Uso Basico Del Microscopio

Introducción a la Biología Facultad de Cs.

Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata

MICROSCOPIO COMPUESTO
NORMAS BÁSICAS PARA EL CUIDADO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO Al ser el microscopio un aparato de precisión y de precio elevado, es muy conveniente asegurarle un buen rendimiento y una larga duración mediante toda una serie de normas y cuidados: • • NO ENCHUFAR EL MICROSCOPIO A LA LÍNEA TRIFÁSICA. Para transportar el microscopio se recomienda utilizar siempre las dos manos, sujetándolo por el brazo con una mano y sosteniéndolo del pie con la palma de la otra mano. Se debe desplazar en posición vertical para evitar la caída del ocular y/o del espejo o fuente de luz. En la mayoría de los microscopios el brazo debe quedar hacia el observador. Debe apoyarse correctamente el aparato hacia el centro de la mesada. Seleccionar al inicio de la observación, el objetivo de menor aumento. Cambiar en forma gradual los objetivos. Finalizada la observación, volver a ubicar el objetivo de menor aumento. Al efectuar el primer enfoque, el objetivo debe estar bien cerca de la preparación sin llegar a tocarla. Se coloca en esta posición mirando lateralmente el microscopio. El desplazamiento del tubo óptico para enfocar, se efectuará de abajo hacia arriba. Se evitará siempre tocar la preparación con la lente frontal de los objetivos. En algunos microscopios el desplazamiento del condensador tiene un tope, mientras que en otros no, por lo que al ascenderlo hay que cuidar de no tocar el portaobjetos. Cuando se utiliza un microscopio monocular es recomendable mantener los dos ojos abiertos para evitar el cansancio visual. Mover siempre suave y lentamente cualquier pieza del microscopio Utilice papel de seda fino especial o gamuza para lentes. Evite tocar las lentes con los dedos. La parte inferior del portaobjetos debe estar siempre seca al situarlo sobre la platina.

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Q P P F F’ Q’ La mayor parte de los sistemas ópticos comprenden más de una superficie reflectante o refractante. con la puerta cerrada.. pasa por el segundo foco de una lente convergente. CARACTERÍSTICAS Y FUNCIONAMIENTO DEL MICROSCOPIO ¿CÓMO SE FORMA LA IMAGEN? Algunos principios físicos. Un rayo que pasa (o se dirige hacia) el primer foco emerge paralelo al eje. 59 .Introducción a la Biología Facultad de Cs. después de atravesar la lente. La posición y tamaño de la imagen de un objeto formada por una lente delgada. después de la refracción por la lente. Un rayo que pasa por el centro de curvatura de la lente no es desviado apreciablemente (si la lente es delgada). (llamados rayos principales). que divergen desde un punto determinado del objeto que no esta sobre el eje. Este método consiste en determinar el punto de intersección.. La imagen formada por la primer superficie sirve de objeto a la segunda y así sucesivamente. Un rayo paralelo al eje. puede hallarse por un método gráfico sencillo. como el punto Q de la siguiente figura .Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata • Después de utilizar el microscopio debe guardarse aislado del polvo y la humedad con una funda de plástico o en su caja correspondiente. de unos cuantos rayos.

.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Imagen de un objeto situado a una distancia mayor al foco. real e invertida. (f = R / 2. El objetivo del microscopio actúa como una cámara fotográfica. se produce una imagen ampliada. R es el radio de curvatura de la lente) Foco 2 objeto Foco 1 imagen Imagen de un objeto situado a una distancia menor al foco. 60 . Cuando un objeto se sitúa más allá del foco de su lente..Introducción a la Biología Facultad de Cs. Foco 2 Imagen Objeto Ahora volvemos a lo que nos interesa.

