Uruguay. Rev Med Uruguay 2002. 18 (3): 251-
255.
BIBLIOGRAFIA 3. Ignatius R, Lehmann M, Miksits K, Regnath T, Arvand M, Engelmann E, Futh U, Hahn H, Wagner J. A new acid-fast trichrome stain for simultaneous
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4. Didier ES, Orenstein JM, Aldras A, Bertucci D, Rogers LB, Janney FA. Comparison of three staining methods for detecting microsporidia in fluids. J
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5. Zanetta E, Bonifacino R, Carmona C, Acuña A, Guerrero J. Primeros hallazgos en Uruguay de un nuevo agente de diarrea aguda infantil
(Cryptosporidium sp). Arch Pediatr Uruguay 1987. 58 (1): 37-45.