Introducción a la Biología Facultad de Cs.

Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata

MICROSCOPIO COMPUESTO
NORMAS BÁSICAS PARA EL CUIDADO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO Al ser el microscopio un aparato de precisión y de precio elevado, es muy conveniente asegurarle un buen rendimiento y una larga duración mediante toda una serie de normas y cuidados: • • NO ENCHUFAR EL MICROSCOPIO A LA LÍNEA TRIFÁSICA. Para transportar el microscopio se recomienda utilizar siempre las dos manos, sujetándolo por el brazo con una mano y sosteniéndolo del pie con la palma de la otra mano. Se debe desplazar en posición vertical para evitar la caída del ocular y/o del espejo o fuente de luz. En la mayoría de los microscopios el brazo debe quedar hacia el observador. Debe apoyarse correctamente el aparato hacia el centro de la mesada. Seleccionar al inicio de la observación, el objetivo de menor aumento. Cambiar en forma gradual los objetivos. Finalizada la observación, volver a ubicar el objetivo de menor aumento. Al efectuar el primer enfoque, el objetivo debe estar bien cerca de la preparación sin llegar a tocarla. Se coloca en esta posición mirando lateralmente el microscopio. El desplazamiento del tubo óptico para enfocar, se efectuará de abajo hacia arriba. Se evitará siempre tocar la preparación con la lente frontal de los objetivos. En algunos microscopios el desplazamiento del condensador tiene un tope, mientras que en otros no, por lo que al ascenderlo hay que cuidar de no tocar el portaobjetos. Cuando se utiliza un microscopio monocular es recomendable mantener los dos ojos abiertos para evitar el cansancio visual. Mover siempre suave y lentamente cualquier pieza del microscopio Utilice papel de seda fino especial o gamuza para lentes. Evite tocar las lentes con los dedos. La parte inferior del portaobjetos debe estar siempre seca al situarlo sobre la platina.

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como el punto Q de la siguiente figura . pasa por el segundo foco de una lente convergente. Un rayo que pasa (o se dirige hacia) el primer foco emerge paralelo al eje.. Q P P F F’ Q’ La mayor parte de los sistemas ópticos comprenden más de una superficie reflectante o refractante. que divergen desde un punto determinado del objeto que no esta sobre el eje. después de la refracción por la lente. después de atravesar la lente. Este método consiste en determinar el punto de intersección. 59 . puede hallarse por un método gráfico sencillo. CARACTERÍSTICAS Y FUNCIONAMIENTO DEL MICROSCOPIO ¿CÓMO SE FORMA LA IMAGEN? Algunos principios físicos. con la puerta cerrada. de unos cuantos rayos.Introducción a la Biología Facultad de Cs. La imagen formada por la primer superficie sirve de objeto a la segunda y así sucesivamente.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata • Después de utilizar el microscopio debe guardarse aislado del polvo y la humedad con una funda de plástico o en su caja correspondiente.. La posición y tamaño de la imagen de un objeto formada por una lente delgada. (llamados rayos principales). Un rayo que pasa por el centro de curvatura de la lente no es desviado apreciablemente (si la lente es delgada). Un rayo paralelo al eje.

real e invertida.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Imagen de un objeto situado a una distancia mayor al foco.. Foco 2 Imagen Objeto Ahora volvemos a lo que nos interesa.Introducción a la Biología Facultad de Cs. El objetivo del microscopio actúa como una cámara fotográfica. 60 .. Cuando un objeto se sitúa más allá del foco de su lente. R es el radio de curvatura de la lente) Foco 2 objeto Foco 1 imagen Imagen de un objeto situado a una distancia menor al foco. se produce una imagen ampliada. (f = R / 2.