y un sistema mecánico (o montura). 2. y otra (ocular) que actúa como una lupa que observa la imagen formada por la primera. y semejante al del vidrio (n=1. el aire se interpone entre su lente y el preparado. • Objetivos a inmersión: Se distinguen de los anteriores porque entre la lente y el preparado se debe interponer un medio transparente con un índice de refracción (n) superior al del aire (n=1). Está compuesta por dos lentes: la inferior o colectora. ¿por qué existe una limitación en la amplificación que puede brindar un sistema de lentes? El principal problema radica en que la capacidad de aumentar una imagen no es la única propiedad a tener en cuenta para una buena observación. que permite aprovechar un mayor número de rayos refractados por el preparado para la formación de la imagen. y la superior. cuya finalidad es la de sustentar convenientemente los elementos ópticos y los preparados que se examinan. la imagen definitiva (que es invertida respecto de la original) resulta el producto entre el aumento del objetivo por el aumento del ocular. 61 . ♦ El ocular recibe la imagen dada por el objetivo. En consecuencia. ¿Cuál es la otra propiedad importante para lograr una buena imagen? En el microscopio distinguimos un sistema óptico destinado a la iluminación y obtención de una imagen muy aumentada del objeto examinado. Esto significa que una estructura que mide un micrón puede observarse como si tuvieran 1 o 1. que se diferencian por las características de su composición. construyendo una nueva imagen mucho más ampliada. 40 y 45 X. de manera muy simplificada. Por lo tanto. los mayores aumentos que pueden conseguirse con el microscopio óptico son de 1000-1500 x. En las figuras anteriores pudimos observar. es tomada por el ocular (como si fuera un objeto) y es magnificada nuevamente. producida por el objetivo. que la imagen aumentada. pero invertida con relación al objeto examinado. o por la manera de utilizarse: • Objetivos a seco: En éstos. La distancia al preparado utilizando estos objetivos es muy pequeña y suelen tener un muelle protector para evitar roturas. Los objetivos más comúnmente utilizados son de 4. ♦ El objetivo está compuesto por un sistema centrado de lentes convergentes. virtual y derecha con relación a aquella.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata El ocular actúa como una lupa que observa la imagen que ha formado el objetivo. La parte óptica fundamental del microscopio está formada por dos sistemas centrados de lentes de aumento o convergentes: el objetivo y el ocular.5). como por ejemplo el aceite de cedro. Sin embargo. o lente ocular.Introducción a la Biología Facultad de Cs. Existen distintos tipos de objetivos. la imagen del microscopio compuesto resulta de la combinación de las provocadas por una lente (objetivo) que actúa como una cámara fotográfica.5 milímetros. y por el aparato de iluminación. 10. El medio utilizado es un aceite de inmersión. que facilita y mejora la observación microscópica. Así.

es decir. la profundidad de campo es muy escasa (menor que 1 µm). al mover el tornillo micrométrico. 62 . posee una cara plana y otra cóncava destinadas a proyectar el haz de rayos que iluminará el objeto. • Filtros de luz: son placas de vidrio coloreadas que dejan pasar las radiaciones de longitud de onda más convenientes para la más adecuada observación (κ=400-500 nm).Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata ♦ El aparato de iluminación. Los microscopios con luz incorporada generalmente no poseen espejo. podemos observar sólo pequeños espesores con nitidez.Introducción a la Biología Facultad de Cs. • Diafragma: dispuesto debajo del condensador. profundidad de planos que están en foco en un momento dado. Con aumentos medianos o grandes. Es inversamente proporcional al aumento. Profundidad de campo o de foco o poder de penetración: Es el espesor del preparado que se observa con nitidez. Concentra los rayos luminosos procedentes de la fuente de luz sobre la preparación. ALGUNOS CONCEPTOS IMPORTANTES EN MICROSCOPÍA Aumento: Es la proporción entre el tamaño de la imagen observada al microscopio y el tamaño real del objeto. Con inmersión en aceite. absorbiendo las restantes. dirigiéndolos hacia arriba del eje óptico. mientras que por encima y por debajo de esta zona la imagen se desvanece. • Condensador :está constituido por un sistema de lentes convergentes que proyecta sobre el preparado en forma de un amplio cono el haz de luz que lo atraviesa. El aumento total puede calcularse como el producto del aumento del ocular por el del objetivo. es decir. Distancia frontal: Es la distancia ente el objeto observado y la lente del objetivo cuando el preparado se encuentra enfocado correctamente. La profundidad de foco guarda relación inversa con el aumento: es tanto menor cuanto mayor es el aumento de la lente. situado debajo de la platina. que a medida que se utilizan objetivos de mayor aumento disminuye la distancia frontal y por lo tanto aumenta el riesgo de romper el preparado. sirve para graduar la cantidad de rayos luminosos que llegan al objeto. está formado por: • Espejo: cuando existe.

