Introducción a la Biología Facultad de Cs.

Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata

MICROSCOPIO COMPUESTO
NORMAS BÁSICAS PARA EL CUIDADO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO Al ser el microscopio un aparato de precisión y de precio elevado, es muy conveniente asegurarle un buen rendimiento y una larga duración mediante toda una serie de normas y cuidados: • • NO ENCHUFAR EL MICROSCOPIO A LA LÍNEA TRIFÁSICA. Para transportar el microscopio se recomienda utilizar siempre las dos manos, sujetándolo por el brazo con una mano y sosteniéndolo del pie con la palma de la otra mano. Se debe desplazar en posición vertical para evitar la caída del ocular y/o del espejo o fuente de luz. En la mayoría de los microscopios el brazo debe quedar hacia el observador. Debe apoyarse correctamente el aparato hacia el centro de la mesada. Seleccionar al inicio de la observación, el objetivo de menor aumento. Cambiar en forma gradual los objetivos. Finalizada la observación, volver a ubicar el objetivo de menor aumento. Al efectuar el primer enfoque, el objetivo debe estar bien cerca de la preparación sin llegar a tocarla. Se coloca en esta posición mirando lateralmente el microscopio. El desplazamiento del tubo óptico para enfocar, se efectuará de abajo hacia arriba. Se evitará siempre tocar la preparación con la lente frontal de los objetivos. En algunos microscopios el desplazamiento del condensador tiene un tope, mientras que en otros no, por lo que al ascenderlo hay que cuidar de no tocar el portaobjetos. Cuando se utiliza un microscopio monocular es recomendable mantener los dos ojos abiertos para evitar el cansancio visual. Mover siempre suave y lentamente cualquier pieza del microscopio Utilice papel de seda fino especial o gamuza para lentes. Evite tocar las lentes con los dedos. La parte inferior del portaobjetos debe estar siempre seca al situarlo sobre la platina.

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Este método consiste en determinar el punto de intersección. puede hallarse por un método gráfico sencillo. con la puerta cerrada.. La imagen formada por la primer superficie sirve de objeto a la segunda y así sucesivamente. de unos cuantos rayos. Un rayo que pasa por el centro de curvatura de la lente no es desviado apreciablemente (si la lente es delgada). Un rayo paralelo al eje. después de la refracción por la lente. (llamados rayos principales). 59 . después de atravesar la lente. Q P P F F’ Q’ La mayor parte de los sistemas ópticos comprenden más de una superficie reflectante o refractante. que divergen desde un punto determinado del objeto que no esta sobre el eje. pasa por el segundo foco de una lente convergente. La posición y tamaño de la imagen de un objeto formada por una lente delgada. Un rayo que pasa (o se dirige hacia) el primer foco emerge paralelo al eje.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata • Después de utilizar el microscopio debe guardarse aislado del polvo y la humedad con una funda de plástico o en su caja correspondiente.. como el punto Q de la siguiente figura . CARACTERÍSTICAS Y FUNCIONAMIENTO DEL MICROSCOPIO ¿CÓMO SE FORMA LA IMAGEN? Algunos principios físicos.Introducción a la Biología Facultad de Cs.

real e invertida. se produce una imagen ampliada. R es el radio de curvatura de la lente) Foco 2 objeto Foco 1 imagen Imagen de un objeto situado a una distancia menor al foco.. Foco 2 Imagen Objeto Ahora volvemos a lo que nos interesa. (f = R / 2. El objetivo del microscopio actúa como una cámara fotográfica. 60 .Introducción a la Biología Facultad de Cs. Cuando un objeto se sitúa más allá del foco de su lente..Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Imagen de un objeto situado a una distancia mayor al foco.