La parte óptica fundamental del microscopio está formada por dos sistemas centrados de lentes de aumento o convergentes: el objetivo y el ocular. El medio utilizado es un aceite de inmersión. Esto significa que una estructura que mide un micrón puede observarse como si tuvieran 1 o 1. el aire se interpone entre su lente y el preparado. Sin embargo. Los objetivos más comúnmente utilizados son de 4.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata El ocular actúa como una lupa que observa la imagen que ha formado el objetivo. cuya finalidad es la de sustentar convenientemente los elementos ópticos y los preparados que se examinan. 61 . 40 y 45 X. y otra (ocular) que actúa como una lupa que observa la imagen formada por la primera. los mayores aumentos que pueden conseguirse con el microscopio óptico son de 1000-1500 x.5 milímetros. La distancia al preparado utilizando estos objetivos es muy pequeña y suelen tener un muelle protector para evitar roturas.Introducción a la Biología Facultad de Cs. que se diferencian por las características de su composición. y semejante al del vidrio (n=1. 10. ¿Cuál es la otra propiedad importante para lograr una buena imagen? En el microscopio distinguimos un sistema óptico destinado a la iluminación y obtención de una imagen muy aumentada del objeto examinado. ♦ El objetivo está compuesto por un sistema centrado de lentes convergentes. ♦ El ocular recibe la imagen dada por el objetivo. • Objetivos a inmersión: Se distinguen de los anteriores porque entre la lente y el preparado se debe interponer un medio transparente con un índice de refracción (n) superior al del aire (n=1). de manera muy simplificada. es tomada por el ocular (como si fuera un objeto) y es magnificada nuevamente. Así. Existen distintos tipos de objetivos. 2. y por el aparato de iluminación. Por lo tanto. pero invertida con relación al objeto examinado. como por ejemplo el aceite de cedro. la imagen definitiva (que es invertida respecto de la original) resulta el producto entre el aumento del objetivo por el aumento del ocular. En consecuencia. que facilita y mejora la observación microscópica. En las figuras anteriores pudimos observar. y un sistema mecánico (o montura). Está compuesta por dos lentes: la inferior o colectora. la imagen del microscopio compuesto resulta de la combinación de las provocadas por una lente (objetivo) que actúa como una cámara fotográfica. y la superior. que la imagen aumentada. que permite aprovechar un mayor número de rayos refractados por el preparado para la formación de la imagen. producida por el objetivo. o lente ocular. o por la manera de utilizarse: • Objetivos a seco: En éstos. ¿por qué existe una limitación en la amplificación que puede brindar un sistema de lentes? El principal problema radica en que la capacidad de aumentar una imagen no es la única propiedad a tener en cuenta para una buena observación. virtual y derecha con relación a aquella.5). construyendo una nueva imagen mucho más ampliada.

Es inversamente proporcional al aumento. situado debajo de la platina. ALGUNOS CONCEPTOS IMPORTANTES EN MICROSCOPÍA Aumento: Es la proporción entre el tamaño de la imagen observada al microscopio y el tamaño real del objeto.Introducción a la Biología Facultad de Cs. la profundidad de campo es muy escasa (menor que 1 µm). profundidad de planos que están en foco en un momento dado. al mover el tornillo micrométrico. está formado por: • Espejo: cuando existe. 62 . podemos observar sólo pequeños espesores con nitidez. Distancia frontal: Es la distancia ente el objeto observado y la lente del objetivo cuando el preparado se encuentra enfocado correctamente. sirve para graduar la cantidad de rayos luminosos que llegan al objeto. • Diafragma: dispuesto debajo del condensador. El aumento total puede calcularse como el producto del aumento del ocular por el del objetivo. • Condensador :está constituido por un sistema de lentes convergentes que proyecta sobre el preparado en forma de un amplio cono el haz de luz que lo atraviesa. Concentra los rayos luminosos procedentes de la fuente de luz sobre la preparación. dirigiéndolos hacia arriba del eje óptico. La profundidad de foco guarda relación inversa con el aumento: es tanto menor cuanto mayor es el aumento de la lente. Los microscopios con luz incorporada generalmente no poseen espejo. es decir. posee una cara plana y otra cóncava destinadas a proyectar el haz de rayos que iluminará el objeto. es decir.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata ♦ El aparato de iluminación. • Filtros de luz: son placas de vidrio coloreadas que dejan pasar las radiaciones de longitud de onda más convenientes para la más adecuada observación (κ=400-500 nm). Profundidad de campo o de foco o poder de penetración: Es el espesor del preparado que se observa con nitidez. Con inmersión en aceite. Con aumentos medianos o grandes. absorbiendo las restantes. mientras que por encima y por debajo de esta zona la imagen se desvanece. que a medida que se utilizan objetivos de mayor aumento disminuye la distancia frontal y por lo tanto aumenta el riesgo de romper el preparado.