En consecuencia. el diafragma y el condensador en la iluminación? 63 . En los microscopios ópticos. Si cambiamos de un objetivo a otro de mayor aumento. 6. Observando los distintos elementos del microscopio ubique los que corresponden a la parte óptica. 3. más finos serán los detalles de la preparación que puedan distinguirse. 5. Poder de resolución: Es la capacidad de las lentes de distinguir o resolver (mostrar separados) con nitidez dos puntos situados muy próximos entre sí. ¿De qué partes del microscopio depende la correcta iluminación de la preparación ? ¿A qué partes del microscopio debe dirigirse la luz de la lámpara? ¿Por qué? ¿Qué se puede colocar en el portafiltros y qué utilidad tiene? ¿Cómo varía la iluminación al abrir o cerrar el diafragma? ¿Qué función tienen el espejo.2 µm. menor es la distancia que separa dos puntos entre sí sin que estos se confundan. 4. inferior a 0. Cuanto mayor es el poder de resolución (PR). 8. Límite de resolución: Es la distancia mínima que debe existir ente dos puntos del objeto para que puedan visualizarse separados. Reconozca los objetivos secos y de inmersión.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Campo observado: Es la porción del preparado incluida en la imagen. El tamaño del campo observado es inversamente proporcional al aumento total del microscopio. Es una característica propia de cada objetivo. es por esto que forma parte de las inscripciones grabadas en los objetivos. cuanto mayor sea el poder resolutivo del objetivo. 7. y por esta razón las lentes de pequeño aumento son útiles para rastrear la preparación. en vez de verlos como uno solo. Apertura numérica: Es una medida de la capacidad del microscopio de agrupar las refracciones de la luz producidas por los finos detalles del objeto. observaremos una imagen más aumentada pero que incluirá sólo una parte de lo que observábamos con el objetivo menor. en general. el filtro. Se representa por el diámetro de la parte de la preparación que se está observando (área del campo).Introducción a la Biología Facultad de Cs. el límite de resolución no es. Se expresa como la distancia mínima que permite dar una imagen bien definida de dos puntos. debido a que determina el tamaño del haz de luz que es captado por el objetivo luego de haber pasado a través del objeto.

ESTE OBJETIVO REQUIERE DE ACEITE DE INMERSION PARA SU UTILIZACION. Coloque una gota de agua en el centro del portaobjetos. ¿en qué sentido se mueve la imagen? ¿Qué combinaciones de aumentos (del ocular. Observe a menor aumento. ordenada y brevemente todos los pasos. Preste especial atención al objetivo de INMERSION. Esta preparación se conoce como MONTAJE HÚMEDO. ¿Cuáles son las características que tiene la imagen final del microscopio compuesto? Al desplazar el portaobjetos. 12. preferentemente enjuagados con alcohol fino y secos.Introducción a la Biología Facultad de Cs. Dibuje lo observado y coloque referencias. ¿CÓMO SE PREPARA EL MATERIAL PARA SU OBSERVACIÓN BAJO EL MICROSCOPIO? Existen diversas técnicas de preparación del material para su observación bajo el instrumental óptico. 14. En caso de realizar cortes. NO INTENTE OBSERVAR MATERIAL SIN TOMAR LOS RECAUDOS NECESARIOS. Coloque el portaobjetos sobre la platina. cuidando que el objetivo no toque el preparado. Mueva lentamente el tornillo micrométrico y observe las modificaciones en la imagen. Indique las características de las distintas imágenes. La preparación del material se debe realizar sobre una superficie limpia y plana. Escriba e interprete las inscripciones que llevan cada grupo de lentes. desde el principio hasta el final. Fundamentalmente. éstos deben ser sumamente delgados como para permitir el 64 . del objetivo y total) pueden hacerse con el microscopio del que se dispone? ¿Por qué es conveniente centrar en el campo de observación el objeto que nos interesa ver de la preparación si queremos observarlo a gran aumento? Analice las 4 imágenes que aparecen a continuación. En función a lo observado. Observación de una preparación: resuma global. se requiere que los portas y cubreobjetos se encuentren perfectamente limpios. 13. que se han efectuado para observar un preparado correctamente. ¿Cuál le parece el instrumento más eficiente? Fundamente su respuesta. 11. 10. Cubra el preparado con un cubreobjetos.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Tome un portaobjetos limpio y seco por sus bordes. podrá responder a las siguientes preguntas: 9. Ellas responden a un mismo objeto visualizado mediante cuatro instrumentos diferentes. Corte una pequeña letra de diario y ubíquela encima de la gota de agua.

