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TP 6 - Enzimas Séricas - 2019
TP 6 - Enzimas Séricas - 2019
TRABAJO PRÁCTICO 6
Enzimas Séricas
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA HUMANA
MATERIA QUÍMICA BIOLÓGICA - CICLO LECTIVO 2017
ENZIMAS SÉRICAS
En la práctica clínica el estudio de las enzimas séricas es muy importante para el diagnóstico,
control y seguimiento de una gran variedad de patologías. Sin perder de vista que es imprescindible
tener en cuenta la sintomatología del paciente y los estudios clínicos, la detección de altos niveles
de la actividad de una enzima en suero contribuye a dilucidar un cuadro patológico.
Las enzimas que se detectan en plasma pueden tener o no función en ese medio. En este
sentido, se las clasifica como funcionales o no funcionales, respectivamente.
Algunas enzimas tienen amplia distribución tisular, mientras que otras son específicas de un
determinado tejido. Esta mayor o menor especificidad es importante para algunos diagnósticos
diferenciales.
Una vez en el plasma, cada enzima sufre un proceso de depuración que le es característico
y por lo tanto resulta de gran utilidad conocer cuál es su vida media.
Clasificación
Como mencionamos, las enzimas que se encuentran en el plasma o en el suero pueden
dividirse para su estudio en dos grupos: enzimas funcionales y enzimas no funcionales.
a- Las enzimas funcionales del plasma tienen una función definida y específica en el
plasma, es decir, este medio constituye su sitio normal de acción. Su concentración plasmática es
equivalente o mayor que la del tejido donde se producen. A este grupo pertenecen la
seudocolinesterasa, ceruloplasmina, lipoproteinlipasa, lecitin-colesterolacil transferasa, así como
también las enzimas que intervienen en la coagulación. La determinación de la actividad de estas
enzimas tiene interés clínico en la evaluación tanto de la función propia de la enzima en estudio
como de la función del tejido que la sintetiza.
b- Las enzimas no funcionales del plasma no tienen una función conocida en este medio,
ya sea porque no disponen de la cantidad necesaria de sustratos, cofactores o activadores a nivel
plasmático o porque su concentración plasmática es considerablemente menor que los niveles
titulares. Sin embargo, normalmente existen niveles circulantes detectables de la mayoría de las
enzimas no funcionales debido a la renovación celular natural o pequeños traumatismos
espontáneos. Su presencia en plasma en niveles más altos de lo normal sugiere un aumento en la
velocidad de destrucción celular y tisular.
La determinación de estos niveles de enzimas plasmáticas puede proveer información
valiosa para diagnóstico y pronóstico. Sin embargo, niveles elevados de enzimas en plasma no sólo
pueden ser interpretados como evidencia de necrosis celular ya que también la realización de
ejercicio vigoroso libera cantidades significativas de enzimas musculares.
Las enzimas no funcionales del plasma pueden dividirse en dos grupos: enzimas de
secreción y enzimas del metabolismo intermedio.
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Las enzimas de secreción se producen en glándulas exócrinas, como páncreas y próstata,
así como en tejidos como mucosa gástrica y hueso. En adenocarcinoma y osteosarcoma se observa
un aumento importante de la actividad plasmática de las fosfatasas ácida y alcalina.
Otro grupo de enzimas no funcionales son las enzimas que participan en el metabolismo
intermedio. La concentración tisular de estas enzimas es miles de veces más alta que en el plasma.
Una injuria tisular puede conducir a un aumento en la permeabilidad de la membrana plasmática
con la consecuente liberación a la circulación general de las enzimas de dicho tejido. Algunas de
las enzimas que corresponden a este grupo son: aspartato amino transferasa (AST) o glutámico-
oxalacético transaminasa (GOT), alanina amino transferasa (ALT) o glutámico-pirúvico
transaminasa (GPT), lactato deshidrogenasa (LDH), creatina quinasa (CK), amilasa, -
glutamiltranspeptidasa (-GT), 5´nucleotidasa y aldolasa (ALS).
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Lactato deshidrogenasa (LDH)
Los niveles séricos aumentados de LDH se observan en muchas circunstancias como
anemias megaloblásticas, infarto de miocardio y pulmonar, etc. El gran número de situaciones que
conducen a un aumento en la actividad de LDH hace relativa su utilidad diagnóstica. Sin embargo,
es muy útil en el seguimiento de la quimioterapia del cáncer puesto que la respuesta en la
terapéutica se acompaña por una disminución del nivel sérico de esta enzima.
