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Uso Basico Del Microscopio

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Introducción a la Biología Facultad de Cs.

Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata

MICROSCOPIO COMPUESTO
NORMAS BÁSICAS PARA EL CUIDADO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO Al ser el microscopio un aparato de precisión y de precio elevado, es muy conveniente asegurarle un buen rendimiento y una larga duración mediante toda una serie de normas y cuidados: • • NO ENCHUFAR EL MICROSCOPIO A LA LÍNEA TRIFÁSICA. Para transportar el microscopio se recomienda utilizar siempre las dos manos, sujetándolo por el brazo con una mano y sosteniéndolo del pie con la palma de la otra mano. Se debe desplazar en posición vertical para evitar la caída del ocular y/o del espejo o fuente de luz. En la mayoría de los microscopios el brazo debe quedar hacia el observador. Debe apoyarse correctamente el aparato hacia el centro de la mesada. Seleccionar al inicio de la observación, el objetivo de menor aumento. Cambiar en forma gradual los objetivos. Finalizada la observación, volver a ubicar el objetivo de menor aumento. Al efectuar el primer enfoque, el objetivo debe estar bien cerca de la preparación sin llegar a tocarla. Se coloca en esta posición mirando lateralmente el microscopio. El desplazamiento del tubo óptico para enfocar, se efectuará de abajo hacia arriba. Se evitará siempre tocar la preparación con la lente frontal de los objetivos. En algunos microscopios el desplazamiento del condensador tiene un tope, mientras que en otros no, por lo que al ascenderlo hay que cuidar de no tocar el portaobjetos. Cuando se utiliza un microscopio monocular es recomendable mantener los dos ojos abiertos para evitar el cansancio visual. Mover siempre suave y lentamente cualquier pieza del microscopio Utilice papel de seda fino especial o gamuza para lentes. Evite tocar las lentes con los dedos. La parte inferior del portaobjetos debe estar siempre seca al situarlo sobre la platina.

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Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata • Después de utilizar el microscopio debe guardarse aislado del polvo y la humedad con una funda de plástico o en su caja correspondiente. Un rayo que pasa por el centro de curvatura de la lente no es desviado apreciablemente (si la lente es delgada). como el punto Q de la siguiente figura . que divergen desde un punto determinado del objeto que no esta sobre el eje. con la puerta cerrada. de unos cuantos rayos.Introducción a la Biología Facultad de Cs. puede hallarse por un método gráfico sencillo. La posición y tamaño de la imagen de un objeto formada por una lente delgada. Q P P F F’ Q’ La mayor parte de los sistemas ópticos comprenden más de una superficie reflectante o refractante. después de atravesar la lente. La imagen formada por la primer superficie sirve de objeto a la segunda y así sucesivamente. CARACTERÍSTICAS Y FUNCIONAMIENTO DEL MICROSCOPIO ¿CÓMO SE FORMA LA IMAGEN? Algunos principios físicos. Un rayo que pasa (o se dirige hacia) el primer foco emerge paralelo al eje. después de la refracción por la lente. pasa por el segundo foco de una lente convergente. 59 . Este método consiste en determinar el punto de intersección. Un rayo paralelo al eje. (llamados rayos principales)...

R es el radio de curvatura de la lente) Foco 2 objeto Foco 1 imagen Imagen de un objeto situado a una distancia menor al foco.. El objetivo del microscopio actúa como una cámara fotográfica.Introducción a la Biología Facultad de Cs. Foco 2 Imagen Objeto Ahora volvemos a lo que nos interesa. 60 . Cuando un objeto se sitúa más allá del foco de su lente. se produce una imagen ampliada.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Imagen de un objeto situado a una distancia mayor al foco. real e invertida.. (f = R / 2.

