Esporulados

Multiples capas

Mas externa exoporium

Cubiertas de la espora (capas de proteínas)

Córtex (capa de peptidoglucano)

Núcleo (contiene la pared celular) AC DIPICOLINICO

  endosporas bacterianas son formas de perdurabilidad
termorresistencia: Favorece el aislamiento de las bacterias esporuladas, calentando el material donde se supone que
existen esporas a 100 ºC durante 10 minutos mueren todas las bacterias y, seguidamente, las esporas sobrevivientes se
hacen germinar y crecer en el medio de cultivo adecuado.

Refringencia. Debido al elevado índice de refracción, resultante de las proteínas deshidratadas y concentradas en el
pequeño espacio de la espora.Prácticamente toda la materia seca de la bacteria esta en la espora.

formación de endosporas
Etapa 7: La endospora es liberada por la lisis de
la célula.

Etapa 1:El DNA celular se hace

más denso y ocupa el centro Etapa 6:Maduración de la espora. Su
de la célula. Comienza un citoplasma se vuelve homogéneo y
importante recambio electrodenso. La capa cortical se completa.
intracelular de proteínas.

Etapa 2 :Se forma un tabique

(septo) cerca del polo celular Etapa 5: Aparece el exosporio. Además, la
a causa de la invaginación de membrana exterior se transforma en la capa
la membrana citoplasmática. cortical por la incorporación de proteínas ricas
El DNA es segregado en dos en cisteína (semejante a la keratina). Esta etapa
compartimentos (la espora le confiere a la espora resistencia frente a los
en desarrollo y la célula agentes antimicrobianos.
madre).

Etapa 3:El citoplasma de la espora en

formación queda delimitado por dos
Etapa 4:Comienza a formarse la corteza de
membranas debido al crecimiento de la
la espora por el depósito de un
membrana citoplasmática alrededor del
peptidoglucano esporo-específico entre la
protoplasto. La membrana más interna se
membrana externa e interna. La espora
transformará en la membrana
aparece como un cuerpo refractario,
citoplasmática
comienza a acumularse calcio, y a
de sintetizarse acido dipicolínico.

la La esporulación no es una fase obligada del ciclo de vida de la bacteria, se desencadena cuando faltan nutriente.

espora Germinación

en - Disponibilidad de glucosa, aminoácidos y nucleósidos.

germinación - Shock térmico.

Propiedades de las endosporas

•No presentan actividad metabólica

•Gran resistencia al efecto del calor : - Bajo contenido de agua (aprox. 15%)

- contenido de ácido dipicolínico.

•Gran resistencia al efecto de las radiaciones: - Presencia de puentes disulfuro, cisteína en las proteínas de la cubierta
externa.

•Gran resistencia al efecto de los productos químicos : - Impermeabilidad que presenta la cubierta de la espora.
 Microorganismos esporulados mesófilos
Los que producen alteración : Clostridium y Bacillus

Clostridium Bacillus
Gram Positivo .bacilos Positivo
catalasa Negativo Positivo
Anaerobio Aerobio

Clostridium

 Clostridium perfringens
 Clostridium botulinum
 Clostridium tetani
 Clostridium difficile

Clostridium botulinum

 Bacilos rectos o ligeramente curvados de 2- 10 x 0,2 -2 µm

 Esporas ovales ó redondas, subterminales , que deforman ligeramente el bacilo
 Móviles c/flagelos
 Anaerobios estrictos
 No producen catalasa
 La mayor parte de las cepas fermentan los carbohidratos
 Variables en cuanto a la actividad proteolítica
 Producen SH2 y acetilmetilcarbinol (VP +).
 No reducen NO3 - a NO2
 Las formas vegetativas sensibles al ø (↑ la cepa E). Las esporas son resistentes. Resisten 105 °C, 10 min.
 Condiciones de cultivo Temp. óptima de crecimiento: 25-30 °C, pH 4,6-8, aw > 0,935. Anaerobiosis estricta . Toleran NaCl hasta 10 %

Producción de toxina: altamente deficientes de oxigeno . 4.5 < pH < 8.5 (intestab en alcalinidad)

Las toxinas entran inactivas en el organismo y necesitan la acción de proteasas endógenas

de este para activarse.