rápido y uniforme. se desliza hacia el otro extremo con un movimiento suave. Para realizarlo se siguen los siguientes pasos: • • • • Se disgrega el material con la ayuda de pinzas y alfileres o agujas. • 65 . • FROTIS : consiste en esparcir el material generalmente líquido o semilíquido de modo que quede distribuido uniformemente en una delgada capa. Cuando la gota se extienda por capilaridad a todo el ancho del portaobjetos. Se cubre el material con un cubreobjetos.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata paso de la luz a través del material. Se debe operar con precaución pero con firmeza para evitar la rotura del material. Se coloca sobre el cubreobjetos un papel secante o un papel de filtro doblado y se aplasta con el dedo pulgar sin deslizar ni rotar el cubreobjetos. . Además del montaje húmedo existen dos técnicas especiales para realizar el montaje del material: SQUASH o aplastado y FROTIS o extendido. SQUASH : consiste en la disgregación de la muestra mediante el aplastamiento del material entre el porta y cubreobjetos. Se procede del siguiente modo: • • Se coloca una gota de material sobre un extremo del portaobjetos limpio y seco Se apoya sobre la gota un borde del otro portaobjetos formando un ángulo agudo. Si se requiere. se lo somete a coloración durante el tiempo necesario.Introducción a la Biología Facultad de Cs. Se apoya el portaobjetos sobre una superficie dura y completamente plana. Para ello se utiliza otro portaobjetos de borde muy parejo que se desliza sobre el primero desde un extremo al opuesto.

¿Cuáles son las ventajas y qué limitaciones presenta el microscopio óptico en la observación de estructuras biológicas? CON EL MICROSCOPIO ÓPTICO SE PUEDEN OBSERVAR: • • • La forma general de la mayoría de las células procariontes La forma general de las células eucariontes Algunas organelas eucariontes: núcleo. Estas estructuras se identifican con claridad utilizando alguna técnica accesoria con preparación de la muestra. nucleólos. centriolos.Introducción a la Biología Facultad de Cs. mitocondrias. aunque su ubicación en la célula puede ser revelada mediante ciertas técnicas • Los ribosomas 66 . pared celular. NO PUEDEN OBSERVARSE CON EL MICROSCOPIO ÓPTICO: • • • • • Las bacterias más pequeñas La estructura interna de las células procariontes La estructura de las organelas eucariontes La membrana plasmática Los conjuntos membranosos como los retículos endoplásmicos y el aparato de Golgi. cilias. cromosomas.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Realice un frotis y un squash con el material brindado en el trabajo práctico. vacuolas. cloroplastos. flagelos.

Puede apreciarse que la lupa posee un par de oculares. ya que en éstos la imagen formada en un único objetivo es desdoblada en dos imágenes idénticas por un prisma situado entre el objetivo y los dos oculares. las imágenes formadas en los oculares son distintas (lo mismo que ocurre con la visión ocular). al no coincidir sus ejes ópticos. cada uno de los cuales se 67 . por lo que vemos una imagen de tres dimensiones.Introducción a la Biología Facultad de Cs.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata ESTEREOMICROSCOPIO O LUPA BINOCULAR El estereomicroscopio consta realmente de dos microscopios completos. cada uno con su objetivo y ocular en los que. No debe confundirse este aparato óptico con los microscopios binoculares.