La distancia al preparado utilizando estos objetivos es muy pequeña y suelen tener un muelle protector para evitar roturas. 10. Existen distintos tipos de objetivos. 40 y 45 X. y por el aparato de iluminación. los mayores aumentos que pueden conseguirse con el microscopio óptico son de 1000-1500 x. el aire se interpone entre su lente y el preparado. Está compuesta por dos lentes: la inferior o colectora. construyendo una nueva imagen mucho más ampliada. ¿Cuál es la otra propiedad importante para lograr una buena imagen? En el microscopio distinguimos un sistema óptico destinado a la iluminación y obtención de una imagen muy aumentada del objeto examinado. o lente ocular. En consecuencia. ♦ El ocular recibe la imagen dada por el objetivo. ¿por qué existe una limitación en la amplificación que puede brindar un sistema de lentes? El principal problema radica en que la capacidad de aumentar una imagen no es la única propiedad a tener en cuenta para una buena observación. y otra (ocular) que actúa como una lupa que observa la imagen formada por la primera. que la imagen aumentada. El medio utilizado es un aceite de inmersión. que se diferencian por las características de su composición. pero invertida con relación al objeto examinado.5).Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata El ocular actúa como una lupa que observa la imagen que ha formado el objetivo. la imagen del microscopio compuesto resulta de la combinación de las provocadas por una lente (objetivo) que actúa como una cámara fotográfica. • Objetivos a inmersión: Se distinguen de los anteriores porque entre la lente y el preparado se debe interponer un medio transparente con un índice de refracción (n) superior al del aire (n=1). y un sistema mecánico (o montura).5 milímetros. producida por el objetivo. y la superior. Así.Introducción a la Biología Facultad de Cs. Esto significa que una estructura que mide un micrón puede observarse como si tuvieran 1 o 1. que facilita y mejora la observación microscópica. cuya finalidad es la de sustentar convenientemente los elementos ópticos y los preparados que se examinan. La parte óptica fundamental del microscopio está formada por dos sistemas centrados de lentes de aumento o convergentes: el objetivo y el ocular. la imagen definitiva (que es invertida respecto de la original) resulta el producto entre el aumento del objetivo por el aumento del ocular. virtual y derecha con relación a aquella. ♦ El objetivo está compuesto por un sistema centrado de lentes convergentes. como por ejemplo el aceite de cedro. En las figuras anteriores pudimos observar. Por lo tanto. es tomada por el ocular (como si fuera un objeto) y es magnificada nuevamente. Los objetivos más comúnmente utilizados son de 4. Sin embargo. 61 . de manera muy simplificada. y semejante al del vidrio (n=1. 2. que permite aprovechar un mayor número de rayos refractados por el preparado para la formación de la imagen. o por la manera de utilizarse: • Objetivos a seco: En éstos.

sirve para graduar la cantidad de rayos luminosos que llegan al objeto.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata ♦ El aparato de iluminación. profundidad de planos que están en foco en un momento dado. Los microscopios con luz incorporada generalmente no poseen espejo. ALGUNOS CONCEPTOS IMPORTANTES EN MICROSCOPÍA Aumento: Es la proporción entre el tamaño de la imagen observada al microscopio y el tamaño real del objeto. Distancia frontal: Es la distancia ente el objeto observado y la lente del objetivo cuando el preparado se encuentra enfocado correctamente. Con aumentos medianos o grandes. El aumento total puede calcularse como el producto del aumento del ocular por el del objetivo. • Diafragma: dispuesto debajo del condensador. la profundidad de campo es muy escasa (menor que 1 µm). La profundidad de foco guarda relación inversa con el aumento: es tanto menor cuanto mayor es el aumento de la lente. Profundidad de campo o de foco o poder de penetración: Es el espesor del preparado que se observa con nitidez. que a medida que se utilizan objetivos de mayor aumento disminuye la distancia frontal y por lo tanto aumenta el riesgo de romper el preparado. • Condensador :está constituido por un sistema de lentes convergentes que proyecta sobre el preparado en forma de un amplio cono el haz de luz que lo atraviesa. Es inversamente proporcional al aumento. absorbiendo las restantes. Concentra los rayos luminosos procedentes de la fuente de luz sobre la preparación. mientras que por encima y por debajo de esta zona la imagen se desvanece. posee una cara plana y otra cóncava destinadas a proyectar el haz de rayos que iluminará el objeto. situado debajo de la platina.Introducción a la Biología Facultad de Cs. es decir. 62 . podemos observar sólo pequeños espesores con nitidez. dirigiéndolos hacia arriba del eje óptico. Con inmersión en aceite. • Filtros de luz: son placas de vidrio coloreadas que dejan pasar las radiaciones de longitud de onda más convenientes para la más adecuada observación (κ=400-500 nm). está formado por: • Espejo: cuando existe. al mover el tornillo micrométrico. es decir.

