UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

PRÁCTICA N° 13
PRUEBA DE SINSIBILIDAD A LOS ANTIOBIÓTICOS: ANTIBIOGRAMA

ASIGNATURA: Microbiología
DOCENTE: BARRENECHEA BUSTAMANTE, Dante Moisés
ESTUDIANTE: RAMOS VIZCARRA, Katherine Liseth
CÓDIGO: 02192109
GRUPO DE PRÁCTICA: Lunes 2 a 5 p.m
FECHA: 14/11/2021

AYACUCHO – PERÚ
2022
Objetivo: es determinar la importancia del antibiograma para una adecuada
elección terapéutica.

Realizar un ensayo de sensibilidad de un cultivo bacteriano a los antibióticos,

usando el método de Kirby Bauer. Interpretar los resultados y hacer el informe
correspondiente.
 INTRODUCCIÓN

La determinación de la sensibilidad o susceptibilidad de un microorganismo

dado un antibiótico constituye una técnica común e importante, en la mayoría de
los laboratorios. Los resultados de estas pruebas sirven para seleccionar los
antibióticos idóneos a la hora de instaurar una terapia frente realizar antes de
microorganismos. Los cultivos la administración de a los se deben de los
antibióticos; de esta manera se pueden aislar los verdaderos microorganismos
causantes de la infección. Si los cultivos se obtienen después de la
administración de los antibióticos, se puede inhibir el desarrollo del
microorganismo causal y sólo permitir el crecimiento de los microorganismos
secundarios.
FUNDAMENTO

En el método de Kirby Bauer, el microorganismo es inoculado en la superficie

de una placa de agar, sobre el cual se colocan discos impregnados con una
concentración conocida del antibiótico. Las placas se incuban por 16-18 horas a
35- 37°C. Durante la incubación, el antibiótico difunde radialmente desde el
disco a través del agar, por lo que su concentración va disminuyendo a medida
que se aleja del disco. En un punto determinado, la concentración del antibiótico
en el medio es incapaz de inhibir al germen en estudio. El diámetro del área de
inhibición alrededor del disco puede ser convertido a las categorías de sensible,
intermedio o resistente (S, I, o R) de acuerdo a tablas publicadas por los
organismos encargados del control de tales métodos, por ejemplo el Comité
Nacional de Estandar de Laboratorios Clínicos de los Estados Unidos de
Norteamérica (National Committee for Clinical Laboratories Standards).
CUESTIONARIO

1.- Explique a que nivel de la célula microbiana actúan los antibióticos. Indique
ejemplos

 Los antibióticos que actúan en el mismo nivel no deben asociarse, pues

compiten por el sitio de unión y se antagonizan.

Bactericidas  Bacteriostáticos

Betalactámicos Amfenicoles

Aminoglucósidos Lincosamidas

Glicopéptidos Macrólidos

Quinolonas Sulfamidas

Rifampicinas Tetraciclinas

2.- Explique como Alexander Fleming descubrió la acción microbiana del

Penicillium

 En uno de sus experimentos en 1928, Fleming observó que colonias de la

bacteria común Staphylococcus aureus habían sido agotadas o eliminadas por un
moho que creció en el mismo plato o placa de Petri. Él determinó que el moho
elaboraba una sustancia que podía disolver las bacterias. Llamó a esta sustancia
penicilina, por el nombre del moho Penicillium que la produce. Fleming y otros
realizaron una serie de experimentos a en las 2 décadas siguientes usando
penicilina que tomaron de los cultivos de moho que mostraron su capacidad de
destruir bacterias infecciosas.

3.- Mencione dos causas del por que los microorganismos pueden llegar a
hacerse resistentes a los antibióticos

 Usar antibióticos cuando no son necesarios. La mayoría de los resfriados,

dolor de garganta, infecciones de oído y sinusitis son causadas por virus. Los
antibióticos no funcionan contra los virus. Muchas personas no comprenden
esto y con frecuencia piden antibióticos cuando no los necesitan. Esto lleva
al uso excesivo de antibióticos. Los CDC calculan que 1 de 3 recetas para
antibióticos no son necesarias.

 No tomar los antibióticos como se los recetaron.  Esto incluye no tomar

todos los antibióticos, dejar de tomar una dosis o usar los antibióticos que
sobran. El hacer esto ayuda a las bacterias a crecer a pesar del uso de
antibióticos. Como resultado, la próxima vez que utilice ese antibiótico la
infección puede no responder plenamente al tratamiento. 