10. que permite aprovechar un mayor número de rayos refractados por el preparado para la formación de la imagen. ♦ El objetivo está compuesto por un sistema centrado de lentes convergentes. pero invertida con relación al objeto examinado. 61 . como por ejemplo el aceite de cedro. que facilita y mejora la observación microscópica.5). virtual y derecha con relación a aquella. Esto significa que una estructura que mide un micrón puede observarse como si tuvieran 1 o 1. En consecuencia. el aire se interpone entre su lente y el preparado.5 milímetros. los mayores aumentos que pueden conseguirse con el microscopio óptico son de 1000-1500 x. Los objetivos más comúnmente utilizados son de 4. o lente ocular. de manera muy simplificada. o por la manera de utilizarse: • Objetivos a seco: En éstos. la imagen definitiva (que es invertida respecto de la original) resulta el producto entre el aumento del objetivo por el aumento del ocular. ¿por qué existe una limitación en la amplificación que puede brindar un sistema de lentes? El principal problema radica en que la capacidad de aumentar una imagen no es la única propiedad a tener en cuenta para una buena observación. y un sistema mecánico (o montura). cuya finalidad es la de sustentar convenientemente los elementos ópticos y los preparados que se examinan. La parte óptica fundamental del microscopio está formada por dos sistemas centrados de lentes de aumento o convergentes: el objetivo y el ocular. y por el aparato de iluminación. y otra (ocular) que actúa como una lupa que observa la imagen formada por la primera. 2. Así. • Objetivos a inmersión: Se distinguen de los anteriores porque entre la lente y el preparado se debe interponer un medio transparente con un índice de refracción (n) superior al del aire (n=1). la imagen del microscopio compuesto resulta de la combinación de las provocadas por una lente (objetivo) que actúa como una cámara fotográfica. 40 y 45 X. En las figuras anteriores pudimos observar. construyendo una nueva imagen mucho más ampliada. y semejante al del vidrio (n=1. es tomada por el ocular (como si fuera un objeto) y es magnificada nuevamente. Está compuesta por dos lentes: la inferior o colectora. ♦ El ocular recibe la imagen dada por el objetivo.Introducción a la Biología Facultad de Cs. que la imagen aumentada.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata El ocular actúa como una lupa que observa la imagen que ha formado el objetivo. ¿Cuál es la otra propiedad importante para lograr una buena imagen? En el microscopio distinguimos un sistema óptico destinado a la iluminación y obtención de una imagen muy aumentada del objeto examinado. producida por el objetivo. Por lo tanto. que se diferencian por las características de su composición. La distancia al preparado utilizando estos objetivos es muy pequeña y suelen tener un muelle protector para evitar roturas. Sin embargo. El medio utilizado es un aceite de inmersión. y la superior. Existen distintos tipos de objetivos.

que a medida que se utilizan objetivos de mayor aumento disminuye la distancia frontal y por lo tanto aumenta el riesgo de romper el preparado. • Filtros de luz: son placas de vidrio coloreadas que dejan pasar las radiaciones de longitud de onda más convenientes para la más adecuada observación (κ=400-500 nm). podemos observar sólo pequeños espesores con nitidez. • Condensador :está constituido por un sistema de lentes convergentes que proyecta sobre el preparado en forma de un amplio cono el haz de luz que lo atraviesa. Distancia frontal: Es la distancia ente el objeto observado y la lente del objetivo cuando el preparado se encuentra enfocado correctamente. la profundidad de campo es muy escasa (menor que 1 µm). Es inversamente proporcional al aumento. es decir. Los microscopios con luz incorporada generalmente no poseen espejo. Con inmersión en aceite. ALGUNOS CONCEPTOS IMPORTANTES EN MICROSCOPÍA Aumento: Es la proporción entre el tamaño de la imagen observada al microscopio y el tamaño real del objeto. situado debajo de la platina.Introducción a la Biología Facultad de Cs. El aumento total puede calcularse como el producto del aumento del ocular por el del objetivo. mientras que por encima y por debajo de esta zona la imagen se desvanece. absorbiendo las restantes. • Diafragma: dispuesto debajo del condensador. Con aumentos medianos o grandes.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata ♦ El aparato de iluminación. al mover el tornillo micrométrico. está formado por: • Espejo: cuando existe. profundidad de planos que están en foco en un momento dado. dirigiéndolos hacia arriba del eje óptico. es decir. La profundidad de foco guarda relación inversa con el aumento: es tanto menor cuanto mayor es el aumento de la lente. posee una cara plana y otra cóncava destinadas a proyectar el haz de rayos que iluminará el objeto. sirve para graduar la cantidad de rayos luminosos que llegan al objeto. Concentra los rayos luminosos procedentes de la fuente de luz sobre la preparación. Profundidad de campo o de foco o poder de penetración: Es el espesor del preparado que se observa con nitidez. 62 .