es por esto que forma parte de las inscripciones grabadas en los objetivos. en vez de verlos como uno solo. más finos serán los detalles de la preparación que puedan distinguirse. En los microscopios ópticos. menor es la distancia que separa dos puntos entre sí sin que estos se confundan. el filtro. 4. 7. debido a que determina el tamaño del haz de luz que es captado por el objetivo luego de haber pasado a través del objeto.2 µm. Se expresa como la distancia mínima que permite dar una imagen bien definida de dos puntos. Cuanto mayor es el poder de resolución (PR). Si cambiamos de un objetivo a otro de mayor aumento. ¿De qué partes del microscopio depende la correcta iluminación de la preparación ? ¿A qué partes del microscopio debe dirigirse la luz de la lámpara? ¿Por qué? ¿Qué se puede colocar en el portafiltros y qué utilidad tiene? ¿Cómo varía la iluminación al abrir o cerrar el diafragma? ¿Qué función tienen el espejo. El tamaño del campo observado es inversamente proporcional al aumento total del microscopio. Observando los distintos elementos del microscopio ubique los que corresponden a la parte óptica. En consecuencia. Límite de resolución: Es la distancia mínima que debe existir ente dos puntos del objeto para que puedan visualizarse separados. cuanto mayor sea el poder resolutivo del objetivo. Se representa por el diámetro de la parte de la preparación que se está observando (área del campo).Introducción a la Biología Facultad de Cs. 6. el límite de resolución no es. inferior a 0. en general. 5.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Campo observado: Es la porción del preparado incluida en la imagen. y por esta razón las lentes de pequeño aumento son útiles para rastrear la preparación. 3. Poder de resolución: Es la capacidad de las lentes de distinguir o resolver (mostrar separados) con nitidez dos puntos situados muy próximos entre sí. Reconozca los objetivos secos y de inmersión. 8. el diafragma y el condensador en la iluminación? 63 . Es una característica propia de cada objetivo. observaremos una imagen más aumentada pero que incluirá sólo una parte de lo que observábamos con el objetivo menor. Apertura numérica: Es una medida de la capacidad del microscopio de agrupar las refracciones de la luz producidas por los finos detalles del objeto.

que se han efectuado para observar un preparado correctamente. del objetivo y total) pueden hacerse con el microscopio del que se dispone? ¿Por qué es conveniente centrar en el campo de observación el objeto que nos interesa ver de la preparación si queremos observarlo a gran aumento? Analice las 4 imágenes que aparecen a continuación. Escriba e interprete las inscripciones que llevan cada grupo de lentes. En función a lo observado. ¿CÓMO SE PREPARA EL MATERIAL PARA SU OBSERVACIÓN BAJO EL MICROSCOPIO? Existen diversas técnicas de preparación del material para su observación bajo el instrumental óptico. Esta preparación se conoce como MONTAJE HÚMEDO. 13. 11. 12. Preste especial atención al objetivo de INMERSION. éstos deben ser sumamente delgados como para permitir el 64 . cuidando que el objetivo no toque el preparado. Fundamentalmente. Observe a menor aumento.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Tome un portaobjetos limpio y seco por sus bordes. 14. Coloque el portaobjetos sobre la platina. Cubra el preparado con un cubreobjetos. desde el principio hasta el final. ¿Cuál le parece el instrumento más eficiente? Fundamente su respuesta. podrá responder a las siguientes preguntas: 9. ¿Cuáles son las características que tiene la imagen final del microscopio compuesto? Al desplazar el portaobjetos. Ellas responden a un mismo objeto visualizado mediante cuatro instrumentos diferentes. preferentemente enjuagados con alcohol fino y secos. ¿en qué sentido se mueve la imagen? ¿Qué combinaciones de aumentos (del ocular.Introducción a la Biología Facultad de Cs. se requiere que los portas y cubreobjetos se encuentren perfectamente limpios. Indique las características de las distintas imágenes. 10. Corte una pequeña letra de diario y ubíquela encima de la gota de agua. La preparación del material se debe realizar sobre una superficie limpia y plana. ordenada y brevemente todos los pasos. Observación de una preparación: resuma global. NO INTENTE OBSERVAR MATERIAL SIN TOMAR LOS RECAUDOS NECESARIOS. Mueva lentamente el tornillo micrométrico y observe las modificaciones en la imagen. Dibuje lo observado y coloque referencias. En caso de realizar cortes. Coloque una gota de agua en el centro del portaobjetos. ESTE OBJETIVO REQUIERE DE ACEITE DE INMERSION PARA SU UTILIZACION.