¿Cuáles son las características de la imagen final? 5. 68 . Esquematice lo observado y coloque referencias e indique el aumento obtenido. ¿Cómo es la distancia de trabajo en relación con la del microscopio óptico? 2. con el fin de proveer una imagen nítida para ambos ojos. ¿Por qué no existe tornillo micrométrico? ¿Cómo es la profundidad del campo? 3. ¿Qué finalidad tiene el ocular ajustable? 6. Debe colocarse en la platina una placa de contraste. de manera de obtener una imagen en tres dimensiones.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata enfoca independientemente del otro. recomendadas para el microscopio compuesto deben tenerse también en cuenta al utilizar la lupa binocular. Enfoque primeramente con el ocular fijo y luego ajuste el foco de la imagen tridimensional con el ocular de foco ajustable. NORMAS BÁSICAS PARA EL CUIDADO Y MANEJO DE LA LUPA BINOCULAR La mayoría de las normas de cuidado. Nótese que éste es un instrumento de baja magnificación.Introducción a la Biología Facultad de Cs. El tornillo de sujeción debe estar suficientemente apretado para evitar la caída del brazo de la lupa CARACTERÍSTICAS Y FUNCIONAMIENTO DE LA LUPA BINOCULAR 1. Observe bajo lupa el material brindado. de un color tal que realce la observación. en qué sentido se mueve la imagen final? 4. Además se tendrán presentes las siguientes normas: • • • • Moviendo los tubos oculares se busca la distancia interpupilar adecuada para cada observador. limpieza y transporte. ¿Al desplazar un objeto observado.

ya que sus componentes.Introducción a la Biología Facultad de Cs. y también para el examen de células recientemente removidas de animales vivos. pero sin colorear. pero esas diferencias no son visibles. La velocidad con que la luz atraviesa un cuerpo transparente depende de la cantidad de material presente y determina el índice de refracción de este cuerpo. 69 . Dado que las diversas estructuras celulares tienen un índice de refracción diferente. dando origen a diferencias de fase entre las zonas luminosas emergentes.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata OTROS TIPOS DE MICROSCOPIOS MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES El estudio de estructuras in vivo es normalmente muy difícil. El microscopio de contraste de fase permite el estudio de muchas estructuras celulares in vivo. o también material fijado. para las cuales la retina es sensible. En el microscopio de contraste de fase existen dispositivos especiales que transforman estas diferencias de fase en diferencias de amplitud. produciendo en consecuencia diferencias de intensidad luminosa. con raras excepciones. causas diversos atrasos en las ondas luminosas que las atraviesan. son incoloros y transparentes. Generalmente se utiliza en combinación con las técnicas de cultivo de células y tejidos.