Límite de resolución: Es la distancia mínima que debe existir ente dos puntos del objeto para que puedan visualizarse separados. y por esta razón las lentes de pequeño aumento son útiles para rastrear la preparación. cuanto mayor sea el poder resolutivo del objetivo. 3. Se expresa como la distancia mínima que permite dar una imagen bien definida de dos puntos. Apertura numérica: Es una medida de la capacidad del microscopio de agrupar las refracciones de la luz producidas por los finos detalles del objeto. Reconozca los objetivos secos y de inmersión. el diafragma y el condensador en la iluminación? 63 . En los microscopios ópticos. Poder de resolución: Es la capacidad de las lentes de distinguir o resolver (mostrar separados) con nitidez dos puntos situados muy próximos entre sí. ¿De qué partes del microscopio depende la correcta iluminación de la preparación ? ¿A qué partes del microscopio debe dirigirse la luz de la lámpara? ¿Por qué? ¿Qué se puede colocar en el portafiltros y qué utilidad tiene? ¿Cómo varía la iluminación al abrir o cerrar el diafragma? ¿Qué función tienen el espejo. El tamaño del campo observado es inversamente proporcional al aumento total del microscopio. menor es la distancia que separa dos puntos entre sí sin que estos se confundan. 5. Cuanto mayor es el poder de resolución (PR). observaremos una imagen más aumentada pero que incluirá sólo una parte de lo que observábamos con el objetivo menor. Observando los distintos elementos del microscopio ubique los que corresponden a la parte óptica. Es una característica propia de cada objetivo. en general. más finos serán los detalles de la preparación que puedan distinguirse.Introducción a la Biología Facultad de Cs. 4. en vez de verlos como uno solo.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Campo observado: Es la porción del preparado incluida en la imagen. debido a que determina el tamaño del haz de luz que es captado por el objetivo luego de haber pasado a través del objeto. 6. inferior a 0. el filtro. es por esto que forma parte de las inscripciones grabadas en los objetivos. Si cambiamos de un objetivo a otro de mayor aumento. 8. Se representa por el diámetro de la parte de la preparación que se está observando (área del campo). En consecuencia. el límite de resolución no es.2 µm. 7.

13. Mueva lentamente el tornillo micrométrico y observe las modificaciones en la imagen. 12. cuidando que el objetivo no toque el preparado. desde el principio hasta el final. ESTE OBJETIVO REQUIERE DE ACEITE DE INMERSION PARA SU UTILIZACION. En caso de realizar cortes. Observe a menor aumento. Coloque una gota de agua en el centro del portaobjetos. Coloque el portaobjetos sobre la platina. que se han efectuado para observar un preparado correctamente. 10. Escriba e interprete las inscripciones que llevan cada grupo de lentes. ordenada y brevemente todos los pasos. ¿en qué sentido se mueve la imagen? ¿Qué combinaciones de aumentos (del ocular. podrá responder a las siguientes preguntas: 9. Corte una pequeña letra de diario y ubíquela encima de la gota de agua. Observación de una preparación: resuma global. En función a lo observado. Cubra el preparado con un cubreobjetos. Esta preparación se conoce como MONTAJE HÚMEDO. ¿Cuál le parece el instrumento más eficiente? Fundamente su respuesta. ¿Cuáles son las características que tiene la imagen final del microscopio compuesto? Al desplazar el portaobjetos. 14. se requiere que los portas y cubreobjetos se encuentren perfectamente limpios. ¿CÓMO SE PREPARA EL MATERIAL PARA SU OBSERVACIÓN BAJO EL MICROSCOPIO? Existen diversas técnicas de preparación del material para su observación bajo el instrumental óptico. Ellas responden a un mismo objeto visualizado mediante cuatro instrumentos diferentes. Indique las características de las distintas imágenes. NO INTENTE OBSERVAR MATERIAL SIN TOMAR LOS RECAUDOS NECESARIOS. del objetivo y total) pueden hacerse con el microscopio del que se dispone? ¿Por qué es conveniente centrar en el campo de observación el objeto que nos interesa ver de la preparación si queremos observarlo a gran aumento? Analice las 4 imágenes que aparecen a continuación.Introducción a la Biología Facultad de Cs. preferentemente enjuagados con alcohol fino y secos. Fundamentalmente. Dibuje lo observado y coloque referencias. La preparación del material se debe realizar sobre una superficie limpia y plana.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Tome un portaobjetos limpio y seco por sus bordes. 11. éstos deben ser sumamente delgados como para permitir el 64 . Preste especial atención al objetivo de INMERSION.