Se apoya el portaobjetos sobre una superficie dura y completamente plana. se lo somete a coloración durante el tiempo necesario. Se debe operar con precaución pero con firmeza para evitar la rotura del material. • FROTIS : consiste en esparcir el material generalmente líquido o semilíquido de modo que quede distribuido uniformemente en una delgada capa.Introducción a la Biología Facultad de Cs. Además del montaje húmedo existen dos técnicas especiales para realizar el montaje del material: SQUASH o aplastado y FROTIS o extendido. Se procede del siguiente modo: • • Se coloca una gota de material sobre un extremo del portaobjetos limpio y seco Se apoya sobre la gota un borde del otro portaobjetos formando un ángulo agudo. . SQUASH : consiste en la disgregación de la muestra mediante el aplastamiento del material entre el porta y cubreobjetos.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata paso de la luz a través del material. • 65 . Para realizarlo se siguen los siguientes pasos: • • • • Se disgrega el material con la ayuda de pinzas y alfileres o agujas. Para ello se utiliza otro portaobjetos de borde muy parejo que se desliza sobre el primero desde un extremo al opuesto. rápido y uniforme. Si se requiere. Cuando la gota se extienda por capilaridad a todo el ancho del portaobjetos. Se cubre el material con un cubreobjetos. se desliza hacia el otro extremo con un movimiento suave. Se coloca sobre el cubreobjetos un papel secante o un papel de filtro doblado y se aplasta con el dedo pulgar sin deslizar ni rotar el cubreobjetos.

mitocondrias.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Realice un frotis y un squash con el material brindado en el trabajo práctico. vacuolas. flagelos. Estas estructuras se identifican con claridad utilizando alguna técnica accesoria con preparación de la muestra. cilias. cloroplastos. pared celular. centriolos. nucleólos. NO PUEDEN OBSERVARSE CON EL MICROSCOPIO ÓPTICO: • • • • • Las bacterias más pequeñas La estructura interna de las células procariontes La estructura de las organelas eucariontes La membrana plasmática Los conjuntos membranosos como los retículos endoplásmicos y el aparato de Golgi. ¿Cuáles son las ventajas y qué limitaciones presenta el microscopio óptico en la observación de estructuras biológicas? CON EL MICROSCOPIO ÓPTICO SE PUEDEN OBSERVAR: • • • La forma general de la mayoría de las células procariontes La forma general de las células eucariontes Algunas organelas eucariontes: núcleo.Introducción a la Biología Facultad de Cs. cromosomas. aunque su ubicación en la célula puede ser revelada mediante ciertas técnicas • Los ribosomas 66 .

ya que en éstos la imagen formada en un único objetivo es desdoblada en dos imágenes idénticas por un prisma situado entre el objetivo y los dos oculares. al no coincidir sus ejes ópticos.Introducción a la Biología Facultad de Cs. Puede apreciarse que la lupa posee un par de oculares. No debe confundirse este aparato óptico con los microscopios binoculares. cada uno con su objetivo y ocular en los que.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata ESTEREOMICROSCOPIO O LUPA BINOCULAR El estereomicroscopio consta realmente de dos microscopios completos. las imágenes formadas en los oculares son distintas (lo mismo que ocurre con la visión ocular). por lo que vemos una imagen de tres dimensiones. cada uno de los cuales se 67 .