Reconozca los objetivos secos y de inmersión. Límite de resolución: Es la distancia mínima que debe existir ente dos puntos del objeto para que puedan visualizarse separados. Se representa por el diámetro de la parte de la preparación que se está observando (área del campo). inferior a 0. cuanto mayor sea el poder resolutivo del objetivo. observaremos una imagen más aumentada pero que incluirá sólo una parte de lo que observábamos con el objetivo menor. y por esta razón las lentes de pequeño aumento son útiles para rastrear la preparación. 6. debido a que determina el tamaño del haz de luz que es captado por el objetivo luego de haber pasado a través del objeto. ¿De qué partes del microscopio depende la correcta iluminación de la preparación ? ¿A qué partes del microscopio debe dirigirse la luz de la lámpara? ¿Por qué? ¿Qué se puede colocar en el portafiltros y qué utilidad tiene? ¿Cómo varía la iluminación al abrir o cerrar el diafragma? ¿Qué función tienen el espejo.Introducción a la Biología Facultad de Cs. 4. En consecuencia. menor es la distancia que separa dos puntos entre sí sin que estos se confundan. En los microscopios ópticos. en general.2 µm. Es una característica propia de cada objetivo. es por esto que forma parte de las inscripciones grabadas en los objetivos. en vez de verlos como uno solo. 7.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Campo observado: Es la porción del preparado incluida en la imagen. 8. Cuanto mayor es el poder de resolución (PR). Observando los distintos elementos del microscopio ubique los que corresponden a la parte óptica. Si cambiamos de un objetivo a otro de mayor aumento. el filtro. Apertura numérica: Es una medida de la capacidad del microscopio de agrupar las refracciones de la luz producidas por los finos detalles del objeto. el límite de resolución no es. 5. Poder de resolución: Es la capacidad de las lentes de distinguir o resolver (mostrar separados) con nitidez dos puntos situados muy próximos entre sí. Se expresa como la distancia mínima que permite dar una imagen bien definida de dos puntos. más finos serán los detalles de la preparación que puedan distinguirse. El tamaño del campo observado es inversamente proporcional al aumento total del microscopio. 3. el diafragma y el condensador en la iluminación? 63 .

Preste especial atención al objetivo de INMERSION. Cubra el preparado con un cubreobjetos. ¿CÓMO SE PREPARA EL MATERIAL PARA SU OBSERVACIÓN BAJO EL MICROSCOPIO? Existen diversas técnicas de preparación del material para su observación bajo el instrumental óptico. 13. Corte una pequeña letra de diario y ubíquela encima de la gota de agua. Observación de una preparación: resuma global. que se han efectuado para observar un preparado correctamente. ESTE OBJETIVO REQUIERE DE ACEITE DE INMERSION PARA SU UTILIZACION. cuidando que el objetivo no toque el preparado. del objetivo y total) pueden hacerse con el microscopio del que se dispone? ¿Por qué es conveniente centrar en el campo de observación el objeto que nos interesa ver de la preparación si queremos observarlo a gran aumento? Analice las 4 imágenes que aparecen a continuación. éstos deben ser sumamente delgados como para permitir el 64 . Observe a menor aumento. 10. se requiere que los portas y cubreobjetos se encuentren perfectamente limpios. Coloque el portaobjetos sobre la platina. 12. Mueva lentamente el tornillo micrométrico y observe las modificaciones en la imagen. Indique las características de las distintas imágenes. Ellas responden a un mismo objeto visualizado mediante cuatro instrumentos diferentes. En función a lo observado. ¿en qué sentido se mueve la imagen? ¿Qué combinaciones de aumentos (del ocular. desde el principio hasta el final. preferentemente enjuagados con alcohol fino y secos. 11. Coloque una gota de agua en el centro del portaobjetos.Introducción a la Biología Facultad de Cs. ordenada y brevemente todos los pasos. podrá responder a las siguientes preguntas: 9. ¿Cuál le parece el instrumento más eficiente? Fundamente su respuesta. En caso de realizar cortes. NO INTENTE OBSERVAR MATERIAL SIN TOMAR LOS RECAUDOS NECESARIOS. ¿Cuáles son las características que tiene la imagen final del microscopio compuesto? Al desplazar el portaobjetos. Esta preparación se conoce como MONTAJE HÚMEDO. Dibuje lo observado y coloque referencias. Fundamentalmente. La preparación del material se debe realizar sobre una superficie limpia y plana. 14. Escriba e interprete las inscripciones que llevan cada grupo de lentes.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Tome un portaobjetos limpio y seco por sus bordes.