.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata paso de la luz a través del material. Para realizarlo se siguen los siguientes pasos: • • • • Se disgrega el material con la ayuda de pinzas y alfileres o agujas. Se procede del siguiente modo: • • Se coloca una gota de material sobre un extremo del portaobjetos limpio y seco Se apoya sobre la gota un borde del otro portaobjetos formando un ángulo agudo. • FROTIS : consiste en esparcir el material generalmente líquido o semilíquido de modo que quede distribuido uniformemente en una delgada capa. • 65 . rápido y uniforme. Para ello se utiliza otro portaobjetos de borde muy parejo que se desliza sobre el primero desde un extremo al opuesto. SQUASH : consiste en la disgregación de la muestra mediante el aplastamiento del material entre el porta y cubreobjetos. Se debe operar con precaución pero con firmeza para evitar la rotura del material. Cuando la gota se extienda por capilaridad a todo el ancho del portaobjetos.Introducción a la Biología Facultad de Cs. Se apoya el portaobjetos sobre una superficie dura y completamente plana. se desliza hacia el otro extremo con un movimiento suave. se lo somete a coloración durante el tiempo necesario. Si se requiere. Se cubre el material con un cubreobjetos. Además del montaje húmedo existen dos técnicas especiales para realizar el montaje del material: SQUASH o aplastado y FROTIS o extendido. Se coloca sobre el cubreobjetos un papel secante o un papel de filtro doblado y se aplasta con el dedo pulgar sin deslizar ni rotar el cubreobjetos.

aunque su ubicación en la célula puede ser revelada mediante ciertas técnicas • Los ribosomas 66 .Introducción a la Biología Facultad de Cs. cilias. vacuolas. centriolos. NO PUEDEN OBSERVARSE CON EL MICROSCOPIO ÓPTICO: • • • • • Las bacterias más pequeñas La estructura interna de las células procariontes La estructura de las organelas eucariontes La membrana plasmática Los conjuntos membranosos como los retículos endoplásmicos y el aparato de Golgi. nucleólos. flagelos.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Realice un frotis y un squash con el material brindado en el trabajo práctico. cromosomas. mitocondrias. Estas estructuras se identifican con claridad utilizando alguna técnica accesoria con preparación de la muestra. cloroplastos. pared celular. ¿Cuáles son las ventajas y qué limitaciones presenta el microscopio óptico en la observación de estructuras biológicas? CON EL MICROSCOPIO ÓPTICO SE PUEDEN OBSERVAR: • • • La forma general de la mayoría de las células procariontes La forma general de las células eucariontes Algunas organelas eucariontes: núcleo.

Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata ESTEREOMICROSCOPIO O LUPA BINOCULAR El estereomicroscopio consta realmente de dos microscopios completos. cada uno con su objetivo y ocular en los que. las imágenes formadas en los oculares son distintas (lo mismo que ocurre con la visión ocular). ya que en éstos la imagen formada en un único objetivo es desdoblada en dos imágenes idénticas por un prisma situado entre el objetivo y los dos oculares.Introducción a la Biología Facultad de Cs. No debe confundirse este aparato óptico con los microscopios binoculares. cada uno de los cuales se 67 . por lo que vemos una imagen de tres dimensiones. al no coincidir sus ejes ópticos. Puede apreciarse que la lupa posee un par de oculares.