de un color tal que realce la observación. Nótese que éste es un instrumento de baja magnificación. de manera de obtener una imagen en tres dimensiones. NORMAS BÁSICAS PARA EL CUIDADO Y MANEJO DE LA LUPA BINOCULAR La mayoría de las normas de cuidado. Enfoque primeramente con el ocular fijo y luego ajuste el foco de la imagen tridimensional con el ocular de foco ajustable. Esquematice lo observado y coloque referencias e indique el aumento obtenido. Debe colocarse en la platina una placa de contraste. con el fin de proveer una imagen nítida para ambos ojos. ¿Qué finalidad tiene el ocular ajustable? 6. 68 .Introducción a la Biología Facultad de Cs. recomendadas para el microscopio compuesto deben tenerse también en cuenta al utilizar la lupa binocular. en qué sentido se mueve la imagen final? 4. ¿Cómo es la distancia de trabajo en relación con la del microscopio óptico? 2. limpieza y transporte. ¿Por qué no existe tornillo micrométrico? ¿Cómo es la profundidad del campo? 3. Observe bajo lupa el material brindado. El tornillo de sujeción debe estar suficientemente apretado para evitar la caída del brazo de la lupa CARACTERÍSTICAS Y FUNCIONAMIENTO DE LA LUPA BINOCULAR 1. ¿Cuáles son las características de la imagen final? 5. ¿Al desplazar un objeto observado. Además se tendrán presentes las siguientes normas: • • • • Moviendo los tubos oculares se busca la distancia interpupilar adecuada para cada observador.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata enfoca independientemente del otro.

para las cuales la retina es sensible. dando origen a diferencias de fase entre las zonas luminosas emergentes. El microscopio de contraste de fase permite el estudio de muchas estructuras celulares in vivo. La velocidad con que la luz atraviesa un cuerpo transparente depende de la cantidad de material presente y determina el índice de refracción de este cuerpo. Generalmente se utiliza en combinación con las técnicas de cultivo de células y tejidos. y también para el examen de células recientemente removidas de animales vivos. pero sin colorear. Dado que las diversas estructuras celulares tienen un índice de refracción diferente. produciendo en consecuencia diferencias de intensidad luminosa. 69 .Introducción a la Biología Facultad de Cs. causas diversos atrasos en las ondas luminosas que las atraviesan. son incoloros y transparentes. con raras excepciones. ya que sus componentes. En el microscopio de contraste de fase existen dispositivos especiales que transforman estas diferencias de fase en diferencias de amplitud. pero esas diferencias no son visibles. o también material fijado.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata OTROS TIPOS DE MICROSCOPIOS MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES El estudio de estructuras in vivo es normalmente muy difícil.

