LUNA VARGAS TIARET

MICROSCOPIO

Los aumentos de estos objetivos suelen estar en un

FUNCIONAMIENTO rango de entre 4x y 100x. En el caso de los oculares
el aumento suele estar entre 5x y 20x. El aumento
En el caso de un microscopio óptico se genera la
alcanzable por el microscopio compuesto varía entre
imagen aumentada a partir de distintas lentes.
20x y 2000x. Sin embargo, debido a la naturaleza de
Algunas de ellas localizadas en el objetivo del
la luz el máximo aumento alcanzable por un
microscopio y otras en el ocular. En primer lugar las
microscopio óptico está limitado alrededor de 1500x.
lentes del objetivo generan una imagen real
aumentada de la muestra. Esta imagen real es a
continuación ampliada mediante las lentes del ocular
FENÓMENO FÍSICO
dando lugar a una imagen virtual de tamaño superior Las propiedades de los lentes en la microscopía se
a la original. El otro elemento esencial para el deben a los fenómenos de refracción que
funcionamiento del microscopio óptico es la luz. Es experimentan los rayos luminosos que las atraviesan;
por esto que los microscopios ópticos vienen este fenómeno se manifiesta mediante una
equipados con un foco de luz y un condensador para desviación en la dirección de la luz. La refracción de
focalizar un haz de luz hacia la muestra. Una vez la la luz visible en las lentes es de mucha importancia,
luz ha atravesado la muestra, las lentes son las pues les permite concentrar un haz de rayos
encargadas de desviar esta luz de forma correcta
luminosos en un punto específico. Si el rayo incide de
para generar la imagen aumentada.
manera oblicua sobre la superficie de la lámina de
vidrio, es desviado de su dirección rectilínea pues
En el caso de un microscopio compuesto la lente
pasa de un medio menos denso (aire) a otro medio
situada cerca de la muestra se denomina objetivo, el
de mayor densidad (vidrio) y es desviado
ocular es la lente a través de la cual observamos la
nuevamente al salir del vidrio hacia el aire.
muestra con el ojo. La luz proveniente de la muestra
atraviesa el objetivo formando una imagen
aumentada como resultado. Esta imagen se
denomina imagen real. Al mirar a través de la lente
ocular se ve una imagen aumentada de la imagen
real que se conoce como imagen virtual.
 COMPONENTES DEL MICROSCOPIO FOTÓNICO
Compuestos mecánicos: Son aquellos que
sirven de sostén, movimiento y sujeción de los
sistemas ópticos y de iluminación así como de los
objetos que se van a observar.
1. Base o pie: Es un soporte metálico, amplio y
sólido en donde se apoyan y sostienen los otros
componentes del microscopio.
2. Brazo, estativo o columna: Permite la sujeción
y traslado del microscopio. Soporta al tubo óptico,
a la platina y el revolver.
3. Platina: Superficie plana de posición horizontal
que posee una perforación circular central. En ella
se apoya la preparación (lámina portaobjetos que
contiene a la muestra que se va a examinar)
4. Tubo óptico: Consiste en un cilindro metálico
que en un extremo, está conectado al revolver o
portaobjetivos y en el otro se relaciona con el (los)
ocular(es).
5. Revolver o portaobjetivos: Es un componente
que gira alrededor de un eje con la finalidad que
los objetivos que sostiene coincidan de manera
perpendicular con la perforación central de la
platina.
6. Tornillos macrométrico y micrométrico:
Generalmente están situados en la parte inferior
del brazo o columna. Ambos tornillos permiten el
desplazamiento de la platina hacia arriba y hacia
abajo con la finalidad de acercar o alejar la
preparación hacia los objetivos y así conseguir un
enfoque de la imagen. El macrométrico produce
desplazamientos evidentes y rápidos de la platina,
en cambio el tornillo micrométrico produce
movimientos imperceptibles de la platina y sirve
para efectuar el enfoque fino y definitivo de la
imagen.
7. Engranajes y cremallera: Constituyen
mecanismos de desplazamientos de las diferentes
partes del microscopio.
Componentes ópticos: Son los objetivos, los
oculares, el condensador y los prismas. Los tres
primeros están constituidos por sistemas de lentes
positivos y negativos.
1. Objetivos: Los objetivos se fabrican para
ampliar las imágenes de los objetos observados
en diversos aumentos; así hay objetivos con
aumentos de 3.5 x, 4x, 10x, 25x, 40x, 65x y 100x.
Los objetivos también se clasifican de acuerdo al
medio que existe entre el objeto examinado y la
lente frontal del objetivo. De acuerdo a esta
característica son secos o de inmersión. Son
objetivos secos aquellos que entre el objeto
observado y el objetivo solamente existe el aire;
en cambio se denominan objetivos de inmersión
aquellos que requieren que entre la preparación y
la lente frontal del objetivo se coloque una
sustancia líquida, ésta puede ser agua, glicerina o
un “aceite de inmersión”, natural como el “aceite
de cedro” o aceites artificiales. El aceite de
inmersión es un líquido viscoso y transparente
que tiene un alto índice refractivo. Por este
motivo es muy utilizado en las observaciones
microscópicas, ya que brinda la propiedad de
concentrar la luz cuando esta pasa a través del
objetivo de 100X del microscopio, aumentando su
poder de resolución. La función principal del
aceite de inmersión es brindar imágenes más
claras, nítidas y definidas, permitiendo la
observación de detalles que con otros objetivos
no sería posible.
2. Condensador: Es el componente óptico que
tiene como función principal concentrar y regular
los rayos luminosos que provienen de la fuente
luminosa
 3. Ocular: Es otro componente óptico del
microscopio, debe su nombre porque la imagen final
se observa a través de él acercando el ojo a la lente
“ocular”. Es el encargado de formar una segunda
imagen a partir de la imagen primaria que forma el
objetivo.
4. Prismas: En los microscopios modernos
monoculares o binoculares, se requiere el empleo de
prismas, estructuras transparentes que sirven para
desviar los rayos luminosos de la trayectoria rectilínea
del eje óptico del objetivo y dirigirlos hacia el tubo

