OBJETIVOS:

Inducir la formación de carboxihemoglobina por medio de la

inhalación de cigarro en un ratón, para determinar la presencia
cualitativa de la carboxihemoglobina mediante el método de ensayo
alcalino y; comprobar que la asfixia que sufre el animal antes de su
muerte se lleva acabo por la formación de este carboxihemoglobina
en sangre.

Conocer el fundamento de ensayo alcalino para la determinación de carboxihemoglobina.

Identificar las principales fuentes de contacto así como de contaminación del monóxido de
carbono.

INTRODUCCION:

El monóxido de carbono (CO) es un gas tóxico, inodoro e incoloro que se produce por la combustión
incompleta de los hidrocarburos. El humo de los incendios, el funcionamiento inadecuado de motores de
automóviles, calderas, estufas de gas y braseros son las causas más frecuentes de intoxicación por CO. Algunos
disolventes de pinturas y desengrasantes que contienen cloruro de metileno son una fuente menos habitual.
La hipoxia tisular y el daño celular directo del CO son los principales mecanismos fisiopatológicos de la
intoxicación:
• Formación de carboxihemoglobina. El CO se absorbe fácilmente por los pulmones, pasa a la circulación y se
une a la hemoglobina, con una afinidad 240 veces mayor que la del oxígeno, formando carboxihemoglobina.
La unión del CO en uno de los cuatro lugares de transporte de la hemoglobina ocasiona un aumento de la
afinidad de la misma por el oxígeno en los tres restantes. Por ello, la carboxihemoglobina es una molécula
incapaz de oxigenar los tejidos.
• Unión a otras proteínas. El CO se une también a la mioglobina muscular y a la mioglobina cardiaca alterando
la función muscular. La disfunción del miocardio hipóxico ocasiona mala perfusión.
• Daño celular directo. La unión del CO a la citocromo-c-oxidasa impide la respiración
celular y la síntesis de ATP favoreciendo el metabolismo anaerobio, la acidosis láctica y
la muerte celular.

Determinación de carboxihemoglobina (COHB)

Ensayo alcalino
Se basa en la mayor estabilidad de la carboxihemoglobina con
respecto a la hemoglobina en similares condiciones alcalinas.
El ensayo ofrece un neto contraste y resulta positivo cuando la
concentración de carboxihemoglobina es superior al 10%.

METODOLOGIA

Se siguió la misma metodología que viene indicada en el manual de

“Toxicología e Higiene Publica” practica de Determinación de
Carboxihemoglobina ( COHb); excepto que usamos un ratón al cual se puso en
contacto con humo de cigarro para que al sacarle sangre este presentara CO
DIAGRAMA DE FLUJO

Sacar sangre de una

persona que tenga
tendencia a fumar
aproximadamente 1ml

Colocar 3 o 4
gotas de sangre en
un tubo de ensaye

Agregar 15 ml
de agua
destilada y
homogenizar
Agregarle al tubo 5 gotas de
hidróxido de sodio al 10 %
y mezclar bien

Se observara un color
castaño a castaño verdoso
si la sangre es normal y la
sangre oxicarbonada
obtendrá un color
carminado durante 1min.
Colocar al ratón en
una caja cerrada la
cual contenga por
unos orificios unos
cigarros encendidos
Sacar al ratón el cual
ya ha inalado el humo
de los cigarros y
obtener una muestra
de sangre de su
corazón
Se seguirán los pasos
mencionados
anteriormente
RESULTADOS:

ANALISIS DE RESULTADOS:

La inducción de la formación de carboxihemoglobina se realizó

mediante la exposición de los ratones al humo de cigarros; se
encontraron expuestos al CO provocando la unión de éste a la
hemoglobina de manera estable; al adicionar el hidróxido de sodio se
observa que en los ratones tratados no existe un cambio de
coloración, debido a que existe una gran cantidad de
carboxihemoglobina estable al ensayo alcalino.

La concentración de carboxihemoglobina en los ratones

tratados debió de ser igual o mayor al 10%, ya que este ensayo es
positivo para concentraciones de esta magnitud.

Carboxihemoglobina

CO + HbFeO2 HbFeCO + O2
Rojo intenso

En el caso del ratón control, no se alcanzan concentraciones de

carboxihemoglobina del 10%, por lo que la prueba da como negativa,
es decir que la formación de COHb es mínima para poder ser
detectada por este método y al adicionar el hidróxido de sodio, se
forma hematina alcalina porque el oxígeno del hidróxido de sodio si
se puede unir a la hemoglobina, en este caso no hay competencia
del oxígeno con el CO por la hemoglobina. El color que resulta de la
formación de la hematina alcalina es verde, el cual se presenta en la
sangre del ratón control.
Hematina
Hb + 0H HbOH
Verde