La determinación de la actividad de LDH es útil en el seguimiento de la evolución del infarto
de miocardio y pulmonar. Son muy característicos los niveles de LDH elevados en los casos de
infarto de miocardio y se observan valores altos ya a las pocas horas del comienzo del mismo. Sin
embargo, por sí sola, la determinación de LDH no es determinante de lesión de ningún órgano en
particular. Por otro lado, hay que tener en cuenta que es necesario evitar la hemólisis de la muestra
de sangre, para una correcta determinación.
Transaminasas
La GOT está elevada en suero en pacientes con enfermedades hepatobiliares,
cardiovasculares y miopatías. La GPT está elevada en el suero de enfermos hepáticos.
Fosfatasas
Fosfatasa alcalina: se encuentra aumentada en las enfermedades hepáticas. Los niños en
crecimiento y las mujeres embarazadas en el tercer trimestre presentan valores “fisiológicamente”
elevados de fosfatasa alcalina en suero. Además, la determinación de la fosfatasa alcalina en suero
es útil en el diagnóstico de las enfermedades óseas, sobre todo la osteítis deformante,
hipoparatiroidismo y neoplasias óseas. La elevación de la fosfatasa alcalina sérica en algunas
enfermedades hepáticas puede ser distinguida mediante otras pruebas de laboratorio y por sus
signos clínicos. Fosfatasa ácida: se observan valores elevados en pacientes con carcinoma
prostático.
Las isoenzimas son enzimas que difieren en la secuencia de aminoácidos pero que
catalizan la misma reacción, estando presentes en la misma especie. Estas enzimas poseen
diferentes propiedades físicas y químicas determinadas genéticamente (punto isoeléctrico,
especificidad de sustrato y cofactor, etc.), suelen mostrar diferentes parámetros cinéticos (diferentes
valores de Km), o propiedades de regulación diferentes. La existencia de las isoenzimas permite el
ajuste del metabolismo para satisfacer las necesidades particulares de un determinado tejido o
etapa del desarrollo.
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Por ejemplo, la creatina quinasa (CK) tiene tres isoenzimas: muscular, cardíaca y cerebral.
La isoforma presente en el cerebro difiere fisicoquímicamente de sus isoenzimas específicas de
músculo cardíaco y esquelético.
Asimismo, las isoenzimas pueden tener distinta localización subcelular como por ejemplo la
glutámico oxaloacética transaminasa (GOT) presente en mitocondria difiere de la citosólica. En
cambio, las diferentes isoenzimas de la láctico deshidrogenasa (LDH) están presentes en
compartimientos citosólicos de diferentes tejidos.
En términos muy generales, las diferencias en el contenido enzimático son puramente
cuantitativas, es decir, las mismas enzimas están presentes en su mayoría en diversos tejidos, pero
sus actividades relativas muestran grandes diferencias de órgano a órgano. Así, el mapa
enzimático es la descripción de un órgano en términos de su contenido enzimático.
El mapa enzimático tisular está constituido, por la cantidad de cada una de las distintas
enzimas que contienen todas las células de un determinado órgano. Tanto en condiciones normales
como patológicas, esto se ve reflejado en un mapa enzimático sérico. Es decir, la presencia en el
suero de las enzimas presentes en un órgano. Esto es de vital importancia en la clínica, ya que
facilita su determinación por su fácil accesibilidad.
La medida de los diversos mapas enzimáticos séricos, por su parte, constituye el intento de
lograr la especificidad bioquímica de los diferentes órganos. Aunque desde el punto de vista
biológico son muchas las enzimas objeto de atención, el interés clínico se centra en el estudio de
aquellas cuyas variaciones son patognomónicas, es decir, indicadoras de enfermedad o, por lo
menos, de determinadas alteraciones funcionales. En algunos casos, es adecuado determinar más
de una enzima en el suero, por el hecho de no existir enzimas que sean simultáneamente órgano
específicas y lo suficientemente sensibles.
Cada enzima particular se encuentra en muy baja concentración, por lo tanto, se complica
la medición de dicha cantidad de enzima presente en un extracto tisular o fluido biológico.