Además se tendrán presentes las siguientes normas: • • • • Moviendo los tubos oculares se busca la distancia interpupilar adecuada para cada observador. Esquematice lo observado y coloque referencias e indique el aumento obtenido. recomendadas para el microscopio compuesto deben tenerse también en cuenta al utilizar la lupa binocular. ¿Cómo es la distancia de trabajo en relación con la del microscopio óptico? 2. con el fin de proveer una imagen nítida para ambos ojos. Observe bajo lupa el material brindado. NORMAS BÁSICAS PARA EL CUIDADO Y MANEJO DE LA LUPA BINOCULAR La mayoría de las normas de cuidado. ¿Qué finalidad tiene el ocular ajustable? 6. ¿Al desplazar un objeto observado. de manera de obtener una imagen en tres dimensiones. limpieza y transporte. 68 .Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata enfoca independientemente del otro. Enfoque primeramente con el ocular fijo y luego ajuste el foco de la imagen tridimensional con el ocular de foco ajustable. ¿Cuáles son las características de la imagen final? 5. de un color tal que realce la observación. Nótese que éste es un instrumento de baja magnificación. El tornillo de sujeción debe estar suficientemente apretado para evitar la caída del brazo de la lupa CARACTERÍSTICAS Y FUNCIONAMIENTO DE LA LUPA BINOCULAR 1. Debe colocarse en la platina una placa de contraste. en qué sentido se mueve la imagen final? 4.Introducción a la Biología Facultad de Cs. ¿Por qué no existe tornillo micrométrico? ¿Cómo es la profundidad del campo? 3.

o también material fijado. La velocidad con que la luz atraviesa un cuerpo transparente depende de la cantidad de material presente y determina el índice de refracción de este cuerpo. El microscopio de contraste de fase permite el estudio de muchas estructuras celulares in vivo. produciendo en consecuencia diferencias de intensidad luminosa. para las cuales la retina es sensible. pero sin colorear. Generalmente se utiliza en combinación con las técnicas de cultivo de células y tejidos.Introducción a la Biología Facultad de Cs. ya que sus componentes.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata OTROS TIPOS DE MICROSCOPIOS MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES El estudio de estructuras in vivo es normalmente muy difícil. causas diversos atrasos en las ondas luminosas que las atraviesan. Dado que las diversas estructuras celulares tienen un índice de refracción diferente. son incoloros y transparentes. con raras excepciones. y también para el examen de células recientemente removidas de animales vivos. 69 . pero esas diferencias no son visibles. En el microscopio de contraste de fase existen dispositivos especiales que transforman estas diferencias de fase en diferencias de amplitud. dando origen a diferencias de fase entre las zonas luminosas emergentes.