Realmente su predicción se cumplió ya que los equipos actuales permiten acceder al mundo molecular y atómico.Introducción a la Biología Facultad de Cs. La velocidad a la que se propaga la luz en estos cuerpos amorfos. independientemente de la dirección que siga dentro de ellos. Cuando se coloca en la platina un cuerpo amorfo. Lo contrario ocurre cuando observamos un cuerpo cristalino o birrefringente. tan lejano para los investigadores de aquellos tiempos. El microscopio de polarización emplea un prisma que deja pasar solamente la luz polarizada rectilíneamente. sufre una división de tal orden que de un solo rayo luminoso a la entrada. MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA BREVE RESEÑA HISTÓRICA DE LA MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA Desde el año 1660 a la actualidad el microscopio óptico ha sido pilar fundamental en el conocimiento de lo invisible. la dirección de la vibración de la luz pasa a seguir una dirección determinada. Sea o no aparente esta ordenación. Tal capacidad se debe a que esas sustancias poseen una ordenación interna y periódica de sus átomos. su factor limitante fue la longitud de onda de la luz. Ernst Abbe había predicho :"Quizá en el futuro se conozca alguna fuerza que permita a través de diferentes caminos sobrepasar los límites que ahora nos parecen insalvables. 70 . En 1873. Creo que los instrumentos que nos asistirán algún día no tendrán nada en común. Además. con la mejora de la calidad de las lentes. eliminando otros rayos por reflexión total. la velocidad de la luz varía según la dirección de propagación. En estas condiciones el observador no ve ninguna luz en el ocular. Este instrumento óptico está compuesto de una platina rotatoria. se dice que tales cuerpos tienen estado cristalino. lo que da lugar al fenómeno conocido con el nombre de doble refracción. Aunque su poder de resolución aumentó a través del tiempo. esto es. resultan dos rayos llamados polarizados. su orientación a escala submicroscópica. o sea. el cuerpo tienen un único índice de refracción. entonces. junto al ocular analizador). la luz brilla con mayor o menor intensidad. esta situación no se altera porque la luz no sufre modificación. Así. encima de ella. permite conocer la ordenación interna de las sustancias birrefringentes. que son polarizados rectilíneamente. las sustancias que no pertenecen a este grupo se llaman amorfas. y según la orientación de ese cuerpo en la platina. también llamados isótropos o monorrefringentes. o anisótropos o birrefringentes. Entonces. es siempre igual. salvo sus nombres". De un único rayo luminoso resultan dos rayos refractados. Polarizador y analizador están colocados de tal manera que sus secciones principales están cruzadas. El microscopio de polarización sirve. se cortan perpendicularmente. para distinguir las sustancias monorrefringentes de las birrefringentes. a la que se le añaden dos polarizadores: uno ubicado debajo de la platina (polarizador) y el otro. Por el contrario.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata MICROSCOPIO DE POLARIZACIÓN Cuando la luz atraviesa ciertas sustancias o estructuras. En los cuerpos cristalinos.

que se avanzó a pasos agigantados en el conocimiento de lo muy pequeño. Los electrones generados son acelerados por un voltaje de aceleración negativo entre el cátodo y el ánodo de 1000 KV (fuente de alta tensión). por lo general en alto vacío y que se comunica con la columna al levantarse la pantalla y abrirse un shunt. Por lo tanto la gran diferencia radica en reemplazar el haz de luz fotónica por un haz de electrones que se genera en el cañón electrónico. EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO Vamos a referirnos a las características del ME que lo diferencian de la microscopía de luz y que permite mejorar el límite de resolución de este último. el ánodo atrae los electrones. la misma se pre-vacía antes de ser comunicada con la columna para introducir el especimen que consiste en una grilla de unos 4 mm de diámetro de cobre o níquel de 200 o 300 mesh.Introducción a la Biología Facultad de Cs. Dos desarrollos esenciales condujeron a la construcción del microscopio electrónico (ME). los saca fuera evitando la acumulación en el filamento. 71 . cuyo poder de resolución es de 0. El alto vacío se logra en general mediante una bomba difusora apoyada por una bomba mecánica. Primero la teoría de De Broglie (1924) que indica que a un electrón en movimiento puede asignarse una longitud de onda muy corta. instrumento y técnicas se han vuelto casi de rutina. La resolución en un ME depende de la condición del potencial acelerador. Una cámara fotográfica se ubica debajo de la pantalla. Un hecho destacable con el desarrollo del ME fue que mientras el microscopio de luz u óptico (MO) alcanzó su perfección de más de 2 siglos de desarrollo. Una enorme expansión de nuestro conocimiento de la ultraestructura de la materia ha tenido lugar gracias al ME. donde se recogen los cortes del material biológico. genera una fuente puntual de electrones y además es enfocante. El ánodo es un disco abierto en la base del cilindro de Wehnelt conectado a tierra (con potencial cero). donde un filamento de tungsteno en forma de V y con propiedades de termoemisión. el ME alcanzó un nivel comparable en el espacio corto de 2 décadas. La columna tiene un lugar donde introducir el especimen en una precámara. Ambos.2 µm.2 nm mientras que la longitud de onda de la luz visible oscila alrededor de 500 nm y su poder de resolución es de 0. Se logran haces de electrones con una longitud de onda de 0. los cuales deben ser lo suficientemente finos (60 nm). El haz de electrones se genera en una columna con un alto vacío a fin de evitar la dispersión de los electrones al chocar con las partículas de la atmósfera. lo que ha permitido la respuesta a muchos problemas fundamentales de significado biológico y médico. al calentárselo con un voltaje de calentamiento del cátodo produce el haz de electrones.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Fue gracias al descubrimiento de los principios físicos que llegaron a ser la base teórica de la microscopía electrónica.05 nm. La segunda demostración de Busch (1926) que un campo electrostático adecuado podría ser usado como verdadera lente para un rayo electrónico y así producir una imagen agrandada. El filamento constituye el cátodo y está rodeado por un cilindro abierto (cilindro de Wehnelt) que contribuye a producir un haz más pequeño pero de igual intensidad.