Afortunadamente la actividad catalítica de una enzima provee un elemento sensible y
específico para su propia determinación. La capacidad de transformar específicamente un gran
número de moléculas de sustrato en producto, en un período corto de tiempo, permite amplificar en
forma muy eficiente su presencia.
El nivel sérico de una enzima dada se cuantifica determinando la actividad de esa enzima
presente en una muestra de suero y no así su concentración, debido a que:
1) por lo general están presentes en cantidades muy pequeñas en los líquidos biológicos;
2) no se encuentran en estado puro, sino que se encuentran dentro de una mezcla compleja,
que, entre muchas otras moléculas, contiene un gran número de otras proteínas.
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La actividad se expresa generalmente en UI/L o también en UI/ml. (UI= unidad internacional).
Para que una prueba enzimática sea válida, debe diseñarse un protocolo donde la
concentración de enzima sea el único factor limitante, es decir que el resultado refleje la cantidad
de enzima y no se vea afectado por otras sustancias o circunstancias. Debe tenerse en cuenta la
posible interferencia por muestras obtenidas con anticoagulantes (resultados falsamente elevados
o disminuidos), por hemólisis de la muestra (se eleva falsamente la LDH, por ejemplo), por
opalescencia o característica lechosa del suero (produce lecturas variables de absorción de luz).
Para la determinación de la actividad enzimática, en algunos casos se utiliza la información
ya conocida de la reacción catalizada por la enzima, su requerimiento de cofactores y algunas
propiedades de alguno de los sustratos o productos de la reacción. Generalmente se recurre a la
medición de la absorbancia de la luz visible o UV por ser una determinación sencilla, fácil y poco
costosa.
A modo ilustrativo, a continuación, se indica cómo se puede determinar la actividad de la
láctico deshidrogenasa (LDH): esta enzima cataliza la reducción de piruvato a lactato y la simultánea
oxidación de NADH a NAD+
Características clínicas
Se ha observado que:
a- en procesos inflamatorios aparecen en plasma en primer término enzimas de bajo e
intermedio peso molecular (por ejemplo, en las hepatitis, aparecen enzimas de entre 40.000 a
140.000 Da).
b- el nivel de enzimas en el suero que se observa en una lesión es generalmente
proporcional a la magnitud de membrana celular afectada.
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c- en los daños celulares mínimos, primero pasan a la sangre las enzimas citoplasmáticas y
en caso de daño extenso o más intenso, lo hacen las enzimas localizadas en las membranas de las
organelas (por ejemplo, la glutámico deshidrogenasa (GLDH) mitocondrial).
d- hay factores que alteran la permeabilidad selectiva de la membrana celular y que provocan
una salida al espacio extracelular de enzimas intracelulares. Los más conocidos son:
• Baja concentración de oxígeno (hipoxia)
• Agentes químicos (iodoacetato, cianuro, tetracloruro de carbono)
• Agentes físicos (pH, temperatura, osmolaridad)
• Algunos virus.
Para los fines diagnósticos, una elevación de las enzimas celulares en el plasma es
equiparable a una lesión celular. Es importante tener en cuenta que las enzimas cuyos niveles
aumentan en suero raramente derivan de una necrosis celular, sino que lo hacen por un grado
sucesivo de liberación debido a que la biosíntesis enzimática se conserva mientras la célula vive.
En los casos extremos de necrosis, después de un breve lapso, las actividades en el suero
disminuyen por falta de nuevos aportes debido a una biosíntesis proteica considerablemente
disminuida o nula.
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del curso temporal de la lesión que les dio origen, y por otra, que, en las lesiones agudas, como por
ejemplo el infarto de miocardio, las determinaciones enzimáticas deben ser efectuadas según el
tiempo transcurrido luego de la lesión.
a- Eliminación renal: se cumple para aquellas de bajo peso molecular. Ejemplo: amilasa y
algunas fosfatasas.
b- Inactivación sérica: existen inactivadores o inhibidores para varias enzimas: Ejemplo:
tripsina, quimiotripsina.
c- Para algunas enzimas existe recaptación por parte de los tejidos convalecientes, al
restablecerse anatómica y fisiológicamente. Esta pequeñísima parte de las enzimas previamente
liberadas sería utilizada, no para su función primitiva, sino como integrante de un “pool” (reservorio)
de aminoácidos.