Cuando la gota se extienda por capilaridad a todo el ancho del portaobjetos. rápido y uniforme. Se procede del siguiente modo: • • Se coloca una gota de material sobre un extremo del portaobjetos limpio y seco Se apoya sobre la gota un borde del otro portaobjetos formando un ángulo agudo. . • FROTIS : consiste en esparcir el material generalmente líquido o semilíquido de modo que quede distribuido uniformemente en una delgada capa. se lo somete a coloración durante el tiempo necesario. Además del montaje húmedo existen dos técnicas especiales para realizar el montaje del material: SQUASH o aplastado y FROTIS o extendido.Introducción a la Biología Facultad de Cs. Se debe operar con precaución pero con firmeza para evitar la rotura del material. SQUASH : consiste en la disgregación de la muestra mediante el aplastamiento del material entre el porta y cubreobjetos. Para realizarlo se siguen los siguientes pasos: • • • • Se disgrega el material con la ayuda de pinzas y alfileres o agujas. Se coloca sobre el cubreobjetos un papel secante o un papel de filtro doblado y se aplasta con el dedo pulgar sin deslizar ni rotar el cubreobjetos. Si se requiere. Para ello se utiliza otro portaobjetos de borde muy parejo que se desliza sobre el primero desde un extremo al opuesto.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata paso de la luz a través del material. • 65 . Se apoya el portaobjetos sobre una superficie dura y completamente plana. Se cubre el material con un cubreobjetos. se desliza hacia el otro extremo con un movimiento suave.

NO PUEDEN OBSERVARSE CON EL MICROSCOPIO ÓPTICO: • • • • • Las bacterias más pequeñas La estructura interna de las células procariontes La estructura de las organelas eucariontes La membrana plasmática Los conjuntos membranosos como los retículos endoplásmicos y el aparato de Golgi. aunque su ubicación en la célula puede ser revelada mediante ciertas técnicas • Los ribosomas 66 . centriolos. mitocondrias. nucleólos. cloroplastos. vacuolas. cilias. pared celular. ¿Cuáles son las ventajas y qué limitaciones presenta el microscopio óptico en la observación de estructuras biológicas? CON EL MICROSCOPIO ÓPTICO SE PUEDEN OBSERVAR: • • • La forma general de la mayoría de las células procariontes La forma general de las células eucariontes Algunas organelas eucariontes: núcleo.Introducción a la Biología Facultad de Cs. flagelos. Estas estructuras se identifican con claridad utilizando alguna técnica accesoria con preparación de la muestra. cromosomas.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Realice un frotis y un squash con el material brindado en el trabajo práctico.

Puede apreciarse que la lupa posee un par de oculares.Introducción a la Biología Facultad de Cs. por lo que vemos una imagen de tres dimensiones. No debe confundirse este aparato óptico con los microscopios binoculares. ya que en éstos la imagen formada en un único objetivo es desdoblada en dos imágenes idénticas por un prisma situado entre el objetivo y los dos oculares. cada uno de los cuales se 67 . cada uno con su objetivo y ocular en los que. las imágenes formadas en los oculares son distintas (lo mismo que ocurre con la visión ocular).Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata ESTEREOMICROSCOPIO O LUPA BINOCULAR El estereomicroscopio consta realmente de dos microscopios completos. al no coincidir sus ejes ópticos.

