UNIVERSIDAD IBEROAMERICANA PUEBLA

ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA

ESCUELA DE BIOTECNOLOGIA
LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PRÁCTICA 3: AMORTIGUADORES Y pH EN LOS SISTEMAS BIOLÓGICOS.

OBJETIVOS:
 Explicar cómo funciona una solución amortiguadora.
 Identificar la importancia de las soluciones amortiguadoras fisiológicos en el
organismo humano.

INTRODUCCIÓN:

Amortiguador de Fosfato
El sistema tampón fosfato consta de un par ácido débil- base conjugada H2PO4- /HPO42-
H2PO-4 ↔ H+ + HPO42-
A pH fisiológico, las especies del fosfato con capacidad de tamponar son H2PO4- y HPO42-
ya que su valor de pK es de 6,8. Así pues, para el tampón fosfato:
pH = 6,8 + log HPO42- / H2PO4
A pH fisiológico de 7,4, la concentración de HPO 42- (un 80%) es 4 veces superior a la de
H2PO4- (un 20%). Así pues, el tampón fosfato es un sistema muy eficaz para amortiguar
ácidos. La concentración de fosfato en la sangre es baja (2 mEq/L) por lo que tiene
escasa capacidad de tamponar si lo comparamos con otros tampones (ej el bicarbonato).
En cambio, a nivel intracelular, las concentraciones de fosfato son elevadas lo que le
convierte en un tampón eficiente. El sistema fosfato es un amortiguador importante en los
líquidos intracelulares, donde su concentración es aproximadamente 75 miliequivalentes
(meq) por litros. La concentración de fosfato en los líquidos extracelulares, como la
sangre, es de alrededor de 4 meq/L. Dado que el pH normal de los líquidos celulares es
aproximadamente
7.2 (con un intervalo de 6.9 a 7.4), en general existe una mezcla equimolar del H2PO-4 y
de HPO42-. Las grandes cantidades de fosfato dentro de las células corporales y en el
hueso hacen que el fosfato sea un depósito grande y eficaz para amortiguar el pH.
Aunque las células contienen otros ácidos débiles, estas sustancias no son importantes
como amortiguadores ya que sus concentraciones son bastante bajas y sus valores de
pKa son mucho menores que el pH intracelular. Por ejemplo, el ácido láctico tiene un pK a
de 3.86.
Amortiguador de Proteínas
Las proteínas son una fuente significativa de capacidad amortiguadora. Formadas por
1

Profesora: Dra. Gabriela Rios.

Licenciatura en Ingeniería química.
Licenciatura en Ingeniería en biotecnología.
Universidad Iberoamericana Puebla Otoño 2021
.
aminoácidos unidos mediante enlaces peptídicos, las proteínas tienen varias clases de

Profesora: Dra. Gabriela Rios.

Licenciatura en Ingeniería química.
Licenciatura en Ingeniería en biotecnología.
Universidad Iberoamericana Puebla Otoño 2021
.
grupos ionizables en las cadenas laterales, que pueden ceder o aceptar protones. Los
aminoácidos y proteínas son electrolitos anfóteros, es decir, pueden tanto ceder protones
(ácidos) como captarlos (bases) y, a un determinado pH (en su pI), tener ambos
comportamientos al mismo tiempo. La carga depende del pH del medio. En un medio
muy básico se cargan negativamente, mientras que en el fuertemente ácido lo hacen
positivamente. Desde el punto de vista fisiológico este tipo de amortiguador resulta de
especial interés a nivel tisular. Debido a que en los seres vivos las proteínas están
presentes en concentraciones significativas, son amortiguadores muy efectivos. Por
ejemplo, la hemoglobina, la molécula transportadora de oxígeno, es la biomolécula más
abundante en los eritrocitos. Dada su estructura y concentración celular elevada, la
hemoglobina desempeña una función esencial en el mantenimiento del pH sanguíneo. La
albúmina sérica y otras proteínas presentes en cantidades elevadas también amortiguan
la sangre.

