UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú, Decana de América

Facultad de Ciencias Biológicas

Escuela Académico Profesional de Genética y Biotecnología

CITOGENÉTICA GENERAL

INTRODUCCIÓN

El número, la morfología y la organización de los cromosomas son parámetros

importantes para los estudios comparativos citogenéticos y filogenéticos (Mandáková y

Lysak 2008; Peruzzi et al. 2009; Cheng et al. 2013; Kirov et al. 2014; Divashuk et al. 2014;

Bolsheva et al. 2015).; Astuti et al.2017). Las diferencias en la morfología cromosómica entre

especies individuales son el resultado de reordenamientos inter e intracromosómicos que son

las principales fuerzas de evolución y especiación (Rieseberg 2001; De Storme y Mason

2014; Mandáková et al. 2015).

Técnicas citogenéticas moleculares modernas, como la hibridación genómica in situ

(GISH), ayuda a mejorar la constitución del cariotipo y los reordenamientos cromosómicos

(Van Laere et al. 2010; Laskowska et al. 2015). Además, para determinar el orden
cromosómico correcto y los pares homólogos, a menudo se requieren marcadores

cromosómicos adicionales, como patrones de bandas y señales FISH.

En esta práctica utilizaremos DRAWID, es un programa de software para el análisis

de cromosomas y la construcción de idiogramas, que permite la medición de parámetros

cromosómicos como el índice centrómero, la longitud y proporción del brazo, etc. Además,

puede medir simultáneamente las posiciones de los puntos de referencia cromosómicos (por

ejemplo, señales de banda, FISH y GISH), lo que permitirá la construcción de idiograma.

Para ello empleamos como base al artículo “A universal chromosome identification

system for maize and wild Zea species” (URL:

https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.01.22.915942v2.full), en el cual se establece

cariotipos de seis especies y subespecies diferentes de Zea y se descubre una inversión

paracéntrica específica de dos especies de Zea silvestres. Además, se desarrollan dos sondas

FISH basadas en oligo para facilitar la identificación simultánea de los 10 cromosomas del

maíz en las mismas células en metafase. Los oligos se sintetizaron como dos grupos

separados, que contenían 25.059 (sonda roja) y 25.023 (sonda verde) oligos, respectivamente.

En este informe solo se analizará los cromosomas en metafase preparados a partir de maíz

B73 endogámico (2n=20).

PROCEDIMIENTO

Tras haber importado al programa DRAWID la foto con los cromosomas metafásicos

extraída del artículo elegido, se procede a marcar las bandas, los centrómeros y los extremos,

de tal forma que el programa pueda medir la longitud de cada brazo. Posteriormente se

estandariza la escala de la foto.

Figura 1. Proceso de medición de cada cromosoma, los cuales son 20 en total. Se colocó una

marca en el extremo del brazo, una en el centrómero y una por cada banda (roja o verde),

además, se colocaron marcas en otras regiones del cromosoma si era necesario, como en el

caso de los cromosomas curvados.

Figura 2. Foto toma luego de haber marcado todos los cromosomas. La escala es de 10 µm

Posteriormente se escogió la opción para obtener el ideograma mostrado en la figura 3. En

este punto se puede escoger la opción “Show Chromosome table” en la opción Data para

obtener una tabla con la medida de los cromosomas.

Figura 3. Foto del ideograma obtenido en el programa DRAWID. Los cromosomas están

ordenados según su longitud. Se observan las bandas rojas y verdes correspondientes a los

puntos marcados con FISH de la foto del artículo, y un NOR en los cromosomas 16 y 17. Se

llega a observar hasta el cromosoma 24, sin embargo, esto se debe a que el programa

enumera cromosomas eliminados durante el proceso de medición, por eso no se encuentran

cromosomas enumerados como 3, 6, 10 y 11.

Figura 4. Foto tomada tras la obtención de la tabla de datos de los cromosomas metafásicos

evaluados.

Finalmente, se elige la opción “Build ideogram”, y se coloca 2 cuando pidan el nivel de

ploidía, ya que la muestra analizada es diploide (figura 5). En este caso se obtendría un

ideograma como el mostrado en la figura 6A. También se puede desarrollar de manera

manual si se agrupan los cromosomas homólogos y se vuelve a marcar los cromosomas de la

foto del artículo considerando solo un cromosoma de cada par homólogo. El ideograma

obtenido manualmente se muestra en la figura 6B.

Figura 5. Foto tomada cuando se colocó el parámetro para que DRAWID pueda realizar el

ideograma.

Figura 6. (A) Ideograma obtenido con la opción “Build ideogram” del programa DRAWID.

(B) Ideograma obtenido de forma manual tras haber emparejado a cada cromosoma, se

observan las bandas marcadas con FISH y el NOR.

TABLA DE MEDICIÓN DE CROMOSOMAS

Se muestra la tabla que resume los parámetros obtenidos en el programa Drawid, después de

haber realizado las mediciones de cromosomas.

Tabla 1. Parámetros de la medición de cromosomas

Cromo Chromos Relative Arm Pares Chromoso Arm Tipo

soma ome Length/lo ratio/prop de me ratio/Pro (T)
length/lo ngitud orción de cromos length/Pr medio
ngitud relative brazos omas omedio proporci
del (LR) (IPB) (P) longitud ón de
cromoso del brazos
ma( C) cromosom (P.IPB)
a(PC)

1 4.89 0.04623 0.63

2 3.96 0.03746 0.64 5;12 6.9 0.92 M

3 4.7 0.0445 0.35

4 6.02 0.057 0.81 10;20 6.425 0.67 M

5 7.32 0.06927 0.98

6 3.48 0.03297 0.86 4;13 6.07 0.86 M

7 4.87 0.0461 0.7

8 5.71 0.05403 0.8 18;19 5.815 0.85 M

9 4.2 0.03973 0.63 8;11 5.455 0.71 M

 10 6.46 0.06115 0.75

11 5.2 0.04923 0.62

M-
12 6.48 0.06123 0.86 16;17 5.045 0.60 SM

13 6.12 0.0579 0.91

14 4.23 0.04005 0.57 1;7 4.88 0.67 M

15 4.21 0.0398 0.52

16 5.13 0.04856 0.77 3;14 4.465 0.46 SM

17 4.96 0.04691 0.42

M-
18 5.92 0.05603 0.93 9;15 4.205 0.58 SM

19 5.71 0.05406 0.76

20 6.37 0.06028 0.59 2;6 3.72 0.75 M

C: Longitud del cromosoma; L.R: Longitud relativa; IPB: proporción de brazos; P:

Pares de cromosomas; PC: Promedio de longitud de cromosomas; PIPB: Promedio de
proporción de brazos; T: Tipo de cromosoma.

CARIOGRAMA
 Figura 7. Se observa el recorte de los cromosomas en el programa Paint

Figura 8. Se observa uno de los cromosomas recortados al que se les está corrigiendo los

bordes en el programa Paint.

Figura 9. Se observa el cariograma de cromosomas en metafase preparados a partir de maíz

B73 endogámico (2n=20).

IDIOGRAMA

Figura 10. Se observa el idiograma de cromosomas en metafase preparados a partir de maíz

B73 endogámico (2n=20), elaborado con el programa Drawid.

REFERENCIAS
Braz, G. T., do Vale Martins, L., Zhang, T., Albert, P. S., Birchler, J. A., & Jiang, J. (2020).

A universal chromosome identification system for maize and wild Zea species.

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