A tal fin el material biológico debe estar incluido en resinas especiales para vacío y con una rigidez suficiente para poder seccionarlo tan finamente en un ultramicrótomo con cuchillas de 72 . Esto se logra variando la distancia focal de la proyectora. lo que resulta en diferencias visibles en diversas partes de la imagen. en la que no son los electrones transmitidos los que dan la imagen sino los electrones secundarios que son refractados en la superficie del material biológico. usando aperturas angulares tan pequeñas que la aberraciones son escasas. cambiando la corriente que pasa a través de la bobina. 3) El modo de formar la imagen es diferente en los 2 microscopios. En la microscopía electrónica de transmisión (MET). En el MO se forma por absorción diferente de la luz. La lente objetivo forma la primera imagen aumentada de la porción iluminada del especimen en un plano que luego se puede volver a aumentar por las lentes proyectoras. en tanto que en el ME la pérdida de electrones por dispersión en puntos individuales del espécimen resulta en variaciones de la intensidad de la imagen (contraste). En el ME en cambio. Resulta claro por qué es necesario cortes muy finos. la porción de electrones absorbido por el material biológico es infinitésima. Pero la diferencia con la MO es que en ésta la imagen se forma porque el material absorbe la luz. a diferencia de la microscopía de scanning (o barrido) (MES o MEB). Podemos resumir las diferencias entre el MO y el ME : 1) Las lentes magnéticas no tienen distancias focales fijas como las lentes ópticas. 2) En el ME no es necesario cambiar la lente de Objetivo o las proyectoras cuando se desean distintas magnificaciones. La formación de la imagen no se basa en la absorción de electrones sino que se basa en la pérdida de electrones del haz por el scattering (o dispersión) en distintos puntos del preparado. La distancia focal es dependiente de la intensidad de campo. los electrones que atraviesan la muestra son los que van a impactar en la pantalla para dar la imagen. La lente objetivo es la más crítica porque de ella depende el poder de resolución. el blanco corresponde a los electrones que no fueron desviados y atraviesan el espécimen y constituyen el background. proceso intensificado por las tinciones del especimen. Las lentes objetivas y proyectoras juntas magnifican la imagen sobre una pantalla fluorescente o cuando ésta se levanta sobre una placa fotográfica.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata El sistema óptico del ME consiste en bobinas electromagnéticas. las lentes condensadoras concentran el haz sobre el especimen y permiten también regular la intensidad de luz. en tanto que la magnificación del objetivo es siempre fija. Existen escalas de grises. La imagen se forma en blanco y negro correspondiendo el negro a las zonas con alta densidad de material capaz de dispersar electrones. Las lentes intermedias y proyectoras se usan en condiciones tales que los errores de la lente no interfieren seriamente con la imagen.Introducción a la Biología Facultad de Cs.

Introducción a la Biología Facultad de Cs. deshidrataciones. Este procesamiento incluye fijaciones. inclusiones. Para ello el material debe ser procesado de manera específica y rigurosa. Dichas resinas son hidrofóbicas y requieren una deshidratación previa con solventes como acetona. Tratamientos tan drásticos hacen indispensables una adecuada fijación del material biológico que asegure la correcta preservación de la ultraestructura. cortes ultradelgados. tinciones o contrastados.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata vidrio o de diamante. 73 .

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