Además se tendrán presentes las siguientes normas: • • • • Moviendo los tubos oculares se busca la distancia interpupilar adecuada para cada observador. Nótese que éste es un instrumento de baja magnificación. ¿Por qué no existe tornillo micrométrico? ¿Cómo es la profundidad del campo? 3.Introducción a la Biología Facultad de Cs. de manera de obtener una imagen en tres dimensiones. Debe colocarse en la platina una placa de contraste. limpieza y transporte. con el fin de proveer una imagen nítida para ambos ojos. en qué sentido se mueve la imagen final? 4. Enfoque primeramente con el ocular fijo y luego ajuste el foco de la imagen tridimensional con el ocular de foco ajustable. 68 . recomendadas para el microscopio compuesto deben tenerse también en cuenta al utilizar la lupa binocular. ¿Qué finalidad tiene el ocular ajustable? 6. NORMAS BÁSICAS PARA EL CUIDADO Y MANEJO DE LA LUPA BINOCULAR La mayoría de las normas de cuidado. ¿Al desplazar un objeto observado. ¿Cuáles son las características de la imagen final? 5. ¿Cómo es la distancia de trabajo en relación con la del microscopio óptico? 2.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata enfoca independientemente del otro. Esquematice lo observado y coloque referencias e indique el aumento obtenido. Observe bajo lupa el material brindado. de un color tal que realce la observación. El tornillo de sujeción debe estar suficientemente apretado para evitar la caída del brazo de la lupa CARACTERÍSTICAS Y FUNCIONAMIENTO DE LA LUPA BINOCULAR 1.

En el microscopio de contraste de fase existen dispositivos especiales que transforman estas diferencias de fase en diferencias de amplitud. Generalmente se utiliza en combinación con las técnicas de cultivo de células y tejidos. pero sin colorear. produciendo en consecuencia diferencias de intensidad luminosa.Introducción a la Biología Facultad de Cs. y también para el examen de células recientemente removidas de animales vivos. La velocidad con que la luz atraviesa un cuerpo transparente depende de la cantidad de material presente y determina el índice de refracción de este cuerpo.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata OTROS TIPOS DE MICROSCOPIOS MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES El estudio de estructuras in vivo es normalmente muy difícil. son incoloros y transparentes. para las cuales la retina es sensible. Dado que las diversas estructuras celulares tienen un índice de refracción diferente. causas diversos atrasos en las ondas luminosas que las atraviesan. El microscopio de contraste de fase permite el estudio de muchas estructuras celulares in vivo. con raras excepciones. 69 . pero esas diferencias no son visibles. o también material fijado. ya que sus componentes. dando origen a diferencias de fase entre las zonas luminosas emergentes.