lo que da lugar al fenómeno conocido con el nombre de doble refracción. con la mejora de la calidad de las lentes. En estas condiciones el observador no ve ninguna luz en el ocular. independientemente de la dirección que siga dentro de ellos. Por el contrario. Creo que los instrumentos que nos asistirán algún día no tendrán nada en común. En 1873. a la que se le añaden dos polarizadores: uno ubicado debajo de la platina (polarizador) y el otro. salvo sus nombres". tan lejano para los investigadores de aquellos tiempos. Aunque su poder de resolución aumentó a través del tiempo. se dice que tales cuerpos tienen estado cristalino. Realmente su predicción se cumplió ya que los equipos actuales permiten acceder al mundo molecular y atómico. su orientación a escala submicroscópica.Introducción a la Biología Facultad de Cs. la velocidad de la luz varía según la dirección de propagación. MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA BREVE RESEÑA HISTÓRICA DE LA MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA Desde el año 1660 a la actualidad el microscopio óptico ha sido pilar fundamental en el conocimiento de lo invisible. La velocidad a la que se propaga la luz en estos cuerpos amorfos. Lo contrario ocurre cuando observamos un cuerpo cristalino o birrefringente. El microscopio de polarización emplea un prisma que deja pasar solamente la luz polarizada rectilíneamente. El microscopio de polarización sirve. De un único rayo luminoso resultan dos rayos refractados. la luz brilla con mayor o menor intensidad. se cortan perpendicularmente. y según la orientación de ese cuerpo en la platina. esto es. sufre una división de tal orden que de un solo rayo luminoso a la entrada. Este instrumento óptico está compuesto de una platina rotatoria. las sustancias que no pertenecen a este grupo se llaman amorfas. la dirección de la vibración de la luz pasa a seguir una dirección determinada. Entonces. o anisótropos o birrefringentes. esta situación no se altera porque la luz no sufre modificación. Ernst Abbe había predicho :"Quizá en el futuro se conozca alguna fuerza que permita a través de diferentes caminos sobrepasar los límites que ahora nos parecen insalvables. Sea o no aparente esta ordenación. Así. junto al ocular analizador).Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata MICROSCOPIO DE POLARIZACIÓN Cuando la luz atraviesa ciertas sustancias o estructuras. encima de ella. Tal capacidad se debe a que esas sustancias poseen una ordenación interna y periódica de sus átomos. 70 . también llamados isótropos o monorrefringentes. o sea. el cuerpo tienen un único índice de refracción. Cuando se coloca en la platina un cuerpo amorfo. eliminando otros rayos por reflexión total. su factor limitante fue la longitud de onda de la luz. es siempre igual. resultan dos rayos llamados polarizados. que son polarizados rectilíneamente. En los cuerpos cristalinos. entonces. para distinguir las sustancias monorrefringentes de las birrefringentes. Además. permite conocer la ordenación interna de las sustancias birrefringentes. Polarizador y analizador están colocados de tal manera que sus secciones principales están cruzadas.

que se avanzó a pasos agigantados en el conocimiento de lo muy pequeño. Ambos.2 µm. El alto vacío se logra en general mediante una bomba difusora apoyada por una bomba mecánica. Un hecho destacable con el desarrollo del ME fue que mientras el microscopio de luz u óptico (MO) alcanzó su perfección de más de 2 siglos de desarrollo.2 nm mientras que la longitud de onda de la luz visible oscila alrededor de 500 nm y su poder de resolución es de 0. cuyo poder de resolución es de 0. el ME alcanzó un nivel comparable en el espacio corto de 2 décadas. Una enorme expansión de nuestro conocimiento de la ultraestructura de la materia ha tenido lugar gracias al ME. 71 .05 nm.Introducción a la Biología Facultad de Cs. por lo general en alto vacío y que se comunica con la columna al levantarse la pantalla y abrirse un shunt. El haz de electrones se genera en una columna con un alto vacío a fin de evitar la dispersión de los electrones al chocar con las partículas de la atmósfera. El filamento constituye el cátodo y está rodeado por un cilindro abierto (cilindro de Wehnelt) que contribuye a producir un haz más pequeño pero de igual intensidad. Una cámara fotográfica se ubica debajo de la pantalla. Dos desarrollos esenciales condujeron a la construcción del microscopio electrónico (ME). los saca fuera evitando la acumulación en el filamento. lo que ha permitido la respuesta a muchos problemas fundamentales de significado biológico y médico. El ánodo es un disco abierto en la base del cilindro de Wehnelt conectado a tierra (con potencial cero). Primero la teoría de De Broglie (1924) que indica que a un electrón en movimiento puede asignarse una longitud de onda muy corta. EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO Vamos a referirnos a las características del ME que lo diferencian de la microscopía de luz y que permite mejorar el límite de resolución de este último. La columna tiene un lugar donde introducir el especimen en una precámara.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata Fue gracias al descubrimiento de los principios físicos que llegaron a ser la base teórica de la microscopía electrónica. Los electrones generados son acelerados por un voltaje de aceleración negativo entre el cátodo y el ánodo de 1000 KV (fuente de alta tensión). donde un filamento de tungsteno en forma de V y con propiedades de termoemisión. la misma se pre-vacía antes de ser comunicada con la columna para introducir el especimen que consiste en una grilla de unos 4 mm de diámetro de cobre o níquel de 200 o 300 mesh. Por lo tanto la gran diferencia radica en reemplazar el haz de luz fotónica por un haz de electrones que se genera en el cañón electrónico. los cuales deben ser lo suficientemente finos (60 nm). Se logran haces de electrones con una longitud de onda de 0. La resolución en un ME depende de la condición del potencial acelerador. donde se recogen los cortes del material biológico. al calentárselo con un voltaje de calentamiento del cátodo produce el haz de electrones. instrumento y técnicas se han vuelto casi de rutina. genera una fuente puntual de electrones y además es enfocante. La segunda demostración de Busch (1926) que un campo electrostático adecuado podría ser usado como verdadera lente para un rayo electrónico y así producir una imagen agrandada. el ánodo atrae los electrones.