Las fotomicrografías muestran imágenes de células

óptico ligeramente inclinado y luego hacia el ocular.
Componentes de iluminación: Se consideran
dentro de este grupo a los instrumentos que
proporcionan energía luminosa al microscopio. Estas
son de dos tipos, natural y artificial.
descamadas del epitelio bucal. a) imagen obtenida de células
sin teñir, b) imagen obtenida con células teñidas con azul de
toluidina, 400x.
Microscopio de campo oscuro: Se
denomina así por que la imagen que se
forma está constituida por una serie de
estructuras brillantes sobre un fondo
oscuro. Esta técnica permite ver muestras
que de otro modo no serían visibles debido
a su transparencia y no requiere teñir la
muestra para aumentar su contraste y
poder observarla. Esta técnica consiste en
iluminar la muestra oblicuamente.

TIPOS DE MICROSCOPIOS
Microscopio de campo claro: Este microscopio

Muestra observada en un microscopio de campo oscuro

se caracteriza porque emplea luz natural o luz
artificial como energía luminosa para formar las
imágenes del objeto que se observa. La imagen
muestra puntos o áreas iluminadas sobre un
fondo claro o transparente. Para que la imagen
sea visible con nitidez es necesario que el objeto
examinado este coloreado o teñido
Microscopio de polarización: Este microscopio
es un tipo de microscopio óptico al que se la han
añadido dos polarizadores. Esto significa que la
onda de luz utilizada para observar la muestra
tiene una dirección de oscilación concreta. Este
tipo de microscopio es muy útil para observar
estructuras cristalinas de rocas y minerales.

Imagen de células, fotografiadas mediante el

microscopio de contraste de fases.

Microscopio de contraste diferencial de

fases: Este tipo de microscopio fue
diseñado y construido basándose en los
principios ópticos semejantes al
microscopio de contraste de fases, porque
la imagen se genera utilizando las
diferencias de fase de los rayos luminosos
que atraviesan el objeto observado. La
diferencia con el microscopio de contraste
de fases esta en el sistema óptico, el cual
tiene un filtro especial (de luz polarizada)

Diagrama que muestra el recorrido de los rayos

luminosos en el microscopio de polarización

Imagenes obtenidas mediante el microscopio de contraste

diferencial de fases.

Microscopio de contraste de fase: Es el

Microscopio de fluorescencia: Como su
microscopio fotónico más utilizado para observar
nombre indica, los microscopios de luz
objetos o estructuras transparentes sin teñir. El
ultravioleta no iluminan la muestra con luz
principio óptico de este microscopio consiste en la
visible, sino que lo hacen con luz
capacidad que tiene para transformar, en los
ultravioleta. Al ser su longitud de onda más
objetos transparentes, los pequeños índices de
corta, puede conseguirse una resolución
refracción que cada uno de sus componentes
mayor. Además, es capaz de detectar un
posee en diferencias de intensidad luminosa, así
mayor número de contrastes, por lo que es
obteniendo imágenes donde las estructuras del
útil cuando las muestras son demasiado
objeto aparecen contrastadas en tonos oscuros o
transparentes y no podrían visualizarse con
tonos brillantes y tonos intermedios.
un microscopio óptico tradicional.
Existen dos tipos de fluorescencia:
natural o autofluorescencia se produce cuando
determinadas estructuras o sustancias animales o
vegetales, al ser excitadas con radiación
ultravioleta irradian fluorescencia.
fluorescencia artificial. Es aquella que irradian, de
manera específica, determinadas estructuras
celulares cuando son “coloreadas” por
fluorocromos” y observadas a través del
microscopio de fluorescencia.