 Uso incorrecto de los antibióticos. Usted nunca debe comprar antibióticos

en línea sin una receta médica o tomar los antibióticos de alguien más. 

 Exposición de fuentes alimenticias. Los antibióticos son ampliamente

usados en agricultura. Esto da lugar a bacterias resistentes en el suministro
de alimentos. 
4.- Defina la Concentración mínima inhibitoria (CIM) y Concentración mínima
bactericida (CBM) ¿Como se determina experimentalmente?

Se realizó un estudio transversal, prospectivo y descriptivo, en el que se evaluó

la relación entre la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y Concentración
Mínima Bactericida (CMB) de cepas bacterianas provenientes de cultivos de
orina de pacientes ambulatorios y hospitalizados del Instituto Nacional de
Enfermedades Neoplásicas (INEN) durante los meses de diciembre de 2002 a
febrero de 2003.

Se utilizó Ciprofloxacina, donada por Laboratorios Farmindustria, de: Lote N°

010418, Fecha de expiración: Abril 2004, Potencia: 94.783 %.

Para la determinación de la CMI se realizaron diluciones seriadas a la mitad en

caldo Mueller Hinton (MH). Se emplearon dos controles: el primero fue el
control positivo (caldo MH al que se añadió la suspensión bacteriana) y el
segundo fue el control negativo (caldo MH sin antimicrobiano y sin suspensión
bacteriana).

Se emplearon las siguientes diluciones de antimicrobiano: 0,00012, 0,00024,

0,00048, 0,0009, 0,0019, 0,0039, 0,0078, 0,0156, 0,03125, 0,062, 0,125, 0,25,
0,5, 1,0, 2,0, 4,0, 8,0, 16,0, 32, 64,0, 128, 256, 512, 1 024 μg/mL.

La CMI fue interpretada como la concentración de antimicrobiano, contenida en

el tubo de la serie que inhibió el crecimiento visible de la bacteria, para lo cual
fue necesario comparar cada uno de los tubos con los controles positivo y
negativo.

La susceptibilidad de las Enterobacterias a la Ciprofloxacina se interpreta como

(10):
Sensible : CMI ≤ 1μg/mL

Indeterminado: CMI = 2 μg/mL

Resistente: CMI ≥ 4 μg/mL

Se determinó además la concentración de antimicrobiano que inhibía al 90% de

las cepas bacterianas (CMI90) , y la concentración de antimicrobiano que
inhibía al 50 % de las cepas bacterianas (CMI50) .

Para determinar la CMB se extrajeron 100 μL de los tubos en los cuales no se

observó crecimiento visible de la bacteria (inhibición de crecimiento); esta
suspensión fue inoculada en placas Petri debidamente rotuladas con la
concentración correspondiente, añadiéndose luego agar MH a 45 ºC
aproximadamente. Se utilizó como control positivo agar MH con 100 μL de
inóculo sin antimicrobiano, y como control negativo, agar MH sin inóculo y sin
antimicrobiano. Las placas se dejaron incubar durante 24 horas a 35 °C.

La lectura de los resultados se realizó en aquellas placas donde el

antimicrobiano fue capaz de eliminar completamente el desarrollo bacteriano o
que eliminó al 99,9% de bacterias, comparándolo con el control positivo.

Se determinó además la concentración de antimicrobiano que eliminó al 90% de

las cepas bacterianas (CMB90) y la concentración que eliminó al 50 % de las
cepas bacterianas (CMB50).

Análisis Estadístico:

Para el análisis estadístico se empleó el programa estadístico SPSS versión 12.0

Se utilizó estadística descriptiva: media, frecuencia, moda, valores máximos y
mínimos y se realizó el test de ANOVA para evaluar las diferencias entre los
valores promedio obtenidos entre la CMI y CMB del total de cepas aisladas.
 5.- Cual es la importancia del antibiograma en el marco de la terapia
antimicrobiana

BIBLIOGRAFÍA
 Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de
Métodos Generales. Segunda edición. Facultad de Farmacia. Universidad
Central de Venezuela.
 Palavecino Rosales E. 1997. Boletín Escuela de Medicina. Pontificia
Universidad Católica de Chile.1997;26:156-160.
 URL: http://www.britanialab.com.ar/k07_04.html