En el MO se forma por absorción diferente de la luz. Existen escalas de grises. La formación de la imagen no se basa en la absorción de electrones sino que se basa en la pérdida de electrones del haz por el scattering (o dispersión) en distintos puntos del preparado. lo que resulta en diferencias visibles en diversas partes de la imagen. usando aperturas angulares tan pequeñas que la aberraciones son escasas. Podemos resumir las diferencias entre el MO y el ME : 1) Las lentes magnéticas no tienen distancias focales fijas como las lentes ópticas. Esto se logra variando la distancia focal de la proyectora. cambiando la corriente que pasa a través de la bobina. En el ME en cambio. 3) El modo de formar la imagen es diferente en los 2 microscopios. Pero la diferencia con la MO es que en ésta la imagen se forma porque el material absorbe la luz. En la microscopía electrónica de transmisión (MET). Las lentes intermedias y proyectoras se usan en condiciones tales que los errores de la lente no interfieren seriamente con la imagen. las lentes condensadoras concentran el haz sobre el especimen y permiten también regular la intensidad de luz. La distancia focal es dependiente de la intensidad de campo. a diferencia de la microscopía de scanning (o barrido) (MES o MEB). Resulta claro por qué es necesario cortes muy finos.Introducción a la Biología Facultad de Cs. los electrones que atraviesan la muestra son los que van a impactar en la pantalla para dar la imagen. Las lentes objetivas y proyectoras juntas magnifican la imagen sobre una pantalla fluorescente o cuando ésta se levanta sobre una placa fotográfica.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata El sistema óptico del ME consiste en bobinas electromagnéticas. en la que no son los electrones transmitidos los que dan la imagen sino los electrones secundarios que son refractados en la superficie del material biológico. La imagen se forma en blanco y negro correspondiendo el negro a las zonas con alta densidad de material capaz de dispersar electrones. en tanto que la magnificación del objetivo es siempre fija. La lente objetivo forma la primera imagen aumentada de la porción iluminada del especimen en un plano que luego se puede volver a aumentar por las lentes proyectoras. proceso intensificado por las tinciones del especimen. 2) En el ME no es necesario cambiar la lente de Objetivo o las proyectoras cuando se desean distintas magnificaciones. en tanto que en el ME la pérdida de electrones por dispersión en puntos individuales del espécimen resulta en variaciones de la intensidad de la imagen (contraste). A tal fin el material biológico debe estar incluido en resinas especiales para vacío y con una rigidez suficiente para poder seccionarlo tan finamente en un ultramicrótomo con cuchillas de 72 . la porción de electrones absorbido por el material biológico es infinitésima. el blanco corresponde a los electrones que no fueron desviados y atraviesan el espécimen y constituyen el background. La lente objetivo es la más crítica porque de ella depende el poder de resolución.

Tratamientos tan drásticos hacen indispensables una adecuada fijación del material biológico que asegure la correcta preservación de la ultraestructura. Para ello el material debe ser procesado de manera específica y rigurosa. 73 . inclusiones.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata vidrio o de diamante. tinciones o contrastados. Este procesamiento incluye fijaciones.Introducción a la Biología Facultad de Cs. deshidrataciones. cortes ultradelgados. Dichas resinas son hidrofóbicas y requieren una deshidratación previa con solventes como acetona.

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