Universidad de

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA Córdoba,

comprometida
Facultad Ciencias De La Salud
con el desarrollo
Programa Bacteriología regional

NIT 891080031-3

CURSO: HEMATOLOGÍA II

Código: 504153
Horas semanales: 5
Componente: Teórico Práctico
Ubicación: VI semestre
Requisitos: 504144
Docente: Yesica María Gándara Herrera

GUÍA N° 3
EVALUACIÓN DE LA HEMOSTASIA SECUNDARIA: TIEMPO DE PROTROMBINA
(TP) Y CÁLCULO DEL INR
INTRODUCCIÓN
El sistema de coagulación plasmática, formado por proteínas enzimáticas y cofactores
enzimáticos, logra la hemostasia secundaria mediante la producción de un trombo
insoluble de fibrina.

La exploración de la coagulación sanguínea se basa principalmente en la realización de

dos pruebas globales: el Tiempo de Protrombina (TP) y el Tiempo de tromboplastina
parcial activada (TTPa), que se complementan con una valoración de la fibrina
formación mediante la determinación funcional del fibrinógeno o la realización del
tiempo de trombina (TT). Con base a los resultados de estas pruebas se puede realizar
una aproximación diagnóstica, cuya confirmación puede requerir la determinación
específica de los factores de la coagulación.

NECESIDAD
Adquirir los conocimientos necesarios para evaluar la formación de fibrina insoluble a
través de la activación de los factores pertenecientes a la vía extrínseca de la
cascada de la coagulación, mediante la aplicación e interpretación acertada de los
tiempos de coagulación en el laboratorio.

OBJETO DE ESTUDIO
Factores procoagulantes de la vía extrínseca en la cascada de la coagulación.

Universidad de Córdoba 1964 – 2012. Carrera 6ª 76 – 103 Montería – Córdoba 7861018

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OBJETIVOS
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Instructivos
 Dominar conocimientos teóricos y prácticos sobre la activación y participación
de los factores de la vía extrínseca y común en la formación del tapón
hemostático secundario.
 Determinar el tiempo de protrombina a una muestra de sangre fresca
citratada.
 Realizar los cálculos para la determinación del Índice Nacional Normalizado.
 Interpretar las formas de expresión de resultados del tiempo de protrombina.

COMPETENCIAS A ADQUIRIR POR PARTE DE LOS ESTUDIANTES

 Evalúa la función de los factores de la coagulación implicados en la vía
extrínseca y común mediante la determinación del tiempo de protrombina.
 Calcula e interpreta adecuadamente el INR.
 Valora el porcentaje de actividad protrombínica en una muestra de plasma
fresco.
 Identifica las patologías que originan alteraciones en los valores de referencia
del tiempo de protrombina.

METODOLOGÍA
 Socialización de la guía y el prelaboratorio.
 Determinación del Tiempo de coagulación de Protrombina y cálculo del INR.
 Realización e interpretación del reporte de resultados obtenidos.
 Solución del cuestionario post-laboratorio al finalizar la práctica.

MATERIALES DE LABORATORIO
 Papel kraft
 Torniquete
 Algodón
 Alcohol
 Agujas vacutainer
 Camisa para agujas vacutainer
 Tubos con citrato de sodio 3.2%

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 Centrifuga
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 Puntas amarillas
 Puntas azules
 Pipetas automáticas
 Tubos de plástico
 Reactivo TP (tromboplastina tisular y cloruro de calcio).
 Baño de maría.
 Agua destilada.
 Cronómetro.
 Pool de muestras de plasma fresco control o normales.

PROCEDIMIENTO
1. TIEMPO DE PROTROMBINA (TP)
Fundamento: el plasma citratado, en presencia de tromboplastina (factor hístico y una
mezcla de fosfolípidos) y cloruro de calcio se coagula a una velocidad dependiente de
las actividades de la protrombina (factor II), los factores V, VII, X y el fibrinógeno.
El tiempo de protrombina es la medida que tarda en coagular un plasma descalcificado,
colocado a 37°C y en presencia de un exceso de tromboplastina tisular y calcio. El
exceso de tromboplastina tisular y calcio es proporcionado por el reactivo soluplastin,
el cual contiene tromboplastina tisular de cerebro de conejo y cloruro de calcio.

Procedimiento
1. Reconstituir el reactivo de tromboplastina (soluplastin), agregando el volumen de
agua destilada indicada en el envase. Tapar y agitar suavemente hasta obtener una
suspensión homogénea.
2. Obtener sangre por punción venosa cuidadosamente (evitando estasis o trauma) y
colocar en un tubo con citrato de sodio al 3.2%.
3. Mezclar por inversión y separar plasma pobre en plaquetas por centrifugación.
4. Colocar el plasma en baño de María a 37°C durante 2-3 minutos (no más de 10
minutos).
5. En tubo plástico, colocar 0.2 mL (200 uL) de soluplastin reconstituido y pre incubar
a 37°C durante 2 a 3 minutos (no más de 10 minuto).