Mecanismo de acción: Absorción de las toxinas → pasaje a sangre y linfa → llegan

a terminaciones nerviosas del SN periférico (neuromusculares) → inhiben la liberación de
acetilcolina → aparición de parálisis flácida de la musculatura esquelética

 Ingestión de la toxina preformada en el alimento: Intoxicación

 Ingestión de esporos y formas vegetativas, producción de toxina in situ en el
intestino : Toxiinfección
 Botulismo por heridas

 Botulismo del lactante: producción de la neurotoxina en intestino.Estreñimiento, al cabo de 1-30 días → dificultad en la succión, llanto, cabeza flácida → puede
ocurrir muerte súbita

 Botulismo por heridas: ingreso a la herida,multiplicación y producción de toxina → pasaje a la sangre → localización en las terminaciones nerviosas

 Botulismo alimentario: Incubación 18-96 horas después de haber ingerido el alimento. síntomas Parálisis flácida, simétrica y descendente
1-Parálisis de los musculos de la cara (Ojos- visión-boca) 2-torax-diafragma-estremidades 3-Síntomas gastrointestinales
4-Parálisis respiratoria 5-Parálisis de miembros inferiores.
 Marcha para el cultivo e identificación

Alimentos propensos

 Alimentos con pH igual o superior a 4,5 pueden causar botulismo, ya que en ellos es posible la multiplicación y producción de toxina (este es el caso de carnes,
pescados, legumbres, platos preparados, etc.).
 Los alimentos con pH inferior a 4,5 es más difícil que sean causa de botulismo ya que a este pH C. botulinum es incapaz de multiplicarse y elaborar la toxina.
 Son ejemplo de alimentos peligrosos: jamón curado o ahumado, conservas de pescado o vegetales (sometidas a un tratamiento térmico insuficiente para destruir
las esporas), etc.Las latas de conservas contaminadas con C. botulinum suelen estar abombadas.
Métodos de prevención
 Evitar contacto con el suelo y con el polvo
 Extremar las medidas de higiene
 Evitar la germinación: pH ácido / temperaturas inferiores a 4ºC.
 En alimentos salados, mas de 6 % de sal
 Destrucción de la toxina preformada: Temperaturas superiores a 80ºC, 20 min.
 Procesamiento adecuado de las conservas.
Clostridium difficile
 Anaerobio estricto.
 Ubicuos:
Flora ambiental (hospitales, geriátricos).
Flora normal del tracto intestinal (2-4%).
 Producción de las toxina A y B
 Toxina A (Enterotoxina) Induce producción de citocinas (proteínas reguladoras) → Produce quimiotaxis→ Acumulación liquida. Desarrolla necrosis
hemorrágica.
 Toxina B (Citotoxina) Induce polimerización de actina con pérdida de citoesqueleto celular.

 (cepas no toxigénicas).
 Resistente a antibióticos
 Patógeno oportunista (comensal del intestino humano)
 Origen endógeno (vagina, uretra, heces) /exógeno (agua, suelo).
 Productores de cuadros de gravedad variable:
 Diarreas asociadas a tratamientos antimicrobianos.
 Colitis seudomembranosa (infección del colon)

Clostridium perfringens

 Bacilos Gram +, rectos de 0,8-1,5 µm diámetro x 2- 4 – 9 µm longitud

 Esporas ovales subterminales, que no deforman la célula (determinación a veces difícil)
 Inmóvil
 Puede crecer accidentalmente en presencia de O 2
 Produce entre sus toxinas lecitinasa (fosfolipasa) →toxina alfa (α) (agar yema de
huevo).
 Doble zona de hemolisis (agar sangre).
 Ligeramente proteolítico (proteólisis en agar leche)
 SH2 +, reducen los nitratos, fermentan azucares (sacarolítico).
 Crece entre 12-50 °C y bien a 32-35 y a 43-45 °C, pH próximo a 7,5.
 Colonias planas, algo rizoides y elevadas en el centro.
 Las esporas son termorresistentes: 100 °C, 1 hora

o Tipos de C. perfringens A, B, C, D , E
o Tipos de enfermedad:
- Gangrena gaseosa: En la GG principalmente del tipo A. Hay desgarro de los tejidos de las heridas → absorción de la toxina en sangre (toxemia)

- Intoxicaciones alimentarias: Los tipos C. perfringens de mayor incidencia

en la IA son el tipo A (toxina α) y el tipo C (toxinas α y β).
Síntomas : Aparecen a las 8-12 h después de haber ingerido → dolor abdominal agudo, nauseas, fiebre, diarrea acuosa (sin sangre y sin moco) y raramente vómitos.
Enfermedad de corta duración (~24 h) y baja mortandad

- Enteritis necrosante: Producida por el tipo C → Incubación corta , no mas de 24 horas → lesiones necróticas a nivel entérico →dolor abdominal, diarrea con sangre,
vomitos , etc. Aumenta la permeabilidad de las celulas intestinales.