En estas condiciones el observador no ve ninguna luz en el ocular. el cuerpo tienen un único índice de refracción. permite conocer la ordenación interna de las sustancias birrefringentes. De un único rayo luminoso resultan dos rayos refractados. Polarizador y analizador están colocados de tal manera que sus secciones principales están cruzadas. La velocidad a la que se propaga la luz en estos cuerpos amorfos. se dice que tales cuerpos tienen estado cristalino. para distinguir las sustancias monorrefringentes de las birrefringentes. Aunque su poder de resolución aumentó a través del tiempo. salvo sus nombres". lo que da lugar al fenómeno conocido con el nombre de doble refracción. la dirección de la vibración de la luz pasa a seguir una dirección determinada. En 1873. Entonces. eliminando otros rayos por reflexión total. entonces. Lo contrario ocurre cuando observamos un cuerpo cristalino o birrefringente. Este instrumento óptico está compuesto de una platina rotatoria. la luz brilla con mayor o menor intensidad. resultan dos rayos llamados polarizados. El microscopio de polarización sirve. independientemente de la dirección que siga dentro de ellos. también llamados isótropos o monorrefringentes. 70 . su orientación a escala submicroscópica.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata MICROSCOPIO DE POLARIZACIÓN Cuando la luz atraviesa ciertas sustancias o estructuras. Por el contrario. y según la orientación de ese cuerpo en la platina. Sea o no aparente esta ordenación. sufre una división de tal orden que de un solo rayo luminoso a la entrada. es siempre igual. esto es. Además. Así. las sustancias que no pertenecen a este grupo se llaman amorfas. MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA BREVE RESEÑA HISTÓRICA DE LA MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA Desde el año 1660 a la actualidad el microscopio óptico ha sido pilar fundamental en el conocimiento de lo invisible. Creo que los instrumentos que nos asistirán algún día no tendrán nada en común.Introducción a la Biología Facultad de Cs. la velocidad de la luz varía según la dirección de propagación. Ernst Abbe había predicho :"Quizá en el futuro se conozca alguna fuerza que permita a través de diferentes caminos sobrepasar los límites que ahora nos parecen insalvables. a la que se le añaden dos polarizadores: uno ubicado debajo de la platina (polarizador) y el otro. o anisótropos o birrefringentes. su factor limitante fue la longitud de onda de la luz. Tal capacidad se debe a que esas sustancias poseen una ordenación interna y periódica de sus átomos. Cuando se coloca en la platina un cuerpo amorfo. esta situación no se altera porque la luz no sufre modificación. que son polarizados rectilíneamente. se cortan perpendicularmente. El microscopio de polarización emplea un prisma que deja pasar solamente la luz polarizada rectilíneamente. junto al ocular analizador). Realmente su predicción se cumplió ya que los equipos actuales permiten acceder al mundo molecular y atómico. tan lejano para los investigadores de aquellos tiempos. o sea. con la mejora de la calidad de las lentes. En los cuerpos cristalinos. encima de ella.

Dos desarrollos esenciales condujeron a la construcción del microscopio electrónico (ME). Un hecho destacable con el desarrollo del ME fue que mientras el microscopio de luz u óptico (MO) alcanzó su perfección de más de 2 siglos de desarrollo. instrumento y técnicas se han vuelto casi de rutina.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Fue gracias al descubrimiento de los principios físicos que llegaron a ser la base teórica de la microscopía electrónica. La segunda demostración de Busch (1926) que un campo electrostático adecuado podría ser usado como verdadera lente para un rayo electrónico y así producir una imagen agrandada. Una enorme expansión de nuestro conocimiento de la ultraestructura de la materia ha tenido lugar gracias al ME. Primero la teoría de De Broglie (1924) que indica que a un electrón en movimiento puede asignarse una longitud de onda muy corta. el ME alcanzó un nivel comparable en el espacio corto de 2 décadas. lo que ha permitido la respuesta a muchos problemas fundamentales de significado biológico y médico. La columna tiene un lugar donde introducir el especimen en una precámara. EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO Vamos a referirnos a las características del ME que lo diferencian de la microscopía de luz y que permite mejorar el límite de resolución de este último. La resolución en un ME depende de la condición del potencial acelerador. por lo general en alto vacío y que se comunica con la columna al levantarse la pantalla y abrirse un shunt. El alto vacío se logra en general mediante una bomba difusora apoyada por una bomba mecánica. cuyo poder de resolución es de 0.2 nm mientras que la longitud de onda de la luz visible oscila alrededor de 500 nm y su poder de resolución es de 0. los saca fuera evitando la acumulación en el filamento. donde se recogen los cortes del material biológico. El filamento constituye el cátodo y está rodeado por un cilindro abierto (cilindro de Wehnelt) que contribuye a producir un haz más pequeño pero de igual intensidad. los cuales deben ser lo suficientemente finos (60 nm). 71 .Introducción a la Biología Facultad de Cs. genera una fuente puntual de electrones y además es enfocante. Por lo tanto la gran diferencia radica en reemplazar el haz de luz fotónica por un haz de electrones que se genera en el cañón electrónico. El ánodo es un disco abierto en la base del cilindro de Wehnelt conectado a tierra (con potencial cero). Una cámara fotográfica se ubica debajo de la pantalla. la misma se pre-vacía antes de ser comunicada con la columna para introducir el especimen que consiste en una grilla de unos 4 mm de diámetro de cobre o níquel de 200 o 300 mesh. el ánodo atrae los electrones. Los electrones generados son acelerados por un voltaje de aceleración negativo entre el cátodo y el ánodo de 1000 KV (fuente de alta tensión).2 µm. El haz de electrones se genera en una columna con un alto vacío a fin de evitar la dispersión de los electrones al chocar con las partículas de la atmósfera. donde un filamento de tungsteno en forma de V y con propiedades de termoemisión. Ambos. Se logran haces de electrones con una longitud de onda de 0. al calentárselo con un voltaje de calentamiento del cátodo produce el haz de electrones.05 nm. que se avanzó a pasos agigantados en el conocimiento de lo muy pequeño.