PRE INFORME
1. Investigar y describir los sistemas amortiguadores en los sistemas biológicos (en
sangre, en riñones y en sistema respiratorio) y mencionar su importancia.
2. Investigar y escribir el concepto de pKa y titulación acido-base.
3. Investigar y describir los siguientes conceptos; solución tampón, solución buffer,
soluciones amortiguadoras.
4. Investigar ¿Por qué las proteínas regulan el pH en los sistemas biológicos?
5. Investigar y escribir los factores para desnaturalizar una proteína, concepto de
desnaturalización, destrucción de proteínas, renaturalización.
6.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

PARTE EXPERIMENTAL

MATERIAL Y EQUIPO SUSTANCI

AS
10 tubos de 25 mL Agua destilada
2 vasos de precipitado de 50 mL Acetato
1 vaso de precipitado de 250 mL Ácido acético 0.1N
1 probeta de 50 mL Ácido acético 0.01N
1 matraz aforado de 50 mL Ácido acético 0.1N
1 Pipeta graduada de 5 mL Ácido acético 1N
1 Pipeta graduada de 1 mL NaOH 1N
1 Pipeta graduada de 10 mL Éter etílico
1 embudo de vidrio mediano Etanol al 70%
Papel filtro Soluciones buffer pH 4 y 7 para calibrar
potenciómetro.
Termómetro Leche entera (1 L)
Potenciómetro
PROCEDIMIENTO:

Parte 1: Capacidad amortiguadora de los tampones fosfatos

1. Ambas buretas, una con el HCl 0.2 M y la otra con NaOH 0.2 M, serán colocadas
en un soporte universal tal y como se muestra en la figura.

2. Preparar en tubos de ensayo las disoluciones según se indican en la tabla siguiente:

TUB pH* CONTENIDO
O
1 7.0 10 ml de agua + 1 gota de Naranja de metilo
2 4.8 5 ml de agua + 5 ml de KH2PO4 0,2 M + 1gota de Naranja de
metilo
3 9.1 5 ml de agua + 5 ml de K2HPO4 0,2 M + 1gota de Naranja de
metilo
4 7.2 5 ml de KH2PO4 0,2 M + 5 ml de K2HPO4 0,2 M + 1gota de
Naranja de metilo
5 7.0 10 ml de agua + 1 gota de Fenolftaleína
6 4.8 5 ml de agua + 5 ml de KH2PO4 0,2 M + 1gota de Fenolftaleína
7 9.1 5 ml de agua + 5 ml de K2HPO4 0,2 M + 1gota de Fenolftaleína
8 7.2 5ml de KH2PO4 0,2 M + 5 ml de K2HPO4 0,2 M + 1gota de
Fenolftaleína
*Los valores de pH que se presentan son aproximados no son valores experimentales
4. Medir el pH de cada disolución y anotarlos.
3. En los tubos 1 al 4 añadir HCl 0.2 M desde la bureta y anote el volumen de este ácido
necesario para que el naranja de metilo cambie a rojo. Medir el pH con cada adición de
ácido y anotar los valores.

4. En los tubos 5 al 8 añadir NaOH 0.2 M desde la bureta y anotar el volumen necesario
para que la fenolftaleína cambie a rojo-rosado. Medir el pH con cada adición de la base
y anotar los valores.

5. Construir las curvas de titulación y determinar los pKa de ambos tampones fosfato

Actividad 2: Capacidad reguladora de las proteínas

1. Añadir 3 ml de leche en un tubo de ensayo y agregar gota a gota HCl 0.1 N,

agitando tras cada adición, hasta lograr la precipitación de la caseína.
2. Medir el pH inmediatamente.
3. Medir el volumen de ácido añadido.
4. Seguir añadiendo ácido y observar los que ocurre.
5. Añadir disolución de NaOH 0.1 N y observar qué evento ocurre.
6. Medir el pH inmediatamente después del evento.
7. Medir el volumen de NaOH añadido.
8. Seguir añadiendo NaOH 0.1 N y observar.

REPORTE

Reportar al profesor:

 Los valores de pH obtenidos para cada tubo en la actividad 1.

 Los volúmenes de ácido y base gastados para cada tubo en la actividad 1.
 Los fenómenos observados en la actividad 2.

 Para la actividad 1
 1.-Explicar el color rojo que se observa en el tubo 7 antes de añadir NaOH.
 2.- ¿Por qué los tubos 2 y 6 tienen un pH ácido?
 3.- ¿Por qué tenemos que añadir distintas cantidades de ácido a los tubos del 1 al 4
para llegar al mismo pH final?
 4.- Teniendo en cuenta las concentraciones de las disoluciones usadas y los
volúmenes de NaOH y HCl gastados según el caso, calcule de forma teórica el pH
que deberían tener al final del experimento los tubos 4 y 8.
 Para la actividad 2
 Explicar con ayuda de la literatura científica los fenómenos observados.

DIAGRAMA DE FLUJO
NOTAS SOBRE LA DISCUSIÓN DE LA PRÁCTICA:

OBSERVACIONES:

CONCLUSIONES