La intoxicación se presenta con 108 formas vegetativas que alcanzan intestino delgado y esporulan.
La diarrea es producida por enterotoxina (34.000 Da) que se forma durante la esporulación

 TOXINA α (alfa):Es una lecitinasa producida por todos los tipos de Clostridium perfringens.Lisa eritrocitos, plaquetas, leucocitos y células endoteliales. Incrementa
la permeabilidad vascular.Provoca hemólisis masiva, destrucción de tejidos y disfunción miocárdica.
 TOXINA β (beta) :Origina lesiones necróticas a nivel entérico.
 TOXINA ε (epsilon): Esta proteína activada por tripsina aumenta la permeabilidad vascular de la pared gastrointestinal.
 TOXINA γ (gama):Posee actividad necrótica e incrementa la permeabilidad vascular. No tan común

Mecanismo de acción del microorganismo (en general):

Entra la forma vegetativa o la espora. En el ileón (ID) la espora germina.

Forma vegetativa que ingresa
Espora que ingresa y germina
→ dando forma vegetativa.Ambas vuelven a esporular → maduran → lisis del esporangio y liberación de la toxina

Toxina ligada a la envoltura de la espora se libera a la luz intestinal. Se une a receptores específicos de las membranas celulares, ↑ la permeabilidad celular, se invierte
el flujo de electrolitos y agua.

Investigación de las toxinas.

La FDA propone un medio para observar esporulación y para investigar enterotoxinas :
2 tubos con caldo tioglicolato ó caldo carne →24 h a 35 °C → 24 h a temp. ambiente→
a) en un tubo coloración de esporas o microscopia de contraste de fases.
b) en el otro tubo → centrifugar (10000 rpm 10min.)→ test de aglutinación c∕ látex
Bacillus
 Familia Bacillaceae
 Incluye 60 especies
 Gram positivas
 Aerobios y anaerobios facultativos con capacidad de formar endosporas.
 Células bacterianas: 0,5 x 1,2 a 2,5 x 10 mm
 Amplia distribución suelos, agua, polvo ambiental
 Desarrollan bien en agar sangre: colonias extendidas-blanco grisáceas- bordes irregulares. Muchos aislamientos son b hemolíticos(diferenciar con B. anthrancis)
 Esporulado:las esporas son centrales, forma elipsoide, no deforman al esporangio.
 Crecen entre los 10- 48ºC, la temperatura óptima es entre 28- 35ºC.
 pH = 4,9-9,3; aw = 0,93- 0,95.
 Generalmente son móviles con flagelos perítricos.
 Poseen antígenos somáticos y flagelares y de esporas.

Bacillus cereus
Epidemiología: Germen ubicuo (en suelo y alimentos de origen vegetal, animal y
derivados lácteos). Produce cambios en la textura y sabor por la multiplicación del
germen o sus toxinas.

La pasteurización, destruye eficazmente las formas vegetativas pero no las esporas. La

esporas se destruyen por esterilización ó tratamientos térmicos de al menos 120 °C, 20-
30 minutos

Bacillus cereus
 Cuando se agota el medio, al final de la fase exponencial → ocurre la esporulación. Las esporas son moderadamente resistentes al calor. Resisten 100º C durante 5-10
minutos.
 Cuando el microorganismo está en medio rico y amiláceo y a unos 30ºC → ocurre la germinación de las esporas.
 Las reacciones serológicas no se usan en su identificación, ya que dan reacciones cruzadas con otros géneros.
 Los antígenos de las esporas son termo resistentes al igual que las propias esporas
 Forma parte de la flora normal fecal (el aislamiento en heces no indica contaminación alimentaria).

Enfermedad mediada por una toxina y no por una infección

Amplia distribución: suelo-agua-polvo ambiental
En alimentos: verduras-carnes-cereales-leche fresca pasteurizada- leche en polvo-harinas, etc.

Dos toxinas son responsables de la enfermedad clínica

Enzimas y toxinas que produce Bacillus cereus

Sustancias producidas por las células vegetativas a lo largo de la fase exponencial o al final de la misma.
 Lecitinasa (fosfolipasa), se puede detectar porque estos microorganismos dan lugar a una reacción típica de precipitación cuando crecen en medios con yema de huevo.
Es una sustancia que puede estar relacionada con efectos necróticos de células intestinales.
 Hemolisina, produce la lisis de glóbulos rojos.
 Factor letal, produce la muerte de conejos cuando se inyectan por vía endovenosa.
 Factor de permeabilidad vascular, produce alteraciones en vasos sanguíneos ya que altera su permeabilidad.
 Toxina emética, produce vómitos. Toxina termoestable (estable a 126ºC durante 90 minutos). Estable a pH 2 y 11 durante 2 horas, puede sobrevivir en los alimentos.
 Toxina necrótica, relacionada con la lecitina y produce necrosis de las células del epitelio intestinal.
 Factor del asa ileal de conejo, origina diarrea y salida de líquido en experimentación.