La lente objetivo forma la primera imagen aumentada de la porción iluminada del especimen en un plano que luego se puede volver a aumentar por las lentes proyectoras. cambiando la corriente que pasa a través de la bobina. En el ME en cambio. 3) El modo de formar la imagen es diferente en los 2 microscopios. La formación de la imagen no se basa en la absorción de electrones sino que se basa en la pérdida de electrones del haz por el scattering (o dispersión) en distintos puntos del preparado. Las lentes objetivas y proyectoras juntas magnifican la imagen sobre una pantalla fluorescente o cuando ésta se levanta sobre una placa fotográfica. a diferencia de la microscopía de scanning (o barrido) (MES o MEB).Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata El sistema óptico del ME consiste en bobinas electromagnéticas. en tanto que la magnificación del objetivo es siempre fija. Podemos resumir las diferencias entre el MO y el ME : 1) Las lentes magnéticas no tienen distancias focales fijas como las lentes ópticas. 2) En el ME no es necesario cambiar la lente de Objetivo o las proyectoras cuando se desean distintas magnificaciones. Existen escalas de grises. lo que resulta en diferencias visibles en diversas partes de la imagen. en tanto que en el ME la pérdida de electrones por dispersión en puntos individuales del espécimen resulta en variaciones de la intensidad de la imagen (contraste). la porción de electrones absorbido por el material biológico es infinitésima. A tal fin el material biológico debe estar incluido en resinas especiales para vacío y con una rigidez suficiente para poder seccionarlo tan finamente en un ultramicrótomo con cuchillas de 72 . Esto se logra variando la distancia focal de la proyectora. En el MO se forma por absorción diferente de la luz. el blanco corresponde a los electrones que no fueron desviados y atraviesan el espécimen y constituyen el background. La lente objetivo es la más crítica porque de ella depende el poder de resolución. proceso intensificado por las tinciones del especimen.Introducción a la Biología Facultad de Cs. En la microscopía electrónica de transmisión (MET). las lentes condensadoras concentran el haz sobre el especimen y permiten también regular la intensidad de luz. La imagen se forma en blanco y negro correspondiendo el negro a las zonas con alta densidad de material capaz de dispersar electrones. Resulta claro por qué es necesario cortes muy finos. en la que no son los electrones transmitidos los que dan la imagen sino los electrones secundarios que son refractados en la superficie del material biológico. los electrones que atraviesan la muestra son los que van a impactar en la pantalla para dar la imagen. usando aperturas angulares tan pequeñas que la aberraciones son escasas. La distancia focal es dependiente de la intensidad de campo. Pero la diferencia con la MO es que en ésta la imagen se forma porque el material absorbe la luz. Las lentes intermedias y proyectoras se usan en condiciones tales que los errores de la lente no interfieren seriamente con la imagen.

Introducción a la Biología Facultad de Cs. Este procesamiento incluye fijaciones. Dichas resinas son hidrofóbicas y requieren una deshidratación previa con solventes como acetona. inclusiones. tinciones o contrastados.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata vidrio o de diamante. cortes ultradelgados. Para ello el material debe ser procesado de manera específica y rigurosa. 73 . Tratamientos tan drásticos hacen indispensables una adecuada fijación del material biológico que asegure la correcta preservación de la ultraestructura. deshidrataciones.

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