Microscopio estereoscópico

Microscopio electrónico de
transmisión: Fue diseñado y construido
basándose en los mismos principios de un
microscopio fotónico; pero existe la
diferencia de que en vez de usar energía
luminosa emplea haces de electrones y
reemplaza las lentes ópticas (de vidrio) por
“lentes” construidas mediante campos
electromagnéticos.

Diagrama que representa los principales componentes del

microscopio de fluorescencia

Microscopio estereoscópico: Los microscopios

estereoscópicos son una variación de los ópticos
tradicionales que permiten una visualización
tridimensional de la muestra. Están equipados
con dos oculares, la imagen que llega a cada uno
de los oculares es ligeramente distinta entre ellos,
pero al combinarse se consigue ese efecto
Diagrama que representa los componentes
tridimensional deseado. principales de un microscopio electrónico
Microscopio electrónico de barrido El microscopio electrónico de barrido también se basa en la
colisión de electrones sobre la muestra para lograr la visualización, pero en este caso las partículas
no impactan sobre toda la muestra simultáneamente, sino que lo hacen recorriendo distintos puntos.
Como si se tratara de un escaneado. Midiendo estos cambios se puede obtener toda la información
necesaria para, como si de un mapa se tratara, hacer una reconstrucción ampliada de la muestra.

Imagen que forma el microscopio de “scanning” o

de barrido.

Microscopio de tunelaje: Permite visualizar la estructura atómica de las partículas. Utilizando

principios de la mecánica cuántica, estos microscopios capturan los electrones y se logra una imagen
de alta resolución en la que cada átomo se puede distinguir del otro.

Microscopio de fuerza atómica: El microscopio de fuerza atómica no detecta ni luz ni electrones, ya

que su funcionamiento se basa en hacer un escaneado de la superficie de la muestra para detectar
las fuerzas que se establecen entre los átomos de la sonda del microscopio y los átomos de la
superficie. Detecta fuerzas de atracción y de repulsión muy leves y esto permite hacer un mapeado
de la superficie obteniendo así imágenes tridimensionales.
 ILUMINACIÓN K¨
ÖHLER
La iluminación Köhler fue la primera descrita por
August Köhler en 1893, y aun es la aceptada
como el método de iluminación en los
microscopios modernos. La iluminación Köhler
elimina la iluminación dispareja en el campo de
observación para que todas las partes de la
fuente de luz contribuyan a la iluminación del
espécimen.
Existen dos tipos de iluminación Köhler, un
método en el cual la luz es transmitida a través
del espécimen (transmitida) y otro método cuando
la luz es reflejada desde el espécimen (incidente).
La iluminación Köhler transmitida es usada para
especimenes transparentes o semitransparentes,
mientras que la iluminación Köhler incidente es
útil para objetivos como el metal, los cuales no
transmiten luz.
papel para limpieza de lentes. No las limpie
Fotografía tomada con iluminación Köhler.
Fuentes:
Organización Mundial de la Salud. Bases del
diagnóstico microscópico del paludismo. Parte I.
Guía del alumno. Ginebra; 2014.
Montalvo Arenas, C. E. (2010, agosto).
Microscopía. Microscopía- Departamento de
Biología Celular y Tisular.
http://bct.facmed.unam.mx/wp-
content/uploads/2018/08/2_microscopia.pdf
USO DEL MICROSCOPIO
Familiarícese con los componentes del
microscopio y su funcionamiento para utilizarlo de
forma eficiente.
Encienda la fuente de iluminación y gire o deslice
el regulador de la intensidad luminosa situado en
la base del microscopio hasta dar con el punto
óptimo para un correcto nivel de brillo.
Rote el revólver para seleccionar el objetivo de
menor aumento. Retire el ocular, mire por el tubo
y ajuste el espejo y el diafragma de modo que la
luz se refleje hacia arriba por el tubo y en el
campo de visión se observe un círculo de luz
uniformemente iluminado.
Observe la muestra con el objetivo de 10x, luego
con el de 40x y por último con el objetivo de
inmersión de 100x.
MANTENIMIENTO
Inspeccione el microscopio para verificar que no
presenta daños ni fallos de funcionamiento.
Anote todos los daños o fallos de funcionamiento
en la hoja de mantenimiento diario del
microscopio. Limpie los componentes con un
paño limpio.
Limpie los objetivos después de cada jornada de
trabajo.
Asegúrese de eliminar todos los restos de aceite
de inmersión.
Limpie las lentes de los objetivos únicamente con
nunca con alcohol, pañuelos de papel normal,
papel de limpieza doméstica, papel higiénico,
algodón o toallas de mano porque rayaría la
superficie.
Cuando el microscopio no esté en uso, cúbralo
con una funda para protegerlo del polvo.
Al final del día, apague el microscopio y
desenchúfelo para protegerlo de posibles subidas
de tensión.