(*En estos valores puede haber ciertas diferencias por la técnica o por criterios de normalidad
propios de laboratorios concretos, a veces en el rango de valores y otras veces por las unidades a
las que se hace referencia.)
Como la vida media de las LDH-1 (HHHH) (específica de corazón) es diez veces mayor que
la de la LDH-5 (MMMM) (específica de músculo esquelético), después de un infarto de miocardio
se puede comprobar la preponderancia de la isoenzima cardioespecífica aun cuando la actividad
de LDH total retorne a los valores normales.
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CREATINQUINASA
CREATINA FOSFOCREATINA
% de cada isoenzima
ISOENZIMA Músculo esquelético Miocardio Cerebro
CK3-MM 95 80-85 1-2
CK2-MB 2-3 15-20 1
CKA-BB 1-2 1-2 90
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c)- Mapas enzimáticos: La utilidad de determinar un mapa enzimático reside no tanto en
conocer el valor absoluto de la actividad de enzimas investigadas sino en considerar sus valores en
términos relativos. Así, un cociente GPT/GOT mayor que uno es altamente indicativo de una lesión
hepática; en el caso inverso (cociente menor que uno) es más probable un infarto de miocardio. Es
importante remarcar que las conclusiones obtenidas a partir de la medición de un mapa enzimático
deben corroborarse con los síntomas clínicos del paciente.
b) Patrón colestásico: se debe a una lesión en las vías biliares (como puede ser un cálculo
enclavado, enfermedades autoinmunes, etc.) y se manifiesta con elevación de la fosfatasa alcalina
(FAL), una enzima que se ubica en la membrana canalicular del hepatocito. Sin embargo, un
aumento en la actividad de FAL en plasma no alcanza para determinar si se trata o no de una lesión
de vías biliares ya que esta enzima presenta muchas isoenzimas expresadas en diferentes tejidos.
En el laboratorio de bioquímica clínica es posible diferenciar de cuál isoenzima se trata, sin
embargo, es más sencillo y menos costoso determinar la actividad de otras enzimas que también
se expresen en las vías biliares. Es así que se agrega la medición de las enzimas 5’-nucleotidasa
(ubicada también en la membrana canalicular) y -glutamiltranspeptidasa (-GT) (ubicada en el
reticuloendotelial de los hepatocitos y de las células epiteliales de los conductos biliares). Cuando
el aumento de FAL se acompañe con la elevación de una de estas enzimas, entonces sí podemos
afirmar que es de origen hepatobiliar.
CASOS CLÍNICOS
CASO 1:
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Una mujer de 22 años de edad fue ingresada en el hospital por presentar náuseas, vómitos,
fiebre y dolor abdominal irradiado a la espalda. Expresó que los síntomas se presentaron en forma
repentina y que el dolor referido calmaba en posición reclinada hacia delante. La paciente confesó
que ingería habitualmente grandes cantidades de alcohol y que durante las dos semanas
precedentes había bebido más de lo usual. Se procedió a su internación.
CASO 2:
Un varón de mediana edad, obeso, fue conducido a un servicio de urgencia por un agente
de policía, que refirió que el paciente se había envuelto en un accidente de tránsito. Parecía haber
sufrido un desvanecimiento y había causado un choque de automóviles. El paciente explicó que
justamente antes de producirse el choque respiraba entrecortadamente, tenía sudoración profusa y
se encontraba mareado. La exploración del individuo hizo sospechar de un accidente vascular
cerebral o un infarto de miocardio. El paciente fue ingresado para su observación y se extrajo una
muestra de sangre para la determinación de CK-MB.
Responda:
a- ¿En qué tejidos puede encontrarse CK-MB? ¿Qué otras isoenzimas conoce de la creatinquinasa?
b- ¿Es suficiente el dosaje enzimático para el diagnóstico de infarto agudo de miocardio?
c- Si la actividad de la CK-MB se encontraba aumentada ¿Esperaría encontrar la actividad de otras
enzimas séricas elevadas?
d- ¿Debe esperarse un aumento de actividad sérica plasmática de CK-BB tras un accidente vascular
cerebral? Un aumento de la actividad CK, ¿Podría ayudar a distinguir entre una lesión de origen
cerebral y una de origen cardíaco?
e- ¿Cómo espera que evolucione el cuadro para darle el alta clínica?
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