AGAR TCBS

El agar TCBS es un medio de cultivo sólido altamente selectivo y

diferencial, utilizado para el aislamiento y cultivo de bacterias del género
Vibrio, especialmente Vibrio cholerae principal patógenos de este género.

Las siglas TCBS significan tiosulfato citrato bilis sacarosa. A este agar
también se le conoce con el nombre de medio selectivo para Vibrios.

Está compuesto por extracto de levaduras, peptona de carne, tripteína,

citrato de sodio, tiosulfato de sodio, bilis de buey, sacarosa, cloruro de
sodio, citrato férrico, azul de bromotimol, azul de timol y agar.

Esta composición permite un adecuado desarrollo de las especies de Vibrio a

partir de muestras de aguas, alimentos y heces; a excepción de Vibrio
hollisae, que no crece en este medio. Además, el medio TCBS es capaz de
inhibir el crecimiento de otras bacterias acompañantes, en especial
coliformes.

El humano se infecta principalmente por el consumo de alimentos crudos o

poco cocidos del mar o aguas contaminadas, pero también a través de la
infección de heridas.

Debido a ello, los laboratorios clínicos deben incluir el agar TCBS en el

estudio de coprocultivos de muestras de heces líquidas, especialmente con
aspecto de agua de arroz.

La diarrea producida por el cólera a menudo tiene un aspecto pálido y

lechoso que se asemeja al agua en la que se ha enjuagado arroz. Náuseas y
vómitos. 

Especialmente si el paciente refiere haber estado en contacto con agua de

mar o haber consumido mariscos o pescados.

FUNDAMENTO
El extracto de levaduras, las peptonas de carne, y la  tripteína, son la
fuente nutritiva de este medio. Sin embargo, el agar TCBS es un medio
inhóspito para la mayoría de las bacterias.

Su alta selectividad viene dada por el agregado de citrato de sodio y bilis de

buey; ambos son agentes inhibidores que además proporcionan un pH alcalino
al medio, restringiendo el crecimiento de la flora acompañante y
favoreciendo el crecimiento de V. cholerae, entre otras especies. Cabe
destacar que Vibrio cholerae es muy sensible a la acidez.

Por su parte, el cloruro de sodio equilibra osmóticamente al medio. Además

como su concentración es alta, también actúa como un agente inhibidor,
favoreciendo el crecimiento de bacterias halófilas.

La sacarosa es el azúcar fermentable que junto a los indicadores de pH azul

de bromotimol y azul de timol le dan el carácter diferencial al medio. Por tal
motivo, con este medio es posible diferenciar las cepas fermentadoras de
sacarosa de las no fermentadoras.

Las colonias de las cepas fermentadoras de sacarosa se desarrollan de color

amarillo y harán virar el medio de verde a amarillo por la producción de
ácidos. Las no fermentadoras crecen traslúcidas y el medio queda del color
original (verde).

Este medio contiene tiosulfato de sodio como fuente de azufre y citrato

férrico como agente revelador. Ambos evidencian a las bacterias capaces de
producir sulfuro de hidrógeno (gas incoloro). El H2S (ácido sulfhídrico) se
forma a partir del tiosulfato y posteriormente al reaccionar con el citrato
férrico se forma un precipitado negro visible.

Finalmente, el agar es el que proporciona la consistencia sólida al medio.

PREPARACIÓN
Pese 89 gr del medio deshidratado y disuelva en un litro de agua destilada.
Ayude la disolución por calentamiento y agitación frecuente. La mezcla
puede dejarse hervir hasta por 2 minutos.

Este medio no se usa autoclave. Después de su disolución se sirve

directamente sobre placas estériles. Al solidificar se ordenan de forma
invertida en plaqueros y se guardan en nevera (2-8°C) hasta su uso.

El medio después de preparado debe quedar a pH 8,6 ± 0,2.

El color del medio deshidratado es de color beige claro o beige-verdoso, y el

color del medio es verde bosque o verde azulado.

Es importante dejar atemperar las placas antes de sembrar las muestras.

Uso
La muestra más común para el aislamiento de Vibrios son las heces
diarreicas.

Para aumentar la sensibilidad del cultivo, las heces pueden ser pasadas por
agua peptonada a pH 8,4 como medio de enriquecimiento durante 8 horas
máximo, de allí se subcultiva al medio TCBS.

También hay que tener en cuenta que algunas cepas de Vibrios pueden
causar septicemias en pacientes inmunosuprimidos, por tanto pueden
aislarse de hemocultivos. Así mismo,  pueden analizarse muestras de aguas y
alimentos provenientes del mar, cuando existen brotes epidémicos de la
enfermedad de cólera.

SEMBRADO
Las placas se incuban a 37°C por 24 horas en aerobiosis.

Las colonias presuntivas de Vibrio cholerae son de tamaño mediano, lisas,

opacas, de bordes delgados y de color amarillas debido a que fermentan la
sacarosa.

De forma similar crecen las especies de V. alginolyticus, V. fluvialis, V.

hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii y algunos V.
vulnificus. Otras especies de Vibrios clínicamente importantes como V.
parahaemolyticus no fermentan la sacarosa, desarrollándose como colonias
verde oliva.