lo que da lugar al fenómeno conocido con el nombre de doble refracción. o anisótropos o birrefringentes.Introducción a la Biología Facultad de Cs. permite conocer la ordenación interna de las sustancias birrefringentes. En los cuerpos cristalinos. esta situación no se altera porque la luz no sufre modificación. Además. Creo que los instrumentos que nos asistirán algún día no tendrán nada en común. La velocidad a la que se propaga la luz en estos cuerpos amorfos. la dirección de la vibración de la luz pasa a seguir una dirección determinada. eliminando otros rayos por reflexión total. con la mejora de la calidad de las lentes. Este instrumento óptico está compuesto de una platina rotatoria. El microscopio de polarización emplea un prisma que deja pasar solamente la luz polarizada rectilíneamente. Así. resultan dos rayos llamados polarizados. se cortan perpendicularmente. las sustancias que no pertenecen a este grupo se llaman amorfas. junto al ocular analizador). MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA BREVE RESEÑA HISTÓRICA DE LA MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA Desde el año 1660 a la actualidad el microscopio óptico ha sido pilar fundamental en el conocimiento de lo invisible. y según la orientación de ese cuerpo en la platina. tan lejano para los investigadores de aquellos tiempos. o sea. Polarizador y analizador están colocados de tal manera que sus secciones principales están cruzadas. En 1873. la luz brilla con mayor o menor intensidad. 70 . Tal capacidad se debe a que esas sustancias poseen una ordenación interna y periódica de sus átomos. se dice que tales cuerpos tienen estado cristalino. también llamados isótropos o monorrefringentes. Cuando se coloca en la platina un cuerpo amorfo. su orientación a escala submicroscópica. entonces. que son polarizados rectilíneamente. Aunque su poder de resolución aumentó a través del tiempo. su factor limitante fue la longitud de onda de la luz.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata MICROSCOPIO DE POLARIZACIÓN Cuando la luz atraviesa ciertas sustancias o estructuras. esto es. es siempre igual. para distinguir las sustancias monorrefringentes de las birrefringentes. Ernst Abbe había predicho :"Quizá en el futuro se conozca alguna fuerza que permita a través de diferentes caminos sobrepasar los límites que ahora nos parecen insalvables. a la que se le añaden dos polarizadores: uno ubicado debajo de la platina (polarizador) y el otro. Por el contrario. Sea o no aparente esta ordenación. El microscopio de polarización sirve. salvo sus nombres". la velocidad de la luz varía según la dirección de propagación. De un único rayo luminoso resultan dos rayos refractados. encima de ella. Entonces. En estas condiciones el observador no ve ninguna luz en el ocular. el cuerpo tienen un único índice de refracción. independientemente de la dirección que siga dentro de ellos. Lo contrario ocurre cuando observamos un cuerpo cristalino o birrefringente. sufre una división de tal orden que de un solo rayo luminoso a la entrada. Realmente su predicción se cumplió ya que los equipos actuales permiten acceder al mundo molecular y atómico.

El alto vacío se logra en general mediante una bomba difusora apoyada por una bomba mecánica. El haz de electrones se genera en una columna con un alto vacío a fin de evitar la dispersión de los electrones al chocar con las partículas de la atmósfera.2 nm mientras que la longitud de onda de la luz visible oscila alrededor de 500 nm y su poder de resolución es de 0. Dos desarrollos esenciales condujeron a la construcción del microscopio electrónico (ME).Introducción a la Biología Facultad de Cs. que se avanzó a pasos agigantados en el conocimiento de lo muy pequeño. cuyo poder de resolución es de 0.05 nm. La resolución en un ME depende de la condición del potencial acelerador. lo que ha permitido la respuesta a muchos problemas fundamentales de significado biológico y médico. EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO Vamos a referirnos a las características del ME que lo diferencian de la microscopía de luz y que permite mejorar el límite de resolución de este último. la misma se pre-vacía antes de ser comunicada con la columna para introducir el especimen que consiste en una grilla de unos 4 mm de diámetro de cobre o níquel de 200 o 300 mesh. los saca fuera evitando la acumulación en el filamento. El ánodo es un disco abierto en la base del cilindro de Wehnelt conectado a tierra (con potencial cero). genera una fuente puntual de electrones y además es enfocante. por lo general en alto vacío y que se comunica con la columna al levantarse la pantalla y abrirse un shunt. Se logran haces de electrones con una longitud de onda de 0. donde se recogen los cortes del material biológico. Ambos. Un hecho destacable con el desarrollo del ME fue que mientras el microscopio de luz u óptico (MO) alcanzó su perfección de más de 2 siglos de desarrollo. el ánodo atrae los electrones. Primero la teoría de De Broglie (1924) que indica que a un electrón en movimiento puede asignarse una longitud de onda muy corta. Una enorme expansión de nuestro conocimiento de la ultraestructura de la materia ha tenido lugar gracias al ME. Una cámara fotográfica se ubica debajo de la pantalla.2 µm. donde un filamento de tungsteno en forma de V y con propiedades de termoemisión. La columna tiene un lugar donde introducir el especimen en una precámara. 71 . el ME alcanzó un nivel comparable en el espacio corto de 2 décadas. los cuales deben ser lo suficientemente finos (60 nm). instrumento y técnicas se han vuelto casi de rutina. Los electrones generados son acelerados por un voltaje de aceleración negativo entre el cátodo y el ánodo de 1000 KV (fuente de alta tensión).Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Fue gracias al descubrimiento de los principios físicos que llegaron a ser la base teórica de la microscopía electrónica. al calentárselo con un voltaje de calentamiento del cátodo produce el haz de electrones. Por lo tanto la gran diferencia radica en reemplazar el haz de luz fotónica por un haz de electrones que se genera en el cañón electrónico. El filamento constituye el cátodo y está rodeado por un cilindro abierto (cilindro de Wehnelt) que contribuye a producir un haz más pequeño pero de igual intensidad. La segunda demostración de Busch (1926) que un campo electrostático adecuado podría ser usado como verdadera lente para un rayo electrónico y así producir una imagen agrandada.