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6. NIT
Pipetear
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100 uL del plasma pre incubado y agregar rápidamente al tubo que
contiene 200 uL de soluplastin, disparando simultáneamente el cronometro.
7. Mantener el tubo dentro del baño de María y cerca de una fuente de luz. Previo al
tiempo estimado de coagulación sacar el tubo del baño, inclinar suavemente una o
dos veces por segundo y detener el cronometro en el momento de la aparición del
coágulo.

Observaciones
Es imprescindible realizar simultáneamente el tiempo de protrombina a una muestra
de plasma control normal, la cual puede obtenerse mediante una mezcla o pool de por
lo menos 3 plasmas frescos normales.

Reporte e Interpretación de resultados

Los resultados pueden expresarse de distintas formas:
1. En segundos. El rango de valores obtenidos en pacientes normales oscila entre: 10 –
14 seg.
2. En Porcentaje de actividad protrombínica respecto de un plasma normal (100% de
actividad); para ello se debe trazar la curva de actividad protrombinica de un pool
de plasmas frescos normales.
Curva de calibración: preparar 5 diluciones (cada una por duplicado) de un pool de
por lo menos 3 plasmas frescos normales, según:
Diluciones 1:1 1:2 1:3 1:4 1:8
Pool plasmas normales (ml) 0.5 0.3 0.3 0.2 0.2
Solución salina fisiológica (Ml) ---- 0.3 0.6 0.6 1.4
Porcentaje de actividad (%) 100 50 33.3 25 12.5

Determinar el TP para cada dilución. Graficar los resultados en un sistema de

coordenadas, colocando los tiempos de protrombina en segundo sobre el eje de las
ordenadas (y) y los porcentajes de actividad en el eje de las abscisas (x).
Cada laboratorio debe trazar su propia curva de calibración, correspondiente al
lote de reactivos en uso. Repetir con cada nuevo lote de reactivos.
3. Razón Internacional Normalizada (INR): representa la razón que se hubiera
obtenido si se hubiera realizado la prueba con la primera tromboplastina de

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referencia humana de la OMS. El cálculo del INR requiere que conozcamos la

sensibilidad de la tromboplastina usada (dato aportado por el fabricante),
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expresada como ISI. Conocida esta, el cálculo se realiza mediante la fórmula:

INR= (P/C)ISI
En donde,
P= Tiempo de protrombina en segundos del paciente
C= Tiempo de protrombina en segundos del pool de plasmas frescos control.
ISI: Dato suministrado por el fabricante en la tabla de valores adjunta a esta guía
de laboratorio.
Ejemplo: si el TP del paciente es 27 segundos y el del control 12 segundos, la razón
P/C = 27/12 = 2,25. Sea 1,15 el ISI del reactivo de tromboplastina usada,
entonces:
INR = (2,25)1,15 = 2,54
Esta forma de expresión permite comparar resultados para el control del
tratamiento anticoagulante oral realizados en diferentes laboratorios con
reactivos de distinta sensibilidad, y debe reservarse para dicho control, no siendo
correcto su uso en los estudios de carácter diagnostico.
Se consideran valores normales los cocientes de 1,2 o menores (correspondientes a
un porcentaje de actividad protrombínica del 80% o mayores).

PRE LABORATORIO
Antes de presentarse a la práctica el estudiante deberá leer detenidamente la guía de
laboratorio y preparar el siguiente prelaboratorio:
1. ¿Cuál debe ser la proporción sangre:anticoagulante para las pruebas de detección
de la hemostasia secundaria?
2. ¿Qué ocurre con los pacientes que presentan valores de hematocrito por debajo
de 35% o por encima de 50%? ¿Qué se debe hacer en esos casos?
3. ¿Cómo deben almacenarse los plasmas que no van a ser analizados de inmediato?
4. ¿En qué patologías se presentan TP prolongados?
5. ¿En qué patologías se presentan TP cortos?
6. En el seguimiento de la terapia anticoagulante para pacientes trombóticos, ¿Qué
anticoagulantes son evaluados mediante el TP y el INR?

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BIBLIOGRAFÍA
McKENZIE, Shirlyn. Hematología clínica. 2 ed. México: Editorial El Manual
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
Moderno, 2000.
 VIVES, J.L. y AGUILAR, J.L. Manual de técnicas de laboratorio en hematología
3ª ED. Barcelona, 2006.

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