Pero la diferencia con la MO es que en ésta la imagen se forma porque el material absorbe la luz. Podemos resumir las diferencias entre el MO y el ME : 1) Las lentes magnéticas no tienen distancias focales fijas como las lentes ópticas. La imagen se forma en blanco y negro correspondiendo el negro a las zonas con alta densidad de material capaz de dispersar electrones. en tanto que la magnificación del objetivo es siempre fija.Introducción a la Biología Facultad de Cs. lo que resulta en diferencias visibles en diversas partes de la imagen. usando aperturas angulares tan pequeñas que la aberraciones son escasas. Las lentes intermedias y proyectoras se usan en condiciones tales que los errores de la lente no interfieren seriamente con la imagen. La distancia focal es dependiente de la intensidad de campo. Resulta claro por qué es necesario cortes muy finos. cambiando la corriente que pasa a través de la bobina. la porción de electrones absorbido por el material biológico es infinitésima. en la que no son los electrones transmitidos los que dan la imagen sino los electrones secundarios que son refractados en la superficie del material biológico. En la microscopía electrónica de transmisión (MET). proceso intensificado por las tinciones del especimen. La lente objetivo es la más crítica porque de ella depende el poder de resolución. 2) En el ME no es necesario cambiar la lente de Objetivo o las proyectoras cuando se desean distintas magnificaciones. En el ME en cambio.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata El sistema óptico del ME consiste en bobinas electromagnéticas. los electrones que atraviesan la muestra son los que van a impactar en la pantalla para dar la imagen. Las lentes objetivas y proyectoras juntas magnifican la imagen sobre una pantalla fluorescente o cuando ésta se levanta sobre una placa fotográfica. Esto se logra variando la distancia focal de la proyectora. La lente objetivo forma la primera imagen aumentada de la porción iluminada del especimen en un plano que luego se puede volver a aumentar por las lentes proyectoras. el blanco corresponde a los electrones que no fueron desviados y atraviesan el espécimen y constituyen el background. A tal fin el material biológico debe estar incluido en resinas especiales para vacío y con una rigidez suficiente para poder seccionarlo tan finamente en un ultramicrótomo con cuchillas de 72 . a diferencia de la microscopía de scanning (o barrido) (MES o MEB). Existen escalas de grises. en tanto que en el ME la pérdida de electrones por dispersión en puntos individuales del espécimen resulta en variaciones de la intensidad de la imagen (contraste). 3) El modo de formar la imagen es diferente en los 2 microscopios. En el MO se forma por absorción diferente de la luz. las lentes condensadoras concentran el haz sobre el especimen y permiten también regular la intensidad de luz. La formación de la imagen no se basa en la absorción de electrones sino que se basa en la pérdida de electrones del haz por el scattering (o dispersión) en distintos puntos del preparado.

Este procesamiento incluye fijaciones. tinciones o contrastados.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata vidrio o de diamante.Introducción a la Biología Facultad de Cs. Dichas resinas son hidrofóbicas y requieren una deshidratación previa con solventes como acetona. Para ello el material debe ser procesado de manera específica y rigurosa. Tratamientos tan drásticos hacen indispensables una adecuada fijación del material biológico que asegure la correcta preservación de la ultraestructura. deshidrataciones. 73 . cortes ultradelgados. inclusiones.

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